PHÂN TÍCH DI TRUYỀN BỘ NHIỄM SẮC THỂ NGƯỜI I Mục tiêu Kiến thức thu được sau bài học này Trình bày được các nguyên tắc chính để làm tiêu bản NST người Trình bày được các đặc điểm chính của bộ NST người, Quan sát được biến đổi của bộ NST người trên các tiêu bản
PHÂN TÍCH DI TRUYỀN BỘ NHIỄM SẮC THỂ NGƯỜI I Mục tiêu Kiến thức thu sau học này: - Trình bày ngun tắc để làm tiêu NST người - Trình bày đặc điểm NST người - Quan sát biến đổi NST người tiêu II Các nguyên tắc nhuộm băng NST 1 Kỹ thuật nhuộm chuẩn Thuốc nhuộm hay dùng giemsa, có nhiều loại giemsa khác tùy theo hãng sản xuất, pha nhuộm phải thăm dò nồng độ thích hợp Ví dụ dùng: Giemsa RAL: ml Đệm phôtphat pH 6,5: ml Nước cất vừa đủ đến: 100 ml Có thể dùng thuốc nhuộm khác orcein, xanh toludin, tím crosyl Các kỹ thuật băng Các kỹ thuật băng giúp cho định loại nhiễm sắc thể xác phát nhiều cấu trúc nhiễm sắc thể Có nhiều kỹ thuật băng khác nhau, băng thông thường băng Q, băng G, băng C, băng T Băng Q Đây loại băng mô tả (Casperson cộng -1963) Tiêu nhiễm sắc thể nhuộm dung dịch quinacrine - dihydroclorid 0,5% quinacrine-mustard 0,05%, quan sát kính hiển vi huỳnh quang với lọc kính kích thích I, lọc chắn 53 47 Kỹ thuật dùng, dùng để quan sát nhiễm sắc thể Y vài chi tiết nhiễm sắc thể khác phần tâm động nhiễm sắc thể số Sau nhuộm nhiễm sắc thể, quan sát kính hiển vi huỳnh quang, thấy băng sáng băng tối xen kẽ nhiễm sắc thể, số lượng, kích thước, vị trí băng đặc trưng cho nhiễm sắc thể Băng G Để xuất băng G, có nhiều kỹ thuật khác nhau: dùng tác động enzym tiêu protein Trypsin, -chymotrypsin, Protease, xử lý ion kỹ thuật ASG Nguyên tắc kỹ thuật enzyme cho tiêu vào dung dịch enzyme (như Trypsin) với nồng độ thời gian khác tuỳ theo tác giả tùy theo tiêu bản, sau nhuộm Giemsa Có tác giả trộn lẫn Trypsin Giemsa để xử lý tiêu lúc Nguyên tắc kỹ thuật ASG Xử lý tiêu qua giai đoạn định hình hỗn hợp metanol - axit axetic xử lý ion dung dịch NaOH sau nhuộm Giemsa Sau xử lý nhuộm, quan sát tiêu kính hiển vi quang học thấy băng sẫm nhạt nhiễm sắc thể, số lượng, kích thước, vị trí, mức độ bắt màu đặc trưng cho nhiễm sắc thể Băng R Ủ tiêu dung dịch earle có pH 6,5 87ºC khoảng 10-40 phút tuỳ theo tiêu hay cũ Sau nhuộm tiêu giemsa, quan sát kính hiển vi quang học Các băng sẫm nhạt xuất nhiễm sắc thể trái ngược với băng G Băng C Có nhiều kỹ thuật khác để làm xuất băng C, nguyên tắc chung xử lý tiêu dung dịch muối urê nhiệt độ cao, sau nhuộm Giemsa Quan sát tiêu kính hiển vi quang học Kỹ thuật nhuộm đặc hiệu chất dị nhiễm sắc phần tâm, eo thứ cấp nhiễm sắc thể 1, 9, 16 vai dài nhiễm sắc thể Y Băng T Kỹ thuật cải tiến từ kỹ thuật băng R, pH dung dịch muối 4,9 ,5 Nó nhuộm đặc hiệu cho phần cuối nhiễm sắc thể Quy tắc phân loại NST người Hệ thống tiêu chuẩn danh pháp nhiễm sắc thể người mitose Danh pháp NST người sau (theo Grouchy Turleau, 1977): A - G: Các nhóm nhiễm sắc thể - 22: Số hiệu nhiễm sắc thể thường X, Y: Các nhiễm sắc thể giới tính Ví dụ: 46, XY: Kiểu nhân nam giới bình thường 46, XX: Kiểu nhân nữ giới bình thường 45, X: Kiểu nhân có 45 nhiễm sắc thể có nhiễm sắc thể giới tính X (hội chứng Turner) 47, XXY: Kiểu nhân có 47 nhiễm sắc thể ba nhiễm sắc thể giới tính dấu (+) (-): Đặt trước số hiệu nhiễm sắc thể biểu thị nhiễm sắc thể thừa thiếu Ví dụ: 47, XY, +21: nam có ba nhiễm sắc thể số 21 (trisomi 21 nam giới) 45, XX -21: Nữ có nhiễm sắc thể số 21 (monosomi 21 nữ giới) 69, XXY: Tế bào tam bội Dấu (/) : Dấu gạch chéo phân cách dòng tế bào trạng thái khảm Ví dụ: 45, X / 46, XY p: Vai ngắn nhiễm sắc thể q: Vai dài nhiễm sắc thể s: Vệ tinh ( satellite) hay thể kèm cen: Tâm động h: Eo thứ cấp ( nucleolar constriction ) Dấu (+) (-): Đặt sau ký hiệu vai biểu thị tăng giảm chiều dài vai Ví dụ: 46, XX, 18p-: đoạn vai ngắn nhiễm sắc thể số 18 Số La tinh sau ký hiệu vai: Trên nhiễm sắc thể băng chia thành miền giới hạn với dải băng (gọi miền) - dải băng kí hiệu số hàng chục Trên dải băng lại chia băng phân biệt với nhau, chúng kí hiệu số hàng đơn vị (gọi băng) Các miền băng ghi số thứ tự 1, 2, lấy từ phần tâm động làm mốc Ví dụ: 5p23 vị trí băng miền vai dài nhiễm sắc thể số Del: Mất đoạn nhiễm sắc thể (deletion) Ví dụ: 46,XX, del (9) (q32) đoạn vai dài nhiễm sắc thể số vị trí băng miền (:): Biểu thị điểm đứt gẫy nhiễm sắc thể (::): Biểu thị nhiễm sắc thể dứt gẫy nối lại Ter: Đầu xa nhiễm sắc thể (terminal) inv: Đảo đoạn (inversion) Ví dụ: 46, XY, inv (3) (p13 p23) đảo đoạn vai ngắn nhiễm sắc thể số đứt nối lại băng 43 23 r: Nhiễm sắc thể vòng (ring chromosme) i : Nhiễm sắc thể vai đứt đoạn thêm đoạn (isobrachial) dic: Nhiễm sắc thể có tâm động (dicentric) dup: Lặp đoạn (duplication) t: Chuyển đoạn (translocation) Ví dụ: 46, XY, t(3q-, 2p+) chuyển đoạn tương hỗ đoạn nhánh dài NST số đoạn nhắnh ngắn NST số 2.2 Một số đặc điểm nhóm NST NST người Nhóm A: Gồm cặp số 1, o Cặp số 1: có chiều dài 11 , tâm động gần (p q) Eo thứ cấp gần tâm động nằm vai dài o Cặp số 2: dài 10,8 , tâm động gần (p o Cặp số 3: dài 8,3 , tâm cân (p q) q) Nhóm B: gồm cặp Chiều dài 7,7 , tâm lệch (p < q) Nhóm C: gồm cặp 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, NST X (hoạt động) o Đôi số 6: dài 7,2 , vai ngắn có eo thứ cấp , tâm lệch (p < q) o Đôi số dài đôi số chút, tâm động gần o NST X: tuỳ theo giai đoạn hoạt động mà có chiều dài thay đổi giới hạn nhóm C Khi hoạt động thường có kích thước lớn, tâm động gần NST X bất hoạt tạo thể Bar gian kì, thấy dễ dàng nhuộm giêmsa o Đôi số 9: dài 5,8 , NST số có tâm động cận đơi số 9, NST số có eo thứ cấp vai dài o NST số 10,11 12: có chiều dài khoảng 5,7 – 5,8 , tâm động cận Nhóm D: gồm đơi 13, 14 15 : dài 4,2 , tâm mút ( q >> p) vai ngắn kèm NST số 13 đơi có eo thứ cấp Nhóm E: gồm đối số 16, 17 18 : o Đôi số 16 dài 3,6 , tâm lệch (p < q), vai dài có eo thứ cấp o Đôi số 17 ngắn đôi số 16, tâm lệch (p < q) o Đôi số 18: dài 3,2 , tâm lệch (p < q) Nhóm F: gồm đơi số 19 20: dài 2,9 , tâm cân (p q) Nhóm G: gồm đơi số 21 22 : dài 2,3 , tâm mút (p