Chuyên đề thực tập cây dừa cạn catharanthus roseus và nhóm hợp chất vinca alkaloid

MỤC LỤC PHỤ LỤC iii GIỚI THIỆU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Catharanthus 1.2 Catharanthus roseus (L).G.Don [1] 1.2.1 Tên gọi .2 1.2.2 Đặc điểm thực vật 1.2.3 Phân bố 1.2.4 Phân loại [6] 1.2.5 Trồng trọt thu hoạch 1.2.6 Một số công dụng chủ yếu .6 CHƯƠNG 2:CÁC HỢP CHẤT ANKALOID TRONG CÂY C.roseus 2.1 Alkaloid loài Catharanthus roseus .8 2.1.1 Alkaloid 2.1.1.1 Khái niệm 2.1.1.2 Phân loại 2.1.1.3 a Tính chất alkaloid Tính chất vật lý .9 b Tính chất hóa học 10 2.1.2 2.2 Alkaloid catharanthus [1] 10 Các vinca alkaloid 13 2.2.1 Vinbastine 13 2.2.1.1 Công thức 13 2.2.1.2 2.2.2 Đặc điểm 13 Vincristine .14 2.2.2.1 Công thức 14 2.2.2.2 Đặc điểm 14 2.2.3 Sinh tổng hợp [6] 15 2.2.4 Tác dụng dược lý [1], [5], 18 i 2.2.5 Ứng dụng y học 21 2.2.5.1 Vinblastin [1] 21 2.2.5.2 Vincristine [1] 23 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP CHIẾT TÁCH 3.1 25 Phương pháp chiết tách dùng chất lưu siêu tới hạn 25 3.1.1 Khái niệm chiết suất siêu tới hạn: 25 3.1.2 Ưu điểm SC-CO2 chiết xuất hoạt chất tự nhiên: 25 3.2 Phương pháp chiết tách dùng bình chiết Soxhlet [6] .27 3.3 Phương pháp chiết tách solid – liquid [6] 27 3.4 Phương pháp tách chiết nước nóng [6] 28 3.5 Sắc ký lỏng cao áp hiệu cao [4] 29 3.5.1 Định nghĩa: 29 3.5.2 Cấu tạo hoạt động máy sắc ký lỏng cao áp HPLC 30 CHƯƠNG 4:PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY IN VITRO TẾ BÀO C.roseus 4.1 31 Nuôi cấy mô ý nghĩa nuôi cấy mô [2] 32 4.1.1 Giới thiệu .32 4.1.2 Tính ưu việt ni cấy mô tế bào thực vật 32 4.1.3 Một số kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật 32 4.1.3.1 Nuôi cấy quan 32 4.1.3.2 Nuôi cấy mô phân sinh (meristem) .32 4.1.3.3 Nuôi cấy mô sẹo (callus) 33 4.1.3.4 Nuôi cấy huyền phù tế bào 33 4.1.3.5 Tạo phôi soma – tạo hạt nhân tạo .34 4.1.3.6 Nuôi cấy hạt phấn bao phấn đơn bội 35 4.1.3.7 Nuôi cấy tế bào trần 35 4.1.4 Chất điều hòa sinh trưởng [2] 35 4.1.4.1 Auxin 35 4.1.4.2 Cytokinin 36 4.1.4.3 Gibberellin 37 4.1.4.4 Acid abscisic 38 4.1.4.5 Ethylene 39 ii 4.1.5 4.1.5.1 Môi trường nuôi cấy[2] 40 Đường (nguồn carbohydrate) 40 4.1.5.2 Các muối khoáng đa lượng .41 4.1.5.3 Các muối khoáng vi lượng .41 4.1.5.4 Các vitamin chất kích thích sinh trưởng 41 4.1.5.5 4.2 Các chất bổ sung 41 Phương pháp nuôi cấy in vitro tế bào C.roseus [8] 43 4.2.1 Nuôi cấy dịch huyền phù tế bào .43 4.2.2 Nuôi cấy mô sẹo 44 4.2.3 Nuôi hạt nhân tạo 45 4.2.4 Nuôi cấy mô phân sinh 45 4.2.5 Nuôi cấy rễ tơ 46 4.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình ni cấy tế bào C.roseus .47 4.3.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng .47 4.3.2 Ảnh hưởng cường độ chiếu sáng .49 4.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 49 4.3.4 Ảnh hưởng nồng độ đường 50 KẾT LUẬN 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 iii PHỤ LỤC Phụ lục 1: Tra cứu bảng Bảng 1: Ảnh hưởng nồng độ đường sucrose đến nuôi cấy huyền phù tế bào 57 Phụ lục 2: Tra cứu hình Hình : Cành nở hoa; 2.Quả; 3.Hạt .8 Hình 2: Hạt C.roseus Hình 3: Ba giống C.roseus 10 Hình 4: Cơng thức hóa học leurosidine, vincristine, vinblastine, leurosine, catharine, vinamidine 18 Hình 5: Cơng thức hóa học ajmalicin 18 Hình 6: Cơng thức hóa học vinflunine 19 Hình 7: Cơng thức hóa học vinblastine .19 Hình 8: Cơng thức hóa học vincristine .20 Hình 9: Con đường chuyền hóa thành vinblastine vincristine 22 Hình 10: Con đường sinh tổng hợp Vinblastine 23 Hình 11: Quá trình sinh tổng hợp vincristine từ vinblastine 24 Hình 12: Cơ chế ức chế hình thành cấu trúc vi ống vinca alkaloid 26 Hình 13: Cấu trúc hóa học vinblastine sulfate 28 Hình 14: Sản phẩm cấu trúc hóa học vincristine sulfate 30 Hình 15: Sơ đồ trình chiết tách SFE 34 Hình 16: Bình Soxhlet 34 Hình 17: Sơ đồ chưng cất lôi nước 36 Hình 18: Sản phẩm mô sẹo mọc từ hạt nhân tạo 54 Hình 19: Sản phẩm rễ tơ 55 Phụ lục 3: Tra cứu đồ thị Đồ thị 1: Đường cong tăng trưởng dịch huyền phù tế bào mơi trường có bổ sung nồng độ đường khác 58 iv GIỚI THIỆU Dừa cạn Catharanthus roseus G Don thuộc họ Trúc đào Apocynaceae loại cảnh phổ biến đồng thời loại dược thảo dân gian Người ta khám phá khả chữa bệnh loại nhờ chứa nhiều loại hợp chất alkaloid Từ dừa cạn người ta chiết chất chữa ung thư vinblastine, vincristine chữa cao huyết áp ajmalicin, serpentin Hiện nay, nhu cầu C.roseus cao, thực tế, điều kiện tự nhiên nhân giống C.roseus đường sinh sản hữu tính chậm cịn phụ thuộc nhiều vào mơi trường Mặt khác, lượng alkaloid thu từ tự nhiên thấp nên khơng đáp ứng nhu cầu thị trường Vì em chọn đề tài “Cây dừa cạn Catharanthus roseus nhóm hợp chất Vinca alkaloid” với mục đích tìm hiểu dược tính, cách thu nhận ứng dụng Nhờ có giá trị dược tính nên C.roseus trở thành đối tượng nhiều nghiên cứu sinh học Những nghiên cứu chủ yếu liên quan tới điều kiện nuôi cấy in vitro quan, mơ tế bào khác nhau, q trình tách indole alkaloid xác định cấu trúc hóa học q trình sinh tổng hợp hóa tổng hợp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Catharanthus Giống Catharanthus (thuộc họ trúc đào Apocynaceae) gồm có lồi, hầu hết thân thảo lâu năm Trong số có lồi Catharanthus pusillus có nguồn gốc từ Ấn Độ, cịn tất lồi cịn lại có nguồn gốc từ Madagascar Số lượng nhiễm sắc thể cho tất loài Catharanthus 2n=16 Tám lồi thuộc giống là:  Catharanthus coriaceus Markgr Madagascar  Catharanthus lanceus (Bojer ex A.DC.) Pichon Madagascar  Catharanthus longifolius (Pichon) Pichon Madagascar  Catharanthus ovalis Markgr Madagascar  Catharanthus pusillus (Murray) G Don India subcontinent  Catharanthus roseus (L) G Don Madagascar  Catharanthus scitulus (Pichon) Pichon Madagascar  Catharanthus trichophyllus (Baker) pichon Madagascar Những giống Catharanthus có nguồn gốc từ Madagascar thường trồng để làm cảnh Được biết đến nhiều lồi Madagascar Periwinkle hay cịn gọi Vinca nhờ vào khả chịu hạn chịu nóng Ngoài việc biết đến loại cảnh, từ lâu dịch chiết alkaloid từ Catharanthus roseus sử dụng y học dân gian loại thuốc chống đái tháo đường, lợi tiểu, chữa tiêu chảy, xuất huyết, giúp vết thương mau lành, chống viêm mắt, làm se da….và ngày người ta cịn tìm cơng dụng quan trọng lồi Catharanthus roseus khả trị bệnh ung thư hiệu quả.[6] 1.2 Catharanthus roseus (L).G.Don [1] 1.2.1 Tên gọi Tên khoa học: Catharanthus roseus (L) G Don; Vinca rosea L; Lochnera rosea Reich Tên khác: dừa, hoa hải đằng, trường xn hoa, phjắc pót đơng (Tày), dương giác, Madagascar periwinkle Họ: Trúc đào (Apocynaceae) 1.2.2 Đặc điểm thực vật Cây dừa cạn thân thảo sống lâu năm, cao 40-60 cm, phân nhiều cành, có rễ phát triển, thân gỗ phía gốc, mềm phần Mọc thành bụi dày Lá mọc đối, thuôn dài, đầu nhọn, cuống hẹp nhọn, dài 4-6cm, rộng 2-3 cm, hai mặt nhẵn, mặt sẫm bóng, mặt nhạt Hoa trắng hồng, có mùi thơm Hoa mọc riêng lẻ kẽ gần Quả gồm đại, dài 2-4cm, rộng 2-3cm, mọc thẳng đứng, ngả sang hai bên, vỏ có vạch dọc, đầu tù, chứa 12-20 hạt nhỏ màu nâu nhạt, hình trứng, mặt hạt có hột thành đường chạy dọc Mùa hoa gần quanh năm 3 Hình : Cành nở hoa; 2.Quả; 3.Hạt Hình 2: Hạt C.roseus 1.2.3 Phân bố Chi Catharanthus G.Don có nguồn gốc Madagascar Lồi dừa cạn di nhập sang nhiều nước nhiệt đới Nam Á Đơng Nam Á có Việt Nam đảo Hải Nam Trung Quốc Vào kỷ 18, dừa cạn trồng Paris, sau có mặt nhiều vườn thực vật khác Châu Âu Ở Việt Nam, dừa cạn hoang dại, có vùng phân bố tự nhiên tương đối đặc trưng từ tỉnh Quảng Ninh đến Kiên Giang dọc theo vùng ven biển, tập trung tỉnh miền Trung Thanh Hóa, Nghệ An, Thừa Thiên-Huế, Quảng Nam, Đà Nẵng, Bình Định Phú n Ngồi cịn có Côn Đảo Phú Quốc Ở vùng phân bố tự nhiên ven biển, dừa cạn có mọc gần loại bãi cát rừng phi lao, trảng cỏ bụi thấp, có khả chịu đựng điều kiện đất đai khô cằn vùng cát ven biển Dừa cạn trồng khắp nơi nước để làm cảnh làm thuốc 1.2.4 Phân loại [6] Catharanthus roseus G.Don nguồn giàu alkaloid thuộc chủng loại alkaloid terpenoid indole cô lập từ giống khác nhau:  ‘roseus’ với hoa màu tím hồng  ‘albus’ với hoa màu trắng  ‘ocellatus’ với hoa màu trắng nhụy đỏ Trong hoa màu đỏ tím có hàm lượng vincristine vinblastine cao Hình 3: Ba giống C.roseus 1.2.5 Trồng trọt thu hoạch Dừa cạn loại ưa sáng, ưa ẩm có khả chịu hạn Trong điều kiện trồng trọt, cung cấp đầy đủ điều kiện cần thiết, sinh trưởng phát triển mạnh, khối lượng chất xanh thu cao gấp đơi mọc từ thiên nhiên Cây mọc từ hạt tự nhiên vào khoảng 40%, xử lý tăng lên 90% [9] Cây trồng từ hạt hoa sau 4-5 tháng Trong thời kì sinh trưởng mạnh, bị cắt, tái sinh chồi khỏe Nguồn dừa cạn mọc tự nhiên Việt Nam tương đối dồi Trước năm 1975, miền Bắc xuất sang Đông Âu 1-3 tấn/năm Những năm gần đây, lượng xuất sang Pháp (khoảng 10 tấn/năm) thường xuyên hơn, chủ yếu từ trồng Phú Yên [1] Vào năm 1970, Viện Dược Liệu tiến hành nghiên cứu kỹ thuật trồng dừa cạn quy mô sản xuất Cây nhân giống hạt, hecta cần gieo 500-700gr hạt vườn ươm Thời vụ gieo hạt vào tháng 9-10 tháng 1-2 Cần ngâm hạt 34 giờ, vớt để gieo lên luống vườn ươm chuẩn bị kỹ Sau phủ rơm tưới nước Sau khoảng tuần, hạt nảy mầm, cần tháo bỏ rơm rạ Khi có 3-4 đôi thật (khoảng 40-45 ngày sau gieo) đánh trồng Có thể gieo thẳng cách tốn cơng chăm sóc [1] Dừa cạn ưa đất pha cát, đất phù sa, chịu hạn chịu úng Đất cần làm kỹ, lên luống cao 20cm, mặt luống rộng 50-60cm, dung 10-15 phân chuồng hoai mục 120-150 kg super lân để bón lót Trồng với khoảng cách 30x30cm, sau trồng cần tưới để mau bén rễ Tưới thúc cho hecta 100-200kg ure, tưới lần, cách tháng Mặc dù chịu hạn phải giữ đủ ẩm thường xuyên Chú ý thoát nước nhanh sau mưa lớn Khi trồng, thường bị sâu bám phá hoại Cây vườn bị Phytophthora làm cho chết hàng loạt Cần tỉa bớt cho đất thoáng phun phòng Boxdeaux [1] Sau trồng 3-4 tháng, cho thu hoạch, cành mang dài 10-15cm cắt phơi sấy khơ Ở đất nước chăm bón tốt thu hoạch nhiều lứa Trung bình hecta thu 1-1,2 khô lứa Ta thu rễ để chiết ajmalicin Trong điều kiện ngày ngắn, hàm lượng ABA gia tăng mầm chồi dẫn đến miên trạng Tuy nhiên có trường hợp điều kiện ngày ngắn gây miên trạng vài loài lại khơng có gia tăng ABA nội sinh Việc xử lý ABA ngoại sinh lên mầm chồi lên hột kích thích miên trạng chúng Từ phát hiện, ABA xem chất gây nên rụng lá, trái hoa Thật điều khơng hồn tồn ABA khơng trực tiếp ảnh hưởng lên rụng ABA tác động gián tiếp lên q trình lão hóa trước trưởng thành làm gia tăng sản sinh ethylene ethylene đánh thức số gene liên quan đến rụng Ngày người ta biết ABA có nhiều ảnh hưởng mặt sinh lý, sinh hóa phân tử hột có mặt phổ biến lúc hột phát triển Tuy nhiên vai trò trực tiếp ABA q trình cịn chưa rõ 4.1.4.5 Ethylene Những người Ai Cập ethylene tác nhân gây chín trái họ tạo vết thương trái Ngày nay, ethylene biết hormone điều hồ chín trái Năm 1901, Neljubow chứng minh ethylene ức chế vươn dài, kích thích phát triển theo chiều ngang Ngày nay, người ta biết ethylene có khả kích thích ức chế vươn dài thân, rễ quan khác Ethylene có biểu kích thích vươn dài thân rễ với tốc độ chậm Đáp ứng ba kích thích ethylene hoạt động chế tồn Đáp ứng ba dựa tính sinh trưởng ngang, phồng lên ức chế phát triển chiều cao thân Ví dụ: đậu Hà Lan gặp phải bề mặt cứng đất, đá đáp ứng với sinh trưởng theo kiểu ba, cho phép đâm thủng chung quanh chướng ngại, vươn tới bề mặt đất tiếp tục phát triển Ethylene vùng móc câu giúp trì hình móc câu chặt chẽ, vượt qua áp lực vật lý va chạm với đất mà không bị tổn thương Khi nhận ánh sáng đỏ, sản sinh ethylene giảm Kết móc mở Điều hoạt động chế an toàn, ngăn cản mở trước móc giảm thương tổn đến trước nhơ lên khỏi mặt đất 39 Q trình rụng quan trọng nơng nghiệp ảnh hưởng đến suất hiệu sản xuất Ethylene có vai trị tự nhiên việc điều hồ tốc độ rụng Năm 1985, Reid đưa chứng: ethylene sản sinh gia tăng trước rụng nhiều quan rụng; Xử lý ethylene kích thích rụng thực vật; Những chất ức chế sinh tổng hợp ethylene ức chế hoạt động ethylene ức chế rụng Nhiều năm qua người ta quan sát khói từ gỗ thúc đẩy trổ hoa khóm xồi, thành phần khói ethylene Ethylene phần lớn trường hợp ức chế trình trổ hoa; Ngược lại, khóm, xồi vải, ethylene kích thích trổ hoa Cây xử lý trực tiếp với ethylene gián tiếp thông qua việc sử dụng chất phóng thích ethylene Lão hố đặc trưng phân rã diệp lục tố, protein, RNA Cả hoa xử lý với ethylene ngoại sinh gia tăng q trình lão hố gia tăng sản sinh ethylene nội sinh Cần ý có trường hợp ngoại lệ, ethylene khơng đơn lẻ liên quan đến q trình lão hố: nhiều khơng gia tăng sản sinh ethylen trước lão hố Ethylene cũng có liên quan đến quang hợp, hơ hấp, vận chuyển, miên trạng, nảy mầm hột, nhú chồi, ưu chồi ngọn, sinh trưởng tế bào, nuôi cấy mô, thành lập phôi, nghiêng, khởi sinh rễ, quan dự trữ, thành lập gỗ, ức chế mầm hoa, phát triển giới tính, địa hướng động, rỉ nhựa thành lập nhựa mủ 4.1.5 Môi trường nuôi cấy[2] Đối với kỹ thuật nuôi cấy mô, nuôi cấy in vitro địi hỏi điều kiện mơi trường nuôi cấy môi trường xung quanh Những điều kiện thay đổi q trình ni cấy điều cho phép người ta chế ngự kỹ thuật cách tế nhị Mặc dù thành phần môi trường nuôi cấy mô thực vật thay đổi tùy theo loại phận nuôi cấy, phát triển phân hóa mơ cấy tùy theo ta muốn trì mơ trạng thái mơ sẹo, tạo rễ…mà thay đổi nhiều tất mơi trường ni cấy bao gồm thành phần sau: - Đường làm nguồn carbon - Các muối khoáng đa lượng - Các muối khoáng vi lượng - Các vitamin 40 - Các chất kích thích sinh trưởng Ngồi ra, tác giả thêm số chất hữu có thành phần hóa học xác định ( amino acid, EDTA…) không xác định (nước dừa, nước chiết nấm men, nước chiết chuối, nước chiết khoai tây, cà chua…) 4.1.5.1 Đường (nguồn carbohydrate) Trong nuôi cấy nhân tạo, đường sử dụng nguồn carbon để mô, tế bào thực vật tổng hợp nên chất hữu giúp tế bào phân chia, tăng sinh khối mô, ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển chồi Hai dạng đường thường sử dụng saccharose glucose, saccharose sử dụng phổ biến Tùy theo mục đích ni cấy mà nồng độ đường có thay đổi Nhu cầu cacbohydrate mơi trường nuôi cấy 2-3% đường saccharose hay thấp đường glucose [10] 4.1.5.2 Các muối khống đa lượng Nhu cầu muối khống mơ tế bào thực vật tách rời không khác nhiều so với trồng tự nhiên Các nguyên tố đa lượng cần thiết N, P, K, Fe, Ca, Mg 4.1.5.3 Các muối khoáng vi lượng Nhu cầu muối khoáng vi lượng mơ thực vật ni cấy cịn nghiên cứu, chúng thành phần thiếu cho phát triển mô tế bào thực vật Nhưng để an toàn, tác giả cung cấp hầu hết yếu tố vi lượng cho mô nuôi cấy 4.1.5.4 Các vitamin chất kích thích sinh trưởng Để kích thích cho sinh trưởng phát triển mô thực vật nuôi cấy, người ta bổ sung thêm số loại vitamin: myo-inositol, vitamin PP, vitamin B1, B6…và chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin, cytokinin, gibberelin 4.1.5.5 Các chất bổ sung a Agar (thạch) Agar thành phần định trạng thái lý môi trường Hàm lượng agar dùng cho môi trường nuôi cấy dao động từ 0,6-1,0% theo khối lượng Agar nguyên liệu phổ biến dùng cho việc pha môi trường bán rắn hay môi trường rắn Nếu bổ sung agar với nồng độ cao mơi trường trở nên cứng, khuếch tán chất dinh dưỡng hấp thụ mơ gặp khó khăn (Bhojwani Razdan; 1983) Đa số nuôi cấy phôi thực môi trường có agar phụ thuộc vào mà sử dụng cho phù hợp [11] b Than hoạt tính Than hoạt tính sử dụng mơi trường ni cấy chất phụ gia than hoạt tính có khả hấp phụ chất tiết từ mô cấy, vỏ bao phấn…và làm tăng hiệu suất sinh phôi (Fridborg et al, 1978; Ammirato, 1983) Than hoạt tính khơng phải chất điều hịa sinh trưởng làm thay đổi thành phần môi trường, hấp thu nhiều hợp chất khác nhau, mà chất hình thành q trình hấp mơi trường, hấp thu chất tiết từ mẫu cấy chất điều hòa 41 sinh trưởng bổ sung vào môi trường, ngăn chặn phát triển mô sẹo không mong đợi Ngồi than hoạt tính cịn góp phần đẩy mạnh phát sinh phơi hình thành rễ [12] Trong số nghiên cứu ảnh hưởng than hoạt tính bổ sung vào mơi trường nuôi cấy, thấy diện than hoạt tính mơi trường ni cấy quan trọng việc làm tăng chiều cao cây, chiều dài rễ, trọng lượng tươi trọng lượng khô, làm giảm hình thành chồi nách từ mơ cấy cách rõ rệt [10] Ngồi ra, mẫu cấy ni cấy mơi trường có than hoạt tính khỏe mạnh, có màu xanh đậm, cịn mơi trường khơng có than hoạt tính mẫu cấy yếu vàng [13] c Các chất hữu khác Bên cạnh chất điều hòa sinh trưởng, người ta sử dụng nhiều dung dịch hữu phức tạp có thành phần khơng xác định nước dừa, dịch chiết chuối xanh, khoai tây, cà chua dịch chiết nấm men, casein thủy phân…để nhân giống nhằm tăng cường sinh trưởng phát triển mô cấy Hiệu thúc đẩy trình tăng trưởng giải thích vitamin, amino acid chất điều hòa khác chứa chúng (Perik, 1987)  Nước dừa Năm 1941, Van Ovebeck xác nhận tác dụng kích thích dừa nuôi cấy phôi họ Cà Năm 1948, Steward thu kết mô cà rốt Nước dừa vô trùng Trung tâm Sâm Việt Nam dùng làm thành phần môi trường nuôi cấy mô tạo sinh khối mô Sâm K5 thành công từ năm 1983 Ngồi sử dụng ni cấy thành cơng lồi khác đảng sâm di thực, phong lan… Nhiều cơng trình nghiên cứu xác định nước dừa khối lượng nước chiếm 90% cịn có chất đường, amino acid, lipid, vitamin, nguyên tố vi đa lượng, acid hữu cơ, chất kích thích sinh trưởng Theo Tuleke, amino acid nước dừa xanh chiếm 40% amino acid tổng số glutamine, nước dừa già có số lượng lớn acid glutamic, glutamine, serin, leucin, acid amino butyric Ngồi nước dừa cịn có acid hữu có chứa acid hữu có chứa acid malic, sikimic, quinic nguồn hydrate carbon khác saccharose, glucose, fructose Theo Vandebelt (1954), nước dừa có nhiều vitamin acid nicotinic, acid pantotenic, biotin, riboflavin, acid folic, thiamin pyridoxine Theo Paris, Duhamat (1953) nước dừa có chứa IAA Cịn Radiey (1958) phát gibberelin dịch thực vật  Dịch chiết chuối Chuối ăn lâu đời gắn liền với sống gia đình hàng triệu dân vùng nhiệt đới nói chung phổ biến nước ta Hàm lượng chất dinh dưỡng chuối cao, đặc biệt đường chiếm 10-22% nhiều loại vitamin khác vitamin 42 B1, B2, PP, C đặc biệt vitamin A chiếm từ 250-320 đơn vị Theo kết nghiên cứu Atwater, thành phần dinh dưỡng chuối cao: protein 1.3%, mỡ 0.6%, bột đường 22%, tro 0.8%  Khoai tây Thành phần khoai tây bao gồm: magnesium 10%, thyamin 15%, riboflavin 3%, vitamin C 50-70%, Dietary Fibre 10-15%, phosphorus 5%, vitamin B6 13-19%, acid forlic 7%, Fe 6-14%, protein 6.5%, iodine 14%, acid pantothenic 4-7%, calcium 6%, niacin 10%, kẽm 5% [14] 4.2 Phương pháp nuôi cấy in vitro tế bào C.roseus [8] Trước nguyên liệu thô dùng để sản xuất alkaloid thường thu nhận hầu hết vùng mà C.roseus xuất tự nhiên vùng trồng trọt Điều kiện thời tiết đặc tính đất số nước châu Âu bất lợi cho việc gieo trồng C.roseus Vì trồng loại hàng năm nhà kính nhà mái vịng làm nhựa Mặt khác, nhu cầu alkaloid lớn giá chúng cao, hàm lượng alkaloid nguyên liệu thô thu nhận từ tự nhiên thấp Do đó, việc thu nhận indole alkaloid từ mô quan thực vật, từ nhân giống in vitro hướng cần phát huy Mô sẹo, huyền phù tế bào rễ tơ nuôi bioreactor sử dụng nhiều thí nghiệm Những mơ nuôi cấy từ quan khác tổng hợp nhiều hợp chất thứ cấp có tính di truyền ổn định.Nhiều triển vọng hứa hẹn bao gồm việc sản xuất indole alkaloid : ajmalicine mơ sẹo, catharanthine ni cấy bình lắc bioreactor có sục khí, vinblastine từ chồi rễ tơ 4.2.1 Nuôi cấy dịch huyền phù tế bào Nhiều nghiên cứu thử nghiệm việc thu nhận huyền phù tế bào nuôi cấy cho suất thu indole alkaloid cao, đặc biệt vinblastine vincristine Phương pháp sản xuất catharanthine ajmalicine dịch huyền phù nuôi cấy bioreactor thành công Moreno cộng (1996) nghiên cứu ảnh hưởng chất cảm ứng lên đường chuyển hóa khác liên quan đến q trình chuyển hóa hợp chất thứ cấp ni cấy huyền phù tế bào C.roseus Dịch trích tế bào nấm Phytium aphanidermatum tiệt trùng dùng nghiên cứu Những tế bào C.roseus biến đổi trình chuyển hóa chúng để phản ứng lại tác động nấm Zhao cộng (2001) thử nghiệm nhiều chất cảm ứng nấm nhận từ 12 loại nấm ảnh hưởng chúng lên việc cải thiện sản xuất indole alkaloid huyền phù tế bào C.roseus Những kết cho thấy chất chiết từ nấm khác kích thích tích lũy indole alkaloid khác nhau, gấp đến lần nuôi cấy thường Zhao cộng (2001) tăng sản phẩm catharanthine tế bào nuôi cấy C.roseus cách kết hợp chất cảm ứng nuôi bình lắc bioreactor Tác động 43 tổng hợp lên tích lũy alkaloid tế bào ni cấy theo dõi chúng xử lý với vài kết hợp chất cảm ứng nấm hóa chất Sự kết hợp tetramethyl ammonium bromide nấm sợi Aspergillum niger cho hiệu suất thu ajmalicine cao cải thiện tích lũy catharanthine Trong kết hợp chất cảm ứng malate sodium alginate cho kết hiệu suất catharanthine cao tích lũy ajmalicine cao tế bào ni cấy Các tác giả sau phát triển quy trình để nâng cao việc sản xuất catharanthine tế bào C.roseus ni bình lắc bioreactor Sau 10 ngày nuôi cấy thu catharanthine với hiệu suất theo thứ tự 25 mg/l, 32 mg/l 22 mg/l bình lắc 500 ml, 1,000 ml bioreactor dạng sục khí 20 lít Tác giả quan sát thấy kết hợp việc xử lý malate alginate kích thích phản ứng lại, ví dụ oxy hóa lipid xảy hầu hết q trình ni cấy C.roseus điều gián tiếp sản xuất indole alkaloid thông qua đường jasmonate 4.2.2 Nuôi cấy mô sẹo Những mơ sẹo nguồn cung cấp alkaloid chính, phổ biến nhất, cung cấp vật liệu khởi đầu cho thiết lập q trình ni cấy huyền phù cho việc cảm ứng quan chồi rễ Những khảo sát có liên quan đến hình thành rễ từ mơ sẹo C.roseus công bố Dhruva cộng (1977) Việc tái sinh C.roseus khỏe mạnh thực từ mô sẹo thông qua việc làm lây nhiễm với mycoplasma-like organisms (MLOs) Mollers Sarkar (1989) làm nhiễm chỗ cắt đốt thân C.roseus với loại MLOs khác nuôi chúng môi trường dinh dưỡng MS rắn Mơ sẹo hình thành mơ bị nhiễm, phân vào cây, sau chuyển sang mơi trường MS có bổ sung 1-naphthyl acetic acid (NAA) 1.0 mg/l, 6-benzyl aminopurine (BAP) 0.25 mg/l gentamycin 10.0 ml/l Những sau dễ dàng thích nghi với điều kiện nhà kính nơi chúng nuôi năm Việc nhuộm màu với fluorochoromes DAPI (4’,6-diamidino-2-phenylindole) berberine sulfate chứng minh vắng mặt MLOs tái sinh Ramavat cộng (1978) mơ tả q trình hình thành chồi non C.roseus từ mô sẹo Sự tái sinh từ tế bào mô sẹo đơn bội hay lưỡng bội C.roseus kết hợp với việc sử dụng chất điều hòa sinh trưởng thực vật kinetin β-indolylacetic acid (IAA) thực Abou-Mandour cộng (1979) Phương pháp cho tần số C.roseus tái sinh cao cách tạo phôi soma mô tả Kin cộng (1994) Tác giả thu mô sẹo từ bao phấn C.roseus sử dụng môi trường MS rắn bổ sung NAA 1.0 mg/l kinetin 0.1 mg/l (MSNK) Những phơi soma hình thành sau chuyển mô sẹo vào môi trường MSNK lỏng Những trồng có số nhiễm sắc thể trồng từ hạt (2n=16) 44 Pietrosiuk cộng (1999) thành lập hai dòng mơ sẹo C.roseus trắng xanh (hình 17d, e) môi trường Gamborg rắn bổ sung với 0.1 mg/l kinetin 1.0 mg/l IAA Mô sẹo lấy từ đoạn trụ mầm C.roseus giống Dòng mô sẹo trắng chọn từ mô xanh phát triển pha tĩnh Trái ngược với rắn dịng mơ sẹo màu xanh, dịng màu trắng lại mịn mềm Phương pháp HPLC phân tích chất chiết từ mơ sẹo hai dịng mô sẹo xanh mô sẹo trắng cho thấy indole alkaloid tồn dạng vết dược tính 4.2.3 Ni hạt nhân tạo Krueger cộng (1982) tạo có nuôi cấy từ hạt C.roseus nảy mầm vô trùng mơi trường Murashige Skoogs Revised Tobacco (MS RT) có bổ sung benzyladenine (BA), với đặc điểm nhân giống nhanh chóng sản xuất alkaloid vindoline, ajmalicine, sitsiriline, tetrahydroalstonine serpentine Q trình ni cấy cho thấy phát triển sản xuất vindole nhanh chóng nhiều hỗn hợp alkaloid khác, bao gồm alkaloid khơng tìm thấy ngun vẹn Miura cộng (1988) cô lập đựơc vinblastine từ chồi non C.roseus nuôi cấy lấy từ nảy mầm từ hạt Lượng vinblastine thu đựơc 15μg/g chất khô cao mô sẹo (Miura et al 1987) Kết cho thấy sản xuất vinblastine liên quan đến hình thành chồi 4.2.4 Ni cấy mơ phân sinh Sự nhân giống từ mô phân sinh phương pháp hữu ích để sản xuất nhanh sinh khối phục vụ cho y học Nó cho phép khả tái tạo kiểu gen ổn định không thay đổi Alen cộng (1995) đề xướng việc nhân giống in vitro C.roseus cách nuôi dưỡng mô phân sinh chồi nách từ ni nhà kính Các tác giả sử dụng mơi trường MS có bổ sung BA 2,4-D nồng độ thấp Những chồi nách hình thành chồi sau 4-5 tuần nuôi cấy Một phần cành nhân giống chuyển vào nuôi cấy tiếp môi trường tự Sau chúng cắt cho tạo rễ in vitro môi trường MS bổ sung với NAA phát triển nhà kính với độ ẩm tương đối 100% Trong trường hợp thành công Furmanowa cộng (1991, 1994) thành công việc áp dụng phương pháp cho nhân giống C.roseus Tác giả tái sinh từ chồi chồi nách Những chồi cắt từ ngày tuổi nuôi môi trường rắn Nitsch Nitsch (NN) (Nitsch Nitsch 1969) bổ sung thêm kinetin, bezyladenine, indole-3-butyric acid (IBA) IAA kết hợp với Sau tháng ni cấy có rễ cắt chuyển vào môi trường Những phải gồm có chồi chồi nách Khoảng 200 mọc rễ (hình 17a, b) thu từ Sau chúng phát triển nhà mái 45 vòng nhựa nhà kính (hình 1c) Sau tháng sinh trưởng chúng thu nhận, sấy cân Việc phân tích thành phần hóa học thực Vindoline catharanthine chiếm ưu giai đoạn non (trước hoa) Hàm lượng alkaloid tổng nuôi cấy in vitro chuyển sang mơi trường đất cao trồng đất Hình 18: Sản phẩm mơ sẹo mọc từ hạt nhân tạo (a) Cây C.roseus mọc rễ phát triển từ mô phân sinh môi trường NN bổ sung với 0.1 mg/l kinetin 0.5 mg/l IBA sau tuần nuôi cấy (b) Cây C.roseus hoa phát triển từ mô phân sinh môi trường NN bổ sung với 0.1 mg/l kinetin 0.5 mg/l IBA sau ngày chuyển qua (c) Cây C.roseus hoa nhà kính nhân giống in vitro từ mô phân sinh (d) Dịng mơ sẹo màu trắng ni cấy mơi trường B5 bổ sung với 0.5 mg/l kinetin 1.0 mg/l IAA (sau 96 ngày chuyển qua) (e) Dịng mơ sẹo màu xanh ni cấy mơi trường B5 có bổ sung 0.1 mg/l kinetin 1.0 mg/l IAA (sau 96 ngày chuyển qua) 4.2.5 Nuôi cấy rễ tơ Trong năm gần đây, phương pháp nuôi cấy rễ, chủ yếu rễ tơ C.roseus tăng lên đáng kể mong đợi, nguồn tiềm hợp chất có giá trị chữa bệnh Sự phát triển kỹ thuật vi nhân giống phương pháp để mở rộng việc nuôi cấy rễ in vitro quan trọng trở thành giải pháp quan trọng để giải việc thu nhận indole alkaloid từ nguyên liệu thô Những yếu tố di truyền rễ tơ, thu nhiễm với Agrobacterium rhizogenes, sản xuất hợp chất thứ cấp nhiều tự nhiên Hàm lượng 46 alkaloid rễ tơ tương đương cao đối chiếu với hàm lượng đo nghiên cứu rễ tự nhiên Những alkaloid chiếm ưu rễ tơ ajmalicine, serpentine, vidoline catharanthine, tìm thấy với hàm lượng cao rễ tự nhiên Hình 19: Sản phẩm rễ tơ (a) Rễ tơ C.roseus xuất sau 7-10 ngày chỗ cảm ứng với Agrobacterium rhizogenes chủng ATCC 15843 (b) Rễ tơ C.roseus nuôi cấy môi trường lỏng ½ B5 mà khơng có chất điều hịa tăng trưởng (11 ngày chuyển qua) (c) Cây C.roseus chuyển gen tái sinh từ rễ tơ môi trường lỏng ½ B5 khơng có chất điều hịa sinh trưởng (d) Hạt nhân tạo thu từ đoạn rễ tơ C.roseus chứa gel calcium alginate (e) Rễ tơ phát triển từ hạt nhân tạo C.roseus nuôi cấy môi trường rắn NN có bổ sung IBA 0.5 mg/l kinetin 0.1 mg/l (f) Rễ tơ phát triển từ hạt nhân tạo C.roseus nuôi cấy môi trường rắn NN bổ sung với IBA 0.5 mg/l BAP 0.1 mgl/l 4.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy tế bào C.roseus 4.3.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng 47 Hirata cộng (1994) chứng minh phytohormone (hormone thực vật) quan trọng cho tăng trưởng phân chia hình thái mơ, dẫn đến hình thành phát triển chồi C.roseus, làm đa dạng hóa alkaloid làm tăng hàm lượng chúng Tất chồi non ni cấy C.roseus cảm ứng hồn tồn với tần số cao từ hạt nảy mầm môi trường Murashige Skoog (MS) (Murashige Skoog 1962) bổ sung thêm BA 1.1 mg/l (Hirata cộng 1987) Kết nuôi cấy gồm có mơ sẹo mọc trực tiếp mơi trường rắn có số chồi non với vài nhỏ Theo thông số thu từ phương pháp phân tích sắc ký lỏng hiệu suất cao (HPLC) dịch trích ni cấy cho thấy vindoline catharanthine diện chủ yếu cành non, đặc biệt lá, ajmalicine (0.072 mg/g chất khơ) tích lũy mơ sẹo Hàm lượng catharanthine (0.370 mg/g chất khô) nuôi cấy cao vài lần đối chứng (0.035 mg/g chất khơ), hàm lựơng vindoline gần hai trường hợp (lần lượt 1.8 mg/g 1.2 mg/g chất khô) Khi chuyển trình ni cấy vào mơi trường khơng có BA kích thích phát triển chồi non dẫn đến gia tăng sản xuất vindoline catharanthine đồng thời với việc ức chế sản xuất ajmalicine Satdive cộng (2003) nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ IAA BA khác lên sản xuất ajmalicine bình lắc (shake flasks) sử dụng chồi C.roseus để nuôi cấy Những chồi nuôi môi trường MS có bổ sung IAA nồng độ cao BA nồng độ thấp, tích lũy lượng lớn ajmalicine Với IAA nồng độ thấp BA nồng độ cao chồi giải phóng nhiều ajmalicine vào mơi trường Q trình sản xuất ajmalicine từ chồi ni cấy khơng tương quan với tốc độ tăng trưởng Vinblastine vincristine khơng diện chồi nuôi cấy Sự sinh tổng hợp alkaloid xảy lục lạp Theo đó, hình thành dimeric alkaloid phụ thuộc vào mức độ khác lục lạp tế bào nuôi cấy in vitro Loyola-Vargas cộng (1986) thử nghiệm chất điều hòa sinh trưởng khác ảnh hưởng chúng lên việc cảm ứng mơ sẹo xanh dịng tế bào C.roseus năm tuổi Các tác giả xác định vinblastine vincristine hai dịng mơ sẹo trắng xanh Hàm lượng alkaloid dòng màu trắng cao xấp xỉ lần dịng màu xanh Trong mơi trường có bổ sung mg/l benzylaminopurine (BAP) mà khơng có mặt auxin sản xuất hàm lượng chất diệp lục với việc gia tăng hàm lượng dimeric alkaloid Điều kiện nuôi cấy mô sẹo quan trọng cho việc sản xuất alkaloid Morris (1986) thiết lập q trình ni cấy mô sẹo từ C.roseus sử dụng loại môi trường: môi trường Gamborg (B5), môi trường MS Zenk với thay đổi khác (B5 với 2,4-D 1.0 mg/l kinetin 0.1 mg/l; B5 với IAA 1.0 mg/l kinetin 0.1 mg/l; MS với NAA1.0 mg/l kinetin 0.1 mg/l, môi trường Zenk bổ sung IAA 0.175 mg/l BAP 1,125 mg/l, NAA, 2,4-D zeatin 1.0 48 mg/l) Các tác giả thử tiến hành nuôi cấy điều kiện sáng tối Các mơ sẹo hình thành có đặc trưng màu sắc, hình thái hàm lượng alkaloid Bốn loại alkaloid: catharanthine, vindoline, ajmalicine serpentine có mặt mơ sẹo ni cấy mơi trường có bổ sung IAA BAP Serpentine alkaloid tích lũy điều kiện sáng ajmalicine tích lũy điều kiện tối Miura cộng (1987) lập vinblastine từ mơ sẹo C.roseus hình thành từ đoạn non Mơi trường MS có bổ sung NAA 1.0 mg/l kinetin 0.1 mg/l sử dụng Các mô sẹo nuôi cấy môi trường tối Sự diện vinblastine mô sẹo rễ khác xác định phương pháp sắc lý lỏng cao áp (HPLC) phép đo phổ khối lượng Lượng vinblastine (1μg/g chất khô), thấp so với mẹ Marfori Alejar (1993) cho thấy khả sản xuất alkaloid mơ sẹo có nguồn gốc từ rễ, thân, hoa hai giống C.roseus, trắng hồng tím Các tác giả thu tám dịng mơ sẹo cách sử dụng môi trường LS bổ sung BA 3.0 mg/l, 2,4-D 0.5 mg/l nước dừa Sau mơ hình thành chuyển vào mơi trường LS khơng có chất điều hịa sinh trưởng nuôi trồng năm Hàm lượng alkaloid cao màu hồng tím mơ sẹo có nguồn gốc từ rễ Theo báo cáo Bùi Văn Lệ, Nguyễn Ngọc Hồng đăng tạp chí phát triển khoa học cơng nghệ mơ sẹo xanh cảm ứng từ dừa cạn in vitro nuôi môi trường MS (Murashige Skoog) lỏng có bổ sung chất điều hịa tăng trưởng thực vật khác gồm có auxin cytokinin Ở nồng độ mgl-1 ∝naphthaleneacetic acid (NAA) 0,5 mgl-1 kinetin (Kin) thu nhận sinh khối alkaloid toàn phần cao môi trường thay NAA 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) nồng độ thu sinh khối alkaloid toàn phần thấp 4.3.2 Ảnh hưởng cường độ chiếu sáng Yếu tố mơi trường ảnh hưởng đến chúng, ví dụ cường độ ánh sáng hay xạ tử ngoại UV Hirata cộng (1991, 1992) phát mô sẹo xanh cảm ứng từ dừa cạn in vitro nuôi môi trường MS (Murashige Skoog) lỏng có bổ sung chất điều hịa tăng trưởng thực vật khác gồm có auxin cytokinin Ở nồng độ mgl-1 ∝-naphthaleneacetic acid (NAA) 0,5 mgl-1 kinetin (Kin) thu nhận sinh khối alkaloid toàn phần cao môi trường thay NAA 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) nồng độ thu sinh khối alkaloid tồn phần thấp Những kết cho thấy ánh sáng NUV rõ ràng kích thích tổng hợp leurosine tổng hợp vinblastine từ vindoline catharanthine với mức độ 4.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 49 Ten Hoopen cộng (2002) cho thấy nhiệt độ yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến tăng trưởng sản xuất ajmalicine từ huyền phù C.roseus Nhiệt độ tối ưu cho hai trình thu sinh khối sản xuất hợp chất thứ cấp 27.50 C Yuan Hu (1994) nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp khác auxin, cytokinin cường độ chiếu sáng lên hình thành chồi C.roseus nuôi cấy in vitro Các tác giả chứng minh chất điều hòa sinh trưởng BA NAA thêm vào môi trường MS theo thứ tự 7.0 mg/l 1.0 mg/l có tác dụng kích thích hình thành chồi non, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) ức chế phân hóa hình thành chúng Cường độ chiếu sáng 550700lux cho thấy có ảnh hưởng tốt kết hợp đồng thời với môi trường MS bổ sung BA mg/l NAA 0-1.0 mg/l 4.3.4 Ảnh hưởng nồng độ đường Theo báo cáo Bùi Văn Lệ, Nguyễn Ngọc Hồng đăng tạp chí phát triển khoa học cơng nghệ mơ sẹo đặc đưa vào mơi trường MS có chất điều hịa tăng trưởng thích hợp bổ sung nồng độ đường khác Thí nghiệm bố trí bảng Bảng 1: Ảnh hưởng nồng độ đường sucrose đến nuôi cấy huyền phù tế bào 50 Đồ thị 1: Đường cong tăng trưởng dịch huyền phù tế bào mơi trường có bổ sung nồng độ đường khác Theo ta thấy nồng độ đường 60g/l cho lượng sản phẩm cao KẾT LUẬN Ứng dụng nuôi cấy tế bào C.roseus để sản xuất hợp chất thứ cấp có ích tạo bước tiến xa khoa học thực vật Do nhu cầu sử dụng sản phẩm tự nhiên y dược ngày tăng sản lượng chúng trồng tự nhiên lại thấp thúc đẩy phát triển không ngừng công nghệ nuôi cấy tế bào quy mô lớn Tuy nhiên, đường sinh tổng hợp hợp chất thứ cấp mong muốn thực vật nuôi cấy tế bào quy mô lớn phức tạp Vì vậy, thơng tin mức độ tế bào phân tử q trình chuyển hóa cần thiết cho phát triển sản xuất công nghiệp 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng Việt [1] Viện dược liệu, 2004 Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập Nhà xuất khoa học & kỹ thuật Hà Nội [2] Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên, 2006 Công nghệ tế bào Nhà xuất đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh [3] Bùi Văn Lệ, Nguyễn Ngọc Hồng, 2006 Ảnh hường chất điều hòa tăng trưởng thực vật đường saccharose lê dịch nuôi cấy huyền phù tế bào dừa cạn Catharanthus roseus Tạp chí phát triển khoa học & công nghệ, tập 9, số [4] Trần Chấn Đại, 2008 Nuôi cấy mô sẹo dịch huyền phù tế bào Mãn Đình Hồng Althaea Rosea để thu nhận hợp chất Flavonoid có hoạt tính sinh học Luận văn thạc sĩ, đại học Bách Khoa TP.Hồ Chí Minh Tài liệu tham khảo tiếng Anh [5] Fattorusso, E., Taglialatela, O., 2008 Modern alkaloids: structure, isolation, synthesis and biology Wiley-VCH, Weinheim, Germany [6] Pahwa, D., 2008 Catharanthus alkaloids B.Pharm Punjab University Chandigarh [7] Guggisberg, A., Hesse, M., Alkaloids The University of Zurich [8] Pietrosiuk, A., Furmanowa, M., Lata, B., 2007 Catharanthus roseus: micropropagation and in vitro techniques Phytochem Review, 6:459-473 [9] H.Sutarno & Rudjiman, 1999 PROSEA, 12 (1)- Medicinal and Poisionous Plant; 190 [10] Murashige T., 1980 Plant growth substances in commercial uses of tissue culture In: Skoog F, editor Plant Growth Substances Berlin: Springer-Verlag, pp.426-34 [11] Daugaard, H., 2001 Nutritional status of strawberry cultivars in organic production Journal of Plant Nutrition Vol 24, Iss 9, pp 1337-1346 [12] Gamborg, O.L., Murashige, T., Thorpe, T.A & Vasil, i.K., 1976 Plant tissue culture media In Vitro 12:473-8 52 [13] Eymar, E., Alegre, J., Toribio, M & Lĩpez-Vela, D., 2000 Effect of activate charcoal and 6-benzyladenin on in vitro nitrogen uptake by Lagerstroemia india Plant cell, Tissue and Organ Culture 16:23-37 [14] Bhojwani, S.S & Razdan, M.K., 1996 Plant tissue culture: Theory and practice, a revised edition Elsevier Science B.V The Netherlands 53 ... thuộc nhiều vào môi trường Mặt khác, lượng alkaloid thu từ tự nhiên thấp nên không đáp ứng nhu cầu thị trường Vì em chọn đề tài ? ?Cây dừa cạn Catharanthus roseus nhóm hợp chất Vinca alkaloid? ?? với... lượng alkaloid toàn phần, số alkaloid tồn phần có hàm lượng vincaleucoblastin bao nhiêu.[1][6] CHƯƠNG 2: CÁC HỢP CHẤT ANKALOID TRONG CÂY C .roseus 2.1 Alkaloid loài Catharanthus roseus C .roseus. .. động /thực vật mà từ người ta chiết xuất alkaloid ví dụ alkaloid chiết từ dừa cạn vinca gọi chung vinca alkaloid Khi người ta biết nhiều alkaloid cụ thể đó, việc gộp nhóm thường lấy theo tên gọi amin