Luận văn thạc sĩ khoa học nghiên cứu tạo hoạt chất mangostin phytosome và đánh giá khả năng chống oxi hóa trên động vật thực nghiệm

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN HOÀNG MAI LINH NGHIÊN CỨU TẠO HOẠT CHẤT MANGOSTIN PHYTOSOME VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG OXI HÓA TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA[.]

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - HOÀNG MAI LINH NGHIÊN CỨU TẠO HOẠT CHẤT MANGOSTIN PHYTOSOME VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG OXI HÓA TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2020 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN HOÀNG MAI LINH NGHIÊN CỨU TẠO HOẠT CHẤT MANGOSTIN PHYTOSOME VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG OXI HÓA TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420101.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS ĐỖ THỊ TUYÊN PGS.TS NGUYỄN QUANG HUY Hà Nội - 2020 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, tơi xin gửi lời cảm lịng biết ơn chân thành tới TS Đỗ Thị Tun, Trưởng phịng Cơng nghệ sinh học Enzyme thuộc Viện công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam định hướng nghiên cứu hướng dẫn, tạo điều kiện trang thiết bị, hóa chất để tơi hồn thành đề tài Tơi xin cảm ơn PGS.TS Nguyễn Quang Huy cho hội thực luận văn phịng Cơng nghệ sinh học Enzyme, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Luận văn thực kinh phí đề tài cấp Bộ quốc phòng “Nghiên cứu bào chế viên nang chứa phytosome mangostin chiết xuất từ vỏ măng cụt dùng cho đội làm việc điều kiện độc hại” Thiếu tá, Ths Đoàn Thanh Huyền chủ nhiệm Tôi xin cảm ơn tập thể phịng Cơng nghệ sinh học Enzyme, Viện Cơng nghệ sinh học bảo, giúp đỡ chia sẻ tận tình cho tơi kinh nghiệm chun mơn q trình làm thực nghiệm Tơi xin gửi lời cảm ơn lịng biết ơn tới thầy Khoa sinh học, Trường đại học Khoa học tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội tạo điều kiện cho tơi q trình học tập Tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè ln động viên tinh thần để tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng 12 năm 2020 Học viên Hoàng Mai Linh i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC HÌNH v DANH MỤC CÁC BẢNG vi CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hoạt chất α- mangostin 1.1.1 Giới thiệu chung 1.1.2 Cấu trúc hóa học .3 1.1.3 Hoạt tính sinh học 1.2 Phytosome 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Thành phần phytosome 1.2.3 Phân loại, vai trò phospholipid phytosome .9 1.2.4 Ưu nhược điểm phytosome .10 1.2.5 Một số phương pháp bào chế phytosome 11 1.2.6 Một số phương pháp đánh giá tương tác hoạt chất phospholipid phytosome 11 1.3 Peroxidase 12 1.4 Peroxy hóa lipid .13 1.5 Giới thiệu số vi sinh vật gây bệnh ngƣời 14 1.5.1 Staphylococcus aureus .14 1.5.2 Candida albicans .15 1.6 Tình hình nghiên cứu phytosome .15 1.6.1 Trên giới .15 1.6.2 Ở Việt Nam 17 CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 19 2.1 Nguyên liệu hóa chất 19 ii 2.1.1 Nguyên liệu 19 2.1.2 Hóa chất 19 2.2 Các thiết bị thí nghiệm 21 Các thiết bị sử dụng thí nghiệm đƣợc liệt kê bảng 21 2.3 Động vật thí nghiệm 22 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.4.1 Tách chiết tinh α-mangostin 23 2.4.2 Sắc ký cột (Column chromatography - CC) 24 2.4.3 Sắc ký mỏng .25 2.4.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 25 2.4.5 Phương pháp điều chế mangostin phytosome 26 2.4.6 Phương pháp đánh giá khả tạo phức hoạt chất phospholipid 27 2.4.7 Xác định hoạt tính kháng khuẩn 28 2.4.8 Xác định hoạt độ peroxidase 29 2.4.9 Xác định làm lượng malondialdehyde .30 2.4.10 Xác định hàm lượng protein 31 2.4.11 Xác định hàm lượng -SH tự 31 2.4.12 Xử lý số liệu 32 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Tách chiết thu nhận hoạt chất α-mangostin .33 3.2 Điều chế mangostin phytosome 37 3.3 Đánh giá tƣơng tác hoạt chất phospholipid phytosome .39 3.3.1 Phân tích phổ hồng ngoại IR 39 3.3.2 Phân tích quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS .41 3.4 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn phytosome mangostin 42 3.5 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa động vật thực nghiệm 43 3.5.1 Ảnh hưởng mangostin phytosome lên hoạt độ peroxidase gan 43 iii 3.5.2 Ảnh hưởng mangostin phytosome lên hàm lượng MDA gan chuột 45 3.5.2 Ảnh hưởng mangostin phytosome lên hàm lượng nhóm -SH gan chuột 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 KẾT LUẬN 50 KIẾN NGHỊ .50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc Chromono Hình 1.2 Cấu trúc khung xương phân tử xanthone Hình 1.3 Cấu trúc hóa học α- mangostin Hình 1.4 Cấu tạo phytosome .8 Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo phosphatidylcholin 10 Hình 1.6 Cấu trúc nhân hem peroxidase 13 Hình 1.7 Hình dạng vi khuẩn Staphylococcus aureus 14 Hình 1.8 Hình dạng nấm Candida albicans .15 Hình 2.1 Quy trình tinh α-mangostin từ vỏ măng cụt Garcinia mangostana L .23 Hình 2.2 Sơ đồ bào chế mangostin phytosome .27 Hình 2.3 Đường chuẩn peroxidase có sử dụng chuẩn peroxidase horce 30 Hình 2.4 Đường chuẩn Bradford sử dụng BSA làm chuẩn .31 Hình 3.1 Tách chiết thu nhận hoạt chất α-mangostin 33 Hình 3.2 Ảnh chạy sắc kí mỏng sản phẩm tinh α-mangostin 34 Hình 3.3 Hoạt chất α-mangostin dạng tinh thể 36 Hình 3.4 Phổ HPLC hoạt chất - mangostin 36 Hình 3.5 Quá trình bào chế mangostin phytosome 39 Hình 3.6 Phổ hồng ngoại mẫu - mangostin 40 Hình 3.7 Hấp thụ huỳnh quang phức mangostin phytosome 41 Hình 3.8 Hoạt tính kháng khuẩn α-mangostin mangostin phytosome nấm Candida albicans (A) vi khuẩn Staphylococcus aureus (B) .42 Hình 3.9 Hoạt độ peroxidase gan chuột tác dụng mangostin phytosome 44 Hình 3.10 Sự thay đổi hàm lượng MDA gan tác dụng mangostin phytosome 46 Hình 3.11 Sự thay đổi hàm lượng nhóm -SH gan tác dụng mangostin phytosome 48 v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách hóa chất sử dụng thí nghiệm .20 Bảng 2.2 Thành phần loại đệm dung dịch 20 Bảng 2.3 Thành phần môi trường nuôi cấy vi sinh vật .21 Bảng 2.4 Các thiết bị thí nghiệm 21 Bảng 2.5 Các nhóm chuột xử lí hóa chất 22 Bảng 3.1 Tỷ lệ sản phẩm tách chiết so với nguyên liệu thô .35 Bảng 3.2 Số liệu phân tích phổ HPLC mẫu - mangostin tinh .37 Bảng 3.3 Hiệu suất trình điều chế mangostin phytosome 38 Bảng 3.4 Hoạt độ peroxidase gan chuột 44 Bảng 3.5 Hàm lượng MDA gan chuột tác dụng phytosome mangostin 46 Bảng 3.6 Hàm lượng nhóm -SH gan chuột tác dụng phytosome mangostin 48 vi CÁC CHỮ VIẾT TẮT H-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân DMSO Dimethyl sulfoxide DSC Phân tích nhiệt vi sai ĐC Đối chứng EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid EP Ether petroleum EtOAC Ethyl acetate EtOH Ethanol FTIR Quang phổ hồng ngoại chuyển đổi HPLC High-performance liquid chromatography HSPC Phosphatidylcholin đậu nành hydrogen hóa (Hydrogenated Soy Phosphatidylcholin) LB Luria broth LDL Low density lipoprotein MDA Malondialdehyde MeOH Methanol MIC Minimum inhibitory concentration OD Optical density PC Phosphatidylcholin PDI Chỉ số phân bố KTTP Rf Retention factor SD Standard deviation SDA Sabouraud dextrose agar SDS Sodium dodecyl sulfate -SH Nhóm sulfhydryl SEM Kính hiển vi điện tử quét SKD Sinh khả dụng SOD Superoxide dismutase vii TB Trung bình TBA Thiobarbituric acid TL Trọng lượng TLC Thin layer chromatography TMB 3,3´-5,5´-tetramethyl benzidine TN Thí nghiệm TT Thể trọng XRD Nhiễu viii xạ tia X (XRay diffraction) MỞ ĐẦU Măng cụt (Garcinia mangostana L.) thuộc họ Clusiaceae (Guttiferae) biết đến “nữ hoàng trái cây” hương vị thơm ngon dược liệu quý giá, vỏ măng cụt sử dụng y học dân gian để chữa bệnh tiêu chảy, kiết lị…Nghiên cứu hóa thực vật cho thấy măng cụt có chứa nhiều chất hóa học khác tannin, chất nhựa (resin), pectin đặc biệt dẫn xuất xanthone, chất thuộc nhóm chất phenolic Các chất xanthone vỏ măng cụt xác định là: -mangostin, -mangostin, -mangostin, isomangostin, normangostin, hoạt chất -mangostin có hàm lượng cao nhất, chiếm khoảng 0,02- 0,2% Các mangostin có nhiều hoạt tính sinh học quý như: hoạt tính kháng khuẩn, hoạt tính kháng nấm, hoạt tính chống viêm, hoạt tính chống oxi hóa nên nhà khoa học quan tâm nghiên cứu Hiện với việc sử dụng công nghệ phytosome dần ứng dụng rộng rãi khả tăng sinh khả dụng lớn hoạt chất có nguồn gốc từ tự nhiên, có độ an tồn cao, khơng có tác dụng phụ liều sử dụng nhỏ Phytosome có cấu trúc tương tự màng tế bào sinh học, tương hợp sinh học cao thuận lợi để vận chuyển vào nội bào Công nghệ phytosome công nghệ nghiên cứu bào chế ứng dụng phức hợp hợp chất tự nhiên với phospholipid có cấu trúc tương tự màng tế bào nhằm tăng khả vận chuyển hoạt chất từ môi trường thân nước sang môi trường thân lipid để tăng hấp thu cho hoạt chất tự nhiên Sử dụng hợp chất mangostin kết hợp với công nghệ phytosome tạo dịng sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên phục vụ chăm sóc sức khoẻ ngày phổ biến tính tự nhiên, phong phú, tương hợp sinh học cao Sử dụng phospholipid có nguồn gốc tự nhiên, phát triển thành công dạng bào chế phytosome cho sản phẩm tự nhiên tạo hướng đột phá cho xu hướng phát triển Các nghiên cứu tinh tác dụng sinh học mangostin, đặc biệt công nghệ phytosome Việt Nam hạn chế Hơn nữa, thiếu vắng nghiên cứu sâu tính kháng khuẩn, tác dụng chống oxi hóa hoạt chất mangostin phytosome động vật thực nghiệm làm sở khoa học cho nghiên cứu tạo sản phẩm ứng dụng hoạt chất mangostin phytosome việc chăm sóc sức khỏe người từ nguồn dược liệu quý nước Xuất phát từ thực tế trên, tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu tạo hoạt chất mangostin phytosome đánh giá khả chống oxi hóa hoạt chất động vật thực nghiệm” với mục tiêu sau: (1) Nghiên cứu tách chiết hoạt chất mangostin sạch; (2) Nghiên cứu công nghệ tạo hoạt chất mangostin phytosome; (3) Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hoạt chất mangostin phytosome động vật thực nghiệm CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hoạt chất α- mangostin 1.1.1 Giới thiệu chung Hoạt chất α- mangostin chất tách chiết từ vỏ măng cụt, chiếm hàm lượng cao vỏ khoảng 0,02 % đến 0,2 % trọng lượng khô Chất biết đến với danh pháp quốc tế là: 1,3,6-trihydroxy-7-methoxy-2,8-bis (3-methylbut-2-enyl) xanthen-9-one, có cơng thức phân tử C24H26O6 khối lượng phân tử 410,46 g /mol Là tinh thể có màu vàng, có nhiệt độ nóng chảy khoảng từ 205-206 0C, chất coi gần không tan nước nồng độ tan thấp khoảng 2,03x10-4 mg/L 250C [58], nhiên lại tan chất như: ancol, aceton, chloroform, ethyl acetat [4] 1.1.2 Cấu trúc hóa học Hoạt chất α- mangostin có cấu trúc điển hình hợp chất xanthone Trong hợp chất xanthone biết đến chất chống oxi hóa mạnh, có cấu trúc mạch phẳng gồm vòng carbon nối với nhóm carboxyl nguyên tử oxi tạo thành khung xương phân tử Cấu trúc có dạng giống cấu trúc chromono (hình 1.1) Tuy nhiên thay có vịng carbon xanthone có hai vịng carbon hai bên (hình 1.2) Khung xương nối với mạch bên khác tạo thành nhiều loại xanthone có đặc tính vật lý, hóa học, sinh học khác Ngày nay, người ta tìm 200 loại dẫn xuất xanthone khác nhau, với 60 loại xanthone có vỏ măng cụt [5] Hình 1.1 Cấu trúc Chromono [56] Hình 1.2 Cấu trúc khung xương phân tử xanthone (PubChem CID:7020) [60] Dựa cấu trúc khung xương hợp chất xanthone, cấu trúc α-mangostin có thêm nhóm methoxyl (- O - CH3), hai nhóm isoprenyl (C5H8) ba nhóm chức hydroxyl (- OH ) mơ tả hình 1.3 Trong nhóm isoprenyl đóng vai trị quan trọng việc giúp α- mangostin có hoạt tính kháng khuẩn [28,45] Hình 1.3 Cấu trúc hóa học α- mangostin (PubChem CID: 5281650) [58] 1.1.3 Hoạt tính sinh học Đã từ lâu, vỏ măng cụt sử dụng y học cổ truyền không Việt Nam mà nhiều nước Châu Á Trung Quốc, Ấn Độ với tác dụng chữa trị kiết lỵ, tiêu chảy, chữa đau bụng, làm khô vết thương, chống nhiễm trùng da [6] Một số nghiên cứu cho thấy hợp chất xanthone có vỏ măng cụt cịn có khả kìm hãm phát triển khối u ung thư, chống oxi hóa, kháng viêm, kháng khuẩn… 1.1.3.1 Hoạt tính kháng khuẩn Hoạt chất α-mangostin với dẫn xuất xanthone biết đến có khả kháng khuẩn mạnh Theo nghiên cứu Pothitirat cộng (2009) cho thấy α-mangostin có khả kháng lại vi khuẩn gram dương Propionibacterium acnes, loại vi khuẩn có bề mặt da người gây nên bệnh mụn trứng cá với nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 1,95 µg/ml [41] Ngồi αmangostin cịn chống lại vi khuẩn kháng lại kháng sinh, vi khuẩn có nguy gây bệnh khơng thể kiểm sốt với người điều trị kháng sinh dài hạn, Iinuna cộng (1996) đề cập đến khả hạn chế phát triển Staphylococcus aureus kháng methicillin α- mangostin, khả tăng lên kết hợp với hoạt động kháng sinh vancomynine [25] Ở nghiên cứu khác Sakagami cộng (2005) α-mangostin có khả chống lại vi khuẩn Enterococci kháng vancomycine nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 6,25 µg/ml kháng lại S.aureus kháng methicillin nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 6,25-12,5 µg/ml [42] Nhờ hoạt tính mà mà α- mangostin góp phần kiểm sốt nhiễm trùng vi khuẩn Enterococci S.aureus gây Jun cộng (2013) dùng năm hoạt chất xanthone khác thử nghiệm kháng lại vi khuẩn S.aureus kháng methicillin, kết cho thấy α- mangostin có nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) tốt 0,78-1,56 µg/ml, đồng thời nhóm ơng cho α-mangostin có khả diệt S.aureus kháng methicillin nhanh tương tác trực tiếp nhóm isoprenyl α- mangostin với lớp lipid kép màng tế bào vi khuẩn dẫn đến màng bị vỡ làm tăng tính thẩm thấu màng [28] Như vậy, α-mangostin dẫn xuất xanthone từ măng cụt có khả giúp kháng lại số loại bệnh vi khuẩn gây nên, đồng thời ngăn chặn nguy bùng phát dịch bệnh vi khuẩn kháng kháng sinh gây Pimchan cộng (2017) nghiên cứu kết hợp α- mangostin kháng sinh ceftazidime chống lại vi khuẩn Acinetobacter baumannii kháng ceftazidime kết cho thấy kết hợp có hiệu tốt làm mỏng màng peptidoglycan, tăng tính thấm màng tế bào khuẩn A.baumannii đồng thời α- mangostin cho thấy khả ức chế enzyme β-lactamase loại IV khuẩn gây kìm hãm tiêu diệt chúng Từ nghiên cứu này, cho thấy phát triển sử dụng α- mangostin dược phẩm bổ sung, phối hợp với kháng sinh ceftazidime để tăng cường khả tiêu diệt A.baumannii kháng kháng ceftazidime [39] Một nghiên cứu khác, Sivaranjani cộng (2017) sử dụng α- mangostin để tiêu diệt khuẩn Staphylococcus epidermidis RP62A, thu nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) α-mangostin với khuẩn S.epidermidis RP62A 1,25 μg / mL Trong α- mangostin thể khả diệt khuẩn tốt nhanh chóng làm giảm lượng vi khuẩn S.epidermidis RP62A vòng năm phút Cơ chế diệt khuẩn S.epidermidis α-mangostin giải thích ức chế diệt trừ màng sinh học (biofilm) loài khuẩn Từ đó, cho thấy tiềm α-mangostin sử dụng hỗ trợ điều trị nhiễm trùng vi khuẩn S.epidermidis gây [47] 1.1.3.2 Hoạt tính kháng nấm Các hợp chất xanthone nói chung α- mangostin tách chiết từ vỏ măng cụt có khả kháng số loại nấm gây bệnh thực vật, nguyên nhân gây thiệt hại mùa màng Fusarium oxysporum, Aliciella tenuis, Aspergillus oryzae [22] Ngoài α- mangostin cịn có khả chống lại nấm Candida albicans, loại nấm gây bệnh nhiễm trùng đường sinh dục, miệng da máu Người ta dự đoán chế kháng nấm α- mangostin dẫn xuất xanthone chúng công vào cấu trúc chức tế bào nấm, đặc biệt ergosterol, loại lipid qua trọng màng tế bào nấm, mà khơng có tế bào động vật [16] Vậy nên điều có ý nghĩa sử dụng α- mangostin chất diệt bệnh nấm động vật, mà không sợ ảnh hưởng đến tế bào chúng 1.1.3.3 Hoạt tính kháng viêm Trong nghiên cứu Nakatani cộng (2002), chứng minh cao chiết xanthone từ vỏ măng cụt có khả ức chế q trình giải phóng histamine tổng hợp prostaglandin E2 Do đó, chất tách chiết từ vỏ măng cụt chống dị ứng kháng viêm [37] Ngoài năm 2010, Bumrungpert cộng chứng minh α- mangostin γ-mangostin ức chế hoạt động LPS (lipopolisaccharide có plasma người béo phì) lên biểu gen quy định protein-enzyme liên quan đến phản ứng viêm kháng insulin đại thực bào Hai dẫn xuất xanthone có từ vỏ măng cụt làm suy giảm khả cảm ứng biểu interleukin-6, yếu tố gây lên hoại tử (TFNα) [17] 1.1.3.4 Hoạt tính chống oxi hóa Các gốc tự sản phẩm tất yếu q trình sinh lý hóa thể Sự tăng mức gốc tự làm cho hệ thống chống oxi hóa tế bào không đáp ứng gây phá hủy Protein, DNA, chất béo, gây tổn thương tế bào trình trao đổi chất đẩy nhanh q trình lão hóa [5] Williams cộng (1995) chứng minh mangostin có khả hoạt động chất thu dọn gốc tự để ngăn chặn phá gốc tự lên LDL (Low density lipoprotein) [53] Trong nghiên cứu khác, Sun cộng (2009) mangostin trung hòa gốc hydroxyl tự do, superoxin anion, ức chế hình thành MDA (malondialdehyde) q trình ni cấy tế bào bạch cầu [48] 1.1.3.5 Hoạt tính chống ung thư Đặc biệt hoạt chất α- mangostin nghiên cứu ứng dụng chữa nhiều bệnh ngày tiêu biểu ung thư Shibata cộng (2011) chứng minh mangostin từ măng cụt gây chết số dạng tế bào ung thư thể Nhóm ơng cho thử nghiệm hoạt tính diệt ung thư αmangostin chuột gây ung thư vú Sau điều trị α- mangostin cho thấy số chuột có khả sống sót cao so với chuột khơng điều trị, đồng thời khối u ung thư chuột ức chế đáng kể [44] Tiếp đó, Han cộng (2017) α-mangostin ức chế LSD1 (Lysine-specific demethylase 1) chống lại di khối u ung thư [23] Cùng năm này, Wang cộng (2017) chứng minh α-mangostin chống lại ung thư da gây anthracene 9,10-dimetylbenzan (DMBA) / TPA thử nghiệm chuột Trong đó, ung thư da biết dạng ung thư phổ biến gây tử vong người, nhiên ngày tiến trình điều trị bệnh cịn chưa hiệu Nhóm ông cho α- mangostin ức chế hình thành ung thư da thử nghiệm chuột gây DMBA / TPA chúng ức chế viêm, đồng thời ức chế thúc đẩy tự phát q trình apoptosis [51] Tóm lại, hoạt chất α- mangostin diệt ung thư theo nhiều chế khác nhau, theo chúng chủ yếu tác động lên tế bào ung thư gây trình chết theo chu trình tế bào 1.2 Phytosome 1.2.1 Khái niệm Hình 1.4 Cấu tạo phytosome Phytosome phức hợp cao chiết dược chất dược liệu chuẩn hóa gắn với phospholipid mức độ phân tử, có cấu trúc tương tự màng tế bào sinh học, tương hợp sinh học cao vận chuyển vào nội bào cách dễ dàng [33] Thuật ngữ "Phyto" nghĩa “thực vật” “some” có nghĩa “giống tế bào”, thường gọi herbosome nhiều tài liệu khác Thế hệ phytosome đời việc kết hợp hợp chất polyphenol với phospholipid dung môi không phân cực [18] 1.2.2 Thành phần phytosome Phytosome phức hợp tổng hợp phân tử phospholipid tự nhiên hay tổng hợp (phosphatidylcholin, phosphatidylethanolamin hay phosphatidyiserin) phản ứng với hợp chất tự nhiên có dịch chiết từ dược liệu [14] Cấu tạo phytosome gồm thành phần: hoạt chất dược liệu tan q nước phospholipid Trong phức hợp, nhóm phân cực dược chất tương tác với nhóm phosphat phospholipid thơng qua liên kết hydro, hình thành xếp khơng gian đặc trưng chứng minh loại phổ [18] Phospholipid phân tử lipid nhỏ cấu tạo glycerol đó, hai gốc rượu gắn với hai acid béo, gốc lại gắn với nhóm phosphat [14] Dược chất: Hoạt chất gắn vào đầu phân cực phospholipid, trở thành phận cấu tạo màng có hình thành liên kết hydro hydroxyl phenol hoạt chất nhóm phosphat nhánh phospholipid cho phân tử hoạt chất 1.2.3 Phân loại, vai trò phospholipid phytosome 1.2.3.1 Phân loại Phospholipid gồm loại: Phospholipid tự nhiên: Hay dùng phosphatidylcholin từ lecithin trứng đậu tương, ngồi cịn có phosphatidylethanolamin, phosphatidylserin, phosphatidylglycerol… Phospholipid tổng hợp: Phosphatidylcholin đậu nành hydrogen hóa, disteroyl phosphatidylcholin, dioleyl phosphatidylcholin, dioleyl phosphatidylethanolamin…ngồi cịn có số loạiphospholipid khác như: sphingolipid (sphingomyelin, sphingosin…) Phospholipid sử dụng chủ yếu từ đậu nành trứng, đặc biệt phosphatidylcholin phospholipid màng tế bào 1.2.3.2 Vai trò phospholipid phytosome Do phospholipid hợp chất hai chức có chứa nửa phosphatidyl ưa dầu nửa cholin ưa nước nên có khả cải thiện sinh khả dụng hợp chất tự nhiên Phần nửa ưa nước (nhóm cholin) gắn với hợp chất tự nhiên, nửa phần phosphatidyl tan lipid dạng đuôi bao bọc thành phần liên kết cholin [11] Ngồi vai trị chất mang thuốc, phosphatidylcholin thành phần quan trọng màng tế bào, phân tử gốc để xây dựng nên lipoprotein màng tế bào, ngồi nguồn cung cấp cholin thiết yếu cho tế bào thể Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo phosphatidylcholin [11] Đồng thời, phospholipid làm giảm sức căng bề mặt hệ phân tán với dịch tiêu hóa, cách phytosome dễ dàng vận chuyển vào màng, mô, thành tế bào thể [14,38,40] 1.2.4 Ưu nhược điểm phytosome 1.2.4.1 Ưu điểm Phytosome dễ tan dung môi dầu nước nên tăng khả hấp thụ dược chất, gia tăng sinh khả dụng, dẫn đến giảm liều dùng tăng hiệu điều trị Phospholipid vừa chất mang, vừa có tác dụng bảo vệ gan Cholin có phospholipid giúp bổ sung cholin cho gan, bảo vệ gan khỏi nhiễm mỡ Do phytosome cải thiện độ tan dược chất muối mật nên tăng tác dụng thuốc gan Giữa phân tử phosphatidylcholin hoạt chất có hình thành liên kết hóa học nên dạng bào chế phytosome có ổn định cao Hướng hoạt chất đến mơ đích hiệu tăng vận chuyển nội bào Bên cạnh đó, phytosome giúp tăng tính thấm, hấp thu qua da nên dùng nhiều mỹ phẩm Đặc biệt, phytosome có đặc tính thân dầu nên hoạt chất dễ vượt qua lớp màng sinh học giàu lipid Phytosome giúp tăng thời gian bán hủy số hoạt chất nên tăng thời gian tác dụng hoạt chất thể, tăng tác dụng sinh học hợp chất [33]  ... cứu tạo hoạt chất mangostin phytosome đánh giá khả chống oxi hóa hoạt chất động vật thực nghiệm? ?? với mục tiêu sau: (1) Nghiên cứu tách chiết hoạt chất mangostin sạch; (2) Nghiên cứu công nghệ tạo. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN HOÀNG MAI LINH NGHIÊN CỨU TẠO HOẠT CHẤT MANGOSTIN PHYTOSOME VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỐNG OXI HÓA TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM Chuyên... công nghệ tạo hoạt chất mangostin phytosome; (3) Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa hoạt chất mangostin phytosome động vật thực nghiệm CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Hoạt chất α- mangostin 1.1.1