Đang tải... (xem toàn văn)
MỤC LỤC MỤC LỤC DANH SÁCH BẢNG viii DANH SÁCH HÌNH ix CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU 10 CHƯƠNG 2 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 12 2 1 Auxin 12 2 1 1 Lược sử nghiên cứu auxin 12 2 1 2 Vai trò sinh lý của auxin 12 2 2 Vi sin[.]
MỤC LỤC DANH SÁCH BẢNG viii DANH SÁCH HÌNH ix CHƯƠNG GIỚI THIỆU 10 CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 12 2.1 Auxin 12 2.1.1 Lược sử nghiên cứu auxin 12 2.1.2 Vai trò sinh lý auxin 12 2.2 Vi sinh vật tổng hợp IAA vai trò chúng trồng .14 2.2.1 Các vi sinh vật tổng hợp Auxin 14 2.2.2 Tác dụng auxin vi sinh vật tổng hợp trồng 17 2.3 Qui trình tổng hợp IAA vi sinh vật .18 2.4 Sơ lược rau muống 21 2.4.1 Đặc điểm thực vật học 21 2.4.2 Yêu cầu điều kiện ngoại cảnh .21 2.4.3 Giá trị dinh dưỡng ý nghĩa kinh tế 22 CHƯƠNG 3.1 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 23 Phương tiện .23 3.1.1 Vật liệu thí nghiệm 23 3.1.2 Thiết bị dụng cụ .23 3.1.3 Hóa chất 23 3.1.4 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 24 3.2 Phương pháp .24 3.2.1 Phân lập dòng vi sinh từ đất vùng rễ rau muống .24 3.2.2 Định lượng IAA 25 3.2.3 Khảo sát đặc tính sinh hóa 26 3.2.4 Thử nghiệm rau muống 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ THẢO LUẬN .30 i 4.1 Phân lập dòng vi khuẩn tổng hợp IAA 30 4.2 Khảo sát đặc tính sinh hóa 36 4.3 Kết thử nghiệm rau muống 40 4.3.1 Thử nghiệm chậu .40 4.3.2 Thử nghiệm đồng 42 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ii DANH SÁCH BẢNG Bảng Vai trò auxin thực vật .14 Bảng 2: Các nhóm vi sinh vật tổng hợp IAA chất dẫn xuất 16 Bảng Nguồn gốc 40 dòng vi khuẩn phân lập đất trồng rau Tiền Giang 30 Bảng Đặc điểm khuẩn lạc 40 dòng vi khuẩn phân lập 33 Bảng Tỉ lệ phần trăm đặc điểm khuẩn lạc .33 Bảng Phản ứng với thuốc thử dòng vi khuẩn 37 Bảng Các tiêu thu 40 Bảng Ảnh hưởng dòng P24 phân NPK lên tiêu rau muống .43 iii DANH SÁCH HÌNH Hình : Các lộ trình tổng hợp IAA vi sinh vật (Suzuki et al., 2003) 19 Hình : Cơ chế tổng hợp Indole-3-acetic acid (IAA) vi sinh vật .20 Hình Colony 30 Hình 4.Phản ứng với thuốc thử Salkowski (Có trytophan) 36 Hình 5.Phản ứng với thuốc thử Salkowski (Không trytophan) 36 Hình Hình nhuộm Gram 40 Hình Ảnh hưởng dòng P24 phân NPK lên rau muống .42 Hình Ảnh hưởng dòng P24 phân NPK .44 Hình Tương quan chiều dài rễ trọng lượng .44 Hình 10 Ảnh hưởng dịng P24 phân NPK .46 Hình 11 Tương quan đường kính thân trọng lượng .46 Hình 12 Ảnh hưởng dịng P24 phân NPK 48 Hình 13 Tương quan chiều cao trọng lượng 48 Hình 14 Ảnh hưởng dòng P24 phân NPK .49 Hình 15 Tương quan số trọng lượng 49 Hình 16 Ảnh hưởng dịng P24 phân NPK .52 iv GIỚI THIỆU Đồng sơng Cửu Long thích hợp với nhiều loại loại rau phục vụ cho đời sống ngày, nên vùng đóng vai trị quan trọng việc sản xuất cung cấp lượng lớn sản phẩm nơng nghiệp cho vùng nước Trong rau muống quen thuộc người Việt Nam, dễ chế biến ăn ngày Theo y học đại, rau muống cung cấp nhiều chất xơ, có vitamin C, vitamin A số thành phần tốt cho sức khoẻ, thức ăn tốt cho người Những người già ăn bữa rau ngày có não trẻ khoảng năm bị suy giảm tinh thần 40% so với người ăn khơng ăn rau Trong thời điểm nay, đôi với việc gia tăng sản xuất nông nghiệp sản lượng cung cấp thị trường việc sử dụng lượng lớn phân bón hố học vào sản xuất nhằm gia tăng suất trồng Tuy nhiên lượng phân hố học gây ảnh hưởng xấu đến môi trường sống sức khoẻ người dân, lượng lớn phân hoá học tồn dư đất dạng khó tan không hấp thụ được, gây ô nhiễm nguồn nước, đất canh tác,… Do việc tìm nguồn phân bón để giảm sử dụng phân hoá học vấn đề cần lưu tâm đầu tư nghiên cứu, nhóm PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria) nhóm vi sinh vật sống tự đất, có khả kích thích sinh trưởng gia tăng suất trồng chế đặc biệt chúng tổng hợp phytohormon, hồ tan lân khó tan thành dạng dễ tan cung cấp cho trồng khả tổng hợp chất kích thích sinh trưởng thực vật vi sinh vật cytokinins, auxins kích thích phát triển hệ rễ chủ, tăng khả nẩy mầm hạt, tăng khả hấp thu nước, chất dinh dưỡng đất, từ gia tăng trao đổi chất, tăng suất trồng phẩm chất trái hạt, năm gần có nhiều cơng trình nghiên cứu phân sinh học Phân bón vi sinh có nhiều ưu điểm trội so với phân bón hóa học, tác dụng nâng cao suất chất lượng trồng, tiết kiệm phân vô cơ, giảm chi phí sản xuất phân bón vi sinh cịn góp phần quan trọng việc bảo vệ môi trường phát triển nơng nghiệp bền vững Tuy nhiên tình hình sản xuất phân bón vi sinh nước ta chưa đáp ứng đủ nhu cầu thực tiễn sản xuất nông nghiệp quy mô sản xuất nhỏ, chất lượng sản phẩm chưa hoàn thiện ổn định Do dó, nghiên cứu để hồn thiện nâng cao chất lượng phân bón vi sinh việc làm cần thiết Trong đó, việc tuyển chọn, đánh giá hoạt tính chủng vi sinh vật khâu quan trọng quy trình tạo chế phẩm (Đỗ Thu Hà et al.,2008) Bên cạnh vi sinh vật có khả tồng hợp Indole-3-acetic acid (IAA) Rhizobium, Agrobacterium, Azotobacter, Azospirillum, Pseudomonas xem giống vi sinh vật có khả tổng hợp IAA cao có nhiều đặc tính tốt kích thích sinh trưởng phát triển trồng Từ lý nên thực đề tài Luận văn tốt nghiệp “ Phân lập số dịng vi khuẩn có khả tổng hợp Indole-3-acetic acid (IAA) từ đất trồng rau thử nghiệm rau muống Tiền Giang ” MỤC TIÊU ĐỀ TÀI - Phân lập số dòng vi sinh có khả tổng hợp IAA cao đất trồng rau Tiền Giang - Tìm dịng có độ hữu hiệu cao trộn phân sinh học - Khảo sát khả tổng hợp phytohormon dòng chọn trồng LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU Auxin 1.1.1 Lược sử nghiên cứu auxin Auxins chất nhóm điều hồ sinh trưởng thực vật phát sớm Thuật ngữ auxins có nguồn gốc từ tiếng Hy Lạp, “Auxein” nghĩa “grow” (mọc, sinh trưởng) Việc phát auxins Darwin (1880) khảo sát tượng quang hướng động diệp tiêu hướng phía có ánh sáng cho ánh sáng kích thích diệp tiêu hướng phía ánh sáng Bằng nhiều thí nghiệm đơn giản dùng nắp che chóp diệp tiêu hay cắt diệp tiêu khơng cịn hướng phía ánh sáng Năm 1907 Fitting ước lượng ảnh hưởng vết cắt phía lên diệp tiêu Avena, ơng cho chất kích thích vận chuyển qua chất sống di chuyển quanh vết cắt, nhiên quan sát ơng khơng xác vách ngăn vận chuyển khơng hình thành Dựa thí nghiệm Fitting Boysen-Jensen (1913) chêm miếng mica phần chóp phần gốc diệp tiêu chứng minh có vận chuyển auxins truyền xuống qua phía tối diệp tiêu kích thích sinh trưởng cong phía ánh sáng Vào năm Paal (1918), Soding (1925), Went (1926) cho có chất sinh diệp tiêu Avena điều khiển phát triển diệp tiêu, cắt bên diệp tiêu diệp tiêu nghiêng phía khơng bị cắt, cắt rời diệp tiêu sinh trưởng giảm, đặt khối agar chứa chất hoà tan từ đỉnh chóp cắt lên nơi diệp tiêu bị cắt bỏ kích thích phát triển trở lại Từ kích thích mạnh mẽ việc nghiên cứu chất kích thích sinh trưởng thực vật Năm 1934, Kogl Haagen-Smit phân lập IAA từ men bia Thimann (1935) phân lập IAA từ việc ni cấy Rhizopus suinus Đến năm 1954 nhóm nhà khoa học xác lập đặc điểm nhóm chất điều hồ sinh trưởng auxins 1.1.2 Vai trị sinh lý auxin Auxin tác dụng lên nhiều trình sinh trưởng tế bào, hoạt động tầng phát sinh, hình thành rễ, tượng ưu ngọn, tính hướng thực vật, sinh trưởng tạo khơng hạt Auxin kích thích sinh trưởng giản tế bào, đặc biệt theo chiều ngang làm cho tế bào dài Hiệu đặc trưng auxin tác động lên giãn thành tế bào; Auxin gây giảm độ pH thành tế bào nên hoạt hóa enzyme phân giải polysacharid liên kết cac sợi celluloz làm cho chúng lỏng lẻo tạo điều kiện cho thành tế bào giãn tác dụng áp suất thẩm thấu khơng bào trung tâm Ngồi auxin kính thích tổng hợp cấu tử cấu trúc nên thành tế bào đặc biệt cellulose, pectin, hemicellulose Bên cạnh IAA cịn ảnh hưởng đến phân chia tế bào Tuy nhiên ảnh hưởng auxin lên giãn phân chia tế bào mối tác động tương hỗ với phytohormon khác (gibberellin,cytokinin) (Cao Ngọc Điệp, 2007) IAA gây tính hướng động (hướng quang hướng địa) Bằng cách sử dụng nguyên tử đánh dấu người ta nhận thấy IAA phóng xạ phân bố nhiều phần khuất ánh sáng phần phận nằm ngang gây nên sinh trưởng khơng hai phía quan Phía khuất ánh sáng tích điện dương, cịn phía chiếu sáng tích điện âm IAA thường bị ion hóa (IAA ) phân bố phía điện dương nhiều (Lương Minh Châu, 2004) Về nguyên tắc IAA phân bố phía mang điện dương nhiều kích thích sinh trưởng phía khuất ánh sáng mạnh phía chiếu sáng Kết làm uốn cơng phía chiếu sáng IAA điều chỉnh tượng ưu ngọn: Hiện tượng ưu đặc tính quan trọng phổ biến thực vật Khi chồi rễ sinh trưởng ức chế sinh trưởng chồi bên Đây ức chế tương quan loại trừ ưu cách cắt chồi rễ chồi bên rễ bên giải phóng khỏi ức chế sinh trưởng Hiện tượng giải thích IAA hình thành đỉnh với hàm lượng cao vận chuyển xuống dưới, đường xuống ức chế sinh trưởng chồi bên Nếu cắt làm giảm hàm lượng auxin nội sinh kích thích chồi sinh trưởng (Cao Ngọc Điệp, 2007) IAA kích thích hình thành rễ: Trong hình thành rẽ đặc biệt rễ phụ, hiệu auxin đặc trưng Sự hình thành rễ phụ chia làm giai đoạn: Giai đoạn đầu phản phân hóa tế bào trước tầng phát sinh, xuất mầm rễ cuối rễ sinh trưởng thành rễ phụ chọc thủng vỏ ngồi IAA cịn kích thích hình thành kìm hảm rụng hoa ,quả ức chế hình thành tầng rời cuống lá, hoa, vốn cảm ứng chất ức chế sinh trưởng Bảng Vai trò auxin thực vật Tế bào gia tăng kích thước Phân chia tế bào Phân hóa mạch Tạo rễ Địa hướng động thuận Ức chế phát triển rễ Quang hướng động thuận Phát triển đỉnh sinh trưởng Rụng Rụng trái Lá lâu già Trái mau chín Tạo phát triển nhanh Kích thích tạo bầu nỗn Kích thích hoa Gia tăng tốc độ tăng trưởng Phân hóa tế bào mơ Kích thích tổn hợp ARN Kích thích tổng hợp protein Gia tăng hoạt lực enzime Gia tăng hô hấp Phát triển mô sẹo Nguồn: (Frankenberger W.T & Jr Muhammad Arshad, 1995) Vi sinh vật tổng hợp IAA vai trò chúng trồng Các vi sinh vật tổng hợp Auxin Auxins chất kích thích sinh trưởng tổng hợp thực vật, IAA có vai trị q trình phát triển tế bào tăng trưởng tế bào, phân chia, hình thành rễ (Ann Vande Broek, 1998), nhiên tăng trưởng thực vật lại chịu tác động khơng nhỏ từ nguồn auxins bên ngồi nguồn auxins tổng hợp vi sinh vật có ích đất Trong vi sinh vật phân lập từ vùng rễ bề mặt rễ nhiều loại trồng có khả tổng hợp IAA cao (Arshad & Frankenberger, 1998) Theo Loper & Schroth (1986) có đến 80% dòng vi khuẩn phân lập từ vùng rễ nhiều loại trồng có khả tổng hợp auxins Các dòng vi khuẩn thuộc giống Azospirilium, Pseudomonas, Rhizobium, Xanthomonas, Bradyrhizobium japonicum, Gluconobacter diazotrophicus xác định có khả tổng hợp IAA giúp kích thích sinh trưởng trồng (Patten & Glick, 1996) Gần Ahmad (2005) phân lập 10 chủng Azotobacter 11 chủng Pseudomonas từ đất vùng rễ lúa mì, mù tạt, cải, cho thấy chúng có khả tổng hợp IAA cao mơi trường có bổ sung Tryptophan khơng có bổ sung Tryptophan Stijn Spaepen et al.,(2007) nghiên cứu gen ipdC vi khuẩn Azospirillum brasilense có khả tổng hợp IAA cao đất vùng rễ nhiều loại cỏ ngũ cốc Azospirillum brasilense vi khuẩn gram âm, vi khuẩn tổng hợp nitrogen sống cộng sinh với nốt rễ loài cỏ nhiều loại ngũ cốt, vi khuẩn tổng hợp chất dinh dưỡng hóa học cho sợ phát triển trồng Khi chủng Azospirillum kết làm tăng số rễ tơ rễ bên cây, giúp cho hấp thu nước chất dinh dưỡng trình phát triển ảnh hưởng trình tổng hợp IAA tự nhiên, trytophan tiền chất tổng hợp IAA Nhiều dịng vi khuẩn sống đất có khả tổng hợp nên chất tăng trưởng thực vật giúp cho trồng phát triển Trong có nhiều vi sinh vật sống vùng rễ (rihzophere) có khả tổng hợp chất kích thích tăng trưởng thực vật gọi nhóm (PGPR) (Nguyễn Thị Ngọc Trúc, 2007) Vi khuẩn vùng rễ kích thích tăng trưởng thực vật cải thiện tăng trưởng thực vật gia tăng suất với chế trực tiếp (tổng hợp phytohormon, hịa tan lân khó tan, sản xuất auxin hay cytokinin) chế gián tiếp (hạn chế phát triển vi sinh vật gây hại)(Brown, 1974; Klopper et al., 1986, 1989; Davision, 1988; Lambert & Joos, 1989) Với nhiều nhóm vi sinh vật sơ hạch Pseudomonas syringae (Glickmann et al., 1998), Azosprillium brasilense (Hartman et al., 1983), Azobacter vineelandii (Garcia-Tavares et al, 1987), Agrobacterium tumefasciens (Liu et al., 1982), Rhizobium trifolii Rhizobium leguminosarum (Badenoch-Jones et al., 1982), Rhizobium phaseoli (Ernstsen et al., 1987), Bradyrhizobium japonicum (Kaneshiro et al., 1983), Erwinia herbola (Koga et al., 1991), tảo Anabaena cylindrica Nostoc rivulare (Florenzano et al., 1978), Enterobacter cloacae (Koga, 1995), vi sinh vật đại diện cho vi sinh vật có khả tổng hợp kích thích tố tăng trưởng cho trồng, bảng số vi sinh vật có khả tổng hợp kích thích tố tăng trưởng 10 Dựa vào đường chuẩn IAA tinh khiết để tính lượng IAA dịng vi sinh tổng hợp mơi trường có bổ sung L-Tryptophan khơng có bổ sung LTryptophan 1.1.5 Khảo sát đặc tính sinh hóa a Phương pháp nhuộm Gram - Sau chọn lọc dòng vi khuẩn tổng hợp IAA cao, ta tiến hành nhuộm Gram vi khuẩn (Cao Ngọc Điệp & Nguyễn Hữu Hiệp, 2000) - Trình tự nhuộm Gram thực sau: + Lấy 10µ nước cất vơ trùng nhỏ lên kính mang vật + Dùng que cấy khử trùng lửa đèn cồn lấy vi sinh vật trải lên kính mang vật + Hơ mẫu tên lửa đèn cồn để cố định vi sinh vật kính mang vật + Nhỏ từ đến hai giọt crytal violet lên kính mang vật cố định mẫu vi sinh vật để phút + Rửa lại nước cất vô trùng, dùng giấy thấm chậm nhẹ cho khô nước + Nhỏ từ đến hai giọt iod trải vùng mẫu cố định phút + Rửa lại nước cất vô trùng, chậm nhẹ cho khô + Rửa lại cồn thật nhanh để tẩy màu từ đầu đến cuối kính mang vật giọt cồn cuối khơng cịn màu tím + Rửa lại nước cất vô trùng vài giây, chậm nhẹ cho khô + Nhỏ từ đến hai giọt fusin trải vùng chứa mẫu khoãng phút + Rửa lại nước cất vơ trùng khơng cịn màu fushin + Dùng giấy thấm chấm nhẹ cho khơ kính mang vật + Quan sát kính hiển vi ghi nhận Gram vi khuẩn Nếu mẫu vi khuẩn có màu tím xanh crytal violet mẫu Gram dương, có màu hồng đỏ fushin mẫu Gram âm b Quan sát hình dạng khả di động + Dàn sinh khối vi khuẩn lên giọt nước lam kính sạch, quan sát di động tế bào vi khuẩn kính hiển vi 21 Thử nghiệm rau muống * Thí nghiệm chậu - Thử nghiệm tiến hành rau muống - Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên với lần lặp lại nghiệm thức sau: dòng vi khuẩn với mật số 109 tế bào/ml dòng vi khuẩn với mật số 108 tế bào/ml dòng vi khuẩn với mật số 107 tế bào/ml dòng vi khuẩn với mật số 106 tế bào/ml dòng vi khuẩn với mật số 105 tế bào/ml Đối chứng (không chủng vi sinh vật, khơng bón phân) Bón 100mg NPK/kg đất Bón 50mg NPK/kg đất Qui trình thí nghiệm: - Cách bón phân vi sinh vật: phân chia hai lần tưới, lần tưới vào lúc ngày gieo hạt, lần hai bón lúc 10 ngày sau gieo hạt, nghiệm thức bón 100 % NPK (100 mg NPK), lần bón 50 mg NPK lần bón 50 mg NPK, nghiệm thức bón lần 25 mg NPK lần hai 25 mg NPK Các chậu bón vi sinh bón hai lần, lần bón vứi mật độ ngiệm thức thể tích bón 5ml/chậu - Thời gian tiến hành thí nghiệm: Ngày tháng 01 năm 2009: gieo hạt mồng tơi vào chậu Ngày 13 tháng 01 năm 2009 tưới phân vi sinh vật lần Ngày 18 tháng 01 năm 2009 tưới phân vi sinh lần Ngày 23 tháng 01 năm 2009 thu kết phân tích thống kê * Thí nghiệm ngồi đồng - Dịng vi khuẩn với mật số thích hợp (10 7/ml) chọn để tiến hành thử nghiệm đánh giá hiệu đồng rau muống - Hạt giống rau muống , phân dùng thí nghiệm NPK - Thí nghiệm bố trí ngẫu nhiên địa điểm Tiền Giang, địa điểm trồng vụ, với nghiệm thức, nghiệm thức với lần lập lại sau: 22 Đối chứng âm (khơng bón phân) Đối chứng dương (100 kg NPK/1000m2) dòng vi khuẩn (6 lit/1000m2) dòng vi khuẩn (6 lit/1000m2) + 50 kg NPK/1000m2 dòng vi khuẩn (6 lit/1000m2) + 25 kg NPK/1000m2 NPK chia lần tưới (lần 1: – ngày sau gieo, lần 2: 15 – 20 ngày sau gieo) Vi sinh vật tưới lần với thời gian tưới đạm Cách làm đất: Đất làm cỏ, cuốc lên lếp ( chiều ngang lếp 1m ), phơi đất, băm đất nhỏ làm cỏ trước gieo hạt Cách gieo hạt: Hạt giống rau muống ngâm nước trước gieo, gieo hạt theo hàng, hàng cách 20cm.(10kg hạt/1000m2)(Nguyễn Mạnh Chinh & Phạm Anh Cường, 2007) Cách bón phân: Phân hóa học dòng vi khuẩn chia làm hai lần tưới vụ - lần 1: tưới vào lúc ngày sau gieo hạt - Lần 2: tưới vào ngày thứ 15 sau gieo hạt - Địa điểm 1: o Vụ 1: Gieo hạt ngày tháng năm 2009 - Ngày tháng năm 2009, tưới phân vi sinh vật lần - ngày 17 thu thập số liệu lần - ngày 18 tháng năm 2009, tưới phân lần - ngày 27 tháng năm 2009 thu thập số liệu lần - ngày tháng năm 2009 thu thập số liệu lần o Vụ 2: Gieo hạt ngày 14 tháng năm 2009 - Ngày 20 tháng năm 2009, tưới phân vi sinh vật lần - ngày 28 tháng năm 2009 thu thập số liệu lần - ngày 29 tháng năm 2009, tưới phân lần - ngày tháng năm 2009 thu thập số liệu lần - ngày 14 tháng năm 2009 thu thập số liệu lần 23 - Địa điểm 2: o Vụ 1: Gieo hạt ngày tháng năm 2009 - Ngày 11 tháng năm 2009, tưới phân vi sinh vật lần - ngày 19 thu thập số liệu lần - ngày 20 tháng năm 2009, tưới phân lần - ngày 30 tháng năm 2009 thu thập số liệu lần - ngày tháng năm 2009 thu thập số liệu lần Vụ 2: Gieo hạt ngày 16 tháng năm 2009 - Ngày 22 tháng năm 2009, tưới phân vi sinh vật lần - ngày 28 tháng năm 2009 thu thập số liệu lần - ngày 29 tháng năm 2009, tưới phân lần - ngày 10 tháng năm 2009 thu thập số liệu lần - ngày 16 tháng năm 2009 thu thập số liệu lần Thu thập tiêu: chiều cao cây, chiều dài rễ, số lá, đường kính thân, trọng lượng Dùng phương pháp thống kê để phân tích số liệu 24 KẾT QUẢ THẢO LUẬN Phân lập dòng vi khuẩn tổng hợp IAA Bảng Nguồn gốc 40 dòng vi khuẩn phân lập đất trồng rau Tiền Giang STT Dòng vi khuẩn Nguồn gốc 01 P1 Ấp Thân Hòa, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 02 P2 Ấp Thân Hòa, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 03 P3 Ấp Cửu Hòa, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 04 P4 Ấp Cửu Hòa, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 05 P5 Ấp Long Định A, Long Hưng, Châu Thành, Tiền Giang 06 P6 Ấp Long Định A, Long Hưng, Châu Thành, Tiền Giang 07 P7 Ấp Trung, Long Định, Châu Thành, Tiền Giang 08 P8 Ấp Trung, Long Định, Châu Thành, Tiền Giang 09 P9 Ấp Keo, Long Định, Châu Thành, Tiền Giang 10 P10 Ấp Keo, Long Định, Châu Thành, Tiền Giang 11 P11 Ấp 2, Đạo Thạnh, TP Mỹ Tho, Tiền Giang 12 P12 Ấp 2, Đạo Thạnh, TP Mỹ Tho, Tiền Giang 13 P13 Ấp Lương Phú B, Lương Hòa Lạc, Chợ Gạo, Tiền Giang 14 P14 Ấp Lương Phú B, Lương Hòa Lạc, Chợ Gạo, Tiền Giang 15 P15 Ấp Lương Phú C, Lương Hòa Lạc, Chợ Gạo, Tiền Giang 16 P16 Ấp Lương Phú C, Lương Hòa Lạc, Chợ Gạo, Tiền Giang 17 P17 Ấp Phú Thạnh A, Phú Kiết, Chợ Gạo, Tiền Giang 18 P18 Ấp Phú Thạnh A, Phú Kiết, Chợ Gạo, Tiền Giang 19 P19 Ấp Phú Thạnh A, Phú Kiết, Chợ Gạo, Tiền Giang 20 P20 Ấp Cửu Hòa, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 21 P21 Ấp Cửu Hòa, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 22 P22 Ấp Cửu Hòa, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 23 P23 Ấp Ngãi Lợi, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 24 P24 Ấp Ngãi Lợi, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 25 P25 Ấp Ngãi Lợi, Thân Cửu Nghĩa, Châu Thành, Tiền Giang 26 P26 Ấp Đơng B, Đơng Hịa, Châu Thành, Tiền Giang 25 27 P27 Ấp Đơng B, Nhị Bình, Châu Thành, Tiền Giang 28 P28 Ấp Đông B, Nhị Bình, Châu Thành, Tiền Giang 29 P29 Ấp Đơng B, Nhị Bình, Châu Thành, Tiền Giang 30 P30 Ấp 5, Tam Hiệp, Châu Thành, Tiền Giang 31 P31 Ấp Hòa Ninh, Hòa Tịnh, Chợ Gạo, Tiền Giang 32 P32 Ấp Hòa Ninh, Hòa Tịnh, Chợ Gạo, Tiền Giang 33 P33 Ấp Thạnh Hưng, Phước Thạnh, Châu Thành, Tiền Giang 34 P34 Ấp Thạnh Hưng, Phước Thạnh, Châu Thành, Tiền Giang 35 P35 Ấp Long Hưng, Long An, Châu Thành, Tiền Giang 36 P36 Ấp Long Mỹ, Long An, Châu Thành, Tiền Giang 37 P37 Ấp 4, Xã Trung An, TPMT, Tiền Giang 38 P38 Ấp 4, Xã Trung An, TPMT, Tiền Giang 39 P39 Ấp Long Tường, Long An, Châu Thành, Tiền Giang 40 P40 Ấp Long Thạnh, Long An, Châu Thành, TIền Giang 40 dòng vi khuẩn Pseudomonas sp phân lập từ địa diểm khác từ vùng rễ đất trồng rau tỉnh Tiền Giang, vi khuẩn phân lập từ môi trường King B, kết cho thấy chủng vi khuẩn có màu trắng đục, trắng sữa lồi, rời rạc Kết cho thấy phù hợp với nghiên cứu Nguyễn Thị Thu Hà (2008) 26 a b Hình Colony a.Các colony chủng P18 b Các colony chủng P24 27 Bảng Đặc điểm khuẩn lạc 40 dòng vi khuẩn phân lập Đặc điểm STT Dòng vi khuẩn 01 P1 Trắng đục Tròn Lồi Trơn 02 P2 Trắng đục Tròn Lồi Trơn 03 P3 Trắng sữa Không đều, lan rộng Nổi Mép vỏ sị 04 P4 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Gợn sóng 05 P5 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Gợn sóng 06 P6 Trắng sữa Trịn Lồi Trơn 07 P7 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 08 P8 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 09 P9 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 10 P10 Trắng đục Tròn Lồi Trơn 11 P11 Trắng đục Không đều, lan rộng Nổi Trơn 12 P12 Trắng sữa Không đều, lan rộng Nổi Gợn sóng 13 P13 Trắng đục Trịn Lồi Trơn 14 P14 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 15 P15 Trắng sữa Không đều, lan rộng Lồi Gợn sóng 16 P16 Trắng sữa Trịn Lồi Trơn 17 P17 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 18 P18 Trắng sữa Trịn Lồi Trơn 19 P19 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Gợn sóng 20 P20 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Mép vỏ sị 21 P21 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Mép vỏ sị 22 P22 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 23 P23 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 24 P24 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 25 P25 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 26 P26 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn Màu sắc Hình dạng Độ Bìa 28 27 P27 Trắng sữa Tròn Lồi Trơn 28 P28 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Gợn sóng 29 P29 Trắng đục Trịn Lồi Trơn 30 P30 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Lồi Mép vỏ sò 31 P31 Trắng sữa Trịn Lồi Trơn 32 P32 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Lồi Gợn sóng 33 P33 Trắng sữa Trịn Lồi Trơn 34 P34 Trắng đục Khơng đều, lan rộng Lồi Gợn sóng 35 P35 Trắng sữa Trịn Lồi Trơn 36 P36 Trắng sữa Không đều, lan rộng Nổi Mép vỏ sị 37 P37 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Mép vỏ sò 38 P38 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Gợn sóng 39 P39 Trắng sữa Khơng đều, lan rộng Nổi Mép vỏ sị 40 P40 Trắng đục Không đều, lan rộng Nổi Gợn sóng Bảng Tóm tắt đặc điểm khuẩn lạc Đặc điểm khuẩn lạc giải phóng IAA Màu sắc 31/40 77,5% trắng Hình dạng sữa 22/40 trịn 55% 9/40 trắng đục 32,5% Độ 34/40 lồi Bìa 23/40 trơn 57,5% 18/40 không đều, lan 4/40 mặt phẳng nhẵn 7/40 mép vỏ sò rộng 45% 17.5% 2/40 10/40 gợn sóng 25% 29 1.2 Khảo sát đặc tính sinh hóa Kết khảo xác đặc tính sinh hóa dòng vi khuẩn thu thập được, thử với thuốc thử Salkowski dòng phản ứng với thuốc thử có màu hồng, màu đặc trưng thuốc thử Salkowski Màu hồng có độ đậm nhạt khác nhau, vi khuẩn nuôi môi trường có thêm L- tryptophan dịng P10 có màu hồng nhạt dịng P18 có màu hồng đậm (hình 4) Cịn vi khuẩn ni mơi trường có khơng có L- tryptophan dịng P22 có màu hồng nhạt dịng P24 có màu hồng đậm (hình 5) Hình Phản ứng với thuốc thử Salkowski (Có trytophan) Hình Phản ứng với thuốc thử Salkowski (Không trytophan) 30 Bảng Phản ứng với thuốc thử dòng vi khuẩn Thuốc thử Salkowski Dòng vi khuẩn Thuốc thử Salkowski Dòng vi khuẩn Lặp lại Lặp lại 2 P1 + + P21 + + P2 + + P22 + + P3 + + P23 + + P4 + + P24 + + P5 + + P25 + + P6 + + P26 + + P7 + + P27 + + P8 + + P28 + + P9 + + P29 + + P10 + + P30 + + P11 + + P31 + + P12 + + P32 + + P13 + + P33 + + P14 + + P34 + + P15 + + P35 + + P16 + + P36 + + P17 + + P37 + + P18 + + P38 + + P19 + + P39 + + P20 + + P40 + + Đường chuẩn IAA đo 31 Hình Đường chuẩn IAA tinh khiết Tải FULL (60 trang): https://bit.ly/3konjXs Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net Bảng Khả tổng hợp IAA 40 dịng vi khuẩn Dịng vi khuẩn µg/ml P1 8.11 P2 8.40 P3 10.78 P4 2.66 P5 5.57 P6 7.25 P7 9.93 P8 5,05 P9 7.78 P10 3.32 P11 8.03 P12 3.76 P13 4.32 P14 5.08 P15 6.71 P16 5.19 P17 10.61 32 P18 16.92 P19 6.46 P20 10.57 P21 4.96 P22 5.27 P23 9.16 P24 22.86 P25 6.00 P26 7.74 P27 8.56 P28 3.86 P29 8.68 P30 9.18 P31 11.55 P32 5.61 P33 7.50 P34 8.20 P35 5.58 P36 3.87 P37 6.04 P38 6.18 P39 6.04 P40 7.75 SE (N=4) 2.84 5%LSD 7.97 Kết bảng cho thấy dịng vi khuẩn có khả tổng hợp IAA, thống kê cho thấy trọng lượng IAA dịng vi khuẩn khác biệt có ý nghĩa khoảng biến động trung bình trọng lượng IAA khoảng (2.66 - 22.86 µg/ml), dịng P4 có trung bình vè trọng lượng nhỏ 2.66 µg/ml dịng P24 có trung bình trọng lượng cao 22 86 µg/ml 33 Hartmann et al 1983 thành công nguyên cứu khả sản xuất IAA Azospirillum thuốc thử Salkowki Patten & Glick 2002, nguyên cứu khả sản xuất IAA Pseudomonas, nuôi cấy 48 sau dùng pipet hút 1ml ml thuocs thử Salkowki, sau lắc 20 phút nhiệt độ (26 ± 1oC) quan sát chuyển sang màu hồng đo máy quang phổ xác định nồng độ IAA mà vi khuẩn Pseudomonas tạo Khaharova et al (1999) dùng thuốc thử Salkowki để kiểm tra định lượng lượng IAA tạo dòng vi khuẩn Farah Ahmad et al, (2004) phân lập 21 dòng vi khuẩn (Azotobacter sp., 10 and fluorescent Pseudomonas sp., 11), phân lập từ vùng đất khác vùng gần thành phố Aligarh Mức độ tổng hợp IAA thấp dòng khơng thêm tryptophan dịng Azotobacter cho thấy khả tổng hợp IAA cao ( 7.3 – 32.8 mg/ml) Đối với fluorescent Pseudomonas có khả tổng hợp IAA cao mơi trường khơng có tryptophan, dịng tổng hợp IAA cao (41.0 – 53.2 mg/ml), dịng có lượng IAA tổng hợp mức (23.4 - 36.2mg/ml) Tải FULL (60 trang): https://bit.ly/3konjXs Dự phòng: fb.com/TaiHo123doc.net a b Hình Hình nhuộm Gram a Dịng P18 b Dòng P24 Kết nhuộm Gram dòng P18 P24 cho thấy dòng P18 P24 có màu hồng đỏ fushin, dịng vi khuẩn vi khuẩn Gram âm Quan sát hình dạng khả di động: Kết quan sát kính hiển vi cho thấy dịng P18 P24 có hình que có khả chuyển động chậm Kết cho thấy phù hợp với nghiên cứu Smidt & Kousuge, 1978) 34 Kết thử nghiệm rau muống Thử nghiệm chậu Bảng Ảnh hưởng dịng N24 phân hóa học lên thí nghiệm chậu Chiều cao (cm) Đường kính thân (cm) Trọng lượng Chiều dài rễ (cm) Nghiệm thức Số NT1 10.33 11.50 0.36 13.33 4.97 NT2 10.00 13.50 0.39 16.00 5.06 NT3 11.33 12.66 0.38 15.83 4.23 NT4 10.00 11.33 0.33 17.66 5.85 NT5 9.33 12.50 0.37 14.83 4.67 NT6 9.33 7.00 0.29 11.66 2.86 NT7 9.66 10.83 0.26 10.33 2.59 NT8 11.33 13.00 0.36 14.00 4.55 SE(=3) 1.06 0.82 0.30 1.29 0.66 5%LSD 3.17 2.48 0.91 3.88 1.99 Ghi : NT1 : chủng vi sinh mật độ 10 9, NT2= chủng vi sinh mật độ 10 8, NT3= chủng vi sinh mật độ 10 7, NT4= chủng vi sinh mật độ 10 6, NT5= chủng vi sinh mật độ 10 5, NT6= tưới nước, NT7= bón 50% phân NPK ( ), NT8= bón 100% phân NPK Kết thống kê bảng vê thử nghiệm chậu sau 14 ngày số ta thấy khơng có khác biệt ý nghĩa thống kê, khoảng biến động trung bình số (9.33- 11.33), nghiệm thức 2,3 có trung bình số lớn nghiệm thức (bón 50% phân NPK) có số trung bình số Qua kết cho thấy chủng vi khuẩn P24 có ảnh hưởng đến thí nghiệm Về chiều cao có khác biệt ý nghĩa thống kê, khoảng biến động (7.00- 13.50 cm) nghiệm thức (chỉ tưới nước) có trung bình chiều cao thấp (7.00 cm) nghiệm thức 1(chủng vi khuẩn với mật độ 10 9) có trung bình chiều cao cao (13.50 cm) Về chiều dài rễ có khác biệt ý nghĩa thống kê, khoảng biến động (10.33- 17.66 cm) nghiệm thức (bón 50% phân NPK) có trung bình chiều dài rễ thấp 35 5633338 ... triển trồng Từ lý nên thực đề tài Luận văn tốt nghiệp “ Phân lập số dòng vi khuẩn có khả tổng hợp Indole-3-acetic acid (IAA) từ đất trồng rau thử nghiệm rau muống Tiền Giang ” MỤC TIÊU ĐỀ TÀI - Phân. .. TÀI - Phân lập số dịng vi sinh có khả tổng hợp IAA cao đất trồng rau Tiền Giang - Tìm dịng có độ hữu hiệu cao trộn phân sinh học - Khảo sát khả tổng hợp phytohormon dòng chọn trồng LƯỢC KHẢO TÀI... 1995), vi sinh vật đại diện cho vi sinh vật có khả tổng hợp kích thích tố tăng trưởng cho trồng, bảng số vi sinh vật có khả tổng hợp kích thích tố tăng trưởng 10 Bảng 2: Các nhóm vi sinh vật tổng hợp