Luận án nghiên cứu độc tính và tác dụng điều trị suy giảm sinh dục đực của viên hoàn cứng td 0014 trên thực nghiệm

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Tỷ lệ vô sinh ngày gia tăng trở thành thách thức lớn y tế giới Trong năm 2010, ước tính có khoảng 48,5 triệu cặp vợ chồng tồn giới bị vô sinh [1], khoảng 40% số đó, nam giới xác định nguyên nhân góp phần gây nên vơ sinh [2] Suy sinh dục nguyên nhân gây nên tình trạng vơ sinh nam giới Suy giảm chức sinh dục nam (male sexual dysfunction) tình trạng bệnh lý có rối loạn giai đoạn hoạt động tình dục, bao gồm rối loạn ham muốn, rối loạn cương dương, rối loạn cực khoái, rối loạn xuất tinh giảm khả xìu dương vật; tình trạng xuất đơn độc phối hợp với [3] Đây tình trạng rối loạn bệnh lý thường gặp nam giới với tỷ lệ cao Kết nghiên cứu khảo sát cho thấy, có khoảng 31% nam giới gặp rối loạn chức sinh dục suốt đời họ [4] Tại Việt Nam, theo nghiên cứu Võ Văn Thắng cộng thực năm 2015 Thành phố Huế người đàn ông 20-60 tuổi lập gia đình, có tới 2/3 (66,9%) nam giới tham gia nghiên cứu có dấu hiệu rối loạn cương dương [5] Bệnh lý không gây tử vong, không cần xử trí cấp cứu ảnh hưởng nhiều đến tinh thần chất lượng sống bệnh nhân [6] Vì việc phát triển phương pháp dự phịng điều trị suy sinh dục nam trở thành mối quan tâm đặc biệt y học giới Việc áp dụng biện pháp điều trị giúp nâng cao sức khỏe sinh sản cải thiện chất lượng sống cho bệnh nhân Theo y học đại, phương pháp để điều trị suy sinh dục nam bao gồm liệu pháp thay testosteron biện pháp điều trị số triệu chứng bệnh rối loạn cương dương, rối loạn xuất tinh [8],[9] Tuy mang lại số hiệu định cải thiện triệu chứng chất lượng sống cho bệnh nhân, sử dụng thuốc theo y học đại có nhược điểm lớn nhiều tác dụng khơng mong muốn Vì vậy, nay, xu hướng phổ biến Việt Nam giới phát nghiên cứu thuốc điều trị có nguồn gốc từ dược liệu Theo y học cổ truyền (YHCT), có nhiều dược liệu sử dụng rộng rãi để tăng cường chức sinh dục nam giới nhục thung dung, ba kích, bá bệnh, nhân sâm, cá ngựa, v.v… [10] Sản phẩm TD0014 phối hợp 32 vị thuốc có nguồn gốc thảo dược nhung hươu, có tác dụng giúp bổ khí huyết, bổ thận, tráng dương, mạnh gân cốt, tăng cường sức đề kháng phục hồi sinh lực cho quan nội tạng tồn thân Thành phần TD0014 có số dược liệu nghiên cứu dùng để điều trị suy sinh dục nam: bạch tật lê, nhục thung dung, ba kích, bá bệnh, nhân sâm… Sản phẩm dạng thực phẩm chức sử dụng nhiều nam giới có sức đề kháng sức khỏe toàn thân suy giảm, sinh lý giảm sút, thận hư gây tiểu đêm nhiều lần, người uống nhiều bia rượu, người cao tuổi Tuy nhiên, nước ta, chưa có nghiên cứu cung cấp chứng khoa học đáng tin cậy tác dụng chức sinh dục độc tính sản phẩm TD0014 Vì vậy, để cung cấp chứng khoa học tính an tồn hiệu nhằm ứng dụng sản phẩm TD0014 điều trị suy sinh dục nam giới, đề tài “Nghiên cứu độc tính tác dụng điều trị suy giảm sinh dục đực viên hoàn cứng TD0014 thực nghiệm” thực nhằm mục tiêu sau đây: Xác định độc tính cấp, độc tính bán trường diễn viên hồn cứng TD0014 động vật thực nghiệm Đánh giá hoạt tính androgen tác dụng chức cương dương viên hoàn cứng TD0014 động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng viên hoàn cứng TD0014 chuột cống đực bị gây suy giảm sinh sản natri valproat Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan suy sinh dục nam theo y học đại 1.1.1 Định nghĩa nguyên nhân Năm 1993, Hội nghị Viện Sức khỏe Quốc gia Hoa Kỳ, thuật ngữ “rối loạn cương dương” (erectile dysfunction) đưa để thay cho cụm từ “bất lực” (impotence) – khái niệm suy sinh dục nam trước – để mô tả tình trạng rối loạn chức sinh dục nam giới [7] Rối loạn cương dương định nghĩa “khơng có khả cương dương, giai đoạn trình hoạt động tình dục nam giới” Tuy nhiên, với hiểu biết ngày đầy đủ giai đoạn hoạt động tình dục nam giới tiến mặt sinh lý bệnh, cụm từ “rối loạn cương dương” khơng cịn thích hợp để nói lên tất khía cạnh tình trạng suy giảm chức sinh dục nam giới Hiện nay, khái niệm suy giảm chức sinh dục nam mở rộng, định nghĩa tình trạng bệnh lý có rối loạn giai đoạn hoạt động tình dục nam giới, bao gồm rối loạn ham muốn, rối loạn cương dương, rối loạn cực khoái, rối loạn xuất tinh giảm khả xìu dương vật; tình trạng xuất đơn độc phối hợp với [3],[7] Các nguyên nhân tâm thần thực thể gây rối loạn giai đoạn hoạt động tình dục nam giới tổng hợp bảng 1.1 Bảng 1.1 Các nguyên nhân thường gặp gây suy giảm chức sinh dục nam [7] Biểu lâm sàng Định nghĩa Nguyên nhân thường gặp Rối loạn ham muốn Giảm ham muốn Tình trạng thiếu hụt khơng Tâm thần (trầm cảm, bất hịa nhân dẫn đến giảm ham cịn ham muốn, hứng thú muốn, lo âu thực dẫn đến ức chế hứng thú) hoạt động tình dục xảy kéo Bệnh thần kinh trung ương (động kinh cục bộ, Parkinson, sau đột dài tái diễn liên tục, dẫn đến quỵ, loạn dưỡng não chất trắng thượng thận) trạng thái mệt mỏi gặp khó Thiếu hụt androgen (nguyên phát thứ phát), kháng androgen khăn mối quan hệ Thuốc (hạ huyết áp, chống loạn thần, rượu, chất gây nghiện, chất cá nhân với [7] Hành vi tình dục cưỡng ức chế dopamin, kháng androgen) Các hành vi tình dục phức tạp có Tâm thần (tình dục ám ảnh cưỡng chế, tìm kiếm tình dục q mức tính chất lặp lại, dội không gắn với rối loạn cảm xúc, nghiện tình dục, cuồng dục) cưỡng lại [11] Rối loạn cương dương Tình trạng khơng có khả đạt Tâm thần (stress, lo âu thực hiện, trầm cảm, tâm thần phân liệt, trì độ cương cứng hoang tưởng tự cao) dương vật đủ để tiến hành Thuốc (hạ huyết áp, kháng cholinergic, chống loạn thần, hút thuốc giao hợp cách trọn vẹn [9] lá, chất gây nghiện) Biểu lâm sàng Định nghĩa Nguyên nhân thường gặp Bệnh toàn thân (bệnh tim mạch, gan, thận, phổi, ung thư, bệnh chuyển hóa, sau ghép tạng, xạ trị vùng chậu) Thiếu hụt androgen (nguyên phát thứ phát), kháng androgen, bệnh nội tiết khác Suy giảm chức mạch máu (xơ vữa động mạch, hội chứng pelvic steal, Raynaud dương vật, rò rỉ tĩnh mạch) Bệnh lý thần kinh (Parkinson, Alzheimer, Shy-Drager, tổn thương tủy sống dây thần kinh) Bệnh lý dương vật (Peyronie, cương đau dương vật kéo dài, hẹp bao quy đầu, rối loạn chức trơn, chấn thương) Rối loạn xuất tinh Xuất tinh sớm (nguyên Tình trạng luôn gần Tâm thần (lo âu/trầm cảm, không thỏa mãn hoạt động phát thứ phát) ln ln xuất tinh sớm tình dục trước đó, bất hịa mối quan hệ gia đình) vịng phút (xuất tinh sớm Thực thể (tăng hoạt động dopaminergic trung ương, tăng nhạy cảm nguyên phát) phút (xuất dương vật) tinh sớm thứ phát) kể từ đưa dương vật vào âm đạo; bệnh nhân Biểu lâm sàng Định nghĩa Ngun nhân thường gặp khơng có gần khơng có khả kiểm sốt xuất tinh; dẫn đến ảnh hưởng tâm lý tự ti, căng thẳng, bực bội né tránh quan hệ tình dục [12] Khơng xuất tinh xuất tinh muộn Có trì hỗn đáng kể Tổn thương thần kinh giao cảm (đái tháo đường, phẫu thuật, xạ trị) khả xuất tinh 75 – Thuốc (hủy giao cảm, ức chế thần kinh trung ương) 100% số lần hoạt động tình dục Thiếu hụt androgen (nguyên phát thứ phát), kháng androgen tháng mà khơng có trì hỗn theo mong muốn cá nhân, dẫn đến lo lắng, căng thẳng thân [13] Xuất tinh ngược dịng Tình trạng tinh dịch vào bàng Phẫu thuật (phẫu thuật tuyến tiền liệt, phẫu thuật sau phúc mạc, quang cổ bàng quang không phẫu thuật đại trực tràng, phẫu thuật cột sống) đóng kín hồn toàn Tổn thương thần kinh giao cảm (đái tháo đường) Biểu lâm sàng Định nghĩa Nguyên nhân thường gặp Thuốc (đối kháng α receptor, hủy giao cảm) Đau xuất tinh Tình trạng đau liên tục tái Tâm thần (hội chứng đau sau xuất tinh) diễn quan sinh dục Thủ thuật (thắt ống dẫn tinh) sau xuất tinh Bệnh lý (tắc viêm ống dẫn tinh, xoắn tinh hoàn, viêm tuyến tiền liệt, ung thư tuyến tiền liệt, tăng sản lành tính tuyến tiền liệt) Rối loạn cực khối Tình trạng khó đạt cực Thuốc (các thuốc ức chế tái hấp thu chọn lọc serotonin, chống trầm khoái, kéo dài đáng kể thời gian cảm vòng, ức chế monoamine oxidase, chất gây nghiện) đạt cực khoái khả Bệnh lý thần kinh trung ương (đa xơ cứng, Parkinson, múa giật đạt cực khoái Huntington, cắt giao cảm tủy sống) hoạt động tình dục, tình trạng Tâm thần (lo âu thực hiện, yếu tố hồn cảnh, lo sợ có thai, xảy liên tục tái diễn, giảm ham muốn tình dục) dẫn đến ảnh hưởng tâm lý [14] Giảm khả xìu dương vật Bệnh lý cấu trúc dương vật Bất thường cấu trúc dương vật (Peyronie, hẹp bao quy đầu) Biểu lâm sàng Định nghĩa Nguyên nhân thường gặp Cương đau dương vật Tình trạng dương vật cương cứng Cương đau nguyên phát: vô kéo dài (nguyên phát mức gây đau kéo dài (> Cương đau thứ phát bệnh lý: huyết học (thiếu máu hồng cầu thứ phát) giờ) khơng kèm theo ham muốn tình hình liềm, leukemia, đa xơ cứng), bệnh thâm nhiễm (Faber, dục, thường xảy sau kích amyloidosis), viêm nhiễm (tularemia, quai bị), bệnh lý thần kinh, thích tình dục bình thường [15] khối u, chấn thương Cương đau thứ phát thuốc: phenothiazin, trazodon, cocain, thuốc giãn mạch tiêm vào dương vật 1.1.2 Các thuốc điều trị suy sinh dục nam Các biện pháp điều trị suy sinh dục nam bao gồm biện pháp điều trị nội khoa, điều trị ngoại khoa, với việc kết hợp điều chỉnh lối sống/yếu tố nguy cơ, điều trị nguyên nhân điều trị triệu chứng Như trình bày bảng 1.1, suy giảm chức sinh dục nam nhiều nhóm nguyên nhân gây ra, bao gồm yếu tố tâm thần, thần kinh, hormon, bệnh lý toàn thân/tại chỗ, thuốc Tùy nhóm nguyên nhân có phương pháp điều trị nguyên nhân tương ứng Với nguyên nhân tâm thần, thần kinh, hay bệnh tồn thân, phương pháp điều trị mang tính chun khoa sâu lựa chọn tùy thuộc vào trường hợp cụ thể Luận án tập trung trình bày thuốc thường sử dụng điều trị suy giảm chức sinh dục nam, bao gồm liệu pháp thay hormon thuốc điều trị số triệu chứng suy sinh dục nam (thuốc điều trị rối loạn cương dương, thuốc điều trị xuất tinh sớm) 1.1.2.1 Liệu pháp thay testosteron Testosteron androgen có vai trị chủ yếu chức sinh sản nam, với tác dụng giúp phát triển quan sinh dục bên đặc điểm giới tính thứ phát giai đoạn trước tuổi dậy thì, đồng thời trì đặc điểm giới tính thứ phát, bắt đầu trì trình sản sinh tinh trùng, kích thích trì chức tình dục nam giới sau tuổi dậy Tác dụng testosteron chất chuyển hóa dihydrotestosteron thực thông qua androgen receptor (AR), phân tử protein 110 kD có mặt nhân bào tương tế bào đích, theo chế phụ thuộc gắn DNA (tác dụng thơng qua hệ gen) để điều hịa phiên mã gen đích, theo chế không phụ thuộc gắn DNA (tác dụng không thông qua hệ gen) để khởi động loạt hoạt động tế bào phosphoryl hóa chuỗi tín hiệu truyền tin thứ [16] Suy tuyến sinh dục nam (male hypogonadism) hội chứng lâm sàng gây thiếu hụt androgen ảnh hưởng xấu đến chức nhiều quan 10 chất lượng sống [8], thể bệnh thường gặp gây suy giảm chức sinh dục nam giới [7] Chỉ định Liệu pháp thay testosteron (testosterone replacement therapy – TRT) sử dụng bệnh nhân nam giới có thiếu hụt nồng độ testosteron thấp xác định triệu chứng lâm sàng xét nghiệm sinh hóa Mục đích sử dụng TRT nhằm phục hồi nồng độ testosteron giới hạn sinh lý bình thường theo nhóm tuổi bệnh nhân, cải thiện triệu chứng liên quan đến thiếu hụt androgen, từ giúp cải thiện chất lượng sống, chức tình dục, sức mạnh mật độ khoáng xương bệnh nhân [8] Chống định Liệu pháp thay testosteron chống định số trường hợp sau [8]: - Đã xác định nghi ngờ ung thư biểu mô phụ thuộc androgen: ung thư tuyến tiền liệt ung thư vú nam - Tiền sử có khối u gan - Chứng ngừng thở ngủ nặng - Bệnh nhân nam vô sinh mong muốn có - Haematocrit > 54% - Triệu chứng đường tiết niệu nặng phì đại lành tính tuyến tiền liệt - Suy tim mạn tính nặng (NYHA IV) Lựa chọn chế phẩm điều trị Testosteron tự nhiên hấp thu tốt đường tiêu hóa, nhiên bị chuyển hóa nhanh gan, điều dẫn tới khó trì nồng độ bình thường huyết bệnh nhân suy tuyến sinh dục Với nỗ lực cải thiện sinh khả dụng hiệu điều trị, nhà nghiên cứu phát triển nhiều dạng bào chế testosteron với khác đường dùng, dược động học tác dụng không mong muốn Các chế phẩm testosteron có sẵn thị trường gồm: dạng viên cấy da, dạng tiêm bắp, dạng uống, hệ trị liệu qua da, viên ngậm má, dạng gel dùng đường mũi Dược liệu Bộ phận sử dụng Thành phần hóa học Tác dụng dược lý thành phần khác chống viêm, kháng khuẩn, … Hợp chất dễ bay (palmitic acid, linoleic acid, 14Nhục thung dung (Herba Cistanches) Thân có chất thịt, methylpentadecanoat,…), hợp chất không bay gồm Cải thiện chức não, tăng có vảy phơi phenylethanoid glycosid (echinacosid, acteosid, cường hoạt động tình dục, tăng khơ cistanosid, tubulosid,…), iridoid, lignan, alditol, cường miễn dịch, chống oxy hóa oligosaccharid, polysaccharid Bạch truật (Atractylodes macrocephala) Đảng sâm (Codonopsis spp.) Thỏ ty tử (Cuscuta sinensis) Phá cố (Psoralea corylifolia) Thân rễ phơi hay Atractylol, atractylon, atractylenolid I-III, endesmol, sấy khô atractylmacrol A-E,… Rễ phơi khô Các alkaloid, phenylpropanoid, triterpen, polyacetylen, nhiều loài flavon, acid hữu cơ, polysaccharid, tinh dầu hợp Codonopsis chất khác Hạt phơi hay sấy Flavonoid (rutin, quercetin, isorhamnetin, astragalin khô Tơ [kaempferol-3-O-β-D-glucoside]), lignan, dẫn xuất acid hồng quinic, polysaccharid Hạt phơi khơ Kháng u, chống viêm, chống oxy hóa, chống lỗng xương, bảo vệ thần kinh, điều hịa miễn dịch, … Chống oxy hóa, bảo vệ gan, chống viêm, chống ung thư, … Bảo vệ gan, chống loãng xương, chống oxy hóa, chống lão hóa, chống trầm cảm, cải thiện chức tình dục,… Isopsoralen, psoralen, dẫn xuất benzofuran (corylifonol, Hạ sốt, giảm đau, chống viêm, isocorylifonol), flavonoid (corylifolean, corylifolin, kháng khuẩn, kháng nấm, chống corylifolinin, bakuchicin, psoralidin, bakuchalcone, ung thư, bảo vệ gan, chống oxy Dược liệu Bộ phận sử dụng Thành phần hóa học Tác dụng dược lý psoralone, psoralenol,…),… hóa, kích thích miễn dịch,… Lipid khoáng chất, protein (collagen acid Nhung hươu (Cornu Cervi parvum) Sừng non hươu (lộc) nai (mê) đực amin), hormon tăng trưởng yếu tố tăng trưởng (IGF-1, EGF), glycosaminoglycan (chondroitin sulphat, glucosamin sulphat erythropoietin, glycosphingolipid, hyaluronic acid, prostaglandin, phospholipid), chất ức chế monoamine oxidase Chống thiếu máu, chống lão hóa, chống ung thư, chống viêm, kiểm sốt huyết áp, tăng cường chức xương khớp, kích thích miễn dịch Tài liệu tham khảo Đỗ Tất Lợi (2015) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học WHO (2010) WHO monographs on medicinal plants commonly used in the Newly Independent States (NIS) WHO (1999) WHO monographs on selected medicinal plants – Vol WHO (2004) WHO monographs on selected medicinal plants – Vol WHO (2007) WHO monographs on selected medicinal plants – Vol WHO (2009) WHO monographs on selected medicinal plants – Vol PHỤ LỤC HÌNH ẢNH VI THỂ GAN, THẬN CHUỘT CỐNG TRONG NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA VIÊN HỒN CỨNG TD0014 Hình Hình thái vi thể gan chuột lô chứng (chuột số 3) (HE x 400) – Tế bào gan thối hóa nhẹ – Tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy (HE x 400: Nhuộm Hematoxylin - Eosin, độ phóng đại 400 lần) Hình Hình thái vi thể gan chuột lơ trị (chuột số 98) (HE x 400) – Tế bào gan thối hóa nhẹ – Tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy Hình Hình thái vi thể gan chuột lô trị (chuột số 100) (HE x 400) – Tế bào gan bình thường – Tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy Hình Hình thái vi thể gan chuột lơ trị (chuột số 81) (HE x 400) – Tế bào gan bình thường – Tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy Tiểu cầu thận Hình Hình thái vi thể thận chuột lô chứng (chuột số 3) (HE x 400) Thận có thối hóa nhẹ tế bào ống lượn gần Tiểu cầu thận Hình Hình thái vi thể thận chuột lô chứng (chuột số 8) (HE x 400) Thận bình thường Tiểu cầu thận Hình Hình thái vi thể thận chuột lô trị (chuột số 98) (HE x 400) Thận bình thường Tiểu cầu thận Hình Hình thái vi thể thận chuột lơ trị (chuột số 81) (HE x 400) Thận bình thường PHỤ LỤC TĨM TẮT QUY TRÌNH SẢN XUẤT SẢN PHẨM TD0014 CHUẨN BỊ NGUYÊN LIỆU 1.1 Chuẩn bị bột hỗn hợp dược liệu Bột hỗn hợp dược liệu chuẩn bị từ dược liệu: Cúc hoa; Hoa đào; Hoa hịe; Hồi sơn; Hà thủ đỏ; Trần bì; Đương quy; Trạch tả; Ngưu tất; Ba kích; Tỏi khơ; Nhân sâm; Xuyên khung; Nhục thung dung; Bạch truật; Đảng sâm Các nguyên liệu chuẩn bị sau: – Sơ chế Cúc hoa, Hoa đào, Hoa hịe, Trần bì: Dược liệu đạt tiêu chuẩn rửa sạch, để nước sau chuyển sang sấy khơ nhiệt độ 700C, sau chuyển dược liệu sang qua dùng để xay bột dược liệu – Sơ chế Hoài sơn, Trạch tả: Dược liệu đạt tiêu chuẩn rửa đến sạch, sau ủ mềm khoảng 30 phút tiến hành phun nước thấm ẩm bề mặt dược liệu lần, thời gian ủ qua đêm cho dược liệu mềm tiến hành thái Dùng máy thái, thái lát dược liệu ủ thành lát mỏng dầy 1-5 mm, chuyển sang sấy khô tủ sấy tĩnh điện máy sấy băng tải vi sóng nhiệt độ 900C đến khô Dược liệu sau sấy chuyển sang vàng sử dụng để xay bột – Sơ chế Hà thủ ô đỏ: Hà thủ ô đỏ cho vào thùng nhựa, cho nước sinh hoạt vào đầy thùng, ngâm qua đêm (10-14 giờ), sau cho Hà thủ đỏ vào máy rửa để rửa đến chế với Đỗ đen (đã vò rửa rổ tre đến đất cát) Chuyển toàn dược liệu vào nồi nấu Rải dược liệu xen kẽ, cụ thể rải lượt mỏng Hà thủ sau rải lượt mỏng đỗ đen lên Tiến hành rải nhiều lần Hà Thủ ô Đỗ đen hết Cho nước sinh hoạt vào ngập bề mặt dược liệu cách mặt 30 cm Duy trì thời gian sơi lăn tăn thời gian 18 giờ, bổ sung nước dịch cạn xuống mặt dược liệu Dịch sau đủ thời gian hầm tiến hành rút dịch chiết, thu hồi Hà thủ ô loại bỏ đỗ đen Tiến hành lọc dịch chiết Hà thủ ô qua rây 0,3 mm, loại bỏ đỗ đen, thu hồi dịch Hà thủ ô chuyển sang công đoạn Chuyển dịch sau lọc vào nồi cô hở, bổ sung 350 g sodium benzoat, tiến hành cạn dịch đến thể chất sánh ngừng lại, chuyển dịch chiết sang công đoạn tẩm dược liệu sấy đến khô Dược liệu sau chế dùng để xay bột – Sơ chế Đương quy, Xuyên khung, Bạch truật, Nhục thung dung: Dược liệu đạt tiêu chuẩn rửa đến sạch, sau ủ mềm khoảng 30 phút tiến hành phun nước thấm ẩm bề mặt dược liệu lần, thời gian ủ qua đêm cho dược liệu mềm tiến hành thái Dùng máy thái, thái lát dược liệu ủ thành lát mỏng dầy 1-5 mm, chuyển sang sấy khô tủ sấy tĩnh điện máy sấy băng tải vi sóng nhiệt độ 700C đến khô Dược liệu sau sấy chuyển sang qua sử dụng để xay bột – Sơ chế Đảng sâm: Dược liệu đạt tiêu chuẩn rửa đến sạch, sau cắt thành đoạn 3-5 cm chuyển sang sấy khô tủ sấy tĩnh điện máy sấy băng tải vi sóng nhiệt độ 900C đến khơ Dược liệu sau sấy chuyển sang vàng sử dụng để xay bột – Sơ chế Ngưu tất: Dược liệu đạt tiêu chuẩn rửa đến sạch, sau cắt thành đoạn 3-5 cm chuyển sang sấy khô tủ sấy tĩnh điện máy sấy băng tải vi sóng nhiệt độ 900C đến khơ Dược liệu sau sấy chuyển sang qua sử dụng để xay bột – Sơ chế Nhung hươu: Nhung hươu cạo lông, thái lát phơi khô Các nguyên liệu sau sơ chế cân theo tỷ lệ công thức, trộn chuyển sang xay mịn máy xay búa, rây bột qua rây inox kích thước 0,2-0,3 mm Bột mịn đóng lần túi PE kín thùng carton, có nhãn đầy đủ, qui chế Bột mịn thu dùng để pha chế viên hoàn cứng 1.2 Chuẩn bị hỗn hợp cao dược liệu Hỗn hợp cao dược liệu chiết xuất từ dược liệu: Bạch tật lê; Đỗ đen; Bá bệnh; Tỳ giải; Rễ đinh lăng; Dây đau xương; Mộc qua; Lạc tiên; Đại táo; Thục địa; Ngũ vị tử; Kim anh tử; Kỷ tử; Cam thảo; Nhục thung dung; Thỏ ty tử; Phá cố - Thỏ ty tử Phá cố chỉ: Rửa dược liệu rá vo gạo Đóng dược liệu vào lần bao tải dứa, buộc chặt lần túi Mỗi bao không 1/3 thể tích bao - Thục địa: Để nguyên, không tiến hành rửa - Nhục thung dung, cam thảo: Thái dược liệu dài 3-5 cm máy thái dược liệu - Các dược liệu cịn lại: Cho tồn dược liệu lại vào bể, xả ngập nước Dùng rổ mắt dầy vớt xóc dược liệu (nhìn thấy nước bẩn thay nước khác) Chuyển toàn dược liệu sơ chế vào nồi chiết dịch có dung tích phù hợp Mỗi nồi chiết xuất nước, nồi cuối chiết xuất nước Chỉ chuyển cô dịch chiết nước nồi chiết dịch chiết nước nồi cuối Các dịch chiết nước (trừ nước nồi cuối) nước sử dụng làm dung môi chiết xuất cho nồi Dịch chiết cô sơ hệ thống cô kép chuyển sang nồi cô chân khơng, cho natri benzoat vào nồi có sẵn dịch cơ, đóng chặt nắp nồi, bật cánh khuấy, tiến hành cô đặc hết dịch cô cao đạt hàm ẩm dừng lại Lấy mẫu bán thành phẩm, đạt độ ẩm yêu cầu 20-30% tiến hành cao Đóng cao vào lần túi PE, đựng thùng nhựa vệ sinh sạch, dùng để pha chế viên hoàn cứng 1.3 Chuẩn bị tá dược dính - Nấu hồ Amidon 16% theo tỷ lệ công thức - Cân nguyên liệu gồm cao hỗn hợp dược liệu, nước tinh khiết, natri benzoat cho vào nồi nấu, cấp nhiệt bật khuấy để cao tan hoàn toàn thành hỗn hợp đồng Thêm tiếp hồ Amidon 16% chuẩn bị khuấy đồng thu tá dược dính dùng để pha chế 1.4 Chuẩn bị dịch bao màu Black 952 Cho vào thùng inox theo công thức: nước RO đun sơi để nguội, đường kính trắng khuấy tan, thêm cồn cao độ, natri benzoat, màu Black 952 khuấy đồng thu hỗn hợp dịch bao màu 1.5 Pha dịch bao bóng HPMC Cho vào thùng nhựa theo công thức: cồn cao độ, nước RO đun sơi để ngi, khuấy Thêm HPMC, bóp kỹ rây lại qua rây inox 2,0 mm, thêm natri benzoat khuấy cho tan hết thu dịch bao bóng viên hoàn PHA CHẾ - Cân hỗn hợp bột mịn thảo mộc vừa chuẩn bị mục 1.1 Avicel 101 theo tỷ lệ công thức máy nhào trộn cánh, bật máy - Thêm hỗn hợp tá dược dính từ từ, vừa thêm vừa nhào trộn khoảng 20 phút thành hỗn hợp dẻo dính đồng - Chuyển khối dính đồng chuẩn bị sang hệ thống tạo viên hoàn tự động, viên ướt thu được chuyển sấy khơ máy sấy khơ vi sóng nhiệt độ 80˚C đến khô - Viên khô thu được sàng phân loại viên máy sàng, viên đạt kích thước chuyển sang cơng đoạn bao màu hỗn hợp dịch màu thực phẩm chuẩn bị mục 1.4 đánh bóng hỗn hợp HPMC vừa đủ chuẩn bị mục 1.5 - Lấy mẫu kiểm tra chất lượng, đạt chuyển sang công đoạn đóng gói ĐĨNG GĨI CẤP - Viên hồn cứng đạt tiêu chuẩn chuyển sang đóng túi máy đóng gói bán tự động với khối lượng gói không kể vỏ từ 7,125-7,875 gam - Lấy mẫu kiểm tra BTP, đạt chuyển sang đóng gói cấp ĐĨNG GĨI CẤP - Hộp 10 gói/20 gói/30 gói - Đóng hộp thùng carton, ghi đầy đủ nội dung theo qui định - Lấy mẫu kiểm tra chất lượng thành phẩm, đạt chuyển công đoạn nhập kho bảo quản NHẬP KHO, BẢO QUẢN - Lấy mẫu kiểm tra chất lượng thành phẩm - Nếu đạt chất lượng chuyển sang nhập kho bảo quản Các nguyên liệu Các nguyên liệu chiết xuất sơ chế bột Chiết lần x Rửa sạch, sấy khơ Cao mềm Xay, rây Tá dược dính Bột mịn hỗn hợp Avicel 101 Viên hoàn KTCL Bao bì Đóng gói KTCL Nhập kho Sơ đồ giai đoạn sản xuất sản phẩm TD0014 PHỤ LỤC TIÊU CHUẨN CƠ SỞ Áp dụng cho sản phẩm Thực phẩm chức Viên uống TD0014 YÊU CẦU KỸ THUẬT 1.1 Cảm quan: Viên hồn cứng hình cầu, màu nâu đen đến đen, mùi thơm đặc trưng dược liệu 1.2 Độ ẩm: ≤ 12% 1.3 Đồng khối lượng: 6,7 gam – 8,3 gam 1.4 Định tính: Chế phẩm phải thể phép thử định tính kỳ tử, đỗ đen 1.5 Hàm lượng kim loại gây độc: - Chì: Khơng q 3,0 ppm - Thuỷ ngân: Khơng q 0,1 ppm - Cadimi: Không 1,0 ppm 1.6 Độ nhiễm khuẩn: - Tổng VKHK: không 10.000 CFU/g - Tổng số bào tử nấm mốc, nấm men: Không lớn 100CFU/1g - Coliforms: Không 10 CFU/g - E coli: Khơng có g sản phẩm - Staphylococus aureus: Không lớn CFU/g - Cl perfringens: Khơng lớn 10 CFU/g - Salmonella: Khơng có 25g sản phẩm - B cereus: Không lớn 10 CFU/g 1.7 Các chất không mong muốn: - Aflatoxin B1: Không ppm - Aflatoxin B1, B2, G1, G2: Không 15 ppm - Dư lượng chất bảo vệ thực vật: Phù hợp với định số 46/2007/QĐ-BYT ngày 19/12/2007 Bộ Y tế PHƯƠNG PHÁP THỬ 3.1 Cảm quan: Kiểm tra cảm quan chế phẩm phải đạt yêu cầu nêu 3.2 Độ ẩm: (1g; 1050C) 3.3 Độ đồng khối lượng: Thử theo DĐVN IV 3.4 Định tính: 2.4.1 Kỷ tử - Dụng cụ, thuốc thử: + Bản mỏng silicagel G chấm sắc ký Merk hoạt hóa 1100C 30 phút + Dung môi triển khai sắc ký: chloroform – ethyl acetat – acid formic (2:3:1) + Thuốc thử màu: soi đèn tử ngoại bước sóng 365 nm - Cách thử: + Dung dịch thử: Lấy gam chế phẩm, nghiền mịn, thêm nước, đun sôi nhẹ 60 phút Để nguội, lọc Lấy dịch lọc thêm 20 mL ethyl acetat, lắc, gạn lớp ethyl Cô cách thủy đến cạn cắn Hòa tan cắn với mL ethanol dung dịch chấm sắc ký + Dung dịch chuẩn: lấy g dược liệu chuẩn, cắt nhỏ, làm tương tự dung dịch thử dung dịch chuẩn + Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µL dung dịch chuẩn dung dịch thử Triển khai sắc ký dung môi khoảng 12 – 13 cm, lấy mỏng ra, để khơ nhiệt độ phịng, soi đèn tử ngoại bước sóng 365 nm - Yêu cầu: sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết màu, Rf với vết sắc ký đồ dung dịch chuẩn 2.4.2 Đỗ đen - Dụng cụ, thuốc thử: + Bản mỏng silicagel G chấm sắc ký Merk hoạt hóa 1100C 30 phút + Dung môi triển khai sắc ký: 1-propanol – ethanol – acid acetic – nước (4:4:4:2) + Thuốc thử màu: dung dịch Ninhydrin 0,5% ethanol 96% - Cách thử: + Dung dịch thử: Lấy gam chế phẩm nghiền mịn, thêm 30 mL ethanol 70%, lắc siêu âm 10 phút, lọc dung dịch chấm sắc ký + Dung dịch đối chiếu: lấy gam đỗ đen xay nhỏ, thêm 30 mL ethanol 70%, lắc siêu âm 10 phút, lọc dung dịch chấm sắc ký + Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µL dung dịch chuẩn dung dịch thử Triển khai sắc ký dung môi khoảng 12 – 13 cm, lấy mỏng ra, để khô nhiệt độ phòng Phun thuốc thử màu sấy mỏng 1050C đến vết - Yêu cầu: sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết màu, Rf với vết sắc ký đồ dung dịch chuẩn 3.5 Hàm lượng kim loại gây độc: Chì (Pb) - Thuốc thử: Theo DĐVNIV + Dung dịch chì chuẩn: 3g/mL + Dung dịch đệm acetat (pH = 3,5): + Dung dịch thioacetamid 4% (khối lượng/thể tích) + Amoniac đậm đặc (TT) + Acid acetic băng (TT) + Dung dịch phenolphtalein (CT) + Thuốc thử thioacetamid: hòa tan hỗn hợp gồm mL dung dịch natri hydroxyd 1M, mL nước cất mL glycerin (85%) 1,6 mL dung dịch thioacetamid 4%, dùng sau pha - Thiết bị: Chén sứ, ống Nesler 50 mL - Tiến hành: Mẫu thử: Cân xác khoảng g mẫu thử vào chén sứ, đun bếp đến khơ, tiếp tục đun nóng bếp đến hết khói, chuyển chén sứ vào lị nung nung nhiệt độ 4000C thu cắn màu trắng nhạt màu Lấy mẫu thử khỏi lò nung, để nguội hòa cắn với 8ml dung dịch acid hydrocloric 2M (TT), đem lọc Mẫu chuẩn: Hút xác mL dung dịch chì chuẩn làm song song với mẫu thử Mẫu chuẩn khơng vơ hóa: Hút xác 1ml dung dịch chì chuẩn thêm 8ml dung dịch acid hydrocloric 2M (TT) Thêm vào mẫu 0,1 mL dung dịch phenolphtalein (CT) thêm giọt dung dịch amoniac đậm đặc đến có màu hồng Sau thêm acid acetic băng đến màu dung dịch, thêm dư 0,5ml 2ml đệm acetat pH 3,5 Thêm 1,2 mL thuốc thử thioacetamid pha So sánh mẫu thử với mẫu chuẩn: Mầu thu dung dịch thử không đậm màu dung dịch chuẩn Thuỷ ngân, cadimi Sử dụng phương pháp AAS 3.6 Độ nhiễm khuẩn: Cân xác khoảng 10 g chế phẩm vào bình nón nút mài dung tích 200 mL tiệt trùng cân bì Thêm vào lượng dung dịch natri clorid 0,9% vô trùng vừa đủ để pha loãng chế phẩm thành nồng độ đem thử nghiệm thích hợp như: 10-1, 10-2, 10-3 1/2, 1/5, 1/20, 1/40 cho đếm khuẩn lạc đĩa Petri có đường kính 90 – 100 mm số lượng khuẩn lạc không vượt 300 đĩa Tiến hành thử theo DĐVN IV ĐÓNG GÓI - GHI NHÃN - BẢO QUẨN: 4.1 Đóng gói: Viên hồn cứng đóng gói màng nhơm, hộp x 10 gói hộp x 30 gói 4.2 Ghi nhãn: Đúng qui chế 4.3 Bảo quản: Nơi khô, tránh ánh sáng trực tiếp ... suy sinh dục nam giới, đề tài ? ?Nghiên cứu độc tính tác dụng điều trị suy giảm sinh dục đực viên hoàn cứng TD0 014 thực nghiệm? ?? thực nhằm mục tiêu sau đây: Xác định độc tính cấp, độc tính bán trường... trường diễn viên hoàn cứng TD0 014 động vật thực nghiệm Đánh giá hoạt tính androgen tác dụng chức cương dương viên hoàn cứng TD0 014 động vật thực nghiệm Đánh giá tác dụng viên hoàn cứng TD0 014 chuột... phương pháp sử dụng để gây suy giảm sinh sản động vật thực nghiệm bao gồm: suy giảm sinh sản tuổi, suy giảm sinh sản stress, suy giảm sinh sản nhiệt độ, suy giảm sinh sản tia xạ, suy giảm sinh sản