Khóa luận nghiên cứu so sánh khả năng giải phóng thuốc của vật liệu cellulose nạp diclofenac natri tạo ra từ gluconacetobacter xylinus trong một số môi trường nuôi cấ

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT STT KÍ KIỆU VIẾT TẮT BC h MT G xylinus OD UV-vis NỘI DUNG Bacterial cellulose Giờ Môi trường Gluconacetobacter xylinus Optical density Ultraviolet visible MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn NỘI DUNG CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cellulose vi khuẩn (BC) 1.1.1 Vị trí phân loại vi khuẩn G xylinus 1.1.2 Đặc điểm sinh lý 1.1.3 Đặc điểm nuôi cấy 1.1.4 Tính chất màng BC 1.2 Thuốc Diclofenac natri 1.2.2 Công thức 1.2.3 Tác dụng dược lý chế tác dụng 1.2.4 Dược động học 1.2.5 Chỉ định 1.2.6 Tác dụng phụ 1.3 Tổng quan tình hình nghiên cứu ngồi nước 1.3.1 Tình hình ngiên cứu giới 1.3.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Đối tượng nghiên cứu 10 2.2 Vật liệu nghiên cứu 10 2.2.1 Chủng vi khuẩn 10 2.2.2 Nguyên liệu hóa chất 10 2.2.3 Các thiết bị 11 2.3 Nội dung nghiên cứu 11 2.4 Phương pháp nghiên cứu 11 2.4.1 Bố trí thí nghiệm 11 2.4.2 Phương pháp chế tạo màng BC 12 2.4.3 Đánh giá độ tinh khiết màng BC 13 2.4.5 Xác định lượng thuốc hấp thụ vào vật liệu BC 18 2.4.6 Môi trường pH dùng để xác định lượng thuốc giải phóng 18 2.4.8 Xử lý thống kê 20 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Tạo màng BC lên men từ loại môi trường (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa) 21 3.2 Hấp thụ thuốc Diclofenac natri 22 3.3 Xác định lượng thuốc giải phóng khỏi màng BC 23 3.3.1 Xác định lượng thuốc Diclofenac natri giải phóng từ màng BC lên men từ mơi trường chuẩn 25 3.3.2 Xác định lượng thuốc Diclofenac natri giải phóng từ màng BC lên men từ mơi trường dừa 32 3.4 So sánh khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng BC lên men từ loại mơi trường khác mơi trường có pH=6,8 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 Kết luận 40 Kiến nghị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Thành phần dinh dưỡng nước vo gạo Bảng 1.2: Thành phần dinh dưỡng nước dừa già Bảng 2.1: Thành phần trong loại môi trường nuôi cấy vi khuẩn 12 Bảng 2.2: Giá trị OD dung dịch diclofenac natri nồng độ khác (n=3) bước sóng 276nm 15 Bảng 2.3: Giá trị OD dung dịch diclofenac natri nồng độ khác (n=3) bước sóng 278nm 16 Bảng 2.4: Giá trị OD dung dịch diclofenac natri nồng độ khác (n=3) bước sóng 281nm 17 Bảng 3.1: Lượng thuốc hấp thụ vào loại màng khác 23 Bảng 3.2: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ môi trường chuẩn (Màng BC không ép nước) 25 Bảng 3.3: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường chuẩn (Màng BC ép nước 50%) 26 Bảng 3.4: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường gạo (Màng BC không ép nước) 29 Bảng 3.5: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường gạo (Màng BC ép nước 50%) 30 Bảng 3.6: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ môi trường dừa (Màng BC không ép nước) 33 Bảng 3.7: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ môi trường dừa (Màng BC ép nước 50%) 34 Bảng 3.8: Khả giải phóng thuốc màng BC (khơng ép nước) với độ dày khác 24 37 Bảng 3.9: Khả giải phóng thuốc màng BC (ép nước 50%) với độ dày khác 24 38 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Thuốc Diclofenac natri dạng tinh khiết 10 Hình 2.2: Phương trình đường chuẩn thuốc Diclofenac natri bước sóng 276nm 15 Hình 2.4: Phương trình đường chuẩn thuốc Diclofenac natri bước sóng 281nm 17 Hình 3.1: Nuôi cấy màng BC loại môi trường 21 Hình 3.2: Màng BC thu sau q trình ni cấy 22 Hình 3.3: Màng BC thu sau trình hấp thụ thuốc 23 Hình 3.4: Màng cho vào máy giải phóng 24 Hình 3.5: Mẫu rút để đo quang phổ 24 Hình 3.6: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường chuẩn (Màng BC không ép nước) 27 Hình 3.7: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường chuẩn (Màng BC ép nước 50%) 27 Hình 3.8: Khả giải phóng thuốc màng BC tạo từ MT chuẩn mơi trường có pH khác 24h 28 Hình 3.9 Tỉ lệ giải phóng thuốc nồng độ pH khác thời điểm khác màng gạo chưa ép nước 31 Hình 3.10 Tỉ lệ giải phóng thuốc nồng độ pH khác thời điểm khác màng gạo ép 50% nước 31 Hình 3.11: Khả giải phóng thuốc màng BC tạo từ MT gạo mơi trường có pH khác 24h 32 Hình 3.12: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ môi trường dừa (Màng BC không ép nước) 35 Hình 3.13: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ môi trường dừa (Màng BC ép nước 50%) 35 Hình 3.14: Khả giải phóng thuốc màng BC tạo từ MT dừa mơi trường có pH khác 24h 36 Hình 3.15: Khả giải phóng thuốc màng BC (không ép nước) với độ dày khác 24 37 Hình 3.16: Khả giải phóng thuốc màng BC (ép nước 50%) với độ dày khác 24 38 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Trong thời đại kỹ thuật công nghệ phát triển nay, người ngày ý thức quan tâm nhiều vấn đề sức khỏe Nhưng khơng mà bệnh tật giảm Ngược lại, số người mắc bệnh ngày nhiều phổ biến lứa tuổi, đặc biệt bệnh xương khớp Bệnh gây tổn thương biến dạng khớp, hạn chế vận động người bệnh Trong số thuốc giảm đau sử dụng nhằm giảm nhẹ triệu chứng, đưa lại thoải mái dễ chịu cho bệnh nhân, thuốc giảm đau chống viêm không steroit (NSAID), đặc biệt Diclofenac natri sử dụng nhiều vừa giảm đau kháng viêm Tác dụng điều trị chủ yếu dựa vào ức chế tổng hợp Prostaglandin, chất trung gian hóa học quan trọng phản ứng viêm đau, hấp thu dễ dàng qua đường tiêu hóa sau uống [12] Cellulose vi khuẩn (BC) tạo thành từ G xylinum có cấu trúc hóa học giống cellulose thực vật có số tính chất hóa lý đặc biệt như: độ bền học, khả thấm hút nước cao, đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, độ polymer hóa lớn, có khả phục hồi độ ẩm ban đầu, Vì vậy, BC ứng dụng nhiều lĩnh vực như: thực phẩm, công nghiệp dệt, công nghiệp giấy, mỹ phẩm, y học, đáng ý kiểm soát hệ thống vận chuyển thuốc BC sử dụng vài hệ thống để phân phối thuốc Amin et al báo cáo việc sử dụng vật liệu BC làm màng bọc cho paracetamol cách sử dụng kĩ thuật phun phủ Kết cho thấy vật liệu BC giúp cho thuốc giải phóng cách kéo dài làm tăng hiệu sử dụng thuốc Gần hơn, Huang et al nghiên cứu việc sử dụng màng BC cho việc kiểm sốt in vitro Berberine Ngồi thẩm thấu qua da, thí nghiệm kiểm sốt giải phóng thuốc qua màng BC cịn thử nghiệm mơ dày, ruột Các kết thu cho thấy thuốc giải phóng với tốc độ chậm Với mục đích nghiên cứu để bổ sung dẫn chứng khả giải phóng thuốc Diclofenac natri vật liệu BC, chọn đề tài:“Nghiên cứu so sánh khả giải phóng thuốc vật liệu cellulose nạp Diclofenac natri tạo từ Gluconacetobacter xylinus số mơi trường ni cấy” Mục đích nghiên cứu - Nuôi cấy màng BC lên men từ loại môi trường (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa) - Nghiên cứu so sánh khả giải phóng thuốc vật liệu BC loại môi trường nuôi cấy Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: So sánh khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng BC lên men từ loại môi trường (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa) - Địa điểm nghiên cứu: Viện nghiên cứu khoa học ứng dụng, Trường Đại học sư phạm Hà Nội - Phạm vi nghiên cứu: Được thực quy mơ phịng thí nghiệm Nội dung nghiên cứu - Nuôi cấy thu màng từ loại môi trường khác (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa) - Hấp thụ thuốc Diclofenac natri vào màng BC - Xác định khả giải phóng loại màng mơi trường có độ pH khác - So sánh khả giải phóng thuốc loại màng loại mơi trường có độ pH Ý nghĩa khoa học thực tiễn - Ý nghĩa khoa học + Cung cấp thêm thông tin màng BC + Tìm hiểu tiềm màng BC việc giải phóng thuốc - Ý nghĩa thực tiễn + Xây dựng dược quy trình tạo màng từ chủng vi khuẩn G xylinus + Xây dựng hệ thống giải phóng thuốc Diclofenac natri NỘI DUNG CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cellulose vi khuẩn (BC) 1.1.1 Vị trí phân loại vi khuẩn G xylinus Theo hệ thống phân loại nhà khoa học Bergey G xylinus thuộc: - Lớp Schizommycetes - Bộ Pseudomnadales - Họ Pseudomonadaceae - Giống Acetobacter 1.1.2 Đặc điểm sinh lý - Vi khuẩn G xylinus sinh trưởng tốt nhiệt độ 25-30oC, pH mơi trường từ 4-6 - Vì vi khuẩn chịu pH thấp nên nuôi cấy thường bổ sung lượng nhỏ acid axetic vào để hạn chế bị nhiễm khuẩn lạ 1.1.3 Đặc điểm nuôi cấy Trên mơi trường ni cấy, vi khuẩn G xylinus hình thành khuẩn lạc có bề mặt nhẵn xù xì, khuẩn lạc phẳng lồi lên nên dễ tách khỏi môi trường nuôi cấy Khi nuôi cấy môi trường lỏng điều kiện tĩnh, chúng hình thành bề mặt mơi trường lớp màng BC Trong thực nghiệm, tiến hành nuôi cấy vi khuẩn G xylinus loại môi trường tự nhiên sau: - Môi trường chuẩn (sử dụng nước cất hai lần) - Môi trường nước vo gạo: môi trường thích hợp để ni cấy có chứa chất dinh dưỡng với hàm lượng cần thiết cho sinh trưởng vi khuẩn loại vitamin, khoáng chất, protein,… Lưu ý: Sử dụng nước vo gạo sau vo không 2h, đảm bảo hàm lượng chất dinh dưỡng đảm bảo Không sử dụng nước vo gạo bị chua Bảng 1.1: Thành phần dinh dưỡng nước vo gạo Thành phần Hàm lượng Nước 40% Protein 15% - 17% Đường 2% - 3% Vitamin nhóm B (B1, B2, B3, B5) 35% - 50% Khoáng chất 10% - 13% Valine, Lysine,… Acid amin - Mơi trường nước dừa già: mơi trường có chứa nhiều chất dinh dưỡng chất kích thích tố tăng trưởng hexitol, sorbitol, cytolunin, myoinositol,… Lưu ý: Sử dụng nước dừa già sau thu hoạch không ngày bảo quản thích hợp để đảm bảo hàm lượng chất dinh dưỡng Không sử dụng nước dừa già bị chua có mùi lạ Bảng 1.2: Thành phần dinh dưỡng nước dừa già Thành phần Hàm lượng Nước 90% Chất béo toàn phần 0,3% Các loại đường 4% - 5% Protein 1% - 2% Khoáng chất 2% Các loại vitamin 1,5% Nhận xét: Theo số liệu từ bảng 3.2 3.3, ta thấy tỉ lệ giải phóng thuốc tăng dần, mơi trường đệm pH = 6,8 màng có khả giải phóng thuốc cao pH =2, pH =4,5 pH = 7,4; đạt cực đại 24 Cụ thể: Màng khơng ép nước Tỉ lệ thuốc giải phóng 20% Màng ép nước 50% 19% 18% 17% 16% 0,5cm 1cm 0,5cm 1cm 0,5cm 1cm 0,5cm 1cm pH=2 pH=4,5 pH=6,8 pH=7,4 Hình 3.8: Khả giải phóng thuốc màng BC tạo từ MT chuẩn môi trường có pH khác 24h Màng có độ dày 1cm có khả giải phóng cao màng dày 0,5cm Tại mơi trường có độ pH=6,8, màng BC có khả giải phóng thuốc cao 3.3.2 Xác định lượng thuốc Diclofenac natri giải phóng từ màng BC lên men từ mơi trường gạo Lượng thuốc giải phóng khỏi màng BC có độ dày 0,5cm 1cm khoảng thời gian khác dung dịch có độ pH khác thể Bảng 3.4 Bảng 3.5 28 Bảng 3.4: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường gạo (Màng BC không ép nước) Thời pH gian Độ dày màng 0,5cm 1cm 0,5cm 4,5 1cm 0,5cm 6,8 1cm 0,5cm 7,4 1cm 0,5 h 1h 2h 4h 6h 8h 10 h 12 h 24 h 12,30 ± 0,04 12,91 ± 0,02 11,47 ± 0,015 13,53 ± 0,015 12,37 ± 0,025 15,07 ± 0,022 12,30 ± 0,022 13,99 ± 0,056 12,71 ± 0,068 13,21 ± 0,017 12,29 ± 0,021 13,76 ± 0,024 13,54 ± 0,018 16,00 ± 0,015 13,26 ± 0,028 14,61 ± 0,042 13,82 ± 0,038 13,59 ± 0,031 12,78 ± 0,031 14,53 ± 0,035 13,82 ± 0,053 16,79 ± 0,032 13,61 ± 0,018 15,62 ± 0,062 13,96 ± 0,047 14,60 ± 0,012 13,67 ± 0,015 15,69 ± 0,057 15,48 ± 0,026 17,03 ± 0,061 13,83 ± 0,019 16,16 ± 0,056 14,73 ± 0,022 15,22 ± 0,018 14,09 ± 0,023 16,00 ± 0,053 16,05 ± 0,017 17,74 ± 0,053 15,63 ± 0,062 16,95 ± 0,016 15,64 ± 0,016 16,81 ± 0,027 15,14 ± 0,03 16,48 ± 0,022 17,11 ± 0,022 18,23 ± 0,046 16,06 ± 0,029 17,89 ± 0,033 16,55 ± 0,032 17,70 ± 0,035 15,49 ± 0,022 17,57 ± 0,061 17,47 ± 0,032 18,71 ± 0,048 16,35 ± 0,049 18,53 ± 0,028 17,60 ± 0,024 18,19 ± 0,019 16,82 ± 0,016 18,13 ± 0,019 17,71 ± 0,041 19,43 ± 0,058 16,78 ± 0,031 19,47 ± 0,011 17,97 ± 0,042 19,60 ± 0,022 17,74 ± 0,031 19,23 ± 0,045 18,08 ± 0,058 20,69 ± 0,044 17,56 ± 0,022 20,04 ± 0,19 29 Bảng 3.5: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường gạo (Màng BC ép nước 50%) Thời pH gian Độ dày màng 0,5cm 1cm 0,5cm 4,5 1cm 0,5cm 6,8 1cm 0,5cm 7,4 1cm 0,5 h 1h 2h 4h 6h 8h 10 h 12 h 24 h 11,96 ± 0,032 12,19 ± 0,052 10,83 ± 0,031 12,69 ± 0,047 11,71 ± 0,025 13,98 ± 0,058 11,83 ± 0,081 13,41 ± 0,046 12,34 ± 0,068 12,47 ± 0,018 11,20 ± 0,068 13,12 ± 0,045 12,53 ± 0,087 15,13 ± 0,68 12,21 ± 0,065 13,91 ± 0,039 12,78 ± 0,062 12,97 ± 0,084 11,77 ± 0,067 13,91 ± 0,049 13,41 ± 0,037 15,79 ± 0,067 12,72 ± 0,079 14,70 ± 0,033 13,17 ± 0,061 13,83 ± 0,057 12,77 ± 0,066 14,56 ± 0,054 14,24 ± 0,025 16,37 ± 0,044 13,04 ± 0,063 16,14 ± 0,019 13,62 ± 0,039 14,69 ± 0,068 13,53 ± 0,074 16,14 ± 0,063 15,07 ± 0,094 17,39 ± 0,039 14,68 ± 0,057 16,95 ± 0,086 14,38 ± 0,069 16,49 ± 0,59 14,36 ± 0,038 16,51 ± 0,064 15,85 ± 0,088 18,13 ± 0,036 15,20 ± 0,057 17,47 ± 0,037 15,97 ± 0,064 17,44 ± 0,035 14,88 ± 0,078 17,39 ± 0,069 16,25 ± 0,055 18,30 ± 0,081 15,66 ± 0,066 18,07 ± 0,087 16,24 ± 0,068 17,68 ± 0,046 15,71 ± 0,68 18,49 ± 0,049 16,52 ± 0,068 18,62 ± 0,072 16,06 ± 0,037 18,59 ± 0,016 16,58 ± 0,084 19,13 ± 0,069 16,24 ± 0,088 19,16 ± 0,067 16,86 ± 0,058 20,29 ± 0,011 16,65 ± 0,039 19,19 ± 0,028 30 Dựng đồ thị biểu diễn phần mềm Excel 2010, ta Hình 3.9, Hình 3.10 Tỉ lệ giải phóng thuốc % 22 20 18 16 14 12 10 0.5 pH2 Màng 0.5cm pH4.5 Màng 0.5cm pH6.8 Màng 0.5cm pH7.4 Màng 0.5cm 10 pH2 Màng 1cm pH4.5 Màng 1cm pH6.8 Màng 1cm pH7.4 Màng 1cm 12 24 Thời gian Tỉ lệ giải phóng % Hình 3.9 Tỉ lệ giải phóng thuốc nồng độ pH khác thời điểm khác màng gạo chưa ép nước 22 20 18 16 14 12 10 0.5 pH2 Màng 0,5cm pH4,5 Màng 0,5cm pH6,8 Màng 0,5cm pH7,4 Màng 0,5cm 10 pH2 Màng 1cm pH4,5 Màng 1cm pH6,8 Màng 1cm pH7,4 Màng 1cm 12 24 Thời gian Hình 3.10 Tỉ lệ giải phóng thuốc nồng độ pH khác thời điểm khác màng gạo ép 50% nước 31 Nhận xét: Ta thấy tỉ lệ giải phóng thuốc tăng dần, môi trường đệm pH = 6,8 màng có khả giải phóng thuốc cao pH =2, pH =4,5 pH = 7,4; đạt cực đại 24 Cụ thể: Tỉ lệ thuốc giải phóng 21% 20% Màng không ép nước 19% Màng ép nước 50% 18% 17% 16% 0,5cm 1cm pH=2 0,5cm 1cm 0,5cm pH=4,5 1cm pH=6,8 0,5cm 1cm pH=7,4 Hình 3.11: Khả giải phóng thuốc màng BC tạo từ MT gạo mơi trường có pH khác 24h Màng có độ dày 1cm có khả giải phóng cao màng dày 0,5cm Tại mơi trường có độ pH=6,8, màng BC có khả giải phóng thuốc cao 3.3.2 Xác định lượng thuốc Diclofenac natri giải phóng từ màng BC lên men từ mơi trường dừa Lượng thuốc giải phóng khỏi màng BC có độ dày 0,5 cm 1cm khoảng thời gian khác dung dịch có độ pH khác thể Bảng 3.6 Bảng 3.7 32 Bảng 3.6: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ môi trường dừa (Màng BC không ép nước) Thời pH gian Độ Dày màng 0,5cm 1cm 0,5cm 4,5 1cm 0,5cm 6,8 1cm 0,5cm 7,4 1cm 0,5 h 1h 2h 4h 6h 8h 10 h 12 h 24 h 11,94 ± 0,003 12,21 ± 0,003 11,80 ± 0,009 12,68 ± 0,002 12,44 ± 0,008 13,48 ± 0,005 12,16 ± 0,006 13,19 ± 0,003 13,01 ± 0,004 13,63 ± 0,001 12,44 ± 0,003 13,26 ± 0,004 13,87 ± 0,003 14,51 ± 0,003 12,80 ± 0,005 13,93 ± 0,006 14,15 ± 0,006 14,22 ± 0,007 13,29 ± 0,005 13,99 ± 0,006 13,95 ± 0,005 14,74 ± 0,005 13,01 ± 0,002 14,51 ± 0,009 15,44 ± 0,009 14,59 ± 0,009 13,94 ± 0,002 14,58 ± 0,008 15,84 ± 0,003 15,41 ± 0,002 13,79 ± 0,004 15,11 ± 0,004 16,87 ± 0,006 15,18 ± 0,008 14,94 ± 0,004 15,47 ± 0,004 16,59 ± 0,007 16,00 ± 0,001 15,22 ± 0,007 15,78 ± 0,007 17,09 ± 0,007 15,85 ± 0,002 15,31 ± 0,007 16,09 ± 0,000 18,10 ± 0,001 16,68 ± 0,002 15,81 ± 0,001 16,52 ± 0,003 17,67 ± 0,002 18,94 ± 0,009 17,89 ± 0,004 18,50 ± 0,001 19,12 ± 0,009 18,74 ± 0,006 17,89 ± 0,003 18,52 ± 0,001 18,23 ± 0,004 19,02 ± 0,008 18,98 ± 0,002 19,55 ± 0,004 20,08 ± 0,001 20,49 ± 0,005 20,01 ± 0,009 20,08 ± 0,002 18,91 ± 0,0058 20,67 ± 0,0079 20,41 ± 0,0015 21,34 ± 0,0063 21,87 ± 0,0027 22,31 ± 0,0016 21,25 ± 0,0045 21,89 ± 0,0056 33 Bảng 3.7: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ môi trường dừa (Màng BC ép nước 50%) Thời pH gian Độ dày màng 0,5cm 0,5 h 12,78 ± 0,0017 1cm 13,40 ± 0,0003 0,5cm 12,79 ± 4,5 0,0046 1cm 13,48 ± 0,0024 0,5cm 12,87 ± 6,8 0,0011 1cm 14,29 ± 0,0014 0,5cm 13,30 ± 7,4 0,0021 1cm 14,14 ± 0,0025 1h 2h 4h 6h 8h 10 h 12 h 24 h 13,93 ± 0,0026 14,43 ± 0,0014 13,45 ± 0,0034 14,07 ± 0,0012 13,67 ± 0,0012 15,32 ± 0,0009 13,82 ± 0,0046 15,25 ± 0,0016 13,94 ± 0,0045 15,76 ± 0,0057 14,33 ± 0,0025 14,81 ± 0,0006 14,62 ± 0,0021 16,29 ± 0,0023 14,04 ± 0,0018 16,14 ± 0,0063 15,02 ± 0,0016 16,88 ± 0,0027 14,99 ± 0,0047 16,87 ± 0,0043 15,36 ± 0,0037 17,70 ± 0,0024 14,85 ± 0,0034 16,82 ± 0,0039 15,47 ± 0,0019 17,49 ± 0,0023 16,02 ± 0,0019 17,77 ± 0,0029 16,39 ± 0,0054 18,31 ± 0,0051 15,58 ± 0,0035 17,72 ± 0,0041 16,70 ± 0,0023 18,17 ± 0,0017 17,13 ± 0,0017 18,39 ± 0,0038 17,94 ± 0,0083 19,00 ± 0,0034 17,27 ± 0,0091 18,33 ± 0,0053 17,80 ± 0,0048 18,25 ± 0,0041 18,34 ± 0,0062 19,22 ± 0,0035 18,62 ± 0,0039 19,89 ± 0,0017 18,46 ± 0,0067 18,94 ± 0,0029 18,25 ± 0,0009 19,06 ± 0,0053 19,28 ± 0,0044 19,73 ± 0,0072 19,86 ± 0,0013 20,03 ± 0,0046 19,12 ± 0,0028 19,22 ± 0,0015 19,28 ± 0,0026 21,02 ± 0,0072 20,66 ± 0,0011 21,71 ± 0,0022 22,16 ± 0,0047 22,99 ± 0,0029 21,59 ± 0,0021 22,03 ± 0,0037 34 Tỉ lệ thuốc giải phóng (%) Dựng đồ thị biểu diễn phần mềm Excel 2010, ta hình 3.12, hình 13 22 20 18 16 14 12 10 0.5 pH2 0.5cm pH4.5 1cm pH7.4 0.5cm 10 pH2 1cm pH6.8 0.5cm pH7.4 1cm 12 24 Thời gian pH4.5 0.5cm pH6.8 1cm Tỉ lệ thuốc giải phóng (%) Hình 3.12: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường dừa (Màng BC không ép nước) 22 20 18 16 14 12 10 0.5 pH2 0,5cm pH4,5 1cm pH2 1cm pH6,8 0,5cm 10 12 24 Thời gian pH4,5 0,5cm pH6,8 1cm Hình 3.13: Tỉ lệ (%) thuốc giải phóng màng BC tạo từ mơi trường dừa (Màng BC ép nước 50%) 35 Nhận xét: Theo số liệu từ Bảng 3.6 3.7, ta thấy tỉ lệ giải phóng thuốc tăng dần, mơi trường đệm pH = 6,8 màng có khả giải phóng thuốc cao pH =2, pH =4,5 pH = 7,4, đạt cực đại 24 Cụ thể: Tỉ lệ thuốc giải phóng 22% Màng khơng ép nước 21% 20% Màng ép nước 50% 19% 18% 0,5cm 1cm pH=2 0,5cm 1cm pH=4,5 0,5cm 1cm pH=6,8 0,5cm 1cm pH=7,4 Hình 3.14: Khả giải phóng thuốc màng BC tạo từ MT dừa mơi trường có pH khác 24h Màng có độ dày 1cm có khả giải phóng cao màng dày 0,5cm Tại mơi trường có độ pH=6,8, màng BC có khả giải phóng thuốc cao 3.4 So sánh khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng BC lên men từ loại môi trường khác môi trường có pH=6,8 Các loại màng BC có khả giải phóng thuốc cao mơi trường pH=6,8 VÌ vậy, so sánh khả giải phóng thuốc màng BC, xét điều kiện môi trường • Đối với màng BC khơng ép nước 36 Khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng BC lên men từ loại môi trường khác mơi trường có pH=6,8 thể Bảng 3.8 Hình 3.15 Bảng 3.8: Khả giải phóng thuốc màng BC (không ép nước) với độ dày khác 24 Màng 0,5cm Màng 1cm Màng chuẩn 18,02% 19,78% Màng gạo 18,08% 20,69% Màng dừa 21,87% 22,31% Tỉ lệ thuốc giải phóng (%) ( (%) 30 25 20 0,5cm 15 1cm 10 Màng chuẩn Màng gạo Màng dừa Hình 3.15: Khả giải phóng thuốc màng BC (không ép nước) với độ dày khác 24 • Đối với màng BC ép nước 50% 37 Khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng BC lên men từ loại môi trường khác mơi trường có pH=6,8 thể Bảng 3.9 Hình 3.16 Bảng 3.9: Khả giải phóng thuốc màng BC (ép nước 50%) với độ dày khác 24 Màng 0,5cm Màng 1cm Màng chuẩn 17,54% 19,31% Màng gạo 16,86% 20,29% Màng dừa 22,16% 22,99% 30 Tỉ lệ thuốc giải phóng (%) ( (%) 25 20 0,5cm 1cm 15 10 Màng chuẩn Màng gạo Màng dừa Hình 3.16: Khả giải phóng thuốc màng BC (ép nước 50%) với độ dày khác 24 Nhận xét: • Về đặc điểm giải phóng thuốc Diclofenac natri loại màng BC khác Khả giải phóng thuốc theo thứ tự sau: - Đối với màng BC không ép nước: 38 + Màng BC có độ dày 0,5cm: Màng dừa (21,87%) > Màng gạo (18,08%) > Màng chuẩn (18,02%) + Màng BC có độ dày 1cm: Màng dừa (22,31%) > Màng gạo (20,69%) > Màng chuẩn (19,78%) - Đối với màng BC ép nước 50%: + Màng BC có độ dày 0,5cm: Màng dừa (22,16%) > Màng chuẩn (17,54%) > Màng gạo (16,86%) + Màng BC có độ dày 1cm: Màng dừa (22,29%) > Màng gạo (20,29%) > Màng chuẩn (19,31%) Như vậy, khả giải phóng thuốc màng dừa cao (ở hai loại màng dày 0,5cm 1cm) Chứng tỏ với loại màng độ dày khác khả giải phóng thuốc khác - Màng BC có độ dày 1cm có khả giải phóng cao màng BC có độ dày 0,5cm • Về đặc điểm màng BC - Trong mơi trường pH=6,8, màng BC có trương nở nhiều nên tạo nhiều khe hở màng mơi trường cịn lại (pH=2, pH=4,5 pH=7,4) Do liên kết màng trở nên lỏng lẻo hơn, tạo điều kiện cho thuốc Diclofenac natri xuyên qua sợi cellulose nhiều - Thuốc Diclofenac natri có độ tan tốt mơi trường có pH=2 (điển hình mơi trường dịch vị dày) không bao bọc màng BC, độ thải trừ thuốc 2,5-6(h) Màng BC cấu tạo sợi polime bền nên trình giải phóng thuốc khơng có ăn mịn màng Do đó, màng BC phù hợp để làm hệ thống vận chuyển thuốc (qua đường uống), lúc thời gian giải phóng thuốc kéo dài đến 24 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình làm thực nghiệm, thu kết sau: Màng BC lên men từ loại môi trường khác (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa) có độ dày 1cm 0,5cm đánh giá có đủ tiêu chuẩn làm vật liệu giải phóng thuốc Diclofenac natri Nhìn chung, màng BC có độ dày 1cm có tỉ lệ thuốc giải phóng cao so với màng 0,5cm Màng BC ép nước 50% có tỉ lệ giải phóng thuốc cao so với màng BC không ép nước Lượng thuốc giải phóng loại màng nhiều dần theo thời gian Tỉ lệ thuốc giải phóng loại màng nhiều dần theo thứ tự: Màng MT chuẩn, màng MT gạo màng MT dừa Kiến nghị Cần tiếp tục khảo sát thêm khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng BC nuôi cấy từ số loại môi trường tự nhiên khác như: nước nho, nước chè xanh,… để bổ sung thêm nguồn nguyên liệu tự nhiên Tiếp tục nghiên cứu khả giải phóng thuốc Diclofenac natri với lượng mẫu lớn để cung cấp số liệu cho nghiên cứu nhằm ứng dụng màng sản xuất thuốc 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Bộ Y tế (2009), “Dược Điển Việt Nam IV”, NXB Hà Nội 2009 [2] Bộ Y tế (2002), Dược thư quốc gia Việt Nam, tr.1084 – 1088 [3] Nguyễn Thúy Hương, Phạm Thành Hổ (2003), “Chọn lọc dòng Acetobacter xylinum thích hợp cho loại mơi trường dùng sản xuất cellulose vi khuẩn với quy mơ lớn”,Tạp chí Di truyền học & Ứng dụng, 3:49-54 [4] Đặng Thị Hồng (2007), ‘Phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính Sinh học vi khuẩn chế tạo màng sinh học (CVK)’ Luận án thạc sĩ sinh học Đại học Sư phạm Hà Nội [5] Phan Thị Thu Hồng cộng (2015),“Sử dụng cellulose tổng hợp vi khuẩn Acetobacter xylinum để chế tạo vật liệu nhựa composite sinh học nhựa polyvinyl alcohol”, Tạp chí phát triển KH&CN, 18 (4): 114-124 [6] Dương Minh Lam cộng (2013), “Phân lập, tuyển chọn định loại chủng vi khuẩn BHN2 sinh màng cellulose vi khuẩn”, Tạp chí Sinh học, 35(1):74-79 [7] Tạ Long (Chủ tịch hội Khoa học Tiêu hóa Việt Nam), “Báo cáo Hội nghị Khoa học Tiêu hóa tồn quốc lần thứ 19 (tháng 11/2013)” Tại Hà Nội [8] Đinh Thị Kim Nhung (1998), “Tối ưu hóa thành phần mơi trường dinh dưỡng cho Acetobacter xylinum phương pháp quy hoạch thực nghiệm” Tạp chí Khoa học Công nghệ, 36(1), 10 – 12 [9] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Trần Như Quỳnh (2012), “Nghiên cứu vi khuẩn A xylinum tạo màng Bacteril Cellulose ứng dụng điều trị bỏng”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, 50 (4), 453-462 [10] Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu chế tạo màng cellulose trị bỏng từ Acetobactor xylinum”, đề tài KH&CN cấp Bộ Y tế [11] Đàm Thị Thủy (2013), “Nghiên cứu bào chế viên nén Diclofenac natri giải phóng nhanh theo chế nhũ hóa”, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ 41 [12] Tơn Đức Q (2013) “Khảo sát tình hình sử dụng thuốc kháng viêm giảm đau không steroid điều trị BV đa khoa tỉnh Hà Tĩnh”, báo cáo Hà Nội Tài liệu tiếng Anh [13] Brown E (2007), “Bacterial cellulose/Themoplastic polymer nanocomposites”, Master of sience in chemical engineerin, Washington state university [14] Choi Y et al (2004), “Preparation and characterization of acrylic acid treated bacterial cellulose cation exchange membrane”, J Chem Technol Biotechnol, 79, 79-84 [15] Hestrin S., Schramm M (1954), “Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum, Preparation of freeze-dried cells capable of polymerizing glucose to cellulose”, Biochem J 58(2): 345-352 [16] Huang L et al (2013), "Nano-cellulose 3D-networks as controlled-release drug carriers", Journal of Materials Chemistry B (Materials for biology and medicine), 1, 2976-2984 [17] Kyle A.et al (2008), “Examination of metformin hydroclorid in a continuous dissolution/ HDM system”, Int.J.Pharmaceutics, 351, 127 – 132 [18] Pinto R.J et al (2009), “Antibacterial activity of nanocomposites of silver and bacterial or vegetable cellulosic fibers”, Acta Biomater, 5, 2279–2289 [19] Thanh Xuan Nguyen et al (2014), “Chitosan – coated nano – liposomes for the oral delivery of berberin hydrochloride”, J.Mater.Chem.B, 2, 7149 – 7159 Tài liệu từ mạng Internet [20].http://ykhoanet.azurewebsites.net/duoc/duocpham/tracuu/DM0024 68.htm [21] https://hellobacsi.com/thuoc/diclofenac 42 ... cứu so sánh khả giải phóng thuốc vật liệu BC loại mơi trường nuôi cấy Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: So sánh khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng BC lên men từ loại môi. .. thấy thuốc giải phóng với tốc độ chậm Với mục đích nghiên cứu để bổ sung dẫn chứng khả giải phóng thuốc Diclofenac natri vật liệu BC, chọn đề tài:? ?Nghiên cứu so sánh khả giải phóng thuốc vật liệu. .. liệu cellulose nạp Diclofenac natri tạo từ Gluconacetobacter xylinus số môi trường nuôi cấy” Mục đích nghiên cứu - Ni cấy màng BC lên men từ loại môi trường (MT chuẩn, MT gạo, MT dừa) - Nghiên cứu