Quan hệ di truyền các loài thuộc họ tôm he (penaeidae) dựa trên chỉ thị gene ty thể 16s ribosomal rna (16s rrna)

VAÄN DUÏNG TÖ TÖÔÛNG HOÀ CHÍ MINH VEÀ COÂNG TAÙC SÖÛ DUÏNG CAÙN BOÄ, COÂNG CHÖÙC TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC VĂN LANG Trương Thế Quang 94 QUAN HỆ DI TRUYỀN CÁC LOÀI THUỘC HỌ TÔM HE (PENAEIDAE) DỰA TRÊN C[.]

TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC VĂN LANG Trương Thế Quang QUAN HỆ DI TRUYỀN CÁC LỒI THUỘC HỌ TƠM HE (PENAEIDAE) DỰA TRÊN CHỈ THỊ GENE TY THỂ 16S RIBOSOMAL RNA (16S-rRNA) FINDING GENETIC RELATIONS OF THE SPECIES OF THE PENAEIDAE FAMILIA BASED ON INDICATION OF MITOCHONDRIAL 16S RIBOSOMAL RNA (16S-rRNA) GENE TRƯƠNG THẾ QUANG TÓM TẮT: Tách chiết giải trình tự thành cơng gene 16S-rRNA ba mẫu tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei) Việt Nam Hai mươi sáu lồi thuộc họ tơm he (Penaeidae) phân thành nhóm dựa gene thị 16S-rRNA Nhóm I có lồi, nhóm II có lồi, nhóm III có lồi, nhóm IV có lồi, nhóm V có lồi, nhóm VI có lồi, nhóm VII có lồi nhóm VIII có lồi Khoảng cách di truyền nhóm III nhóm V gần 0,272 Khoảng cách di truyền nhóm IV nhóm VII xa 1,645 Khoảng cách di truyền nhóm VII nhóm VIII gần 0,342 Khoảng cách di truyền nhóm VII, nhóm VIII nhóm cịn lại lớn từ 1,153 đến 1,645, điều cho thấy lồi tơm thuộc nhóm VII, nhóm VIII có quan hệ tiến hóa di truyền xa hầu hết lồi tơm he thuộc họ Penaeidae từ nhóm I đến nhóm VI Từ khóa: phát sinh loài; gene 16S-Rrna; khoảng cách di truyền; quan hệ di truyền ABSTRACT: The 16S ribosomal RNA genes of three species of Penaeus vannamei in Vietnam were extracted and sequenced successfully Twenty six species of the Penaeidae familia were classified into eight groups based on the indication of 16S ribosomal RNA gene Group I has species, group II has species, group III has species, group IV has species, group V has species, group VI has species, group VII has species and group VIII has species The genetic distance between group III and group V is nearest, 0.272 The genetic distance between group IV and group VII is farthest, 1.645 The genetic distance of group VII and group VIII is close to 0.342 The genetic distance between group VII, group VIII and the remaining groups is ranged from 1.153 to 1.645, this shows that shrimp species belonging to groups VII and VIII have a long genetic evolution relationship for most shrimp species of the Penaeidae familia from group I to group VI Key words: phylogeny tree; 16S-rRNA gene; genetic distance; genetic relation ĐẶT VẤN ĐỀ Trong động vật giáp xác (Crustacea) biển, họ tôm he (Penaeidae) quan tâm nhiều đa dạng thành phần lồi, có giá trị kinh tế cao, quan trọng nghề nuôi khai thác thủy sản vùng ven biển nước ta Với lồi đối tượng ni quan trọng tôm sú (Penaeus Monodon), tôm bạc thẻ  (Penaeus Merguiensis), Tôm thẻ chân trắng (Penaeus Vannamei), tôm đôi (Penaeus Chinensis), tôm đất (Metapenaeus Ensis),… mang lại lợi nhuận lớn với nhiều hình thức ni khác Bên cạnh sản lượng tôm khai thác tự nhiên, sản lượng tôm nuôi Việt Nam tăng lên nhanh chóng, sản phẩm tôm sú nuôi đứng vị trí hàng đầu TS Trường Đại học Văn Lang, truongthequang@vanlanguni.edu.vn, Mã số: TCKH22-04-2020 94 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC VĂN LANG Số 22, Tháng - 2020 giới Vấn đề chất lượng giống quan tâm đặt nhiều câu hỏi cho nhà quản lý người nuôi Xét mặt di truyền, nguyên nhân chủ yếu dẫn tới sụt giảm chất lượng giống giao phối cận huyết Trong quần thể chọn lọc, giao phối cận huyết gây tác động tiêu cực tăng đồng hợp tử, dẫn đến gia tăng biểu gene lặn gây hại, suy thoái cận huyết giảm biến dị di truyền Điều dẫn đến làm tăng khả mắc bệnh, giảm khả tăng trưởng, kích cỡ tối đa đạt đối tượng nuôi Việc ứng dụng di truyền phân tử để đánh giá đặc điểm di truyền đối tượng thủy sản nói chung tơm nói riêng có ý nghĩa quan trọng [1, tr.797-803] Ở Việt Nam, nghiên cứu tơm tập trung vào sinh sản nhân tạo nuôi thương phẩm Việc đánh giá quan hệ di truyền số quần đàn tơm ni Việt Nam có ý nghĩa quan trọng, sở khoa học để đề xuất chương trình chọn giống tơm giúp tăng biến dị di truyền góp phần nâng cao hiệu cho việc phát triển đối tượng Bên cạnh đó, việc phân tích định danh lồi theo hình thái khơng xác, nghiên cứu quan hệ di truyền số loài thuộc họ tôm he (Penaeidae) phương pháp sinh học phân tử dựa trình tự vùng gene ty thể 16S- rRNA (16S ribosomal ribonucleic acid) cần thiết c Tôm sú (Penaeus Monodon) d Tơm bạc thẻ (Fenneropenaeus Merguiensis) Hình Một số lồi thuộc họ tơm he (Penaeidae) [3] NỘI DUNG 2.1 Mục tiêu nội dung nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu giải trình tự gene ty thể 16S-rRNA ba mẫu tôm thẻ chân trắng (Penaeus Vannamei) Việt Nam, xác định quan hệ di truyền phân nhóm theo khoảng cách di truyền lồi tơm thuộc họ Penaeidae Kết nghiên cứu sở khoa học chọn giống nuôi trồng thủy sản Nội dung nghiên cứu tách chiết, giải trình tự chỉnh sửa trình tự gene ty thể 16S-rRNA ba mẫu tôm thẻ chân trắng Việt Nam Ứng dụng tin sinh học nhận diện loài Penaeus Vannamei Việt Nam dựa sở liệu GenBank, ước lượng khoảng cách di truyền lồi, nhóm lồi xây dựng phát sinh lồi Phân tích quan hệ di truyền lồi tơm thẻ chân trắng Việt Nam lồi tơm khác thuộc họ Penaeidae 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Tách chiết DNA tổng số Mẫu tôm xử lý bảo quản 20 oC cho việc tách chiết DNA tổng số (Total Deoxyribonucleic Acid) DNA tổng số trích ly từ mơ thịt tơm kit PHUSAIHHNV theo quy trình Cơng ty Sinh hóa Phù Sa Kiểm tra nồng độ độ tinh mẫu DNA tổng số phương pháp đo hai a Tôm thẻ chân trắng (Penaeus Vannamei) b Tôm vằn (Penaeus Semisulcatus) 95 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC VĂN LANG Trương Thế Quang bước sóng 260 nm 280 nm máy quang phổ hấp thu phân tử UV-VIS, hãng Bio-Rad 2.2.2 Khuếch đại, tinh sạch, giải trình tự chỉnh sửa trình tự gene 16S-rRNA Cặp mồi 16Lvan-f 16Lvan-r dùng để khuếch đại trình tự gene 16S-rRNA thiết kế công cụ Primer-BLAST, National Center for Biotechnology Information (NCBI) tổng hợp Phòng Oligo, Cơng ty Sinh hóa Phù Sa [7], [8], [9] Sau chạy PCR khuếch đại trình tự gene 16S-rRNA, tiến hành điện di gel agarose 2% để kiểm tra chất lượng độ tinh sản phẩm PCR Sử dụng thang chuẩn DNA 100 bp (từ 100 bp đến 1500 bp) để ước lượng kích thước band sản phẩm PCR Band sản phẩm PCR phải sáng rõ, chiều rộng band lớn có kích thước khoảng 550 bp, xem phản ứng khuếch đại thành công Sau đó, sản phẩm PCR tinh theo quy trình Cơng ty Sinh hóa Phù Sa giải trình tự theo nguyên tắc Sanger hệ thống 3130, hãng Applied Biosystems Chỉnh sửa file trình tự gene 16S-rRNA thu phần mềm BioEdit phiên 7.0.5.2 cơng cụ Nucleotide Blast (NCBI) 2.2.3 Sắp hàng trình tự 16S-rRNA với sở liệu GenBank Sau có kết giải trình tự gene 16SrRNA, tiến hành thu thập mối quan hệ tương quan kiểm tra sai lệch dựa hàng hai trình tự gồm trình tự truy vấn 16SrRNA với trình tự sở liệu GenBank công cụ Nucleotide Blast để tìm trình tự sở liệu GenBank có tỷ lệ tương đồng cao với trình tự truy vấn, qua kiểm tra nhận diện tên lồi mẫu vật 2.2.4 Phân tích phát sinh chủng lồi Phân tích phát sinh chủng lồi thực dựa hàng nhiều trình tự gene 16SrRNA ba mẫu tôm thẻ chân trắng Việt Nam T1 (Cà Mau), T2 (Bạc Liêu) T3 (Sóc Trăng) với trình tự gene 16S-rRNA lồi thuộc họ tôm he (Penaeidae) thu thập từ sở liệu GenBank theo thuật toán ClustalW, ứng dụng phần mềm Mega phiên X 2.2.5 Xây dựng phát sinh loài Cây phát sinh loài sơ đồ thể mức độ tương đồng trình tự qua q trình tiến hóa di truyền Thơng qua phát sinh lồi phân loại thành nhóm sinh vật cho biết sinh vật chiếm số lượng nhiều hay loài sơ khai, loài phát triển Việc xây dựng phát sinh loài để mơ tả lịch sử tiến hóa nhóm lồi với đặc tính khác có mối quan hệ họ hàng với hình thành từ tổ tiên chung khứ Ước lượng ma trận khoảng cách di truyền loài, nhóm lồi theo mơ hình Kimura – Parameter [2] xây dựng phát sinh lồi theo thuật tốn Neighbor – Joining Tree [6, tr.406-425], ứng dụng phần mềm Mega phiên X [5, tr.15471549] Chọn bootrap 1000 lần lặp lại để tăng độ tin cậy tính tốn [4, tr.783-791] 2.2.6 Phân tích quan hệ di truyền Dựa vào phát sinh lồi, phân loại nhóm lồi cho khoảng cách di truyền hai nhóm i nhóm j Dij > 0,200 Từ đó, ước lượng hai nhóm có khoảng cách di truyền xa nhất, gần Khoảng cách di truyền Dkm nhóm k nhóm m, (k  m) tính theo cơng thức (1) [2] n i Dmi  n jDmj (1) Dkm  ni  n j Công thức (1) đảm bảo Dmk khoảng cách trung bình tất lồi nhóm k nhóm m Ở đây, ni nj số lồi nhóm i nhóm j, Dmi khoảng cách di truyền nhóm m nhóm i, Dmj khoảng cách di truyền nhóm m nhóm j 2.3 Kết thảo luận 2.3.1 Tách chiết DNA tổng số DNA tổng số tách chiết từ mơ thịt tơm có tỷ lệ độ hấp thu bước sóng 260 96 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC VĂN LANG Số 22, Tháng - 2020 nm 280 nm (OD260 / OD280) 1,85 đến 1,97 nằm giới hạn từ 1,8 đến 2,0 chứng tỏ mẫu DNA có độ tinh cao không bị tạp nhiễm protein, RNA phân tử hữu khác (Bảng 1) Kết chạy PCR khuếch đại thành công gene ty thể 16S-rRNA, điện di sản phẩm PCR thu band DNA sáng rõ có kích thước khoảng 550 bp (Hình 2) Bảng Kết kiểm tra độ tinh sản phẩm DNA tổng số [3] STT Tên mẫu Tôm Cà Mau (T1) Tôm Bạc Liêu (T2) Tơm Sóc Trăng (T3) OD260 OD280 OD260/ OD280 0,528 0,268 1,97 0,617 0,315 1,96 0,437 0,236 1,85 Hình Kết điện di sản phẩm PCR [3] Kết giải trình tự, chỉnh sửa thu ba file trình tự 16S-rRNA định dạng fasta ba mẫu tơm thẻ chân trắng Việt Nam T1, T2 T3 Ba trình tự gene 16S-rRNA đệ trình GenBank (USA) phát hành ngày 09/01/2020 với số gia nhập (Accession) MK390356, MK390357 MK390358 [7], [8], [9] 2.3.3 Kết hàng trình tự gene 16SrRNA với sở liệu GenBank 2.3.2 Khuếch đại, tinh sạch, giải trình tự hiệu chỉnh trình tự gene 16S-rRNA Thực kỹ thuật PCR khuếch đại trình tự gene ty thể 16S-rRNA với cặp mồi [7], [8], [9]: 16Lvan-f (5' - 3'): GTCCCGAAAGAAAAA GAGCTAAC 16Lvan-r (5' - 3'): GTCCAACCATTCATAC GAGC Bảng Kết hàng trình tự 16S-rRNA tơm thẻ chân trắng Việt Nam sở liệu GenBank STT Tên loài Penaeus vannamei Penaeus vannamei Penaeus vannamei Penaeus vannamei Penaeus vannamei Độ bao phủ (%) 99,00 99,00 99,00 98,00 98,00 Tỷ lệ tương đồng (%) 99,00 99,00 99,00 99,00 99,00 Kiểm tra công cụ Nucleotide Blast sở liệu GenBank cho thấy, tỷ lệ tương đồng trình tự gene ty thể 16S-rRNA ba mẫu tôm thẻ chân trắng Việt Nam T1, T2 T3 so với loài Penaeus vannamei China (KT596762, DQ534543), Mexico (EF584003, AY046914), Spain (HM590748) 99 % (Bảng 2) Như vậy, nhận diện ba mẫu tôm thẻ chân trắng Việt Nam loài Penaeus vannamei [3] Quốc gia China China Mexico Mexico Spain Accession KT596762 DQ534543 EF584003 AY046914 HM590748 2.3.4 Cây phát sinh loài Kết hàng nhiều trình tự gene ty thể 16S-rRNA lồi thuộc họ tôm he (Penaeidae), công cụ Distance, Phylogeny phần mềm Mega X ước lượng ma trận khoảng cách di truyền phát sinh loài (Hình 3) 97 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC VĂN LANG Trương Thế Quang Hình Cây phát sinh lồi lồi thuộc họ tơm he (Penaeidae) dựa thị gene 16S-rRNA [3] brasiliensis Farfantepenaeus duorarum có khoảng cách di truyền gần không vượt 0,086 nên có chi Farfantepenaeus Lồi Farfantepenaeus paulensis Anh, loài Farfantepenaeus subtilis Brazil loài Farfantepenaeus duorarum Mexico Nhóm II: Litopenaeus schmitti, Litopenaeus setiferus, Litopenaeus stylirostris Litopenaeus vannamei có chi, khoảng cách di truyền gần không vượt 0,073 Litopenaeus schmitti Litopenaeus setiferus vùng Đại Tây Dương, Litopenaeus stylirostris Japan, Litopenaeus vannamei Brazil Nhóm III: Chi Penaeus tổ chức lại theo hệ thống mà Pérez Farfante Kensley đề xuất dựa khác biệt hình thái, đặc biệt đặc trưng quan sinh dục loài này, sửa đổi chưa chấp nhận rộng khắp Kết là, nhiều loài trước thuộc chi Penaeus chuyển qua chi họ Penaeidae gồm có Farfantepenaeus, Fenneropenaeus, Litopenaeus Marsupenaeus Tuy Penaeus esculentus nằm chung nhóm với Fenneropenaeus chinensis, Fenneropenaeus merguiensis, Fenneropenaeus penicilatus Fenneropenaeus silasi khác chi Như kết phân loại khoa học dựa vào hình thái nhóm xác với sinh học phân tử 2.3.5 Kết phân tích quan hệ di truyền Với điều kiện phân loại theo khoảng cách di truyền hai nhóm i nhóm j cho Dij > 0,200, lồi tơm thuộc họ Penaeidae phân thành nhóm sau: Nhóm I có lồi: Farfantepenaeus paulensis, Farfantepenaeus subtilis, Farfantepenaeus aztecus, Farfantepenaeus brasiliensis Farfantepenaeus duorarum; Nhóm II có lồi: Litopenaeus schmitti, Litopenaeus setiferus, Litopenaeus stylirostris Litopenaeus vannamei; Nhóm III có lồi: Penaeus esculentus, Fenneropenaeus chinensis, Fenneropenaeus merguiensis, Fenneropenaeus penicilatus Fenneropenaeus silasi; Nhóm IV có lồi: Melicertus latisculatus, Melicertus kerathurus, Melicertus marginatus, Melicertus longistylus, Marsupenaeus japonicus Melicertus canaliculatus; Nhóm V có lồi: Penaeus semisulcatus; Nhóm VI có lồi: Penaeus monodon; Nhóm VII có lồi: Farfantepenaeus notialis, Fenneropenaeus indicus, Farfantepenaeus brevitrostri; Nhóm VIII có lồi: Penaeus vannamei Cà Mau, Bạc Liêu, Sóc Trăng Kết phân tích quan hệ di truyền: Nhóm I: Farfantepenaeus paulensis, Farfantepenaeus subtilis, Farfantepenaeus aztecus, Farfantepenaeus 98 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC VĂN LANG Số 22, Tháng - 2020 Nhóm IV: Marsupenaeus japonicus Melicertus longistylus có khoảng cách di truyền nhỏ 0,041 nên hai lồi thuộc chi Có thể định danh lại Melicertus longistylus Marsupenaeus longistylus Nhóm V nhóm VI hai nhóm độc lập, Penaeus semisulcatus Penaeus monodon hai loài khác nhau, chi Penaeus Theo phát sinh lồi (Hình 3) khoảng cách di truyền Penaeus semisulcatus Penaeus monodon Dij = 0,085 nhỏ điều kiện phân nhóm với khoảng cách di truyền nhóm tối thiểu 0,200 Nhóm VII: Gồm loài chi Farfantepenaeus notialis, Fenneropenaeus indicus Farfantepenaeus brevitrostris có khoảng cách di truyền khơng vượt q 0,176 Nhóm VIII: Gồm lồi tơm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei) Việt Nam Khoảng cách di truyền nhóm thuộc họ tơm he (Penaeidae) dựa thị gene 16S-rRNA nêu Bảng Khoảng cách di truyền nhóm III nhóm V gần 0,272 Khoảng cách di truyền nhóm IV nhóm VII xa 1,645 Khoảng cách di truyền nhóm VII nhóm VIII gần 0,342 Khoảng cách di truyền nhóm VII, nhóm VIII nhóm cịn lại lớn từ 1,153 đến 1,645 Điều cho thấy lồi tơm thuộc nhóm VII nhóm VIII có quan hệ tiến hóa di truyền xa hầu hết lồi tơm thuộc họ Penaeidae từ nhóm I đến nhóm VI Bảng Khoảng cách di truyền nhóm thuộc họ Penaeidae dựa thị gene 16S-rRNA Nhóm I II III IV V VI VII VIII I 0,000 0,316 0,299 0,414 0,319 0,330 1,317 1,251 II III 0,000 0,302 0,382 0,323 0,333 1,590 1,255 0,000 0,366 0,272 0,283 1,547 1,203 Khoảng cách di truyền IV V 0,000 0,370 0,381 1,645 1,301 0,000 0,285 1,549 1,206 VI VII VIII 0,000 1,496 1,153 0,000 0,342 0,000 loài Penaeus vannamei Việt Nam với tỷ lệ tương đồng 99 % độ bao phủ từ 98 đến 99 % Giải thành cơng tốn hàng nhiều trình tự thuật toán ClustalW, ước lượng ma trận khoảng cách di truyền theo mơ hình Kimura – Parameter, xác định lồi có quan hệ di truyền gần lồi có quan hệ di truyền xa Xây dựng thành cơng phát sinh lồi theo thuật toán Neighbor – Joining Tree Dựa vào phát sinh lồi phân loại lồi tơm he thuộc họ Penaeidae thành nhóm: Nhóm I có lồi, Nhóm II có lồi, nhóm III có lồi, KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Tách chiết thu nhận DNA tổng số ba mẫu tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei) Việt Nam T1, T2 T3 Thiết kế sàng lọc cặp mồi 16Lvan-f 16Lvan-r đặc hiệu việc khuếch đại giải trình tự gene 16S-rRNA ba mẫu tôm thẻ chân trắng Kiểm tra điện di kết PCR thu sản phẩm band sáng rõ, kích thước vị trí 550 bp khơng bị tạp nhiễm Sắp hàng trình tự gene 16S-rRNA với sở liệu GenBank cho thấy tất ba trình tự gene 16S-rRNA thuộc 99 TẠP CHÍ KHOA HỌC ĐẠI HỌC VĂN LANG Trương Thế Quang nhóm IV có lồi, nhóm V có lồi, nhóm VI có lồi, nhóm VII có lồi nhóm VIII có lồi Khoảng cách di truyền nhóm III nhóm V gần 0,272 Khoảng cách di truyền nhóm IV nhóm VII xa 1,645 Khoảng cách di truyền nhóm VII nhóm VIII gần 0,342 Khoảng cách di truyền nhóm VII, nhóm VIII nhóm cịn lại lớn từ 1,153 đến 1,645 Điều cho thấy lồi tơm thuộc nhóm VII nhóm VIII có quan hệ tiến hóa di truyền xa hầu hết lồi tơm thuộc họ Penaeidae từ nhóm I đến nhóm VI Mở rộng phạm vi nghiên cứu thu thập thêm nhiều mẫu tôm he Việt Nam giới để xây dựng hệ thống phân loại sinh học phân tử xác Thiết kế mồi đặc hiệu để khuếch đại vùng gene ty thể 16S-rRNA giải trình tự cho tất lồi thuộc họ tơm he (Penaeidae) Cần phải nghiên cứu giải trình tự thêm vùng gene COI, COII, COIII, NADH, 18S-rRNA kết hợp với hình thái để định danh xác tên lồi xây dựng hệ thống DNA barcode cho lồi tơm he thuộc họ Penaeidae TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Trần Thị Thúy Hà cộng (2013), Tìm hiểu đặc điểm di truyền số quần đàn tôm thẻ chân trắng nuôi Việt Nam thị Microsatellite, Tạp chí khoa học phát triển 11(6) [2] Trương Thế Quang (2018), Tin sinh học (Bioinformatics), Nxb Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [3] Trương Thế Quang, Trần Thị Kim Khánh (2018), Sử dụng mã vạch DNA định loại số lồi tơm thuộc họ Penaeidae dựa trình tự vùng gene ty thể 16S-rRNA, Trường Đại học Văn Lang [4] Felsenstein J (1985), Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap, Evolution 39 [5] Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C., Tamura K (2018), MEGA X: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across computing platforms, Molecular Biology and Evolution 35 [6] Saitou N., Nei M (1987), The neighbor - joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees, Molecular Biology and Evolution [7] Trương Thế Quang (2020), Penaeus vannamei isolate LVAN1 16S ribosomal RNA gene, partial sequence; mitochondrial, Title: Genetic diversity of the Penaeus shrimp using 16S ribosomal RNA mitochondrial gene, Version MK390356.1, GenBank, The National Center for Biotechnology Information, USA, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MK390356.1 [8] Trương Thế Quang (2020), Penaeus vannamei isolate LVAN2 16S ribosomal RNA gene, partial sequence; mitochondrial, Version MK390357.1, GenBank, The National Center for Biotechnology Information, USA, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MK390357.1 [9] Trương Thế Quang (2020), Penaeus vannamei isolate LVAN3 16S ribosomal RNA gene, partial sequence; mitochondrial, Version MK390358.1, GenBank, The National Center for Biotechnology Information, USA, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MK390358.1 Ngày nhận bài: 13-5-2020 Ngày biên tập xong: 07-7-2020 Duyệt đăng: 24-7-2020 100 ... định danh lồi theo hình thái khơng xác, nghiên cứu quan hệ di truyền số lồi thuộc họ tơm he (Penaeidae) phương pháp sinh học phân tử dựa trình tự vùng gene ty thể 16S- rRNA (16S ribosomal ribonucleic... gene ty thể 16S- rRNA ba mẫu tôm thẻ chân trắng (Penaeus Vannamei) Việt Nam, xác định quan hệ di truyền phân nhóm theo khoảng cách di truyền lồi tơm thuộc họ Penaeidae Kết nghiên cứu sở khoa học... dựa thị gene 16S- rRNA nêu Bảng Khoảng cách di truyền nhóm III nhóm V gần 0,272 Khoảng cách di truyền nhóm IV nhóm VII xa 1,645 Khoảng cách di truyền nhóm VII nhóm VIII gần 0,342 Khoảng cách di