Influenceof plant growth regulators on the rapid propagation buds of dendrobium officinale kimura et migo

Untitled TAÏP CHÍ PHAÙT TRIEÅN KH&CN, TAÄP 20, SOÁ T2 2017 Trang 29 Ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên sự nhân nhanh chồi in vitro lan Thạch hộc thiết bì (Dendrobium officinale Kimu[.]

TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T2- 2017 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên nhân nhanh chồi in vitro lan Thạch hộc thiết bì (Dendrobium officinale Kimura et Migo)   Lê Thị Diễm Võ Thị Bạch Mai Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM (Bài nhận ngày 03 tháng 08 năm 2016, nhận đăng ngày 20 tháng June năm 2017) TĨM TẮT Các chồi sử dụng để ni cấy cụm chồi Lan Dendrobium officinale Kimura et Migo cho mục đích nâng cao hệ số nhân giống Sự hình (Thạch hộc thiết bì) biết đến từ lâu thành cụm chồi tốt môi trường nuôi cấy giống lan quý, sử dụng làm thuốc thực phẩm MS + BA 2,0 mg/L + NAA (Naphthalene acetic chức thương mại hóa rộng rãi acid) 0,4 mg/L; MS + kinetin 1,5 mg/L + NAA giới Việc nhân giống đoạn thân 0,3 mg/L; MS + TDZ (Thidiazuron) 2,0 mg/L + mang mầm cho hiệu nhân giống cao, phẩm NAA 0,4 mg/L; MS + adenin 1,5 mg/L + NAA 0,3 chất giống tốt đồng Có thể nhân mg/L Tuy nhiên, môi trường bổ sung kinetin giống với số lượng lớn khoảng thời TDZ cần phải thực bước cấy gian ngắn Kết nghiên cứu cho thấy đoạn chuyền để kéo dài chồi sau 45 ngày nuôi cấy thân mang mầm ngủ nuôi cấy môi trường Môi trường tốt cho giai đoạn tạo rễ MS + MS (Murashige Skoog) + 25 g sucrose + 10 % NAA 0,5 mg/L nước dừa + 0,5 mg/L BA (N6 benzyl amino purin) + g/L agar môi trường cho tỉ lệ tạo chồi cao Từ khóa: Dendrobium officinale Kimura et Migo, Thạch hộc Thiết bì, nhân giống, cụm chồi MỞ ĐẦU Thạch hộc thiết bì cịn gọi Thạch hộc tía (Dendrobium officinale) loài lan rừng thuộc chi Dendrobium, vừa làm cảnh vừa làm thuốc quý hiếm, đưa vào công ước quốc tế động thực vật hoang dã có nguy tuyệt chủng Thạch hộc tía có tên khoa học Dendrobium officinale Kimura et Migo, thuộc chi Thạch hộc, họ Lan (Orchidaceae), phân bố tự nhiên chủ yếu vùng rừng có độ cao 1.000–3.400 m so với mặt biển Trong chi Thạch hộc có nhiều lồi dùng để làm thuốc q Ở Trung Quốc, chi Thạch hộc có 14 lồi 12 lồi phụ, có 11 lồi làm thuốc quý Thạch hộc tía loại làm thuốc tốt [1] Về mặt y học, Thạch hộc tía có nhiều tác dụng chống ung thư, chống lão hóa, tăng sức đề kháng thể, chữa bệnh tiểu đường, tăng huyết áp [2] Về mặt dinh dưỡng, Thạch hộc tía có giá trị độc đáo công bảo vệ sức khỏe, sản phẩm bổ dưỡng từ lâu đời sử dụng làm thực phẩm Thạch hộc tía giàu polysaccharide, alkaloid, amino acid nhiều chất khoáng kalium, calcium, magnesium, đồng, titan nhiều nguyên tố vi lượng Ngoài ra, Thạch hộc thiết bì cịn có hợp chất đặc thù phenanthryn, bibenzyl, ketone, ester chất nhầy, hợp chất amidon [1] Do nhu cầu ngày tăng thị trường cho mục đích làm dược liệu phục vụ cho Trang 29 Science & Technology Development, Vol 20, No.T2-2017 người, việc khai thác tự nhiên thời gian dài làm cạn kiệt nguồn nguyên liệu quí giá [3] Hơn nữa, hầu hết phận lan Thạch hộc tía sử dụng làm dược liệu nên sau đợt thu hoạch cần lượng lớn giống để trồng lại Với phương pháp nhân giống vơ tính ngồi tự nhiên phương pháp nhân giống truyền thống có hệ số nhân giống thấp, giống không đồng đều, ảnh hưởng lớn đến suất chất lượng sản phẩm Vì việc chọn lọc tạo nguồn giống in vitro để đáp ứng nhu cầu thị trường việc làm cần thiết Với mục tiêu tạo nguồn giống đạt chất lượng cao, đồng đều, số lượng lớn, đề xuất thực nghiên cứu đề tài VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Vật liệu Cây lan Thạch hộc tía (Dendrobium officinale Kimura Et Migo) trồng quận Hóc cm cm Mơn, Tp Hồ Chí Minh sử dụng làm vật liệu nghiên cứu Khử trùng mẫu vật Mẫu vật in vivo rửa vịi nước chảy sau lắc nhẹ với xà phòng, rửa lại nhiều lần với nước cất vô trùng Trong tủ cấy vô trùng lắc nhẹ mẫu vật với cồn 70 % khoảng phút Loại bỏ bao kèm bên phần phụ bị tổn thương, rửa nước cất vô trùng nhiều lần, xử lý mẫu vật dung dịch Javel thương phẩm (NaOCl %) giọt Tween 20 lắc 10 phút, sau lắc với dung dịch HgCl2 0,1 % phút, rửa nhiều lần nước cất vô trùng Mẫu vật sau khử trùng, cắt thành đoạn có kích thước cịn khoảng 0,8–1 cm với khúc cắt có mang mầm ngủ Sau đó, ni cấy mơi trường thích hợp cho nảy chồi Các chồi sử dụng làm nguồn vật liệu cho thí nghiệm (Hình 1) cm 0,5 cm Hình Sự hình thành chồi in vitro tạo nguồn vật liệu ban đầu Nuôi cấy in vitro mầm ngủ thân lan Thạch hộc tía Mơi trường ni cấy thích hợp cho nảy chồi khúc cắt thân mang mầm ngủ môi trường: MS bổ sung 1,0 mg/L BA 10 % nước dừa (Hình 1) Ni cấy in vitro chồi lan Thạch hộc tía Thí nghiệm 1: Mơi trường MS có bổ sung BA (mg/L) kết hợp với NAA (mg/L) nồng độ khác nhau, đồng thời bổ sung 0,3 g/L than hoạt tính 10 % nước dừa Trang 30 Thí nghiệm 2: Mơi trường MS có bổ sung kinetin (mg/L) kết hợp với NAA (mg/L) nồng độ khác nhau, đồng thời bổ sung 0,3 g/L than hoạt tính 10 % nước dừa Thí nghiệm 3: Mơi trường MS có bổ sung TDZ (mg/L) kết hợp với NAA (mg/L) nồng độ khác nhau, đồng thời bổ sung 0,3 g/L than hoạt tính 10 % nước dừa Thí nghiệm 4: Mơi trường MS có bổ sung adenin (mg/L) kết hợp với NAA (mg/L) nồng độ khác nhau, đồng thời bổ sung 0,3 g/L than hoạt tính 10 % nước dừa TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T2- 2017 Thí nghiệm 5: Sự phát triển rễ lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung NAA (mg/L) nồng độ khác Các mơ cấy đặt ngồi sáng phịng ni có nhiệt độ 27 ± oC, độ ẩm 55 ± 10 %, ánh sáng 2000 ± 20 lux Tỉ lệ mẫu phát triển, số chồi xuất chồi bên ghi nhận sau tuần ni cấy Quan sát hình thái giải phẫu Khúc cắt thân mang mầm ngủ sau tuần tuần nuôi cấy môi trường MS mơi trường có bổ sung chất điều hịa tăng trưởng cắt theo chiều dọc theo chiều ngang, nhuộm hai màu đỏ carmin - xanh iod, quan sát kính hiển vi chụp ảnh Xử lý số liệu Các số liệu ghi nhận xử lý thống kê phần mềm StatGraphics Plus 3.0 Sự sai biệt có ý nghĩa mức p = 0,05 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN Khử trùng mẫu vật tạo nguồn vật liệu ban đầu Mẫu vật in vivo dùng để nuôi cấy khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% dung dịch Javel thương phẩm (NaOCl 5%) dung dịch HgCl2 0,1% kết hợp với dung dịch Javel thương phẩm (NaOCl 5%) giọt Tween 20 thời gian khử trùng khác Kết sau tuần nuôi cấy, nồng độ HgCl2 0,1%, thời gian khử trùng 13 phút cho tỉ lệ mẫu sống không bị nhiễm cao so với thời gian lại Ảnh hưởng của chất điều hòa tăng trưởng thực vật lên nuôi cấy in vitro chồi lan Thạch hộc tía Thí nghiệm 1: Sự ni cấy in vitro chồi lan Thạch hộc tía mơi trường MS có bổ sung BA (mg/L) kết hợp với NAA (mg/L) nồng độ khác Sau 10 ngày nuôi cấy, khúc cắt chồi in vitro có cảm ứng hình thành chồi môi trường, sau 30 ngày có hình thành cụm chồi (Bảng 1) Bảng Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung BA; BA kết hợp NAA than hoạt tính 0,2 g/L Nghiệm thức Tỉ lệ chồi sống tái sinh (%) Số chồi trung bình MS 100 10,55de MS + BA 1,0 mg/L 100 17,33cd MS + BA 1,5 mg/L 100 10,06de MS + BA 2,0 mg/L 100 7,17e MS + BA 3,0 mg/L 100 4,44e MS + BA 0,5 mg/L + NAA 0,1 mg/L 100 19,66c MS + BA 1,0 mg/L + NAA 0,2 mg/L 100 21,44bc MS + BA 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L 100 28,11b MS + BA 2,0 mg/L + NAA 0,4 mg/L 100 38,11a MS + BA 3,0 mg/L + NAA 0,5 mg/L 100 8,44e Trên mơi trường có bổ sung BA, hình thành chồi tốt môi trường MS + BA 1,0 mg/L, chồi phát triển đồng có màu xanh đậm, chồi to khỏe Tuy nhiên, BA tăng cao thì số chồi cụm giảm, chồi chậm phát triển, chồi mập ngắn, dày có màu xanh Trang 31 Science & Technology Development, Vol 20, No.T2-2017 đậm (Hình 2) Cytokinin thúc đẩy trưởng thành diệp lạp nhân tố điều khiển q trình tái sinh mạnh [4] Cytokinin cần cho giai đoạn cảm ứng tạo chồi kìm hãm kéo dài chồi mơi trường có bổ sung BA riêng lẻ hầu hết nghiệm thức (Bảng 1, Hình 2A) Mơi trường MS có bổ sung BA mg/L + NAA 0,4 mg/L mẫu cấy phát triển tốt cho tỉ lệ tái sinh chồi cao sau 45 ngày ni cấy với số chồi trung bình 38,11 chồi (Bảng 1, Hình 2B) Các nghiệm thức cịn lại có hệ số nhân chồi thấp nhiên cao so với nghiệm thức đối chứng Khi tăng dần nồng độ BA NAA hình thành chồi ban đầu tăng lên, chồi tăng trưởng tốt đồng Sự phối hợp auxin cytokinin thúc đẩy biệt hóa chồi tốt sử dụng đơn lẻ báo cáo nghiên cứu Dake Zhao cộng Dendrobium wangliangii [9] Kết nghiên cứu cho thấy mơi trường MS có bổ sung kết hợp BA NAA 100 % mẫu hình thành cụm chồi có số chồi trung bình cao A 0,5 cm B 0,5 cm Hình Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía A: MS + BA 1,0 mg/L; B: MS + BA 2,0 mg/L + NAA 0,4 mg/L Thí nghiệm 2: Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung kinetin (mg/L) kết hợp với NAA (mg/L) nồng độ khác Bảng Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung kết hợp kinetin, NAA than hoạt tính 0,2 g/L Nghiệm thức Tỉ lệ chồi sống tái sinh (%) Số chồi trung bình MS 100 6,11d MS + kinetin 0,5 mg/L MS + kinetin 1,0 mg/L 100 100 4,77d 15,33c MS + kinetin 1,5 mg/L 100 5,11d MS + kinetin 2,0 mg/L 100 4,66d MS + kinetin 0,5 mg/L + NAA 0,1 mg/L 100 17,77c MS + kinetin 1,0 mg/L + NAA 0,2 mg/L 100 23,77b MS + kinetin 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L MS + kinetin 2,0 mg/L + NAA 0,4 mg/L 100 100 42,77a 25,77b MS + kinetin 3,0 mg/L + NAA 0,5 mg/L 100 16,66c Trang 32 TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T2- 2017 Kinetin cảm ứng trực tiếp hình thành chồi từ lát mỏng tế bào [5] Trong thí nghiệm kinetin thúc đẩy hình thành cụm chồi từ chồi in vitro sau 20 ngày ni cấy Trên mơi trường có kinetin riêng lẻ tỉ lệ tạo chồi tốt mơi trường kinetin 1,0 mg/L với số chồi trung bình 15,33 chồi (Bảng 2, Hình 3A) Tuy nhiên, nồng độ kinetin > 1,0 mg/L số chồi cụm bắt đầu giảm số chồi trung bình thấp so với đối chứng, chồi mảnh, có tượng thủy tinh thể có hình thành PLB (Bảng 3) Cytokinin nồng độ thấp kích thích phát triển chồi nách, nồng độ cao cảm ứng hình thành chồi bất định chồi khó rễ Kết khảo sát cho thấy ảnh hưởng kinetin NAA, sau 45 ngày nuôi cấy, chồi phát triển tốt Đặc biệt, mơi trường có bổ sung kinetin 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L kích thích phát triển chồi (Bảng 2, Hình 3B) Cytokinin làm thuận lợi cho trình phân nhánh chồi thân thảo Trong phát sinh quan, phối hợp auxin 0,5 cm A cytokinin với tỉ lệ hợp lý cho hiệu tạo chồi tạo rễ [6] Bổ sung kết hợp kinetin NAA vào môi trường nuôi cấy cho hiệu nhân chồi rõ ràng Sự phối hợp kinetin NAA tất nồng độ khảo sát thúc đẩy gia tăng hệ số nhân chồi cao so với nghiệm thức đối chứng (Bảng 2, Hình 3B) Nghiên cứu Peng Zhao cộng sử dụng kết hợp kinetin NAA cho mục đích tái sinh chồi trực tiếp từ lát mỏng tế bào đối tượng Dendrobium candidum Wall Ex Lindl [7] Nghiên cứu cho thấy BA thúc đẩy hình thành chồi trực tiếp từ lát mỏng tế bào tốt kinetin Tuy nhiên, hình thành chồi bắt đầu giảm gia tăng dần nồng độ kinetin NAA (Bảng 2) Nghiên cứu Paromik Bhattacharyya cộng năm 2015 cho thấy gia tăng kinetin 3,0 mg/L có giảm số chồi mảnh cấy lan Dendrobium thyrsiflorum [8] Bên cạnh hình thành chồi, kết nghiên cứu cho thấy gia tăng nồng độ kinetin NAA chồi bắt đầu có tượng thủy tinh thể 0,5 cm B Hình Sự phát triển chồi lan Thạch hộc tía A: MS + kinetin 1,0 mg/L; B: MS + TDZ 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L Trang 33 Science & Technology Development, Vol 20, No.T2-2017 Thí nghiệm 3: Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung TDZ (mg/L) kết hợp với NAA (mg/L) nồng độ khác TDZ (thidiazuron) xem cytokinin tổng hợp có hoạt tính mạnh ứng dụng phổ biến cho nhiều đối tượng nghiên cứu nhiều trình sinh lý khác thực vật, làm thuận lợi cho trình phân nhánh chồi thân thảo [6] Kết thí nghiệm cho thấy sử dụng loại TDZ khác loại nồng độ xử lý dẫn đến kết thúc đẩy ức chế hình thành chồi khác TDZ xử lý riêng lẻ cho hiệu kích thích tạo chồi tốt nồng độ 1,0 mg/L, trung bình 39,21 chồi Tuy nhiên, nhiều chồi có kích thước ngắn có hình thành PLB (Bảng 3, Hình 4A) Bảng Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung kết hợp TDZ (mg/L), NAA (mg/L) than hoạt tính 0,2 g/L Nghiệm thức Tỉ lệ chồi sống tái sinh (%) Số chồi trung bình MS 100 6,46e MS + TDZ 0,5 mg/L MS + TDZ 1,0 mg/L 100 100 20,77cd 39,21b MS + TDZ 1,5 mg/L 100 19,88cd MS + TDZ 2,0 mg/L MS + TDZ 0,5 mg/L + NAA 0,1 mg/L MS + TDZ 1,0 mg/L + NAA 0,2 mg/L 100 100 100 8,35e 18,10d 24,88bcd MS + TDZ 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L 100 26,10bc MS + TDZ 2,0 mg/L + NAA 0,4 mg/L MS + TDZ 3,0 mg/L + NAA 0,5 mg/L 90 75 51,11a 18,55d TDZ có vai trị cảm ứng hình thành chồi bất định, tùy vào nồng độ sử dụng mà hiệu cảm ứng khác nhau) [8] Trong thí nghiệm chúng tơi khảo sát vai trị TDZ phối hợp NAA q trình tạo chồi TDZ kích thích tạo chồi Phalaenopsis delenatii hiệu BA zeatin, với 75 % tạo cụm chồi môi trường MS có bổ sung 1,5 mg/L TDZ sau 30 ngày [5] Sự kết hợp NAA TDZ thúc đẩy hình thành chồi làm tăng hệ số nhân chồi Kết thí nghiệm cho thấy TDZ với NAA nồng độ thích hợp thúc đẩy cho hình thành chồi tất nghiệm thức xử lý phối hợp Môi trường MS + TDZ 2,0 mg/L + NAA 0,4 mg/L cho tỉ lệ tạo chồi cao trung bình 51,11 chồi (Bảng 3, Hình 4B) Trang 34 Nghiên cứu Dake Zhao cộng năm 2013, Dendrobium wangliangii cho thấy TDZ kích thích tạo chồi hiệu BA [9] Tuy nhiên, TDZ cytokinin mạnh, có hiệu kích thích tạo chồi tối ưu nồng độ định, sử dụng nồng độ cao gây hiệu ứng ức chế Kết thí nghiệm chúng tơi thể rõ điều Khi tăng dần nồng độ TDZ 3,0 mg/L tỉ lệ hình thành chồi giảm đáng kể số chồi hình thành khơng có khác biệt so với nghiệm thức đối chứng điều đồng nghĩa với việc TDZ khơng cịn hiệu gây kích thích tạo chồi nồng độ cao (Bảng 3) Ngồi chúng tơi ghi nhận thêm tăng nồng độ TDZ NAA, chồi ngắn có hình thành PLB Ngồi tăng dần nồng độ TDZ NAA làm giảm tỉ lệ sống mẫu cấy (Bảng 3) TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T2- 2017 0,5 cm A 0,5 cm B Hình Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía A: MS + TDZ 1,0 mg/L; B: MS + TDZ 2,0 mg/L + NAA 0,4 mg/L Thí nghiệm 4: Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung adenin (mg/L) kết hợp với NAA (mg/L) nồng độ khác bình 14,88 chồi, số chồi cụm cao so với đối chứng cao nghiệm thức lại Chồi khỏe, tăng trưởng nhanh có màu xanh đậm (Bảng 4, Hình 5A) Tuy nhiên, nồng độ adenin lớn 1,0 mg/L có ức chế hình thành chồi, chồi ngắn, màu xanh đậm có hình thành PLB Phần lớn cytokinin cytokinin tổng hợp dẫn xuất adenin [6] Trong thí nghiệm này, xử lý adenin nồng độ 1,0 mg/L thì thúc đẩy hình thành chồi với số chồi trung Bảng Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung kết hợp adenin (mg/L), NAA (mg/L) Nghiệm thức Tỉ lệ chồi sống tái sinh (%) Số chồi trung bình MS MS + adenin 0,5 mg/L MS + adenin 1,0 mg/L MS + adenin 1,5 mg/L MS + adenin 2,0 mg/L 100 100 100 100 100 5,66ef 13,55bcd 14,88bc 10,88cde 5,66ef MS + adenin 0,5 mg/L + NAA 0,1 mg/L 100 8,66def MS + adenin 1,0 mg/L + NAA 0,2 mg/L 100 16,55b MS + adenin 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L MS + adenin 2,0 mg/L + NAA 0,4 mg/L MS + adenin 3,0 mg/L + NAA 0,5 mg/L 100 100 100 33,33a 16,77b 4,77f Khi khảo sát vai trị adenin phối hợp NAA q trình tạo chồi, kết cho thấy adenin kết hợp với NAA nồng độ thích hợp thúc đẩy cho hình thành chồi, cụ thể mơi trường MS + adenin 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L cho tỉ lệ tạo chồi cao trung bình 33,33 chồi (Bảng 4, Hình 5B) Khi tăng dần nồng độ adenin NAA tỉ lệ hình thành chồi giảm đáng kể số chồi trung bình khơng có khác biệt so với nghiệm thức đối chứng Điều cho thấy adenin kích thích hình thành chồi khoảng nồng độ thích hợp cần có phối hợp với NAA Hơn nữa, ghi nhận giai đoạn đầu cảm ứng tạo chồi, adenin kích thích chồi hình thành tăng trưởng nhanh, chồi phát triển tốt có màu xanh đậm tăng nồng độ adenin tăng cao có giảm hình thành chồi khơng có hình thành PLB Trang 35 Science & Technology Development, Vol 20, No.T2-2017 A 0,3 cm B 0,3 cm Hình Sự phát triển cụm chồi lan Thạch hộc tía C: MS + adenin 1,0 mg/L ; D: MS + adenin 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L Quan sát hình thái giải phẫu chồi 500 µm 500 µm 500 µm Hình Khúc cắt thân mang mầm ngủ nuôi môi trường 0,5 mg/L BA A, B, C: chồi cảm ứng sau 5, 15, 20 ngày nuôi cấy mơi trường nhân chồi Thí nghiệm 5: Sự phát triển rễ lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung NAA (mg/L) nồng độ khác Auxin hoạt hóa phân bào, sinh trưởng kéo dài, cần cho tạo mạch dẫn rễ [4] Việc sử dụng auxin cảm ứng tạo rễ nghiên cứu ứng dụng phổ biến nhiều đối tượng nghiên cứu Tuy nhiên loại nồng độ auxin tùy thuộc vào đối tượng mà sử dụng phù hợp Trong thí nghiệm này, sử dụng NAA cho giai đoạn rễ Kết cho thấy gia tăng dần nồng độ NAA thì 100% cảm ứng tạo rễ Số rễ cao môi trường MS + NAA 0,3; 0,5; 0,7 1,0 mg/L khơng có khác biệt ý nghĩa thống kê nghiệm thức này, có khác biệt so với nghiệm thức đối chứng (Bảng 5, Hình 6) Để giảm chi phí nhân giống nên chọn NAA 0,5 mg/L Bảng Sự phát triển rễ lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có NAA (mg/L) nồng độ khác Nghiệm thức MS Tỉ lệ chồi tạo rễ (%) 100 Số rễ trung bình /chồi 1,7b MS + NAA 0,3 mg/L 100 3,9a MS + NAA 0,5 mg/L 100 4,9a MS + NAA 0,7 mg/L 100 4,8a MS + NAA 1,0 mg/L 100 4,6a Trang 36 TAÏP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 20, SỐ T2- 2017 cm A 1,5 cm B Hình Sự phát triển rễ lan Thạch hộc tía ni cấy mơi trường MS có bổ sung 0,5 mg/L NAA than hoạt tính 0,3 g/L KẾT LUẬN Dung dịch khử trùng HgCl2 0,1 % kết hợp với dung dịch javel thương phẩm (NaOCl %) cho hiệu khử trùng tốt với 40 % mẫu sống sót Mơi trường tốt cho mầm ngủ phát triển từ đốt thân MS bổ sung 1,0 mg/L BA 10 % nước dừa Môi trường MS bổ sung BA 2,0 mg/L+ NAA 0,4 mg/L, thích hợp cho tái sinh chồi từ khúc cắt chồi in vitro với 100 % mẫu phát sinh chồi số chồi tái sinh mẫu 38,11 Môi trường MS bổ sung kinetin 1,5 mg/L + NAA 0,3 mg/L thích hợp cho phát sinh chồi từ khúc cắt chồi in vitro với khả tái sinh chồi 100 %, số chồi tái sinh mẫu 42,77 Chồi khỏe phát triển tốt thích hợp cho giai đoạn rễ Môi trường MS bổ sung 1,5 mg/L adenin + NAA 0,3 mg/L thích hợp cho phát sinh chồi từ khúc cắt chồi in vitro với tái sinh chồi tốt với 100 % số chồi tái sinh mẫu 33,33 Môi trường MS bổ sung TDZ 2,0 mg/L + NAA 0,4 mg/L thích hợp cho tái sinh chồi với số chồi trung bình 51,11 Trên mơi trường tỉ lệ tái sinh chồi đạt 90 %, số chồi hình thành cụm cao chồi ngắn có màu xanh nhạt, phát triển bất thường Mơi trường MS bổ sung NAA 0,5 mg/L tạo rễ tốt từ chồi lan Thạch hộc tía Influence of plant growth regulators on the rapid propagation buds of Dendrobium officinale Kimura et Migo  Le Thi Diem  Vo Thi Bach Mai University of Science, VNU-HCM ABSTRACT Dendrobium officinale Kimura et Migo has been known for a long time as a precious orchid, which is used for medicine and functional foods that are widely commercialized in the world The nodal explants could be obtained in high efficiency, good quality and uniform seedlings on multiplication vegetative in vitro They can be propagated in large quantities in a short time The studied results showed that the nodal explants grew on MS medium + 10 % coconut milk + 25 g sucrose + 0.5 mg/L BA + g agar/ liter create high buds This buds were used to Trang 37 Science & Technology Development, Vol 20, No.T2-2017 create bud clusters with the aim of improving in MS + adenine 1.5 mg/L + NAA 0.3 mg/L vitro vegetative The best bud culture medium for However, the addition of kinetin or TDZ to the the formation of clusters was MS + BA 2.0 mg/L culture medium needed a steps to extend the bud + NAA 0.4 mg/L; MS + kinetin 1.5 mg/L + NAA subculture after 45 days in culture The best 0.3 mg/L; MS + TDZ 2.0 mg/L + NAA 0.4 mg/L; medium for the rooting is MS + NAA 0.5 mg/L Key words: Dendrobium officinale Kimura et Migo, multiplication, in vitro, buds TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] W Wei, F Lei, B.W Rong, M.D Lung, L.C Hang, S Ping, H.Q Bin, Structure characterization and immunomodulating effects of polysaccharides isolated from Dendrobium officinale Journal of Agricultural and Food Chemistry, 9–45 (2016) [2] N.T Sơn cs, Nhân giống in vitro lan Dendrobium officinale Kimura et Migo (Thạch hộc thiết bì) Tạp chí Khoa học Phát triển, 8, 12, 1247–1282 (2014) [3] Q Xin, W Caixia, O Tong, T Min, In vitro flowering and fruiting in culture of Dendrobium officinale Kimura et Migo (Orchidaceae) Pak J Bot., 46, 5, 1877–1882 (2014) [4] B.T Việt, Sinh lý thực vật đại cương, Phần II: Phát triển, NXB Đại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh (2000) [5] D.T Nhựt cs, Nghiên cứu khả nhân nhanh protocorm like body hoa địa lan (Cymbidium sp.) hệ thống bioreactor tự tạo, Kỷ yếu hội nghị khoa học Trang 38 [6] [7] [8] [9] Công nghệ sinh học thực vật công tác nhân giống chọn tạo giống hoa, NXB Nông nghiệp (2007) V.T.B Mai, Sự phát triển chồi rễ, Nxb Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh (2004) P Zhao, W Wang, F.S Feng, F Wu, Z.Q Yang, W.J Wang, Highfrequency shoot regeneration through transverse thin cell layer culture in Dendrobium candidum Wall ex Lindl, Plant Cell Tiss Organ Cult., 90, 131– 139 (2007) B Bakul, S.M.S Islam, Effects of plant growth regulators on multiple shoot induction in Vanda tessellata (Roxb.) Hook Ex G.Don an endangered medicinal orchid Inernational Journal of Science and Nature, 5, 4, 707–712 (2014) Z Dake, H Guangwan, C Zhiying, S Yana, Z Li, T Anjun, L Chunlin, Micropropagation and in vitro flowering of Dendrobium wangliangii: A critically endangered medicinal orchid Journal of Medicinal Plants Research, (28): 20982110 (2013)  ... Influence of plant growth regulators on the rapid propagation buds of Dendrobium officinale Kimura et Migo  Le Thi Diem  Vo Thi Bach Mai University of Science, VNU-HCM ABSTRACT Dendrobium officinale. .. vitro vegetative The best bud culture medium for However, the addition of kinetin or TDZ to the the formation of clusters was MS + BA 2.0 mg/L culture medium needed a steps to extend the bud + NAA... polysaccharides isolated from Dendrobium officinale Journal of Agricultural and Food Chemistry, 9–45 (2016) [2] N.T Sơn cs, Nhân giống in vitro lan Dendrobium officinale Kimura et Migo (Thạch hộc thiết