Bước đầu ứng dụng kỹ thuật luminex single antigen beads để theo dõi kháng thể đặc hiệu HLA ở người bệnh suy thận mạn được lọc huyết tương trước ghép thận

Bài viết Bước đầu ứng dụng kỹ thuật luminex single antigen beads để theo dõi kháng thể đặc hiệu HLA ở người bệnh suy thận mạn được lọc huyết tương trước ghép thận trình bày xác định loại kháng thể (KT) kháng HLA đặc hiệu với kháng nguyên (KN) người cho ở người bệnh suy thận mạn được lọc huyết tương trước ghép thận tại Bệnh viện HN Việt Đức.

TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 BƯỚC ĐẦU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT LUMINEX SINGLE ANTIGEN BEADS ĐỂ THEO DÕI KHÁNG THỂ ĐẶC HIỆU HLA Ở NGƯỜI BỆNH SUY THẬN MẠN ĐƯỢC LỌC HUYẾT TƯƠNG TRƯỚC GHÉP THẬN Lưu Thị Tố Uyên1, Vi Quỳnh Hoa1, Vũ Anh Đức1, Phạm Đắc Trường1, Đỗ Thị Nga1 TÓM TẮT 28 Mục tiêu: Xác định loại kháng thể (KT) kháng HLA đặc hiệu với kháng nguyên (KN) người cho người bệnh suy thận mạn lọc huyết tương trước ghép thận Bệnh viện HN Việt Đức Đối tượng phương pháp : 03 người bệnh suy thận mạn theo dõi KT kháng HLA cường độ huỳnh quang tương ứng trước sau lọc huyết tương bệnh viện Việt Đức Kết nghiên cứu: 03 người bệnh có KT đặc hiệu với người cho (DSA), sau lọc huyết tương: Người bệnh 01 có KT anti-A*33 có MFI giảm từ 2336 xuống 576; Người bệnh 02 có KT anti-B*46 có MFI giảm từ 3330 xuống 1929; Người bệnh 03 có KT anti-B*44 có MFI giảm từ 5030 xuống 1313 03 người bệnh sau tiến hành ghép thận, theo dõi sau ghép Hiện thận ghép bệnh nhân theo thứ tự sau năm, năm, tháng ổn định Kết luận: Cả người bệnh sau lọc huyết tương có MFI DSA 2000, mức KT thấp, thuận lợi cho ghép thận Phương pháp lọc huyết tương kết hợp với việc theo dõi KT huyết người bệnh kỹ thuật L-SAB làm tăng hội ghép thận người bệnh có Bệnh viện Hữu Nghị Viện Đức Chịu trách nhiệm chính: Lưu Thị Tố Uyên SĐT: 0975.857.166 Email: uyenltt.vd@gmail.com Ngày nhận bài: 18/8/2022 Ngày phản biện khoa học: 18/8/2022 Ngày duyệt bài: 21/9/2022 xét nghiệm KT kháng HLA dương tính mức độ trung bình cao Từ khóa: Luminex, single antigen beads, kháng thể kháng HLA, ghép thận SUMMARY INITIAL APPLICATION OF LUMINEX SINGLE ANTIGEN BEADS TECHNIQUE TO MONITOR HLASPECIFIC ANTIBODIES IN PATIENTS WITH CHRONIC KIDNEY FAILURE UNDERGOING PLASMAPHERESIS PRIOR TO KIDNEY TRANSPLANTATION Objectives: To identify donor-specific antiHLA antibodies in patients with chronic renal failure undergoing plasmapheresis prior to kidney transplantation at Viet Duc hospital Subjects and methods: 03 patients with chronic renal failure were monitored for anti-HLA antibodies and corresponding fluorescence intensity before and after plasmapheresis at Viet Duc hospital Research results: 03 patients had donor-specific antibodies (DSA), after plasmapheresis: Patient 01: MFI of anti-A*33 antibodies had decreased from 2336 to 576; Patient 02: MFI of anti-B*46 antibodies had decreased from 3330 to 1929; Patient 03: MFI of anti-B*44 antibodies had decreased from 5030 to 1313 03 patients then underwent kidney transplantation, followed up post-transplant Currently, the transplanted kidneys of patients are stable after years, years and months 251 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU respectively Conclusion: All patients after plasmapheresis had an MFI of DSA below 2000, which is a safe level for kidney transplantation Plasma filtration method combined with monitoring of antibodies in the patient's serum by L- SAB increases the chance of a kidney transplant in patients with a positive anti-HLA antibody test Keywords: Luminex, single antigen beads, anti-HLA antibody, kidney transplant I ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, ghép thận xem giải pháp thay hiệu điều trị bệnh suy thận mạn giai đoạn cuối Tuy nhiên với người bệnh có KT kháng HLA dương tính, việc tìm thận ghép hồ hợp vơ khó khăn huyết người bệnh có KT chống lại nhiều loại KN khác Để giảm thời gian chờ đợi nâng cao chất lượng sống cho người bệnh này, lọc huyết tương giải pháp lựa chọn để làm giảm số lượng KT cường độ huỳnh quang tương ứng, đặc biệt KT đặc hiệu với người cho huyết người bệnh Xét nghiệm KT kháng HLA sinh phẩm KN đơn với công nghệ Luminex giúp định danh xác loại KT tương ứng huyết người bệnh, đặc biệt KT đặc hiệu với KN người cho (DSA), đồng thời xác định giá trị cường độ huỳnh quang trung bình KT, từ giúp phân biệt KT mức độ mạnh, trung bình, 252 yếu Kỹ thuật kết hợp với phương pháp chẩn đoán khác tiền sử bệnh lý người bệnh công cụ quan trọng việc điều trị quản lý người bệnh suy thận mạn có xét nghiệm KT kháng HLA dương tính Trong nghiên cứu chúng tơi báo cáo ba trường hợp người bệnh ghép thận có xét nghiệm định danh KT kháng HLA trước ghép dương tính Người bệnh sử dụng xét nghiệm định danh KT kháng HLA phương pháp L-SAB để sàng lọc trước ghép theo dõi hiệu phương pháp lọc huyết tương II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu: 03 người bệnh suy thận mạn có kết KT kháng HLA dương tính mức trung bình cao lọc huyết tương điều trị Bệnh viện HN Việt Đức 2.2 Phương pháp tiến hành: người bệnh xét nghiệm định danh KT kháng HLA kỹ thuật Luminex L-SAB: - Lần 1: Để xác định KT đặc hiệu (DSA) MFI tương ứng MFI > 8000 (mức cao), 2000 < MFI < 8000 (mức trung bình), MFI < 2000 (mức thấp) - Lần tiếp theo: Người bệnh có MFI >2000 tiến hành lọc huyết tương theo dõi MFI trước sau lọc Khi MFI 2000, người bệnh làm thủ tục xét ghép thận TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Bảng 1: Kết HLA người cho KT kháng HLA đặc hiệu người bệnh Cặp ghép số Cặp ghép số Cặp ghép số HLA người DSA người HLA người DSA người HLA người DSA người cho nhận cho nhận cho nhận A*11;A*33 Anti-A*33 A*24;A*24 Không A*33;A*33 Không Lớp1 B*15;B*44 Không B*15;B*46 Anti-B*46 B*44;B*58 Anti-B*44 DRB1*07; DRB1*09; DRB1*03; Lớp2 Không Không Không DRB1*12 DRB1*15 DRB1*07 Nhận xét: Ở cặp ghép, người nhận có KT đặc hiệu kháng KN người cho Bảng Kết định danh KT kháng HLA kỹ thuật L-SAB trước sau lọc huyết tương Nguyễn Thị H-70T LTrước Sau Trước Sau Trước Sau KT KT KT SAB (MFI) (MFI) (MFI) (MFI) (MFI) (MFI) Cw1 7771 3479 A29 2790 A25 2466 B58 6437 1414 Cw10 2773 1242 A34 2437 B57 6063 1666 A74 2557 A33 2336 576 Lớp A23 2957 819 A31 2550 Cw18 2092 964 A32 2947 A66 2537 A43 2083 Cw9 2946 1271 A69 2502 3134 A26 1962 A24 2812 2797 A25 2466 DR53 1130 2625 Lớp DR4 658 1936 DR9 531 Nhận xét: Còn 12 KT sau lọc huyết tương so với 23 KT ban đầu - MFI KT anti-A*33 (DSA) từ 2336 giảm xuống 576 sau lọc huyết tương Bảng Kết định danh KT kháng HLA kỹ thuật L-SAB trước sau lọc huyết tương Nguyễn Bích Ng-59T LSAB KT Lớp B71 A32 B35 B56 B50 B76 B53 Trước (MFI) 5790 5052 4995 4938 4573 4535 4495 Sau (MFI) 6132 2467 4117 6246 6089 2175 3242 KT B75 B13 B78 B51 B72 B52 B46 Trước (MFI) 3963 3682 3597 3561 3379 3342 3330 Sau (MFI) 3961 3439 2440 3457 6459 2648 1929 KT B62 A3 B59 B38 B82 A25 - Trước (MFI) 2502 2389 2309 1893 1356 1098 - Sau (MFI) 6163 253 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU B77 B63 B58 DR12 DR18 DR17 DQ2 DP9 DR52 DP17 4483 4036 B57 3080 3775 4394 4551 B49 2743 5451 4198 2420 Cw15 2655 5033 4887 DP14 3881 1831 DP5 3063 4898 2998 DP3 3829 1972 DR7 2996 4382 4604 2931 DP20 3786 DP11 2778 4270 3384 DP6 3598 1880 DR16 2679 2130 Lớp 4216 1974 DR51 3521 2331 DP10 2673 4062 4149 DP1 3232 DP13 2560 4015 1777 DP19 3198 DQ7 2548 3047 DR11 1547 Nhận xét: Còn 34 KT sau lọc huyết tương so với 48 KT ban đầu - MFI KT anti-B*46 (DSA) từ 3330 giảm xuống 1929 sau lọc huyết tương Bảng Kết định danh KT kháng HLA kỹ thuật L-SAB trước sau lọc huyết tương Trịnh Bá D-32T LTrước Sau Trước Sau Trước Sau KT KT KT SAB (MFI) (MFI) (MFI) (MFI) (MFI) (MFI) A2 29993 23422 B60 25279 16616 CW17 4923 A68 28349 19288 B27 23437 13945 B45 4666 A23 27761 19057 A66 23373 13643 CW5 4395 A69 27599 15819 B48 21813 12009 B41 4320 A24 27526 16364 A1 21724 7029 B51 4205 Lớp B76 26777 9100 B81 21547 12972 B75 4098 B61 26204 16942 B13 18553 9804 CW8 3164 A80 25714 10644 B47 18298 8758 B78 2751 B73 25713 13275 CW2 13599 5790 B18 2588 B7 25627 16050 B44 5030 1313 DR8 20357 6351 DP9 6877 DP3 5737 DR13 13295 3672 DP14 6725 DP20 5282 DQ6 11835 2843 DP17 6322 DP19 5212 Lớp DQ5 9850 3059 DP11 6199 1920 DP13 5187 DR4 9036 2088 DP1 6160 1737 DQ4 2790 DR11 8367 2325 DP6 6009 DP18 2035 DP5 7573 DP10 5910 Nhận xét: Còn 28 KT sau lọc huyết tương so với 49 KT ban đầu - MFI KT anti-B*44 (DSA) từ 5030 giảm xuống 1313 sau lọc huyết tương 254 TẠP CHÍ Y HỌC VIỆT NAM TẬP 520 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2022 Biểu đồ 1: MFI DSA trước sau lọc huyết tương người bệnh Nhận xét: Sau lọc huyết tương, cường độ huỳnh quang trung bình KT đặc hiệu với KN người cho người bệnh giảm xuống 2000 IV BÀN LUẬN Trong ghép tạng nói chung ghép thận nói riêng, biến chứng liên quan nhiều thất bại ca ghép thải ghép Cơ chế dẫn đến tượng thải ghép thường chế chính: miễn dịch qua trung gian tế bào với vai trò chủ yếu tế bào lympho T miễn dịch dịch thể liên quan đến tác dụng KT kháng HLA1 Thải ghép cấp liên quan đến KT kháng HLA xuất khoảng - 6% người bệnh Tuy nhiên khả tăng đến 21 - 55% người bệnh có KT kháng HLA đặc hiệu trước ghép người bệnh điều trị ức chế miễn dịch trước ghép2 Sự tái xuất tồn dai dẳng KT sau ghép đe dọa đến thận ghép thực chức Một số nghiên cứu gần cho thấy 60% ca thải ghép muộn có nguyên nhân liên quan đến KT kháng HLA, nguyên nhân hàng đầu gây sống chứa thận ghép3 Vì vậy, KT kháng HLA cần theo dõi từ trước ghép, điều trị giải mẫn cảm, sau tiếp xúc với yếu tố gây tăng nhạy cảm miễn dịch theo dõi điều trị sau ghép4 Kết bảng cho thấy, người bệnh có xét nghiệm KT kháng HLA đặc hiệu người cho theo thứ tự KT anti-A*33; anti-B*46; anti-B*44 Những người bệnh lọc huyết tương lần, đánh giá hiệu sau lọc huyết tương xét nghiệm L-SAB Những người bệnh có kết L-SAB dương tính với nhiều loại KT có nồng độ trung bình đến cao có hai bất lợi chính: (i) Kết đọ chéo thường dương tính nên người bệnh phải chờ lâu để tìm người hiến phù hợp (ii) Nồng độ KT cao có tác động bất lợi sống cịn mảnh ghép Tuy nhiên trường hợp có KT HLA đặc hiệu hội ghép thận hai cách: (i) lựa chọn người hiến không mang KN HLA tương ứng với KT kháng HLA người nhận (ii) sau người bệnh giải mẫn cảm Ở 03 người bệnh nghiên cứu điều trị giải mẫn cảm phương pháp lọc huyết tương để làm giảm nồng độ KT đặc hiệu Ở người bệnh 1: người bệnh tìm người cho Hai người cho có KN A*33, A*24 đặc hiệu với KT anti-A*33 (MFI=2336), KT anti-A*24 (MFI=2812) người bệnh Người bệnh lọc huyết 255 KỶ YẾU CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁU tương; làm lại xét nghiệm KT anti-A*33 giảm xuống mức thấp (MFI= 576), KT antiA*24 mức trung bình (MFI=2797), lựa chọn người cho thứ để tiến hành ghép thận Ở người bệnh thứ 2, 3: người bệnh ghép thận lần Theo bảng 3: Người bệnh thứ có kết KT anti-B*46 đặc hiệu với KN B*46 người cho Sau giải mẫn cảm MFI giảm từ 3330 xuống 1929 Theo bảng 4: Người bệnh thứ có kết KT anti-B*44 đặc hiệu với KN B*44 người cho Sau giải mẫn cảm MFI giảm từ 5030 xuống 1313 Những người bệnh ghép thận lần lại có KT đặc hiệu với người cho có nguy thải ghép cao nhiều so với người bệnh ghép thận lần 1, địi hỏi phác đồ điều trị trước sau ghép nghiêm ngặt Tuy nhiên, sau ghép năm với người bệnh thứ 2, tháng với người bệnh thứ tình trạng thận ghép ổn định Người bệnh thứ theo dõi chặt chẽ sau ghép Biểu đồ 1: Kết MFI DSA người bệnh sau lọc huyết tương giảm 2000 Với phương pháp lọc huyết tương việc giảm số MFI DSA cho tiêu chí đánh giá hiệu Dựa thực tế đánh giá DSA với MFI < 2500 khơng gây lắng đọng gây thiệt hại lâm sàng cho phẫu thuật Do đó, tùy thuộc vào sở, MFI DSA chấp nhận trước phẫu thuật vào khoảng 2000 ghép thận V KẾT LUẬN Trong nghiên cứu chúng tôi, người bệnh sau lọc huyết tương có MFI DSA 2000, mức an toàn để cấy ghép thận Cả người bệnh theo thứ tự sau 256 năm, năm, tháng thận ghép hoạt động tốt Như vậy, phương pháp lọc huyết tương kết hợp với việc theo dõi KT huyết người bệnh kỹ thuật L-SAB làm tăng hội ghép thận người bệnh có xét nghiệm KT kháng HLA dương tính mức độ trung bình cao, giảm thời gian chờ đợi thận ghép, góp phần nâng cao chất lượng sống cho người bệnh TÀI LIỆU THAM KHẢO Morath C, Opelz G, Zeier M et al Clinical relevalance of HLA antibody monitoring after kidney transplantation Journal of immunology research 2014, S 1-5lefaccher Lefaucher C, Loupy A, Hill GS et al.Preexitsing DonorSpecific HLA Antibodies Predict outcome in Kidney Transplantation Journal of the American Society of neuphrology.2010, Bd.21, 8, S.1398-1406 Einecke G, Sis B, Reeve J et al Antibodymediated microcirculation injury is the major cause of late kidney transplant failure Am J Transplant.9,2009,S.2520-31 Susal C, Opelz G,Morath C Role and value of Luminex- detected HLA antibodies before and after kidney transplantation Transfusion medicine and hemotherapy 40, 2013, S.1905 Nam, Hội ghép tạng Việt Hướng dẫn ghép tạng Việt Nam s.l.:NXB Y học, 2017 S.6 C Morath, J Beimler, G Opelz, et al An intergrative approach for the transplantation of high-risk sensitized patients Transplantation 90645-5 Nakamura T, Ushigome H, Watabe K, et al In-fluences of pre-formed donor-specific anti-human leukocyte antigen antibodies in living-donor renal transplantation: Results with graft Immunocomplex capture fluorescence analysis Transplantation Proceedings 2017; 49 (5): 955-958  ... hợp người bệnh ghép thận có xét nghiệm định danh KT kháng HLA trước ghép dương tính Người bệnh sử dụng xét nghiệm định danh KT kháng HLA phương pháp L-SAB để sàng lọc trước ghép theo dõi hiệu. .. QUẢ NGHIÊN CỨU Bảng 1: Kết HLA người cho KT kháng HLA đặc hiệu người bệnh Cặp ghép số Cặp ghép số Cặp ghép số HLA người DSA người HLA người DSA người HLA người DSA người cho nhận cho nhận cho... HLA tương ứng với KT kháng HLA người nhận (ii) sau người bệnh giải mẫn cảm Ở 03 người bệnh nghiên cứu điều trị giải mẫn cảm phương pháp lọc huyết tương để làm giảm nồng độ KT đặc hiệu Ở người bệnh