Luận án nghiên cứu mức độ nhiễm aflatoxin và đề xuất một số giải pháp công nghệ bảo quản lạc sau thu hoạch ở các tỉnh miền trung và bắc việt nam

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án cơng trình nghiên cứu bởi bản thân tơi dưới sự hướng dẫn của tập thể hướng dẫn Các số liệu, kết quả nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm Thay mặt tập thể giáo viên hướng dẫn Tác giả luận án PGS TS Phạm Xuân Đà Lê Thị Phương Thảo i LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Bộ Giáo dục Đào tạo, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội, Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình học tập hồn thành luận án Tơi bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến giáo viên hướng dẫn khoa học: GS TS Hà Duyên Tư - nguyên phó hiệu trưởng trường Đại học Bách Khoa Hà Nội PGS TS Phạm Xuân Đà - Cục trưởng Cục công tác phía Nam; Các thầy cơ: PGS TS Lê Thanh Mai, PGS TS Nguyễn Thị Xuân Sâm, PGS TS Nguyễn Thị Minh Tú, TS Vũ Hờng Sơn tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, động viên nhiều trình nghiên cứu thực luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy/Cô Bộ môn Quản lý chất lượng, thầy cô Viện Công nghệ Sinh học - Thực phẩm đóng góp ý kiến hướng dẫn tôi, cán phụ trách đào tạo - Viện đào tạo sau đại học - Trường Đại học Bách khoa Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ tơi hồn thành thủ tục cần thiết q trình làm nghiên cứu sinh Tơi trân trọng cảm ơn PGS.TS Lê Thị Hồng Hảo đồng nghiệp công tác Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia giúp đỡ tơi q trình thu thập liệu, cung cấp tài liệu cần thiết cho luận án, cũng có ý kiến đóng góp q báu q trình nghiên cứu Tơi cũng xin bày tỏ lịng biết ơn đến PGS TS Phạm Anh Tuấn - Viện trưởng Viện Cơ điện Nông nghiệp Công nghệ sau thu hoạch tận tình giúp đỡ tơi chun mơn q trình nghiên cứu Tơi biết ơn người thân gia đình quan tâm tạo điều kiện tốt cho học tập nghiên cứu Q trình thực luận án cịn nhiều thiếu sót, tơi mong nhận góp ý Q Thầy/Cơ để thân khắc phục hạn chế hồn chỉnh luận án, đóng góp tích cực cho ngành Trân trọng cảm ơn! Tác giả luận án ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ix DANH MỤC CÁC BẢNG xii DANH MỤC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ xiv MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn 4.1 Ý nghĩa khoa học 4.2 Ý nghĩa thực tiễn Những đóng góp mới của luận án Cấu trúc của luận án CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Cây lạc 1.1.1 Giới thiệu chung lạc 1.1.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ lạc giới Việt Nam .7 1.1.3 Quy định mức nhiễm nấm mốc aflatoxin lạc 11 1.2 Aflatoxin 12 1.2.1 Tính chất hóa lý của aflatoxin 12 1.2.2 Ảnh hưởng của aflatoxin đối với sức khỏe 13 1.2.3 Các phương pháp lấy mẫu, phương pháp phân tích aflatoxin 15 iii 1.2.4 Tình hình nhiễm aflatoxin lạc 17 1.3 Aspergillus lạc 19 1.3.1 Tình hình nhiễm nấm mốc lạc 19 1.3.2 Aspergillus flavus 21 1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển sinh aflatoxin của A flavus 23 1.4.1 Ảnh hưởng của độ ẩm hoạt độ nước 24 1.4.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ 28 1.4.3 Ảnh hưởng của nấm mốc đến chất lượng lạc trình bảo quản 29 1.4.4 Ảnh hưởng của tinh dầu tới sự phát triển sinh aflatoxin của Aspergillus flavus 30 1.4.5 Ảnh hưởng của mơi trường khơng khí đến chất lượng lạc trình bảo quản 33 1.5 Các biện pháp kiểm soát aflatoxin nhiễm lạc nông sản khô sau thu hoạch giới Việt Nam 35 1.5.1 Kiểm soát chất lượng sau thu hoạch trình bảo quản 35 1.5.2 Đóng gói điều biến khí qủn 38 1.5.3 Các loại bao bì dùng bảo quản lạc 40 1.5.4 Bảo quản hoặc giảm nhiễm aflatoxin phương pháp hóa học 41 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu 43 2.1.1 Nguyên vật liệu 43 2.1.2 Hóa chất sử dụng 43 2.1.3 Thiết bị sử dụng 43 2.1.4 Thời gian địa điểm nghiên cứu 44 2.2 Phương pháp lấy mẫu 45 2.3 Phương pháp phân tích hóa lý 45 2.3.1 Xác định độ ẩm 45 iv 2.3.2 Xác định hàm lượng aflatoxin 47 2.3.3 Đánh giá mặt cảm quan của mẫu lạc thu thập mùa thu năm 2013 50 2.4 Phương pháp phân tích sinh học 51 2.4.1 Xác định tổng số bào tử nấm men - mốc 51 2.4.2 Phân lập nấm mốc sinh độc tố từ lạc 52 2.4.3 Định danh nấm mốc Aspergillus flavus 52 2.4.3 Chuẩn bị dịch bào tử Aspergillus flavus với hàm lượng khác 54 2.5 Đánh giá mức độ nhiễm nấm men-mốc aflatoxin lạc 55 2.5.1 Đánh giá lạc nhân, lạc củ lạc rang húng lìu thu thập Bắc Giang, Thanh Hóa Nghệ An vào mùa hè 55 2.5.2 Đánh giá mức nhiễm AF, nấm mốc lạc củ lạc nhân vào mùa thu 55 2.6 Phương pháp công nghệ 56 2.6.1 Điều chỉnh độ ẩm của lạc thí nghiệm 56 2.6.2 Thiết kế thí nghiệm: Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển sinh aflatoxin lạc của Aspergillus flavus 56 2.6.3 Thiết kế thí nghiệm nghiên cứu giải pháp đề xuất số quy trình nhằm giảm nhiễm aflatoxin lạc 62 2.7 Xử lý số liệu 63 2.8 Sơ đồ nghiên cứu 66 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 67 3.1 Đánh giá mức độ nhiễm nấm men-mốc aflatoxin lạc Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang 67 3.1.1 Đánh giá mức độ nhiễm nấm men-mốc aflatoxin lạc nhân, lạc củ lạc rang húng lìu thu thập vào mùa hè 67 3.1.2 Đánh giá mức độ nhiễm nấm mốc AF lạc địa bàn huyện Lục Nam, tỉnh Bắc Giang vào mùa thu 75 v 3.1.3 Phân lập xác định chủng sinh aflatoxin lạc 79 3.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển sinh AF lạc của Aspergillus flavus BG1 85 3.2.1 Đánh giá sự thay đổi độ ẩm của mẫu lạc loại bao bì khác 85 3.2.2 Ảnh hưởng của độ ẩm đến sự phát triển sinh AF của chủng Aspergillus flavus BG1 lạc 86 3.2.3 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự phát triển sinh AF của Aspergillus flavus BG1 lạc 92 3.2.4 Ảnh hưởng của mức nhiễm A flavus đến sự sinh AF lạc 96 3.2.5 Ảnh hưởng của điều kiện hút chân không đến sự phát triển sinh aflatoxin lạc của A flavus BG1 100 3.2.6 Phân tích mối quan hệ của yếu tố đến sự phát triển sinh aflatoxin lạc của A flavus BG1 102 3.2.7 Nghiên cứu ảnh hưởng của tinh dầu hồi, quế đến khả ức chế sự phát triển của A flavus 108 3.3 Khảo nghiệm đề xuất quy trình bảo quản nhằm tránh nguy nhiễm aflatoxin lạc 117 3.3.1 Khảo nghiệm quy trình bảo quản lạc nhân giải pháp kiểm soát chất lượng trước bảo quản 117 3.3.2 Quy trình bảo quản lạc đóng gói hút chân không 120 3.3.3 Quy trình bảo quản lạc nhân cách sử dụng tinh dầu hồi, quế 123 3.3.4 Đề xuất quy trình bảo quản lạc nhân nhằm giảm nhiễm aflatoxin lạc 127 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 130 DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN ÁN 132 TÀI LIỆU THAM KHẢO 133 vi PHỤ LỤC KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ NHIỄM NẤM MỐC VA ̀ AFLATOXIN TRONG LẠC 1.1 Kết quả phân tích nấm men-mốc aflatoxin lạc nhân thu thập vào mùa hè tỉnh Bắc Giang, Thanh Hóa Nghệ An 1.2 Kết quả phân tích nấm men-mốc aflatoxin của lạc củ thu thập vào mùa hè tỉnh Bắc Giang, Thanh Hóa Nghệ An 1.3 Kết quả phân tích nấm men-mốc aflatoxin của lạc rang húng lìu thu thập tỉnh Bắc Giang, Thanh Hóa Nghệ An 1.4 Tổng hợp tình trạng mẫu, độ ẩm, mức nhiễm nấm mốc AF lạc nhân thu thập vào mùa thu Bắc Giang 1.5 Tổng hợp tình trạng mẫu, độ ẩm, mức nhiễm nấm mốc aflatoxin của lạc củ thu thập vào mùa thu Bắc Giang PHỤ LỤC CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ SINH AF TRÊN LẠC CỦA A FLAVUS BG1 11 2.1 Ảnh hưởng của độ ẩm 11 2.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ 12 2.3 Ảnh hưởng của điều kiện hút chân không 13 2.4 Ảnh hưởng của mức nhiễm A flavus đến khả sinh Aflatoxin lạc 14 2.5 Ảnh hưởng của tinh dầu quế đến khả phát triển của A flavus đĩa thạch 15 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU 18 3.1 Phần mềm xử lý số liệu R 3.4.1 18 3.2 Đánh giá mức độ nhiễm nấm men-mốc Aflatoxin lạc 19 3.2.1 So sánh mức nhiễm nấm men-mốc Aflatoxin lạc nhân tỉnh Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang 19 3.2.2 So sánh mức nhiễm nấm men-mốc Aflatoxin lạc củ tỉnh Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang 20 vii 3.3 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển của A flavus sinh AF lạc 21 3.3.1 Phân tích hời quy tuyến tính ảnh hưởng độ ẩm 21 3.3.2 Phân tích hời quy tuyến tính ảnh hưởng nhiệt độ 22 3.3.3 Phân tích hời quy tuyến tính ảnh hưởng mức nhiễm A flavus 23 3.3.4 Phân tích mơ hình hời quy tuyến tính đa biến 24 PHỤ LỤC MỘT SỐ SẮC ĐỒ PHÂN TÍCH AFLATOXIN 26 4.1 Sắc đồ phân tích AF nghiên cứu ảnh hưởng của độ ẩm 26 4.2 Sắc đồ phân tích AF nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ 27 4.3 Sắc đồ phân tích AF nghiên cứu ảnh hưởng của điều kiện hút chân khơng 27 4.4 Sắc đồ phân tích AF nghiên cứu ảnh hưởng của mức nhiễm A flavus BG1 28 viii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt Chú giải Tiếng Việt Tiếng Anh AF Aflatoxin Aflatoxin ALARA Thấp ở mức có thể đạt as low as reasonably achievable AN Acetonitrin Acetonitrile ADN Acid deoxyribonucleic AIC Tiêu chuẩn thông tin Akaike Akaike Information Criterion AOAC Hiệp hội nhà hóa phân tích Association of Official Analytical Chemists ATCC Bộ sưu tập chủng của Mỹ American Type Culture Collection ATP Adenosine Triphosphate BIC Tiêu chuẩn thông tin Bayesian Bayesian Information Criterion BLAST Công cụ BLAST Basic Local Alignment Search Tool BMA Mơ hình trung bình Bayes Bayesian Model Average BYT Bộ Y tế CE Cặp điện cực Calliper Electronic CFU Đơn vị khuẩn lạc Colony Forming Unit CZA Thạch Czapeck Dox Czapek Dox Agar DG Dichloran Glycerol Dichloran Glycerol ĐHBKHN Đại học Bách khoa Hà Nội ECD Bộ phát bắt điện tử Electron Capture Detector EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid Ethylenediaminetetraacetic acid ELISA Hấp thụ miễn dịch liên kết Enzyme-linked enzyme assay FAO Tổ chức nông lương giới Food and Organization FP Sự phân cực huỳnh quang Fluorescence Polarization GC Sắc ký khí Gas Chromatography HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao High Performance Chromatography ix immunosorbent Agriculture Liquid HSCAS Thuỷ hợp natri canxi nhôm Hydrated sodium silicat aluminosilicate ITS Vùng đệm mã ISO Tổ chức tiêu chuẩn hóa International Organization giới Standardization KEBS Văn phịng tiêu ch̉n Kenya KPH Khơng phát KQĐ Khơng quy định LOD Giới hạn phát Limit of Detection LOQ Giới hạn định lượng Limit of Quantitation MEA Thạch chiết xuất malt Malt Extract Agar MeOH Methanol Methanol MIC Nồng độ ức chế tối thiểu Minimum Concentration MIP In dấu phân tử polymer Molecularly Imprinted Polymer MIR Giữa hồng ngoại Mid-infrared ML Giới hạn tối đa Maximum limit MS Khối phổ Mass spectrometry NAFDAC Cơ quan hành kiểm National Agency for Food and soát thuốc thực phẩm Drug Administration and Control NCBI Trung tâm thông tin công National Center for Biotechnology nghệ sinh học quốc gia Information NIR Hồng ngoại gần Near-infrared OD Mật độ quang Optical density OPP Bao bì màng phức hợp Oriented Polypropylene polypropylene PCR “Phản ứng chuỗi trùng hợp” Polymerase Chain Reaction hay “phản ứng khuếch đại gen” PDA Môi trường thạch khoai tây Potato Dextrose Agar dextrose PE Polyethylene Polyethylene PP Polypropylene Polypropylene PVC Vinylchoride Vinylchoride QCVN Quy chuẩn Việt Nam x calcium Internal Transcribed Spacer for Kenya Bureau of Standards Inhibitory 2.4 Ảnh hưởng mức nhiễm A flavus đến khả sinh Aflatoxin lạc Bảng PL2 Ảnh hưởng mức nhiễm A flavus đến sự sinh AF lạc theo thời gian A flavus Sau tuần Ký hiệu Sau tuần Sau tuần Sau tuần AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 Tổng AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 Tổng AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 Tổng AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 Tổng KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 0,91 KPH KPH KPH 0,91 KPH KPH KPH 1,60 4,63 KPH KPH KPH 4,63 0,99 KPH KPH 21,79 1CFU/g M31 KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 101CFU/g M32 KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 102CFU/g M33 KPH KPH KPH KPH KPH 0,89 KPH KPH KPH 0,89 1,60 103CFU/g M34 4,28 KPH KPH KPH 4,28 10,97 KPH KPH KPH 10,97 16,69 0,42 KPH KPH 17,11 20,80 104CFU/g M35 4,74 KPH KPH KPH 4,74 10,57 2,95 KPH KPH 13,52 18,16 1,88 KPH KPH 20,04 23,24 2,10 KPH KPH 25,33 105CFU/g M36 9,45 KPH KPH KPH 9,45 15,99 1,92 KPH KPH 17,92 17,82 6,40 KPH KPH 24,22 23,84 10,08 KPH KPH 33,92 106CFU/g M37 12,81 KPH KPH KPH 12,81 15,82 1,60 KPH KPH 17,42 19,16 3,01 KPH KPH 22,17 27,47 2,75 KPH KPH 30,22 A flavus Ký hiệu Sau 10 tuần Sau 12 tuần Sau 14 tuần Sau 16 tuần AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 Tổng AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 Tổng AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 Tổng AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 Tổng KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 1CFU/g M31 101CFU/g M32 102CFU/g M33 5,67 103CFU/g M34 104CFU/g 1,72 KPH KPH KPH 1,72 3,10 KPH KPH KPH 3,10 5,06 KPH KPH KPH 5,06 5,76 KPH KPH KPH 5,76 KPH KPH KPH 5,67 8,07 KPH KPH KPH 8,07 12,72 KPH KPH KPH 12,72 13,22 KPH KPH KPH 13,22 26,28 1,65 KPH KPH 27,93 26,73 3,08 KPH KPH 29,80 26,39 3,87 KPH KPH 30,26 25,27 6,69 KPH KPH 31,96 M35 26,62 2,49 KPH KPH 29,11 34,40 3,31 KPH KPH 37,71 36,51 3,18 KPH KPH 39,70 37,98 3,75 KPH KPH 41,73 105CFU/g M36 28,37 18,56 KPH KPH 46,93 39,21 20,27 KPH KPH 59,49 39,81 27,07 KPH KPH 66,88 41,48 31,61 KPH KPH 73,09 106CFU/g M37 36,60 11,45 KPH KPH 48,05 40,24 23,96 KPH KPH 64,20 41,36 31,62 KPH KPH 72,98 44,27 34,23 KPH KPH 78,50 14 2.5 Ảnh hưởng tinh dầu quế đến khả phát triển A flavus đĩa thạch Bảng PL2 Tính toán lượng tween tinh dầu bổ sung vào môi trường thạch Nồng độ tinh dầu (% v/v) Tính cho đĩa thạch (30mL) Chuẩn bị cho đĩa (180 mL) Lượng tween 20 (L) Lượng tinh dầu (L) Lượng tween 20 (mL) Lượng tinh dầu (mL) 0(*) 440 2,64 0,0125 440 41,7 2,64 0,25 0,025 440 83,3 2,64 0,5 0,05 440 166,7 2,64 0,1 440 333,3 2,64 0,2 440 666,7 2,64 0,4 440 1333,3 2,64 0,8 440 2666,7 2,64 16 1,6 440 5333,3 2,64 32 3,2 440 10666,7 2,64 64 Ghi chú: (*) Mẫu đối chứng, cho tween 20 không cho tinh dầu 15 Bảng PL2 Kết đo đường kính khuẩn lạc phát triển bổ sung tinh dầu quế đĩa thạch Ngày Nồng độ tinh dầu (%) 11 13 C(-) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 C(+) 3,2 3,0 3,2 3,3 5,4 5,5 5,3 5,2 6,5 6,6 6,6 6,6 7,5 7,4 7,8 7,7 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 0,0125 3,1 3,1 3,2 3,1 5,2 5,4 5,3 5,3 6,5 6,6 6,6 6,6 7,4 7,5 7,6 7,6 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 0,025 2,1 1,7 2,0 1,8 4,5 4,6 4,3 4,4 5,0 5,1 4,9 5,1 6,5 6,4 6,5 6,5 7,1 7,0 7,2 7,1 9,0 9,0 9,0 9,0 0,05 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0.0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,1 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,4 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,8 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 1,6 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 3,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 16 Bảng PL2 Kết đo đường kính khuẩn lạc phát triển bổ sung tinh dầu hồi đĩa thạch Ngày Nồng độ tinh dầu (%) 11 13 C(-) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 C(+) 3,2 3,0 3,2 3,3 5,4 5,5 5,3 5,2 6,5 6,6 6,6 6,6 7,5 7,4 7,8 7,7 9,0 9,0 9,0 9,0 0,0125 3,1 3,0 3,0 2,9 4,1 4,2 4,1 4,0 6,6 6,5 6,5 6,5 7,7 7,8 7,6 7,8 9,0 9,0 0,025 2,1 2,2 2,0 2,1 4,1 4,0 4,0 4,0 6,3 6,4 6,4 6,4 7,5 7,6 7,6 7,5 9,0 9,0 0,05 1,7 1,8 1,9 1,8 3,8 3,8 3,7 3,7 6,0 5,9 6,0 5,8 7,3 7,2 7,3 7,2 9,0 9,0 0,1 1,3 1,5 1,4 1,5 2,6 2,7 2,6 2,6 4,7 4,8 4,7 4,8 7,0 7,1 7,1 7,1 9,0 0,2 0,3 0,4 0,3 0,4 0,8 0,8 0,8 0,7 2,5 2,6 2,5 2,5 4,7 4,8 4,8 4,8 0,4 0,0 0,0 0,0 0,0 0,6 0,6 0,5 0,6 1,5 1,6 1,6 1,5 3,0 3,2 3,1 0,8 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 1,6 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 3,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 17 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0 7,7 7,6 7,8 7,6 9,0 9,0 9,0 9,0 3,2 6,3 6,3 6,2 6,2 7,8 7,9 7,8 7,8 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU 3.1 Phần mềm xử lý số liệu R 3.4.1 18 3.2 Đánh giá mức độ nhiễm nấm men-mốc và Aflatoxin lạc 3.2.1 So sánh mức nhiễm nấm men-mốc Aflatoxin lạc nhân giữa các tỉnh Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang > nam = c(14, 16, 18) > AF = c(12, 9, 16) > Total = c(30, 30, 30) > prop.test(nam, total) > prop.test(AF, total) 3-sample test for equality of proportions without continuity correction data X-squared df alternative hypothesis: two.sided p-value sample estimates prop prop prop nam out of total 1.0714 0.4666667 0.5333333 0.6000000 0.5853 AF out of total 3.3962 0.4000000 0.3000000 0.5333333 0.183 19 3.2.2 So sánh mức nhiễm nấm men-mốc Aflatoxin lạc củ giữa các tỉnh Nghệ An, Thanh Hóa Bắc Giang > namcu = c(16, 13, 17) > AFcu = c(9, 8, 12) > Total = c(30, 30, 30) > prop.test(namcu, total) > prop.test(AFcu, total) 3-sample test for equality of proportions without continuity correction data X-squared df alternative hypothesis: two.sided p-value sample estimates prop prop prop namcu out of total 1.1561 0.5333333 0.4333333 0.5666667 0.561 AFcu out of total 1.3228 0.3000000 0.2666667 0.4000000 0.5161 20 3.3 Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển A flavus và sinh AF lạc 3.3.1 Phân tích hồi quy tuyến tính ảnh hưởng độ ẩm a Mối quan hệ độ ẩm thời gian tới hàm lượng AFB1 sinh Phần dư của mô hình: Min 1Q Median 3Q Max -24.968 -8.865 1.743 9.418 19.215 Các hệ số: Estimate Std Error t value Pr(>|t|) (Intercept) -78.1876 10.2652 -7.617 3.32e-11 *** Week 1.9971 0.2537 7.873 1.02e-11 *** Moi 7.5601 0.9426 8.020 5.15e-12 *** Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ Residual standard error: 10.9 on 85 degrees of freedom Multiple R-squared: 0.5978, Adjusted R-squared: 0.5883 F-statistic: 63.16 on and 85 DF, p-value: < 2.2e-16 b Mối quan hệ độ ẩm thời gian tới hàm lượng AF tổng số sinh ra: Phần dư của mô hình: Min 1Q Median 3Q Max -31.434 -11.291 -0.608 8.772 40.996 Các hệ số: Estimate Std Error t value Pr(>|t|) (Intercept) -76.9121 15.0087 -5.125 1.84e-06 *** Week 2.6051 0.3709 7.024 4.97e-10 *** Moi 7.2425 1.3782 5.255 1.08e-06 *** Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ Residual standard error: 15.94 on 85 degrees of freedom Multiple R-squared: 0.4752, Adjusted R-squared: 0.4628 F-statistic: 38.48 on and 85 DF, p-value: 1.262e-12 21 3.3.2 Phân tích hồi quy tuyến tính ảnh hưởng nhiệt độ Mối quan hệ nhiệt độ thời gian tới hàm lượng AFB1 sinh Phần dư của mô hình: Min -28.364 1Q -10.171 Median 0.804 3Q Max 6.267 35.479 Các hệ số: Estimate Std Error t value Pr(>|t|) (Intercept) 19.5715 11.4777 1.705 0.0918 Week 1.9971 0.3310 6.034 4.04e-08 *** Tem -0.6961 0.4238 -1.642 0.1042 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ Residual standard error: 14.23 on 85 degrees of freedom Multiple R-squared: 0.3151, Adjusted R-squared: 0.299 F-statistic: 19.55 on and 85 DF, p-value: 1.034e-07 22 3.3.3 Phân tích hồi quy tuyến tính ảnh hưởng mức nhiễm A flavus a Mối quan hệ mức nhiễm A flavus thời gian tới hàm lượng AFB1 sinh Phần dư của mô hình: Min 1Q Median 3Q Max -27.124 -11.272 -0.695 6.792 36.713 Estimate Std Error t value Pr(>|t|) 9.297e-01 1.997e+00 5.987e-06 3.414e+00 3.338e-01 5.356e-06 0.272 5.984 1.118 0.786 5.02e-08 *** 0.267 Các hệ số: (Intercept) Week Flavus Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ Residual standard error: 14.35 on 85 degrees of freedom Multiple R-squared: 0.3036, Adjusted R-squared: 0.2872 F-statistic: 18.53 on and 85 DF, p-value: 2.098e-07 b Mối quan hệ mức nhiễm A flavus thời gian tới hàm lượng AF tổng số sinh Phần dư của mô hình: Min 1Q Median 3Q Max Các hệ số: Estimate Std Error t value Pr(>|t|) 23 3.3.4 Phân tích mô hình hời quy tuyến tính đa biến a Tìm mơ hình tối ưu > search=glm(fx~., family="binomial", data=dat1) > step(search) Start: AIC=33.57 fx ~ Week + Moi + Tem + Flavus - Tem - Moi - Flavus - Week Df 1 1 Deviance 24.275 29.489 35.454 45.223 AIC 2.275 37.489 43.454 53.223 Deviance 29.636 35.750 45.624 AIC 35.636 41.750 51.624 Step: AIC=32.27 fx ~ Week + Moi + Flavus - Moi - Flavus - Week Df 1 Call: glm(formula = fx ~ Week + Moi + Flavus, family = "binomial", data = dat1) Coefficients: (Intercept) Week -92.592468 0.665122 Moi 8.919759 Flavus 0.001301 Degrees of Freedom: 87 Total (i.e Null); 84 Residual; Null Deviance: AIC: 32.27 models were selected 24 58.09; Residual Deviance: 24.27 Best models (cumulative posterior probability = ): Intercept Week Moi Tem Flavus nVar BIC post prob p!=0 100 100.0 61.6 12.1 100.0 EV -58.617377 0.644505 5.507737 0.009783 0.001532 SD 1.042e+04 2.308e-01 1.042e+03 5.029e-02 1.196e-03 model model -9.259e+01 -3.116e+00 6.651e-01 6.073e-01 8.920e+00 1.301e-03 1.954e-03 model -9.629e+01 6.832e-01 9.036e+00 9.800e-02 1.099e-03 model -4.289e+00 6.095e-01 4.660e-02 1.885e-03 -3.518e+02 0.535 -3.480e+02 0.081 -3.466e+02 0.039 25 -3.509e+02 0.344 PHỤ LỤC MỘT SỐ SẮC ĐỒ PHÂN TÍCH AFLATOXIN 4.1 Sắc đồ phân tích AF nghiên cứu ảnh hưởng độ ẩm Sắc đồ phân tích mẫu nghiên cứu ảnh hưởng của độ ẩm sau tuần: Hình PL4 Sắc đồ AFB1 mẫu độ ẩm 10%(M13), 12%(M14) 14%(M15) Hình PL4 Sắc đồ AFB2 mẫu độ ẩm 14% 26 4.2 Sắc đồ phân tích AF nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ Sắc đồ phân tích mẫu nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ sau tuần: Hình PL4 Sắc đồ AFB1 mẫu 25o C 30o C 4.3 Sắc đồ phân tích AF nghiên cứu ảnh hưởng điều kiện hút chân khơng Sắc đồ phân tích mẫu nghiên cứu ảnh hưởng của điều kiện hút chân không sau tuần: Hình PL4 Sắc đồ AFB1 nghiên cứu điều kiện hút chân khơng 27 4.4 Sắc đồ phân tích AF nghiên cứu ảnh hưởng mức nhiễm A flavus BG1 Sắc đồ phân tích mẫu nhiễm A flavus BG1: 100 CFU/g (M51), 101 CFU/g (M52), 102 CFU/g (M53), 103 CFU/g (M54), 104 CFU/g (M55), 105 CFU/g (M56), 106 CFU/g (M57) Hình PL4 Sắc đồ AFB1 mẫu M51M55 Hình PL4 Sắc đồ AFB2 mẫu M51 M52 28 ... thực đề tài ? ?Nghiên cứu mức độ nhiễm aflatoxin đề xuất một số giải pháp công nghệ bảo quản lạc sau thu hoạch tỉnh miền Trung Bắc Việt Nam" Mục tiêu nghiên cứu - Đánh giá thực trạng yếu... trạng nhiễm nấm mốc aflatoxin lạc số tỉnh miền Trung Bắc Việt Nam - Đề xuất giải pháp cơng nghệ bảo quản lạc có hiệu quả ngăn ngừa nguy nhiễm aflatoxin lạc Nội dung nghiên cứu Để đánh giá... giải pháp bảo quản lạc sau thu hoạch nhằm giảm nguy nhiễm aflatoxin lạc cần thiết Các nghiên cứu trước điều kiện bảo quản sau thu hoạch tác động đáng kể đến sự xuất aflatoxin lạc [42] Lạc