Ly tâm – lọc – sal in salt out – thẩm tích

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Protein: Cấu trúc, chức công nghệ LY TÂM – LỌC – SAL-IN SALT-OUT – THẨM TÍCH GVHD: TS Nguyễn Trí Nhân NỘI DUNG LY TÂM LỌC – SIÊU LỌC – LỌC TIẾP TUYẾN THẨM TÍCH SALT-IN/SALT-OUT LY TÂM ❖ Ly tâm trình sử dụng lực li tâm để tách hạt (phân tử) khỏi dung dịch theo kích thước, theo tỷ trọng dung dịch dựa vào tốc độ quay dung dịch thêm vào trình ly tâm để phân tách thành lớp khác ❖ Ly tâm sử dụng để tách hạt đại phân tử: + Tế bào + Các thành phần tế bào + Protein + Các axit nucleic… PHÂN LOẠI LY TÂM PHÂN ĐOẠN (Differential centrifuge) LY TÂM LY TÂM THEO GRADIENT tỷ trọng (Density Gradient centrifuge) - Ultracentrifuge (Siêu li tâm) - Continuous centrifuge (Ly tâm liên tục) Isopycnic centrifuge (Li tâm đẳng tị trọng) Rate zone Centrifuge (Li tâm theo kích thước) LY TÂM PHÂN ĐOẠN ❖ Là quy trình phổ biến trong hóa sinh và sinh học tế bào ❖ Được sử dụng để tách các bào quan và phần tử tế bào khác VÍ DỤ VỀ LY TÂM PHÂN ĐOẠN LY TÂM THEO GRADIENT TỶ TRỌNG ❑ LY TÂM ĐẲNG TỶ TRỌNG ❖ Ly tâm đẳng tỷ trọng phân tách phân tử hỗn hợp dựa tỷ trọng chúng ❖ Ly tâm gradient tỷ trọng CsCl: trình li tâm, dung dịch CsCl tự động hình thành gradient tỷ trọng ❖ Dưới tác động lực li tâm, nucleic acid di chuyển ống đến vị trí có tỉ trọng với tỉ trọng ngừng lại hình thành lớp cố định ống Lớp thu nhận lại sau li tâm Hình: Dịch ni cấy tế bào đồng với dung dịch CsCl đến tỷ trọng cuối khoảng 1,7g/cm3 ly tâm tốc độ 40.000 vòng/phút, với lực ly tâm tương đối khoảng 200.000 g LY TÂM DỰA TRÊN TỶ TRỌNG SIÊU LY TÂM ❖ Phương pháp tối ưu hóa để quay tốc độ cao khoảng 75.000 rpm phút hơn, lực ly tâm khoảng 500.000 lần LY TÂM LIÊN TỤC - Có khả ly tâm lượng lớn vật liệu với lực ly tâm cao cách liên tục Thường sử dụng ly tâm với lượng lớn, mẫu có tỷ lệ rắn/lỏng thấp (5-15%) Ưu điểm: làm lắng chất rắn mà tạo điều kiện cho dòng chất lỏng chạy qua rotor Giảm thời gian công sức thực ly tâm 10 SIÊU LỌC (UF) Màng siêu lọc xác định giới hạn trọng lượng phân tử (MWCO) Để phân tách siêu lọc, phân tử phải khác kích thước có trọng lượng phân tử từ kDa đến 1000 kDa 17 LỌC TIẾP TUYẾN (TFF) Lọc tuyếp tuyến (Tangential Flow Filtration TFF) Trong q trình lọc dịch dịng chảy song song với màng Ưu điểm công nghệ hạn chế tạo thành lớp cặn tích tụ bám vào bề mặt màng gây tượng tắc màng công nghệ lọc thông thường 18 LỌC TIẾP TUYẾN (TFF) Quy trình lọc tiếp tuyến 19 LỌC TIẾP TUYẾN (TFF) Tinh chế phức hợp protein Hb-Hp cách dùng TFF nghiên cứu Ivan S Pires Andre F Palmer năm 2021 20 ...NỘI DUNG LY TÂM LỌC – SIÊU LỌC – LỌC TIẾP TUYẾN THẨM TÍCH SALT -IN/ SALT- OUT LY TÂM ❖ Ly tâm trình sử dụng lực li tâm để tách hạt (phân tử) khỏi dung dịch theo... ly tâm tốc độ 40.000 vòng/phút, với lực ly tâm tương đối khoảng 200.000 g LY TÂM DỰA TRÊN TỶ TRỌNG SIÊU LY TÂM ❖ Phương pháp tối ưu hóa để quay tốc độ cao khoảng 75.000 rpm phút hơn, lực ly tâm. .. (Li tâm theo kích thước) LY TÂM PHÂN ĐOẠN ❖ Là quy trình phổ biến trong hóa sinh và sinh học tế bào ❖ Được sử dụng để tách các bào quan và phần tử tế bào khác VÍ DỤ VỀ LY TÂM PHÂN ĐOẠN LY TÂM