Khóa luận khảo sát thành phần hóa học cao etyl acetat của cây nam sâm đứng boerhaavia erecta l họ bông phấn (nyctaginaceae

LỜI MỞ ĐẦU Từ xa xưa người sử dụng nhiều loại cỏ hợp chất trích ly từ cỏ để làm hương liệu, gia vị thực phẩm, màu tự nhiên,…đặc biệt sử dụng để làm thuốc chữa bệnh Trong y học cổ truyền có nhiều thuốc giá trị mà khám phá phần Có đến 80% hoạt chất sử dụng làm thuốc y học đại chất có nguồn gốc tự nhiên, chất tổng hợp bán tổng hợp dựa cấu trúc hóa học hợp chất tự nhiên Vì vậy, việc nghiên cứu, tìm kiếm thuốc từ nguồn gốc tự nhiên quan tâm Chi Boerhaavia, họ Bơng phấn (Nyctaginaceae), có khoảng 40 lồi, Việt Nam, theo tài liệu tìm thấy khoảng loài Một số loài thuộc chi Boerhaavia sử dụng y học cổ truyền nhiều nước giới để chữa trị nhiều loại bệnh viêm nhiễm, kháng u bướu, kháng tế bào ung thư, kháng virút, … Các nghiên cứu hóa – dược cho thấy chi Boerhaavia chứa nhiều loại hợp chất hữu có hoạt tính sinh học hấp dẫn triterpen, steroid, glycoside, flavonoid, alkaloid, Tuy nhiên, thuộc chi Boerhaavia giống hình dáng bên lại chưa nghiên cứu áp dụng vào thực tế Việt Nam Cây Boerhaavia erecta L loài phân bố rộng rãi nước ta, loài chịu hạn dễ sống phát tán sinh sơi nảy nở dễ dàng Với hoạt tính hấp dẫn thuận lợi nuôi trồng thật nguồn dược liệu quý giá Mục tiêu đề tài nghiên cứu thành phần hóa học Nam sâm đứng Boerhavia erecta L thu hái Thủ Đức cách cô lập xác định cấu trúc hóa học hợp chất hữu có cây; tiến hành so sánh đặc tính hóa thực vật với chi Hy vọng kết nghiên cứu mang lại hiểu biết mặt hóa – dược Boerhaavia erecta L làm tăng giá trị ứng dụng vào thực tế sống DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT br: rộng (broad) C: cloroform d: mũi đôi (doublet) dd: mũi đôi - đôi (doublet-doublet) DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer EA: etyl acetat ED: eter dầu hỏa H: hexan HSQC: tương quan H-C qua nối (Heteronuclear Single Quantum Correlation) HMBC: tương quan H-C qua 2, nối (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) M: metanol N: nước NMR: phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) s: mũi đơn (singlet) CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC TÍNH THỰC VẬT 1.1.1 Tổng quan chi Boerhaavia Chi Boerhaavia[17] có khoảng 40 loài, bao gồm lâu năm năm Cây mọc thẳng đứng, nghiêng bò sát mặt đất, phân bố rộng rãi vùng có khí hậu nhiệt đới, cận nhiệt đới số nước vùng ơn đới Chúng tìm thấy Úc, Trung Quốc, Ai Cập, Pakistan, Sudan, Sri Lanka, Nam Phi, Mỹ vài nước Trung Đông Trong đó, Việt Nam xác định lồi thuộc chi Boerhaavia Boerhaavia diffusa Linn (Nam sâm bò), Boerhaavia erecta L (Nam sâm đứng), Boerhaavia chinensis (Nam sâm Trung Quốc)[3] Boerhaavia tetrandra Boerhaavia linearifolia Boerhaavia wrightii Boerhaavia coccinea Boerhaavia triquetra Boerhaavia erecta Boerhaavia diffusa Boerhaavia coulteri Boerhaavia gracillima Boerhaavia herbstii Boerhaavia intermedia Boerhaavia purpurascens Boerhaavia pterocarpa Boerhaavia repens Boerhaavia chinensis Hình 1.1: Một số thuộc chi Boerhaavia 1.1.2 Mô tả thực vật Boerhaavia erecta L.[3, 20] Cây Nam sâm đứng có tên khoa học Boerhaavia erecta L loại thảo mộc thuộc chi Boerhaavia, họ Bông phấn (Nyctaginaceae) (họ Bốn giờ), nhóm Hai mầm, thuộc ngành Cây hạt kín Nam sâm đứng loại cỏ mảnh, cao 40-80 cm, mọc thẳng đứng rủ xuống nách chồi, có lơng mịn chót Lá hình trứng dạng elip, phiến xoan tròn dài đến thon, đáy tròn hay cắt ngang, kích thước 2-3,5× 1-2,5 cm, mặt trắng có bột có tuyến, mặt phía xanh, cuống dài 1-4 cm Chùm tụ tán dài; nhánh chót mang tụ tán hoa; cọng hoa 15-20 mm; bao hoa trắng, hồng hay đỏ, dài 1,5-2 mm; tiểu nhụy 1-2 thùy Hoa hình chùy lật ngược, cao mm, có cánh to, hạt nhiều Hình 1.2: Hoa, rễ Boerhaavia erecta L Cây nam sâm đứng phân bố vùng có khí hậu nhiệt đới cận nhiệt đới giới Là loài liên nhiệt đới, mọc hoang khắp nơi vườn, sân, bờ đường hay bãi cỏ… Ở Việt Nam mọc nhiều vùng Bình Thuận, Ninh Thuận, Ninh Hịa, Phú n,… vùng đất cát, khơ cằn 1.2 NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH CỦA CHI BOERHAAVIA Cho đến nay, nghiên cứu ứng dụng vào y học tập trung chủ yếu vào loài chi Nam sâm bò (Boerhaavia diffusa L.), Boerhaavia erecta sử dụng làm thuốc nhiều nơi giới, nghiên cứu cụ thể dược tính cịn Thân Boerhaavia diffusa người dân số nước Ấn Độ, Sri Lanka, Việt Nam để nấu ăn rau Lá có tác dụng hoạt huyết giải độc Rễ có tác dụng tăng lượng nước tiểu với liều cao gây nơn mửa nhiều mồ hơi; cịn có tác dụng trấn tĩnh (về mặt thần kinh) Rễ dùng để chữa bệnh gãy xương (Nepan) (dùng toàn hay kết hợp với loại khác); chữa rắn cắn thấp khớp (Sri Lanka); Đông Phi dùng để chữa bỏng chữa áp xe; Brasil số nơi khác người ta dùng để chữa bệnh gan lách, bệnh túi mật, bệnh thận chữa viêm nhiễm bên Ở Ấn Độ người ta dùng làm thuốc chữa nhiều bệnh[18] chữa đau bao tử, trừ giun sán, thuốc hạ sốt, chữa phong, chữa bệnh lậu, chứng khó tiêu, chứng phù nề, vàng da, thiếu máu, điều hòa kinh nguyệt Rễ dùng làm thuốc lợi tiểu nhuận tràng với liều dùng 15 g/ngày, ngày dùng hai lần Có nơi dùng chữa ho dạng thuốc bột, thuốc sắc thuốc pha uống trà (10 g/1 lít nước sơi), pha rượu dùng 2-5 g bột rễ ngày Có nhiều nghiên cứu dược lý Boerhaavia diffusa L thực giới cụ thể như: nghiên cứu khả chữa bỏng[12]; khả lợi tiểu điều hòa huyết áp[24,59]; khả nhuận tràng[40]; khả chống co giật[6]; khả chống nhiễm độc gan[52]; dùng để chữa triệu chứng bệnh thận[38,58]; bệnh gan, túi mật đường tiểu[15,16]; khả miễn dịch kháng khuẩn[9,10,37,41,44,56,60]; khả chống co thắt[21]; khả giảm đường huyết cao nước lá[42,47] Năm 2003, Ấn Độ, Rupjyoti Bharali cộng sự[53] tiến hành nghiên cứu khả ngăn ngừa ung thư da chuột dịch chiết thân Boerhaavia diffusa ban đầu cho thấy dịch chiết thân có khả ngăn ngừa hình thành tác nhân gây ung thư da Năm 2007, có nghiên cứu chuột khả chống stress dịch chiết metanol cây[35,51] nhận thấy cao metanol có khả chống stress, nghiên cứu sâu tiếp tục tiến hành Ngoài người ta nghiên cứu chuột khả làm giảm đau[28] dịch chiết tươi Năm 2008, Nigeria, C.O.Ojowundu cộng sự[19] tiến hành nghiên cứu chất dinh dưỡng có Boerhaavia diffusa L báo cáo cho thấy hàm lượng vitamin khoáng chất cao (Bảng 1.2 1.3) Ngồi báo cáo cịn cho thấy Boerhaavia diffusa L có khả chống oxy hóa giảm stress cao Năm 2009, Tillán Hood cộng tiến hành nghiên cứu để xác định tác dụng dịch nước chiết xuất từ Boerhaavia erecta L đến chức bảo vệ gan thể chuột Kết cho thấy dịch chiết có khả chống lại tổn thương gan thể chuột gây carbon tetracloride[31] Năm 2010, Ấn Độ, Rajeswari Krishnakumari tiến hành nghiên cứu để xác định tổng lượng phenol flavonoid dịch chiết xuất methanol Boerhavia erecta L., hợp chất quan trọng đóng vai trị chất chống oxy hóa, chống ung thư,… Kết nghiên cứu cho thấy có lượng đáng kể phenol flavonoid[45] Bảng 1.1: Tổng hàm lượng phenol flavonoid Thành phần thực vật Hàm lượng (mg/100 mg) Tổng lượng phenol 85.90 ± 1.97 Tổng lượng flavonoid 11.39 ± 0.86 Ở nước ta, dân gian, Nam sâm bò sử dụng để chữa hen suyễn, phù thũng, thiếu máu, ho làm thuốc nhuận tràng[2], chưa có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học dược tính mọc Việt Nam 1.2 NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Hàm lượng thành phần, vitamin khống chất Nam sâm bị Nigeria[19] Bảng 1.2: Hàm lượng thành phần có Nam sâm bò Thành phần Hàm lượng (%) Protein 2.26 ± 0.02 Chất béo 1.61 ± 0.06 Carbohydrat 10.56 ± 0.12 Chất xơ 2.40 ± 0.03 Độ ẩm 82.22 ± 4.16 Tro 0.96 ± 0.01 Bảng 1.3: Hàm lượng vitamin có Nam sâm bị Loại vitamin Hàm lượng (mg/100g) Vitamin C 44.80 ± 5.78 Vitamin B3 97.00 ± 8.01 Vitamin B2 22.00 ± 4.25 Bảng 1.4: Hàm lượng khống chất có Nam sâm bị Khống chất Hàm lượng (mg/100gr) Natri 162.50 ± 4.56 Kali 0.91 ± 0.07 Calci 174.0 ± 2.73 Sắt 0.012 ± 0.001 Magie 8.68 ± 0.06 Mangan 0.43 ± 0.02 Iod 0.02 ± 0.00 Nhôm 0.46 ± 0.03 Đồng Không phát Kẽm Khơng phát 1.2.2 Cấu trúc hóa học số hợp chất cô lập từ chi Boerhavia  Steroid H OH 2299 28 24 2233 221 1199 1122 1188 11 HO H 10 88 55 77 2255 2200 H OH 26 17 1166 155 133 144 H HO HO β-Sitosterol [32,49] Campesterol 23 12 18 H OH O O 11 H 22 110 77 13 14 22 22 26 17 16 15 OH β-Sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside (Daucosterol)[32,49] 23 2255 22 20 O Ecdysone[32] [32] 24 21 119 H 29 28 HO H HO H HO H H OH 66 44 227 222 H H OH HO HO H O O OH β-Stigmasterol 3-O-β-D-glucopyranoside[32] 2233 2222 H H H H OH O HO H HO H HO Stigmasterol[32] O OH Campesterol 3-O-β-D-glucopyranoside[32]  Triterpen O H COOH HO O O H H O OH O O HO H H OH [32,49] Ursolic acid Boerhavisterol Boerhavilanostenyl benzoate[11] [11]  Flavonoid H3 OCH HO 10 H3 C H 7a O 6aa D C B 11 12 11aa 2aa 1aa OH O 11 OH HO O O A OH OH O Boeravinone B[8,27,34] O HO H O O Boeravinone D[8,27,34] H OH Boeravinone C[8,27,34] O HO H O H3C O O OH H33C H OH H H H OH H3 C H H3C H3 OCH O O O 4a Boeravinone A[8,27,34] HO H 3C O OH H OH O O H3C O H OH [8,27,34] Boeravinone E H OH O H OH Boeravinone F[8,27,34] PHỤ LỤC 4C- PHỔ HMBC CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 5- PHỔ 1H-NMR CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 5A- PHỔ 1H-NMR CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 5B- PHỔ 1H-NMR CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 5C- PHỔ 1H-NMR CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 6- PHỔ 13C-NMR CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 6A- PHỔ 13C-NMR CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 7- PHỔ DEPT-NMR CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 8- PHỔ HSQC CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 8A- PHỔ HSQC CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 9- PHỔ HMBC CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 9A- PHỔ HMBC CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 9B- PHỔ HMBC CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 9C- PHỔ HMBC CỦA HỢP CHẤT PHỤ LỤC 9D- PHỔ HMBC CỦA HỢP CHẤT ... phạm vi khóa luận này, khảo sát phân đoạn cao etyl acetat Trong thời gian tới, tiếp tục tiến hành khảo sát thành phần hóa học thử hoạt tính sinh học phân đoạn cao lại cao etyl acetat loại cao khác... L.[ 3, 20] Cây Nam sâm đứng có tên khoa học Boerhaavia erecta L loại thảo mộc thuộc chi Boerhaavia, họ Bơng phấn (Nyctaginaceae) (họ Bốn giờ), nhóm Hai mầm, thuộc ngành Cây hạt kín Nam sâm đứng loại... dầu hỏa (15.55%), cao etyl acetat (10,24%) cao metanol lại (65,31%) Cao etyl acetat lựa chọn để nghiên cứu khóa luận Từ cao etyl acetat, phương pháp sắc ký cột silica gel tách thành phân đoạn Phân