Đồ án tốt nghiệp nghiên cứu trích ly thành phần flavonoid từ lá củ đậu và thử nghiệm độc tính trên mô hình in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU TRÍCH LY THÀNH PHẦN FLAVONOID TỪ LÁ CỦ ĐẬU VÀ THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH TRÊN MÔ HÌNH IN VITRO Ngành CÔNG NGHỆ SINH[.]

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU TRÍCH LY THÀNH PHẦN FLAVONOID TỪ LÁ CỦ ĐẬU VÀ THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH TRÊN MƠ HÌNH IN VITRO Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : ThS.NGUYỄN THỊ THU HƯƠNG Sinh viên thực hiện: HUỲNH KIM KHÁNH MSSV: 1211100258 Lớp: 12DSH01 TP Hồ Chí Minh, 2016 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu đồ án trung thực chưa tác giả khác công bố nghiên, đồ án Tôi xin cam đoan giúp đỡ việc hoàn thành luận án cảm ơn thơng tin trích dẫn đồ ghi rõ nguồn gốc Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm số liệu đồ án TP.HCM, ngày tháng Sinh viên năm 2016 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, bên cạnh cố gắng nỗ lực thân, nhận động viên giúp đỡ lớn từ cá nhân tập thể Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới giáo viên hướng dẫn ThS Nguyễn Thị Thu Hương, giảng viên Khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường, người tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, tạo điều kiện tốt cho tơi thực hồn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn thầy Phịng thí nghiệm Trường Đại học Cơng nghệ TP HCM tạo điều kiện sở vật chất tốt cho tơi thực hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ bạn nhóm sinh viên làm nghiên cứu khoa học nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè động viên giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực đề tài hoàn thành luận văn TP.HCM, ngày tháng năm 2016 Sinh viên thực Huỳnh Kim Khánh ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC SƠ ĐỒ DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 14 1.1 Tổng quan củ đậu 14 1.1.1 Nguồn gốc phân loại .14 1.1.2 Đặc điểm sinh thái 15 1.1.3 Tình hình trồng trọt, tiêu thụ kỹ thuật canh tác củ đậu Việt Nam… 16 1.1.4 Thành phần hóa học 21 1.1.5 Tính vị công dụng 21 1.2 Hợp chất Phenol, Flavonoid Rotenone .22 1.2.1 Phenol 22 1.2.2 Flavonoid 25 1.2.3 Rotenone .30 1.3 Các phương pháp tách chiết hợp chất thứ cấp thực vật .33 1.3.1 Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng 33 1.3.2 Kỹ thuật chiết rắn – lỏng .35 1.4 Phương pháp đánh giá độc tính xác định giá trị LC50 41 1.5 Phương pháp xác định khả đối kháng với vi sinh vật gây bệnh 45 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 1.6 Sinh vật thí nghiệm 47 1.6.1 Động vật giáp xác - Artemia Nauplii 47 1.6.2 Các chủng vi sinh vật thí nghiệm 49 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 56 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 56 2.2 Vật liệu nghiên cứu 56 2.3 Dụng cụ hóa chất thí nghiệm .56 2.3.1 Dụng cụ 56 2.3.2 Hóa chất .57 2.4 Phương pháp 57 2.5 Nội dung thí nghiệm 58 2.5.1 Phương pháp tách chiết thu cao chiết 59 2.5.2 Phương pháp định tính số hợp chất thứ cấp củ đậu…… 62 2.5.3 Phương pháp định lượng số hợp chất thứ cấp củ đậu 63 2.5.4 Phương pháp đánh giá độc tính 66 2.5.5 Phương pháp đánh giá khả kháng khuẩn 68 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 73 3.1 Thu nhận cao chiết từ củ đậu phương pháp dung môi khác 73 3.2 Định tính số hợp chất thứ cấp củ đậu 74 3.2.1 Định tính flavonoid 74 3.2.2 Định tính rotenone .75 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 3.3 Định lượng số hợp chất thứ cấp chất khô loại cao chiết .76 3.3.1 Hàm lượng chất khô 76 3.3.2 Định lượng polyphenol tổng số 76 3.3.3 Định lượng Flavonoid tổng số 80 3.4 Khảo sát độc tính .84 3.5 Thử hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết 86 3.5.1 Hoạt tính kháng Enterotoxigenic E.Coli loại cao chiết .86 3.5.2 Hoạt tính kháng Listeria monocytogenes loại cao chiết 88 3.5.3 Hoạt tính kháng Pseudomonas aeruginosa loại cao chiết 89 3.5.4 Khơng có hoạt tính kháng số vi sinh vật loại cao chiết.90 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 93 TÀI LIỆU THAM KHẢO 95 PHỤ LỤC ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AG: Acid Gallic BVTV: Bảo vệ thực vật db: vật liệu ĐC: Đối chứng DMSO: Dimethyl sulfoxide LC50: Lethal concentration NA: Nutrient Agar NB: Nutrient Broth NĐ: Nồng độ OD: Optical density HTHC: Hợp chất thứ cấp ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Hiệu tác động Nicotin Sulphat (trong dung dịch 1% saponin) ruồi giấm .42 Bảng Phân tích nguồn biến lượng 43 Bảng Bố trí thí nghiệm thử độc tính Artemia Nauplii .67 Bảng Kết định tính số hợp chất thứ cấp cao chiết củ đậu 75 Bảng Kết hàm lượng chất khô loại cao chiết 76 Bảng 3 Kết đường chuẩn Acid Gallic 77 Bảng Kết hàm lượng polyphenol tổng loại cao chiết củ đậu 78 Bảng Bảng kết đường chuẩn Rutin 81 Bảng Bảng kết hàm lượng flavonoid tổng số loại cao chiết 82 Bảng Kết đường chuẩn LC50 tương ứng loại cao chiết 84 Bảng Nồng độ LC50 (mg/L) loại cao chiết 86 Bảng Kết kháng Enterotoxigenic E.Coli loại cao chiết 87 Bảng 10 Kết kháng Listeria monocytogenes loại cao chiết .88 Bảng 11 Kết kháng Pseudomonas aeruginosa loại cao chiết 89 Bảng 12 Kết kháng số loại vi sinh vật loại cao chiết 91 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ Nội dung thí nghiệm .58 Sơ đồ 2 Quá trình tách chiết thu cao chiết từ củ đậu 59 Sơ đồ Quy trình định lượng polyphenol tổng 65 Sơ đồ Quy trình đánh giả khả kháng khuẩn cao chiết củ đậu .69 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC HÌNH Hình 1 Cây củ đậu .14 Hình Thương lái thu mua củ đậu đồng ruộng 17 Hình Cây củ đậu trồng theo luống 19 Hình Củ đậu đến thời gian thu hoạch .20 Hình Tephrosin 21 Hình Rotenone 21 Hình Củ đậu tốt cho sức khỏe 22 Hình Một số ăn chế biến từ củ đậu 22 Hình Một số hợp chất phenol 24 Hình 10 Một số Eucoflavonoid 25 Hình 11 Cơng thức cấu tạo cấu trúc 3D rotenone 31 Hình 12 Chuỗi truyền điện tử chế tác động rotenone ty thể 32 Hình 13 Rotenone ngăn cản truyền điện tử đến CoQ .32 Hình 14 Chiết lớp chất lỏng .34 Hình 15 Kỹ thuật chiết ngấm kiệt .35 Hình 16 Bộ chiết Soxhlet 37 Hình 17 Máy chiết Kumagawa 38 Hình 18 Bộ lơi nước .38 Hình 19 Sơ đồ hệ thống chiết siêu tới hạn 39 Hình 20 Cột chiết pha rắn 40 Hình 21 Ấu trùng trứng Artemia Nauplii .48 Hình 22 Vi khuẩn Salmonella .50 Hình 23 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 51 Hình 24 Listeria monocytogenes 52 Hình 25 Vi khuẩn Escherichia coli 53 Hình 26 Pseudomonas aeruginosa .54 Hình Lá củ đậu 56 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Hình 2 Phương pháp ngâm dầm 60 Hình Phương pháp chiết Soxhlet 61 Hình Ngâm với chloroform dịch chiết sau cô kính đồng hồ 63 Hình Các loại cao chiết kính đồng hồ .63 Hình Bố trí thí nghiệm thử độc tính ấu trùng Artemia Nauplii 68 Hình loại cao chiết 73 Hình Cao chiết chuyển từ nâu sang vàng sau cho 1% NaOH/etanol 96o 74 Hình 3 Dịch chiết có màu tím nhỏ giọt H2SO4đđ thêm vài hạt natri nitrit 75 Hình Cao chiết có màu tím nhỏ giọt H2SO4đđ thêm vài hạt natri nitrit 75 Hình Dung dịch dựng đường chuẩn Acid Gallic 77 Hình Màu nâu vàng sang xanh lam cao chiết sau ủ 40oC 77 Hình Đường chuẩn Acid Gallic 78 Hình Sự chênh lệch hàm lượng polyphenol tổng số loại cao chiết 78 Hình Dung dịch Rutin chuẩn 81 Hình 10 Đo hàm lượng flavonoid tổng số cao chiết .81 Hình 11 Đường chuẩn Rutin .82 Hình 12 Sự chênh lệch hàm lượng flavonoid tổng số loại cao chiết 82 Hình 13 Đường chuẩn cao chiết A 84 Hình 14 Đường chuẩn cao chiết C 85 Hình 15 So sánh LC50 loại cao chiết 85 Hình 17 Vịng kháng Enterotoxigenic E.Coli loại cao chiết .87 Hình 18 Vòng kháng Listeria monocytogenes loại cao chiết 88 Hình 19 Vịng kháng Pseudomonas aeruginosa loại cao chiết .89 Hình 20 Kết không kháng Salmonella loại cao chiết 90 Hình 21 Kết khơng kháng Staphylococcus aureus loại cao chiết 91 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ xa xưa, nông dân nhiều nước giới biết sử dụng số loài thực vật chứa chất độc để trừ số loại côn trùng gây hại trồng gia súc cách phun lên hay dùng nước chiết để tắm cho gia súc Trên giới có khoảng 2000 lồi có chất độc, có 10 – 12 loài dùng phổ biến Thuốc thảo mộc diệt trừ côn trùng đường tiếp xúc vị độc phổ tác động thường khơng rộng Một số lồi cịn có khả diệt nhện hại Sau sâm nhập, thuốc nhanh chóng tác động đến hệ thần kinh, gây tê liệt làm chết côn trùng Cây củ đậu loại rau củ ngắn ngày, trồng nhiều vụ năm, quen thuộc với người Việt Nam diện tích trồng trọt lớn mang đến nhiều hiệu kinh tế cao Tuy nhiên, nông dân thu hoạch sử dụng củ (rễ phình to), cắt bỏ tất phần thân gồm thân, lá, hạt Hạt củ đậu có số thành phần hóa học tương tự nhau, độc, gây ngộ độc dẫn đến tử vong cho người vơ tình ăn phải cố ý ăn với liều lượng lớn Dù vậy, nghiên cứu thành phần hóa học độc tính bên hạt củ đậu ứng dụng trừ sâu, bệnh hại thực vật hạn chế nước ta Việc nghiên cứu sản xuất bổ sung chất độc tách chiết từ thiên nhiên vào thuốc bảo vệ thực vật, hạn chế việc sử dụng thuốc bảo vệ thực vật hóa học gây hại cho người môi trường quan tâm Những hợp chất trừ sâu thảo mộc thông dụng rotenone rotenoit, arteminisinin, azadirachtin…Hiện diện số phận số loài Hàm lượng chất độc phụ thuộc loài cây, phận cây, điều kiện sống thời gian thu hái chúng Nói chung, chất dễ bị phân huỷ tác động oxy hoá, ánh sáng (đặc biệt tia cực tím), ẩm độ, nhiệt độ pH mơi trường nên chúng gây độc cho mơi sinh mơi trường.[7] Sau thu hoạch nhiều vụ mùa củ đậu năm, nông dân thải bỏ số lượng lớn hạt có số nhà nơng biết sử dụng hạt củ đậu ngâm nước để ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP bảo vệ trồng thủ cơng đơn giản Bên cạnh đó, cơng trình nghiên cứu củ đậu thành phần độc tính có giá trị Do vậy, đề tài “Nghiên cứu trích ly thành phần flavonoid từ củ đậu thử nghiệm độc tính mơ hình in vitro” thực hiện, tạo tiền đề khoa học cho nghiên cứu tạo chế phẩm ứng dụng bảo vệ thực vật mang lại nhiều giá trị thực tiễn Tình hình nghiên cứu nước 2.1 - Các nghiên cứu nước Chuyên đề tốt nghiệp “Thử hiệu lực số thuốc trừ sâu có nguồn gốc thảo mộc sâu hại lúa rau cải vụ mùa năm 2013 xã Thanh An – huyện Điện Biên – tỉnh Điện Biên” Đỗ Đức Anh Đề tài sử dụng chế phẩm tách chiết từ hạt củ đậu - Luận văn thạc sĩ nông nghiệp “Nghiên cứu tác dụng diệt ve kí sinh cho bò chế phẩm thuốc mỡ từ thuốc cá” Nguyễn Thanh Hải (2007) Trong đó, độc tính chủ yếu chế phẩm rotenone tương tự chất độc bên củ đậu - Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp “Đặc điểm dịch tễ bệnh ve chó hai huyện, thị tỉnh Thái Nguyên, thử nghiệm thảo dược trị ve cho chó” Cù Xuân Đức (2011) Thảo dược đề tài dùng cho thử nghiệm hạt củ đậu - Luận án phó Tiến sĩ “ Nghiên cứu sử dụng số loại có hoạt tính độc để làm thuốc trừ sâu phía Bắc Việt Nam” Nguyễn Duy Trang (2016) Trong đó, đề tài có nghiên cứu hiệu lực trừ sâu hạt củ đậu 2.2 - Các nghiên cứu nước Sahu Rc, Hameed SF (1983), “Assessment of the rotenoids of Indian yam bean seeds” Đánh giá rotenoid chiết xuất từ hạt củ đậu trừ loài sâu, bướm - Sahu RC, Hameed SF (1989), “Effect of Pachyrrhizus erosus urban seed extracts against tobacco caterpillar, Spodoptera litura F Tobacco Res 15(1):17-20” Sự ảnh hưởng hạt củ đậu sâu Mục tiêu nghiên cứu 10 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP - Xác định hàm lượng chất polyphenol, flavonoid cao chiết củ đậu - Đánh giá độc tính khả kháng khuẩn cao chiết củ đậu làm tiền đề cho việc nghiên cứu ứng dụng làm dược liệu bổ sung vào BVTV Nhiệm vụ nghiên cứu - Nhiệm vụ 1: Nghiên cứu sở khoa học, tổng quan tài liệu vấn đề nghiên cứu, làm sở cho nhiệm vụ - Nhiệm vụ 2: Tiến hành nghiên cứu thực nghiệm, thông qua phương pháp xác định, khảo sát, phân tích - Nhiệm vụ 3: Thu nhận cao chiết củ đậu phương pháp ngâm dầm chiết Soxhlet etanol 90o acetone - Nhiệm vụ 4: Định tính sơ số thành phần hóa học có cao chiết củ đậu - Nhiệm vụ 5: Xác định hàm lượng polyphenol tổng số, flavonoid tổng số từ cao chiết củ đậu - Nhiệm vụ 6: Đánh giá độc tính thông qua giá trị LC50 (nồng độ gây chết trung bình) cao chiết củ đậu, đánh giá khả kháng khuẩn mơ hình in vitro Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp nghiên cứu thu thập tài liệu: Các tài liệu củ đậu, thành phần hóa học hạt củ đậu, phương pháp xác định hàm lượng hợp chất thứ cấp, mơ hình đánh giá độc tính, phương pháp đục lỗ thạch, sinh vật thí nghiệm - Phương pháp làm thí nghiệm: Tiến hành làm thí nghiệm nhằm giải nhiệm vụ nghiên cứu - Phương pháp xử lý số liệu Excel SAS Các số liệu thu xử lý nhằm đưa kết luận cho đề tài 11 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Kết đạt đề tài - Thu nhận loại cao chiết củ đậu phương pháp ngâm dầm chiết Soxhlet loại dung mơi etanol 90o acetone - Định tính có mặt flavonoid, rotenone có diện học cao chiết củ đậu - Định lượng được: polyphenol tổng số, flavonoid tổng số loại cao chiết - Tìm giá trị LC50, so sánh độc tính loại cao chiết khả kháng số loại vi sinh vật loại cao chiết Kết cấu đồ án tốt nghiệp - Mở đầu - Chương 1: Tổng quan tài liệu, sở khoa học đề tài - Chương 2: Vật liệu phương pháp nghiên cứu - Chương 3: Kết thảo luận - Chương 4: Kiến nghị - Tài liệu tham khảo 12 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 13 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP CHƯƠNG 1.1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan củ đậu 1.1.1 Nguồn gốc phân loại Cây củ đậu hay củ sắn, sắn nước (theo cách gọi miền Nam, danh pháp hai phần: Pachyrhizus erosus) dây leo Loài Carl von Linné miêu tả khoa học Tên gọi gần chủ yếu nói củ nó.[16] Chi Củ đậu (Pachyrhizus) chi nhỏ gồm khoảng – lồi dây leo có rể phình to thành củ có nguồn gốc vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Châu Mỹ Sau người Châu Âu khám phá Châu Mỹ số loài quan trọng chi giới thiệu sang Châu Phi, Châu Á Châu Úc Loài Củ đậu hay củ sắn dây (Pachyrhizus erosus) có nguồn gốc từ Mexico Trung Mỹ Người Tây Ban Nha đưa dây củ sắn từ Mexico vào Philippines vào kỷ thứ 18 từ củ đậu lan truyền đến khu vực khác Đông Nam Á Trung Quốc Hiện nay, Cây củ đậu trồng nhiều Châu Mỹ, Trung Quốc Đông Nam Á Ở Việt Nam, Cây củ đậu người Pháp nhập vào đầu kỷ 20 trồng nhiều tỉnh Đồng Sông Cửu Long Miền Đông Nam Bộ, Miền Bắc gọi Cây củ đậu Hình 1 Cây củ đậu 14 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Phân loại khoa học Giới (regnum) Bộ (ordo) Họ (familia) Phân họ (subfamilia) Tơng (tribus) Phân tơng (subtribus) Chi (genus) Lồi (species) Danh pháp Plantae Fabales Fabaceae Faboideae Phaseoleae Glycininae Pachyrhizus P erosus Pachyrhizus erosus 1.1.2 Đặc điểm sinh thái Cây củ đậu cao – m có giàn Lá kép gồm chét hình tam giác rộng, mỏng Hoa màu tím nhạt; Việt Nam thường vào tháng 4, tháng 5; hoa lớn, mọc thành chùm dài kẽ Quả có lơng, không cuống, dài 12 cm, ngăn vách nhiều rãnh ngang, thường chứa từ – hạt Củ rễ phình to mà thành, dài tới m nặng đến 20 kg Vỏ củ có màu vàng mỏng giấy cịn ruột có màu trắng kem giống ruột khoa tây hay lê Củ đậu có chứa tinh bột 2,4%, 4,51% đường tồn (glucose) Nó có chứa 86 – 90% nước; có protein (1,46%) khơng có chất béo Trái với củ, phần lại củ đậu độc; hạt có chứa độc tố rotenone, dùng để diệt côn trùng thuốc cá, diệt rệp rau rệp thuốc Lá có chứa chất độc cá động vật nhai lại (trừ ngựa) Củ đậu nên bảo quản nơi khô ráo, nhiệt độ khoảng 12°C tới 16°C (53°F tới 60°F); nhiệt độ thấp làm hư củ Củ đậu tươi cất giữ nhiệt độ thích hợp để lâu hai tháng Cây củ đậu trồng châu Mỹ, Trung Quốc Đông Nam Á, nơi củ đậu sống chế biến thành nhiều ăn đa dạng, phong phú Tại Việt Nam, củ đậu trồng khắp nơi vùng đồng miền núi để lấy rễ củ ăn, hạt dùng làm thuốc, dùng có độc Mùa thu hoạch hạt: tháng 11 – 12.[17] 15 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP 1.1.3 Tình hình trồng trọt, tiêu thụ kỹ thuật canh tác củ đậu Việt Nam 1.1.3.1 Tình hình trồng trọt tiêu thụ Ở Việt Nam, Cây củ đậu được trồng nhiều tỉnh Miền Bắc, Đồng Sông Cửu Long Miền Đông Nam Bộ Tại huyện Kim Thành, tỉnh Hải Dương, nơi có điều kiện tự nhiên thuận lợi cho phát triển nông nghiệp Trong cấu sản xuất nông nghiệp huyện, loại rau, củ, trồng ưu tiên hàng đầu, đặc biệt củ đậu Cây củ đậu có quy trình canh tác đơn giản, cho suất hiệu kinh tế cao Theo điều tra khảo sát xã thuộc huyện Kim Thành, tổng diện tích trồng củ đậu đạt 347 ha, chiếm 37,5% diện tích gieo trồng vụ đơng với bình qn 3,7 sào/hộ Giống chủ yếu cung cấp hệ thống đại lý cung ứng thường giống tỉnh miền Nam Thời gian trồng vụ trái vụ chênh lệch không nhiều (khoảng 30 ngày) cho suất, chất lượng không cao Sau áp dụng sản xuất theo quy trình VietGAP cho suất cao, đạt hiệu kinh tế lớn so với củ đậu khơng thực theo VietGAP Năng suất vụ đạt 3.000 kg/sào, trái vụ đạt 1.800 kg/sào, tiết kiệm chi phí phân bón, thuốc bảo vệ thực vật, sào trồng củ đậu theo VietGAP cho lợi nhuận lớn từ 400 – 500 ngàn đồng, qua tăng thu nhập 13 triệu đồng/ha/vụ.[18] Tại Đơng Triều, tỉnh Quảng Ninh Hiện nay, tồn huyện có gần 200 trồng củ đậu, tập trung xã Tân Việt, Bình Khê, An Sinh, Tràng An, Đức Chính… Trong đó, xã Tân Việt địa phương có diện tích trồng củ đậu nhiều huyện với 72 Được đưa vào trồng đồng đất địa phương từ năm 1997, đến thôn xã, bà nông dân tham gia mô hình Vụ mùa năm nay, xã Tân Việt gieo trồng 164 lúa rau màu, củ đậu chiếm 72 với gần 600 hộ nông dân tham gia So với vụ mùa năm trước, diện tích củ đậu tăng gần 10 16 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Hình Thương lái thu mua củ đậu đồng ruộng Theo đánh giá địa phương, củ đậu cho thu nhập bình quân 150 triệu đồng, suất cao gấp – lần so với cấy lúa Ngoài ra, củ đậu xã Tân Việt chọn đăng ký sản phẩm chương trình “Mỗi xã, thị trấn sản phẩm nông nghiệp đặc trưng huyện” Theo bà nông dân cho biết, sào củ đậu sau trừ chi phí, người nơng dân thu lãi trung bình – triệu đồng.[19] Vụ mùa năm 2011, người dân thôn Mịn To, xã Trù Hựu (Lục Ngạn – Bắc Giang) có nguồn thu bạc tỷ từ củ đậu Cả thơn Mịn To có 42 hộ trồng củ đậu với tổng diện tích lên đến gần chục Những hộ trồng diện tích nhiều từ sào trở lên có đến hàng chục hộ Do điều kiện thời tiết thuận lợi, cộng với việc người dân áp dụng tốt kiến thức khoa học kỹ thuật kinh nghiệm vào sản xuất, nên củ đậu sinh trưởng phát triển tốt cho suất cao đạt bình qn tấn/sào Ngồi việc bán buôn cho tiểu thương vào tận ruộng thu mua, nhiều bà nơi thu hoạch dần mang bán lẻ chợ huyện giá nghìn đồng/kg Trước kia, có vài hộ dân thôn Mịn To đưa củ đậu trồng với diện tích nhỏ lẻ Nhưng từ năm 2007, thấy việc trồng củ đậu khơng khó lại cho hiệu kinh tế cao nên nhân dân học tập mua giống trồng Theo diện tích củ đậu ngày mở rộng, đến có gần chục ha.[20] Năm 2011, Phịng Nơng nghiệp PTNT huyện Yên Thế, tỉnh Bắc Giang phối hợp với UBND xã Đồng Kỳ xây dựng cánh đồng mẫu củ đậu, diện tích 21,3 thơn Ngị Mỗi hộ tham gia hỗ trợ 100 nghìn đồng/sào hướng dẫn kỹ 17 ... Sơ đồ Quy trình đánh giả khả kháng khuẩn cao chiết củ đậu .69 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP DANH MỤC HÌNH Hình 1 Cây củ đậu .14 Hình Thương lái thu mua củ đậu đồng ruộng 17 Hình Cây củ đậu. .. hạt củ đậu ngâm nước để ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP bảo vệ trồng cịn thủ cơng đơn giản Bên cạnh đó, cơng trình nghiên cứu củ đậu thành phần độc tính có giá trị Do vậy, đề tài ? ?Nghiên cứu trích ly thành phần. .. bình) cao chiết củ đậu, đánh giá khả kháng khuẩn mơ hình in vitro Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp nghiên cứu thu thập tài liệu: Các tài liệu củ đậu, thành phần hóa học hạt củ đậu, phương pháp