Luận án nghiên cứu hóa học và hoạt tính sinh học của hai loài tai chua (garcinia cowa roxb ex choisy) và đằng hoàng (garcinia hanburyi hook f ) ở việt nam

1 MỞ ĐẦU Ngày nay, sản phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ điều trị bệnh có nguồn gốc từ thiên nhiên ngày ưa chuộng an tồn với người sử dụng có tác dụng phụ sản phẩm tổng hợp Nhiều hợp chất từ thiên nhiên nghiên cứu phân lập, xác định cấu trúc hóa học chứng minh có nhiều hoạt tính sinh học quan trọng Những nghiên cứu khơng đóng góp kiến thức hợp chất thiên nhiên mà cịn góp phần phát hợp chất tiềm năng, từ xây dựng kế hoạch bảo tồn phát triển loài sinh vật có giá trị phù hợp với khí hậu thổ nhưỡng Việt Nam Với khí hậu nóng ẩm chủ yếu, Việt Nam mơi trường sống thích hợp nhiều loại thuốc quý sử dụng dân gian Nhiều loài thuộc chi Garcinia sử dụng làm vị thuốc chữa bệnh, ví dụ nhựa đằng hồng (gamboge) khơ dạng thỏi màu vàng dùng để điều trị ung thư, cầm máu, tẩy giun sán, chữa viêm hô hấp … Nhiều nghiên cứu thành phần hóa học lồi thuộc chi Garcinia thành phần hóa học chúng xanthone với nhiều hoạt tính sinh học giá trị hoạt tính ức chế tế bào ung thư, hoạt tính chống oxygen hóa, hoạt tính kháng khuẩn, Tại Việt Nam, hai thuộc chi Garcinia tai chua (Garcinia cowa Robx ex Choisy) đằng hoàng (Garcinia hanburyi Hook f) thuộc họ Guttiferae sinh trưởng phát triển tốt, phân bố nhiều địa phương nước [1] Trên giới có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học hai lồi này, nhiên tai chua (Garcinia cowa) đằng hoàng (Garcinia hanburyi) mọc Việt Nam chưa nhóm tác giả nghiên cứu Với mục đích tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học từ lồi thực vật thuộc chi Garcinia nhằm đóng góp sở khoa học cho nghiên cứu lĩnh vực dược phẩm, luận án tập trung nghiên cứu hai loài Garcinia cowa Garcinia hanburyi Do đó, luận án: “Nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học hai loài tai chua (Garcinia cowa Roxb ex Choisy) đằng hoàng (Garcinia hanburyi Hook f) Việt Nam.” thực với nội dung sau: - Phân lập hợp chất từ nhựa tai chua Garcinia cowa - Phân lập hợp chất từ nhựa thân cành đằng hoàng Garcinia hanburyi - Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập - Khảo sát tính chất động học nhiệt động học acid gambogic làm sở cho việc bán tổng hợp số dẫn xuất acid gambogic - Khảo sát số hoạt tính sinh học hợp chất thu CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung chi Garcinia 1.1.1 Đặc điểm thực vật chi Garcinia Chi Garcinia chi lớn thuộc họ Bứa, phân bố khắp Đông Nam Á, bán đảo Ấn Độ vùng xích đạo Châu Phi với khoảng 260 lồi [2, 3] Tên gọi Garcinia lấy theo tên nhà thực vật học Laurence Garcia, người sưu tập mẫu cỏ sống Ấn Độ vào kỷ 18 Ở Việt Nam, theo nghiên cứu có khoảng 29 loài thuộc chi Garcinia phân bố rải rác từ Bắc vào Nam [1, 4], đặc biệt rừng rậm nhiệt đới tỉnh Lào Cai, Hà Giang, Cao Bằng, Bắc Kạn, Lạng Sơn, Thái Nguyên, Phú Thọ, Vĩnh Phúc, Hồ Bình, Quảng Trị, Đà Nẵng, Lâm Đồng, Đồng Nai, Tiền Giang, An Giang, Kiên Giang, … Các loài chi Garcinia thường đại mộc, thân thẳng, màu xanh đậm, có chiều cao trung bình từ 8-30 m bứa núi (G oliveri), sơn vé (G merguensis), bứa lằn đen (G nigrolineata) Một số lồi đại mộc nhỏ bứa trịn dài (G oblongifolia) bụi bứa hoa (G oligantha) Hoa màu vàng nhạt trắng xanh, đài cánh hoa có từ 4-5 cánh, bao phấn khơng cuống, buồng phấn hẹp, đầu nhụy có chia thùy Quả thường hình trịn, có từ 4-10 múi, có nhiều nước cơm, hạt có lớp vỏ mỏng bao bọc [1] Vỏ cây, vỏ gỗ thuộc chi thường tiết mủ màu vàng trắng 1.1.2 Cơng dụng Chi Garcinia có nhiều cơng dụng đời sống làm thực phẩm, phẩm nhuộm, làm thuốc chữa bệnh, Một số loài thuộc chi Garcinia có ăn ngon măng cụt (G mangostana), bứa lửa (G fusca), bứa (G harmandii), bứa núi (G oliveri) Trái G xanthochymus chứa nhiều acid, dùng làm mứt, giấm Cây G dioica cho trái ăn mà non dùng làm rau để ăn Hạt trái G indica có chứa loại chất béo ăn giống bơ Trái loài G livingstonei dùng để lên men thức uống Trước chưa có acid citric tổng hợp, người ta dùng bứa cọng (G pendunculata) làm nguồn cung cấp acid citric Vỏ nhiều loại dùng để nấu canh chua bứa nhà (G cochinchinensis), tai chua (G cowa), dọc (G multiflora), bứa thuôn (G oblongifolia), bứa núi (G oliveri), bứa planchon (G planchonii), … Trong công nghiệp, nhựa vỏ trái nhiều loài chi Garcinia dùng làm phẩm nhuộm vàng vỏ trái sơn vé (G merguensis), nhựa đằng hồng (G hanburyi) dùng sơn, màu vẽ chế vecni phủ lên kim loại Nhựa G hanburyi, G subelliptica, G lanessanii, G delpyana, G merguensis dùng làm phẩm nhuộm màu vàng cho vải Dầu dọc (G multiflora) dùng làm xà phòng, dầu nhờn làm dầu thắp sáng Một số lồi thuộc chi có gỗ màu vàng, rắn, nặng có mùi thơm dùng làm gỗ làm nhà, làm cầu dùng chạm trổ đẹp trai lý (G fagraeoides), nụ (G tinctoria), … Chi Garcinia gồm nhiều loài thuốc sử dụng phổ biến y học cổ truyền Từ lâu dân gian người ta biết sử dụng nhiều loài thuộc chi Garcinia để làm thuốc chữa bệnh đơn giản Vỏ G cochinchinensis dùng trị dị ứng mẩn ngứa, giã đắp trị sâu quảng, búp non nhai ăn chữa động thai [5] Vỏ G cowa sắc uống chữa sốt khát nước [6] Rễ G fagraeoides dùng làm thuốc trị đau dày, vỏ cành trị bỏng [6] Rễ G gaudichaudii dùng xoa trị vết thương [6] Quả G hanburyi làm thuốc xổ, gôm nhựa trị sổ mũi, viêm phế quản, chữa nhiễm trùng, trị giun, sán [4, 5] Cây G harmandii có vỏ chát, dùng chữa ỉa chảy [5] Vỏ G mangostana chứa 7-14 % tanin, dùng trị ỉa chảy, hợp chất mangostin, vỏ dùng trị kiết lị, ỉa chảy; vỏ sắc nước rửa âm đạo chữa bạch đới, khí hư [4, 6, 7] Lá G merguensis dùng chữa bệnh phù [6] Dầu hạt dọc G multiflora dùng đắp trị mụn nhọt, ghẻ lở Vỏ bứa tròn, dài (G oblongifolia) thường dùng trị loét dày, loét tá tràng, viêm dày, ho máu, mụn nhọt, nhựa dùng trị bỏng, vỏ thân chứa hợp chất camboginol guttiferol B, oflongifolin A [1, 4, 7] Lá nụ (G tinctoria) dùng chữa phù đau bụng đầy [6] Vỏ vàng nhựa (G vilersiana) dùng để chữa bong gân [6] Mủ tươi bứa mủ vàng (G xanthochymus) chữa đỉa chui vào mũi, dùng chữa bệnh scorbut, giải khát, thơng mật, làm dịu, kích thích [5] Vỏ bứa (G cambogia) có chứa acid hydroxycitric enzyme citrate liase sử dụng để điều chế thực phẩm chức giúp giảm cân cho người béo phì Nhựa đằng hồng (Garcinia hanburyi) vị thuốc cổ truyền dùng để điều trị ung thư gan, ung thư phổi, ung thư mô liên kết số bệnh cầm máu, tẩy giun sán, viêm hô hấp, viêm phế quản, sổ mũi, nhuận tràng, trị vết thương nhiễm trùng ngồi da [4, 5] 1.1.3 Thành phần hóa học chi Garcinia Cho tới nay, có khoảng 135/260 lồi thuộc chi Garcinia nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học [8, 9] Các kết nghiên cứu cho thấy thành phần hóa học chi Garcinia đa dạng, thành phần xanthone - nhóm hợp chất coi chất điểm sinh học chi Garcinia, cịn có hợp chất khác benzophenone, biflavonoid, triterpenoid, phloroglucinol, flavonoid, … 1.1.3.1 Xanthone Xanthone hợp chất hữu có cơng thức phân tử C13H8O2, khung sở nhiều hợp chất hữu có thực vật, gọi xanthoneoid hay đơn giản xanthone Nhiều loại xanthone tìm thấy từ chi Garcinia xanthone polyoxygen thế, prenyl xanthone, xanthone lồng bisxanthone Nhân xanthone có tính đối xứng, đánh số dựa sở khung 9H-xanthen sau: A O B O C a) Xanthone polyoxygen Các xanthone polyoxygen đơn giản mang từ hai đến năm nhóm hydroxy, methoxy methyl với vị trí mang oxy thường gặp (1,3), (1,5), (1,3,5), (1,3,7), (1,3,5,7), (1,3,6,7) (1,3,5,8) Hai hợp chất 1,5-dihydroxyxanthone (1) 1,7-dihydroxyxanthone (2) hai xanthone dioxygen đơn giản tìm thấy nhiều lồi thuộc chi Garcinia [10] Ba hợp chất xanthone trioxygen phân lập 1,3,5-trihydroxyxanthone (3) 1,5-dihydroxy-2methoxyxanthone (4) từ G xanthochymus [11] 1,2,5- trihydroxyxanthone (5) từ G subelliptica [12] Các xanthone 1,3,5,7- tetrahydroxyxanthone; 1,3,6,7tetrahydroxyxanthone (norathyriol); 1,2-dihyroxy-5,6-dimethoxyxanthone 2,6dihydroxy-1,5-dimethoxyxanthone (6-9) phân lập từ G penduculata G subelliptica [12, 13] ví dụ xanthone tetraoxygen Các hợp chất xanthone pentaoxygen phổ biến hơn, có ba hợp chất xanthone pentaoxygen phân lập từ G hombroniana G tetranda 1,3,4,5,8pentahydroxyxanthone, 1,3,8-trihydroxy-4,6-dimethoxyxanthone trihydroxy-4,6-dimethoxyxanthone (10-12) [14, 15] (hình 1.1) 1,3,7- b) Prenyl xanthone Các prenyl xanthone thường có kiểu mẫu tri- tetra-oxygen mang một, hai hay ba đơn vị năm cacbon (5C), mười cacbon (10C) mười lăm cacbon (15C), hầu hết gắn vào khung xanthone vị trí ortho hay para nhóm hydroxy hay methoxy vòng benzen Đơn vị 5C hay gặp nhóm 3methylbut-2-enyl (cịn gọi prenyl hay isoprenyl), ngồi nhóm 1,1dimethylallyl Ví dụ xanthone kiểu 1,5,8-trihydroxy-3-methoxy-2-(3methylbut-2-enyl)xanthone (13), β-mangostin (14) garcinone E (15) phân lập từ G mangostana [16-18] subelliptenone F, B, A (16-18), phân lập từ G subelliptica [19-21] O OH O OH OH O OH O O OH O OH OH O O OH OH O OH O HO O HO O OCH3 H3CO OH O OH OH OH O O 12 H3CO O OH OH 10 OH H3CO O 11 OH HO OH OH O O OCH3 HO O OH OH OH O OH O OH HO O OCH3 OH OH O OCH3 HO OH OH OCH3 OCH3 Hình 1.1 Một số xanthone polyoxygen đơn giản phân lập từ chi Garcinia OH O OH O OH O O OH MeO OH OMe O HO HO OMe O 14 13 O 15 OH O HO O OH OH OH 16 O O OH O OH O 19 O OH OH HO HO OH 22 O OH O OH OH 21 O OH O O 25 OH OH CH2OH MeO MeO HO O OH O OH O O HO 20 O HO OH MeO 18 OH OH O O OH 17 MeO HO HO OH OH HO O OH HO HO O 23 OH O O O OH O OH 26 27 OH OMe HO O 24 O OH O O O OH O O O O O O 28 O O O O 29 30 Hình 1.2 Một số prenyl xanthone phân lập từ chi Garcinia Đơn vị 10C 15C thường gặp geranyl farnesyl, ví dụ cowaxanthone (19) cowanin (20) phân lập từ G cowa [22] 5-farnesyltoxyloxanthone (21) phân lập từ G merguensis [23] Nhóm prenyl bị hydrate hóa garcinol C (22) 1,6-dihydroxyl-2-(2-hydroxyl-3-methylbut-3-enyl)-3,7- dimethoxy-8-(3-methylbut-2-enyl)xanthone (23) phân lập từ G mangostana [24, 25] cowanol (24) phân lập từ G cowa [22] Ngồi ra, nhóm prenyl phản ứng với nhóm hydroxy vị trí ortho tạo xanthone vòng chứa vòng furano- pyrano-, ví dụ subelliptenone E (25) phân lập từ G subelliptica [19], 2-deprenyl rheediaxanthone B (26) từ G macrophylla [26] 1,5-dihydroxy-6,6-dimethylpyrano(2,3:6,7)-4'',4'',5''-trimethylfurano(2'',3'':3,4)-2(3-methylbut-2-enyl)xanthone (27) từ G opaca [27] Các đơn vị 5C khơng đính trực tiếp vào khung xanthone mà gắn vào vịng qua nguyên tử oxygen Một số ví dụ hợp chất kiểu polyanxanthone A (28), B (29) C (30) phân lập từ G polyantha [28] (hình 1.2) c) Xanthone lồng Các xanthone lồng xanthone polyprenyl vịng A bị biến đổi thành dạng lồng 4-oxa-tricyclo[4.3.1.03,7]dec-2-one [29] Quá trình sinh tổng hợp xanthone lồng tự nhiên đề xuất Quillinan Scheinmann [30], xanthone lồng tổng hợp từ mesuaxanthone B - trihydroxy xanthone phân lập từ Mesua ferrea L [31] thông qua phản ứng chuyển vị Claisen DielsAlder hóa nội phân tử Tuy nhiên phản ứng chuyển vị Claisen xảy C-5 C-6 vòng A, sản phẩm thu hỗn hợp sản phẩm bao gồm xanthone lồng thường (thường gặp loài thuộc chi Garcinia) xanthone lồng neo (hình 1.3) Xanthone đơn giản tổng hợp phương pháp forbesione (31) - xanthone phân lập từ G forbesii [32] OH C O B O OH A O C-5 alkylation OH O O O Diels-Alder OH O O O Xanthone lồng thường OH O O O O OH O Claisen O O O C-6 alkylation OH O O Diels-Alder O OH O O Xanthone lồng neo Hình 1.3 Cơ chế phản ứng sinh tổng hợp xanthone lồng từ mesuaxanthone B Giả thuyết Tisdale cộng khẳng định lại việc tiến hành phản ứng chuyển vị cách có chọn lọc để thu sản phẩm ankyl hóa C-5, kết thu loạt xanthone lồng phân lập từ chi Garcinia desoxymorellin (32), gambogin (33),… [33] Dạng lồng neo gặp, phân lập ba hợp chất có dạng lồng 1-O-methylneobractatin (34), neoisobractatin A B (35a/b) từ G bracteata [34, 35] Các xanthone lồng có chứa dị vòng cạnh chứa cấu trúc polycyclic acid gambogellic (36) [36] Một số xanthone lồng cịn tạo thành oxygen hóa vịng khung xanthone, ví dụ gambospiroene (37) phân lập từ G hanburyi chứa vịng δ-lactone-α,β-khơng no hình thành oxygen hóa mở vịng A [37] Tương tự scortechinone K (38) hình thành oxygen hóa mở vòng A [38], lateriflorone (39) phân lập từ G lateriflora chứa vòng spiroxalactone oxygen hóa vịng C [39] (hình 1.4) O O HO O OH O O 31 O O OH O O O O 32 O O O O HO O 34 OH HOOC O O O O 33 COOH O O O O O O O O HO OH O O O O O O O O O OCH3 O O O O O O 35a/b OH OH O 37 O 36 OH O 38 O OH O 39 Hình 1.4 Một số xanthone lồng phân lập từ chi Garcinia Hầu hết khung xanthone lồng tìm thấy từ chi Garcinia G morella, G hanburyi, G forbesii, G gaudichaudii, G scortechinii, G bracteata, G cantleyana, G lateriflora G urophylla Lồi khơng thuộc chi Garcinia thuộc họ Bứa có chứa hợp chất thành ngạch nam Cratoxylum cochinchinense [40] Duy xanthone lồng tìm thấy từ khơng thuộc họ Bứa Dasymaschalon sootepense Craib, họ Annonaceae [41] d) Bisxanthone Bisxanthone xanthone đime hóa tìm thấy số lồi họ Guttiferae Bisxanthone hình thành từ prenyl xanthone việc tạo liên kết bên vòng khung xanthone với vòng khung xanthone thứ với dị vòng pyrano furano xanthone thứ hai, ví dụ bigarcinenone A-B (40-41) từ G xanthochymus [42] Các bisxanthone hình thành dựa mơ hình phản ứng Diels-Alder hai nhóm prenyl hai xanthone, ví dụ garcilivin A-C (42-44) từ G livingstonei [43] (hình 1.5) 1.1.3.2 Benzophenone Benzophenone hợp chất có chứa khung phenol-carbonyl-phenol Khoảng 50/109 lồi thuộc chi Garcinia khảo sát có chứa benzophenone [44], đặc biệt nhựa lồi G aristana chứa tới 70% benzophenone [45] Thông thường, benzophenone phân lập từ chi Garcinia chia thành dẫn xuất macluin (45) dẫn xuất bicyclo[3.3.1]nonane-2,4,9-trione (hình 1.6) OH O O OH H O O OH O H HO O OH OH OH OH HO OH O O OH OH O O O O OH O OH O HO OH 42: R = 44: R = OH 41 HO OH OH R O 40 OH O O OH OH HO OH OH O O H H 43 Hình 1.5 Một số bisxanthone phân lập từ chi Garcinia HO OH OH A 4' B 3' O OH O 45 HO OH OH OH OH O O HO O O OH O OMe O OH 47 OA B OH Bicyclo[3.3.1]nonane-2,4,9-trione OH 48 OMeO 46 O O O HO OCH3 O O HO OCH3 O O O H O O O O O O HO OH HO O 51 O 50 49 HO O HO 54 O O O O OH O 52 O 53 O OH O O OH HO O OH O O HO HO O HO O HO HO 56 55 57 HO O 58 Hình 1.6 Một số benzophenone phân lập từ chi Garcinia Polyhydroxybenzophenone đơn giản macluin từ G multiflora [46] thường phân lập với xanthone thực vật bậc cao nên người ta cho chúng tiền chất xanthone Dạng polyisoprenyl có cấu trúc phức tạp lại tìm thấy phổ biến so với dạng đơn giản, vịng A macluin bị isoprenyl trường hợp hợp chất 4,6,4’-trihydroxy-2,3’dimethoxy-3-prenylbezophenone (46) từ G multiflora [46] bị oxygen hóa thành dạng vòng cyclohex-4-ene-1,3-dione trường hợp hai xanthone semsinone B-C (47-48) phân lập từ G semseii [47] Các benzophenone dẫn xuất bicyclo[3.3.1]nonane-2,4,9-trione tìm thấy phổ biến gồm ba loại A-C Loại A gồm benzophenol với nhóm benzoyl cacbon C-1, ví dụ garcimultiflorone A (49) từ G multiflora [48] Loại B chứa nhóm benzoyl cacbon C-3 tìm thấy phổ biến, ví dụ isogarcinol 13-O-methyl ete (50) garcinol 13-O-methyl ete (51) phân lập từ G assigu [49] Loại C chứa nhóm benzoyl cacbon C-5 garcinielliptone K (52) phân lập từ G subelliptica [50] Ngoài ra, β-diketone liên kết đơi nhóm isoprenyl tạo vịng với tạo adamantanyl benzophenone phức tạp garciniagifolone A (53) phân lập từ G oblongifolia [51] Một số hợp chất có vịng B cịn bị oxygen hóa thành dạng bicyclo[3.3.2]decane-2,4,10-trione gambogenone (54) từ G xanthochymus [52], 7-epi-nemorosone (56) garcinol (57) phân lập từ G travancorica [53] Một số benzophenone dẫn xuất polycyclic xanthone garcinialone (55) phân lập từ G multiflora [54] Đặc biệt, doitunggarcinone B (58) benzophenone xếp lại độc đáo phân lập từ G propinqua [55] 1.1.3.3 Biflavonoid flavonoid Biflavonoid đime flavonoid, thường tạo thành liên kết C3 với C-8'' C-3' C-8'' flavone, flavanone hay flavanonol Thống kê tài liệu cho thấy có khoảng 100 biflavonoid phân lập từ chi Garcinia, nhiên flavonoid lại gặp Các biflavonoid phân lập từ chi Garcinia chia thành bốn loại sau: Loại GB-1 (59) với hệ flavanone-(3-8'')-flavanonol; loại GB-1a (60) với hệ flavanone-(3-8”)-flavanone; loại GB-2 (61) với hệ flavanone-(3-8'')flavanonol có thêm nhóm hydroxy vị trí 3''; loại morelloflavone (62) với hệ flavanone-(3-8”)-flavone loại amentoflavone (63) với hệ flavone-(3'-8'')-flavone [53, 56, 57] Ngoài ra, số loại biflavonoid phân lập lateriflavone (64) phân lập từ G lateriflora với liên kết flavanone-(6-8)-flavanone (I-2', II-2''')-biapigenin (65) phân lập từ G nervosa với liên kết gặp flavonol-(2'2''')-flavonol [58] Ngồi ra, biflavonoid cịn liên kết với phân tử đường để tạo hợp chất glucoside, ví dụ hợp chất morelloflavone-7''-O-β-Dglycoside fukugiside (66) phân lập từ G travancorica [53] (hình 1.7) OH HO O HO HO O OH O HO OH OH 8'' O OH OH O HO 8'' HO O OH O HO OH 8'' O OH OH O OH O 59 60 O 3' 8'' HO HO OH O HO OH O OH OH O OH OH 8'' O 62 OH O 61 OH O HO O OH OH OH OH HO OH O 2''' O 64 O HO OH H 2' OH O HO O OH OH O 8'' O OH O 63 OH O HO OH OH HO O 3 OH OH O 65 OH H HO H H OH OH O H OH O 8'' O O H H 66 Hình 1.7 Một số hợp chất biflavonoid phân lập từ chi Garcinia OH O 10 1.1.3.4 Triterpenoid Triterpenoid tìm thấy phổ biến từ chi Garcinia Ngoại trừ triterpenoid thường gặp friedelan-3-ol (67) friedelin (68), hầu hết triterpenoid phân lập từ chi thuộc nhóm triterpenoid bốn vịng với khung lanostane friedolanostane Ví dụ triterpenoid friedolanostane triterpenoid lanostane garcihombronane A D (69-70) phân lập từ G hombroniana [59] Ngồi cịn phân lập triterpenoid chứa khung abeolanostane, cycloartane, friedocycloartane, friedelane, protostane, triterpene với khung lup-20(29)-en khung acid oleanolic Ví dụ acid 14β,15β-epoxy-3β-hydroxy9-oxo-11[10-8]-abeolanostan-22-cis-24-trans-dien-28-oic (71) triterpenoid 11[10-8]-abeolanostane phân lập từ G speciosa [60], garciosaterpene A (72) triterpenoid protostane phân lập từ G speciosa [61] Các hợp chất phân lập từ G hanburyi acid 2α-hydroxy-3β-O-acethyllup-20(29)-en-28-oic (73) acid 3-O-(4′-O-acethyl)-α-L-arabinopyranosyloleanolic (74) ví dụ triterpenoid khung lup-20(29)-en triterpenoid oleane [62, 63] Các triterpenoid acid (22Z,24E)-3α-hydroxy-17,13-friedocycloarta-12,22,24-trien-26-oic (75) từ G benthami [64], ovalifolone A (76) phân lập từ G ovalifolia [65] ví dụ triterpenoid friedocycloartane friedelane (hình 1.8) 1.1.3.5 Biphenyl Theo thống kê tài liệu, có nhiều dẫn xuất biphenyl phân lập từ chi Garcinia Những hợp chất thường có nhóm nhóm hydroxy, methoxy isoprenyl gắn vào nhân biphenyl Một số biphenyl thường gặp garcibiphenyl B C (77-78) phân lập từ G linii [66], garmultine A (79) phân lập từ G multiflora [67] Nhóm chức phenol nhóm isoprenyl phản ứng với tạo dị vòng pyrano hợp chất garmultine B (80), garmultine C (81) [67] oblongifoliagarcinine B phân lập từ G oblongifolia [68] (hình 1.9) COOH COOH COOH O O 10 HO O 68 67 HO H 69 HO H 70 HO O 71 COOH COOH H COOH HO O H3CCO O O OH H H3CCOO H 72 H3COCO 73 OH H OH O 74 HO 75 HO Hình 1.8 Một số triterpenoid phân lập từ chi Garcinia 76 139 Hình 4.104 Phổ 13C NMR hợp chất GA5 Căn vào kết phân tích phổ NMR HRESIMS GA5, chúng tơi kết luận GA5 N-morpholine gambogamide Đây hợp chất lần tổng hợp 4.3.3.6 Hợp chất GA6: 1-(4-trifluoromethylbenzene-piperazinyl)-gambogamide 30 34 33 28 35 24 40 38 37 20 36 39 31 O 17 18 23 16 O 26 13 21 OH O 14 29 O 25 19 32 O 27 22 12 N N 11 10 O CF3 Hình 4.105 Cấu trúc hóa học hợp chất GA6 Kết đo phổ HRESIMS GA6 thu pic phân tử proton hóa [M+H]+ 841,4016 (tính tốn lý thuyết cho CTPT C49H56F3N2O7 841,9733) Do đó, CTPT GA6 C49H55F3N2O7 Trên phổ 1H 13C NMR hợp chất GA6 xuất tín hiệu proton cacbon đặc trưng acid gambogic Tuy nhiên, phổ NMR HSQC GA6 xuất tín hiệu nhóm CH thơm thuộc nhóm 1-(4-trifluoromethyl-phenyl)piperazinyl δH 7,49 (2H; d; 9,0)/ δC 126,52; 126,49; δH 6,89 (2H; d; 9,0)/ δC 115,2 Tín hiệu cacbon thơm bậc liên kết với nitrogen xuất δC 152,9 Tín hiệu cacbon nhóm CF3 cacbon thơm liên kết với nhóm khơng quan sát thấy phổ 13C NMR Các tín hiệu proton cacbon nhóm CH2 vịng piperazine quan sát phổ NMR HSQC độ dịch chuyển δH 3,74 (1H; m); 3,59 (1H; m)/ δC 40,6 (CH2 piperazine); 3,35-3,05 (6H; m)/ δC 49,0; 49,0; 48,0 (3CH2 piperazine) 140 Hình 4.106 Phổ 1H NMR hợp chất GA6 Hình 4.107 Phổ 13C NMR hợp chất GA6 Trên phổ COSY GA6, hệ spin đặc trưng GA, dễ dàng nhận xuất hai hệ spin tương tác proton δH 7,49 với proton δH 6,89 tương tác proton δH 3,74-3,05 với Các liệu chứng tỏ xuất nhóm 1-(4-trifluoromethyl-phenyl)piperazinyl cấu trúc hợp chất GA6, khẳng định sản phẩm amide tạo thành Ngoài phổ NMR GA6 xuất tín hiệu đặc trưng cho amide hóa nhóm cacboxyl GA, tách thành hai tín hiệu H26; dịch chuyển phía trường cao H-26 H-27; dịch phía trường cao C-27 dịch trường thấp C-28 Căn vào liệu phổ NMR HRESIMS chúng tơi kết luận hợp chất GA6 1(4-trifluoromethylbenzenepiperazinyl)gambogamide Đây hợp chất lần tổng hợp 4.3.3.7 Hợp chất GA7: 1-(2,5-difluorobenzyl)piperazinyl-gambogamide 30 34 33 28 35 24 40 38 37 O 17 20 36 39 31 18 23 16 O 26 13 21 OH O 14 29 O 25 19 32 O 27 22 12 N N F 11 10 O F Hình 4.108 Cấu trúc hóa học hợp chất GA7 Phổ 1H C NMR hợp chất GA7 có tín hiệu đặc trưng acid 13 gambogic Ngoài ra, vùng trường thấp phổ NMR thấy xuất thêm tín hiệu proton thơm vịng benzen nhóm 1-(2,5- 141 difluorobenzyl)piperazinyl δH 7,14 (m; 1H; CH aromatic); 6,99 (m; 1H; CH thơm) 6,95 (m; 1H; CH thơm) Tín hiệu nhóm methylen thuộc nhóm 1-(2,5difluorobenzyl)piperazinyl xuất phổ NMR δH 3,80; 3,67 (2x1H; m; CH2 piperazine); 3,35-3,17 (6H; m; CH2 piperazine) Tín hiệu nhóm CH2 liên kết với N vịng thơm có dạng singlet xuất δH 3,51 (2H; s; CH2-N) Hình 4.109 Phổ 1H NMR hợp chất GA7 Hình 4.110 Phổ 13C NMR hợp chất GA7 Trên phổ 13 C NMR GA7, tín hiệu cacbon khung acid gambogic xuất tín hiệu sáu cacbon thơm δC 159,7; 156,3; 126,4; 117,1; 116,2; 115,0 tín hiệu bốn cacbon sp3 liên kết với nitrogen δC 46,1; 45,8; 40,9; 40,8 Ngoài phổ NMR GA7 xuất tín hiệu đặc trưng cho amide hóa nhóm cacboxyl GA, tách thành hai tín hiệu H-26; dịch chuyển phía trường cao H-26 H-27; dịch phía trường cao C-27 dịch trường thấp C-28 Các kiện chứng tỏ xuất nhóm 1-(2,5-difluorobenzyl) piperazinyl cấu trúc hợp chất GA7, khẳng định sản phẩm amide 142 tạo thành Kết phân tích phổ NMR hợp chất GA7 so sánh với kiện phổ GH1 GA6 cho thấy hợp chất GA7 1-(2,5-difluorobenzyl)piperazinylgambogamide Đây hợp chất lần tổng hợp 4.3.3.8 Hợp chất GA8: N-(2-thiophen-2-yl)ethylgambogamide 30 34 33 28 35 24 40 38 37 20 36 39 19 32 31 O 17 18 23 16 O 26 OH O 14 21 29 13 O 27 O 25 HN S 22 12 11 10 O Hình 4.111 Cấu trúc hóa học hợp chất GA8 Hình 4.112 Phổ 1H NMR hợp chất GA8 Tại vùng trường thấp phổ 1H NMR hợp chất GA8 ngồi tín hiệu proton đặc trưng acid gambogic, xuất tín hiệu proton thơm vịng thiophen δH 7,06 (m; 1H; CH thiophene); 6,85 (m; 1H; CH thiophene); 6,75 (m; 1H; CH thiophene) Trên phổ 1H NMR xuất tín hiệu nhóm methylen liên kết với nitrogen δH 3,40 (2H; m; CH2-N) tín hiệu nhóm methylen δH 2,94 (2H; m; CH2-CH2-N) Ngồi ra, tín hiệu proton methylen H26 bị tách thành hai tín hiệu xuất δH 2,55 (1H; dd; 15,5; 8,0) 2,40 (1H; dd; 15,5; 8,5) Các liệu chứng tỏ xuất nhóm (2-thiophen-2-yl)ethyl cấu trúc hợp chất GA8, khẳng định sản phẩm amide tạo thành Dữ liệu phổ H NMR GA8 N-(2-thiophen-2-yl)ethylgambogamide Đây hợp chất lần tổng hợp 4.4 Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học chất phân lập dẫn xuất tổng hợp 143 4.4.1 Hoạt tính chống oxygen hóa ABTS DPPH Các hợp chất GC7-GC17, GH1-GH8 thử nghiệm hoạt tính chống oxygen hóa theo hai phương pháp ABTS DPPH với chứng dương sử dụng acid ascorbic trolox Kết giá trị IC50 (nồng độ làm giảm 50% gốc tự ABTS.+ nồng độ trung hòa 50% gốc tự DPPH) trình bày bảng 4.27 Bảng 4.27 Giá trị IC50 hợp chất GC1-GC18 Hợp chất IC50 (µM) ABTS DPPH 621,32±56,61 20,39±1,92 GC7 GC8 GC9 GC10 GC11 GC12 GC13 GC14 74,45±8,89 167,11±14,83 70,98±3,55 692,08±38,34 GC15 64,56±4,51 269,21±13,04 IC50 (µM) ABTS DPPH - Hợp chất GH1 GH2 GH3 GH4 GH5 GH6 GH7 GH8 Acid ascorbic Trolox 82,38 ± 8,97 55,35 ± 5,22 105,72±12,91 384,80±23,12 22,05±1,64 24,25±0,72 GC16 639,74±38,46 GC17 Kết khảo sát hoạt tính chống oxygen hóa cho thấy hợp chất GC13- GC16 thể hoạt tính theo hai phương pháp ABTS DPPH; hợp chất GC11, GC12 GC17 thể hoạt tính theo phương pháp DPPH, chất cịn lại khơng thể hoạt tính chống oxygen hóa nồng độ nghiên cứu Trong số chất thể hoạt tính, hợp chất GC12 thể hoạt tính mạnh theo phương pháp DPPH với giá trị IC50 20,39 µM nhỏ giá trị IC50 chất chứng dương trolox (IC50 24,25 àM) v cha bng ẵ giỏ tr IC50 ca acid ascorbic Theo phương pháp ABTS, hai hợp chất GC13 GC15 thể hoạt tính chống oxygen hóa mạnh với giá trị IC50 74,45 64,56 µM, nhỏ so với giá trị IC50 acid ascorbic 4.4.2 Hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase Các hợp chất chứa hai nhóm prenyl geranyl GC12-GC17 thử nghiệm hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase với chất chứng dương acarbose Bảng 4.28 Giá trị IC50 ức chế enzym α-glucosidase hợp chất GC12-GC17 Hợp chất GC12 GC13 % ức chế nồng độ (µg/mL) 128 32 24 14 86 72 50 48 IC50 (µM) 17,23±0,32 144 GC14 GC15 GC16 GC17 Acarbose 85 13 80 12 77 11 35 10 35 15 26 4 33,53±0,93 149,47±2,8 257,32±4,80 Kết cho thấy hợp chất GC13-GC14 GC17 thể hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase mạnh với giá trị IC50 nhỏ nhiều so với chứng dương acarbose Hợp chất GC13 GC14 thể hoạt tính mạnh, IC50 6,7% 13,0% giá trị IC50 acarbose (IC50 257,32), hứa hẹn chất chống tiểu đường tiềm Hợp chất GC16 thể hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase mạnh với giá trị IC50 khoảng 60% giá trị IC50 acarbose Điểm chung hợp chất có hoạt tính có chứa 1-2 nhóm prenyl geranyl khơng bị oxygen hóa Các hợp chất chứa hai nhóm prenyl geranyl bị hydroxy hóa khơng thể hoạt tính Hợp chất GC13, chứa nhóm prenyl nhóm geranyl khơng bị oxygen hóa hợp chất khơng chứa nhóm methoxy C-7, thể hoạt tính mạnh Trong đó, hợp chất GC12 có cấu trúc hồn tồn giống với hợp chất GC13, khác nhóm methoxy vị trí C-7 lại khơng thể hoạt tính Điều chứng tỏ nhóm hydroxy gắn với khung xanthone đóng vai trị quan trọng hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase 4.4.3 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư in vitro 4.4.3.1 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư chất phân lập Các hợp chất GC1-GC18 phân lập từ G cowa GH1-GH8 phân lập từ G hanburyi thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào ung thư hai dịng tế bào ung thư dòng tế bào ung thư đại trực tràng HT-29 dòng tế bào ung thư cổ tử cung HeLa theo phương pháp MTT Kết tính tốn giá trị IC50 hợp chất trình bày bảng 4.28 Bảng 4.29 Giá trị IC50 hợp chất GC1-GC18, GH1-GH8 Hợp chất GC1 GC2 GC3 GC4 GC5 GC6 GC7 GC8 IC50 (µM) Hợp chất HT-29 HeLa Các hợp chất từ G cowa 49,49 104,42 GC10 83,98 46,55 GC11 GC12 GC13 127,36 147,33 GC14 64,23 117,48 GC15 GC16 56,29 GC17 IC50 (µM) HT-29 HeLa 45,20 6,66 2,80 3,49 2,41 1,60 3,90 9,62 39,30 7,85 16,58 13,46 42,06 81,84 11,96 45,86 145 GC9 - GH1 GH2 GH3 GH4 0,79 5,76 15,54 4,57 Kết cho thấy GC18 Các hợp chất từ G hanburyi 0,99 4,48 3,58 GH5 10,99 4,01 47,38 GH6 17,52 4,32 6,88 GH7 2,89 10,43 GH8 0,95 0,21 1,46 Doxorubicin hợp chất phân lập từ nhựa G cowa thể hoạt tính gây độc tế bào dịng tế bào HT-29 cao so với dòng tế bào HeLa Các hợp chất GC11, GC13 GC16 thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư mạnh dịng tế bào HeLa với giá trị IC50 khoảng 7,85-13,46 µM Năm hợp chất GC12-GC16 thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh dòng tế bào ung thư đại trực tràng HT-29 với giá trị IC50 1,60-3,90 µM, hợp chất GC15 thể hoạt tính mạnh với IC50 1,60 µM Điểm chung hợp chất chúng chứa 1-2 nhóm prenyl/geranyl khơng no, bị hydroxy hóa khơng bị hydroxy hóa Điều chứng tỏ nhóm prenyl/geranyl khơng no đóng vai trị quan trọng hoạt tính Một điểm thú vị xanthone không chứa nhóm methoxy C-7 (GC2-GC5) khơng thể hoạt tính gây độc tế bào hai dịng tế bào ung thư nghiên cứu, so với hoạt tính mạnh xanthone chứa nhóm methoxy có cấu trúc tương tự (GC14-GC17) Điều chứng tỏ nhóm 7-OCH3 đóng vai trị quan trọng hoạt tính hai dòng tế bào Các hợp chất GH1-GH8 thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư mạnh hai dòng tế bào HT-29 HeLa với giá trị IC50 nhỏ, từ 0,79-17,52 µM (trừ hợp chất GH6 có IC50 dịng tế bào HeLa 47,38 µM) Trong đó, hợp chất GH8 thể hoạt tính mạnh dịng tế bào ung thư HT-29 với giá trị IC50 0,95 µM; hợp chất GH4-GH5 thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh dòng tế bào HeLa với IC50 2,89 3,58 µM Đặc biệt acid gambogic (GH1) thể hoạt tính mạnh hai dòng tế bào HT-29 HeLa với giá trị IC50 0,795 0,99 µM Hoạt tính GH1 dịng tế bào HeLa chí cịn mạnh so với chất chứng dương doxorubicin (IC50 1,46 µM) 4.4.3.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thư dẫn xuất GA Acid gambogic (GH1) dẫn xuất GA1-GA9 thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư ba dòng tế bào ung thư người gan (Hep-G2), phổi (LU-1) 146 mô liên kết (RD) theo phương pháp SRB với chứng dương sử dụng ellipticine Giá trị IC50 dẫn xuất trình bày bảng 4.30 Kết cho thấy dẫn xuất GA1-GA5, GA8 có hoạt tính mạnh tương đương mạnh so với acid gambogic (GH1) chứng dương ellipticine ba dòng tế bào ung thư Hep-G2, LU-1 RD Trong đó, dịng tế bào RD, dẫn xuất GA1, GA4-GA5 có giá trị IC50 0,27-0,33 μM nhỏ từ 39-50% so với giá trị IC50 GH1; dòng tế bào Hep-G2, dẫn xuất GA5 có giá trị IC50 nhỏ so với IC50 GH1 38%; dẫn xuất cịn lại có IC50 nhỏ so với giá trị GH1 từ 15-22% Riêng hai dẫn xuất GA6, GA7 có chứa với vịng piperazine gắn với nhân benzen flo hóa lại có hoạt tính yếu GH1 ba dòng tế bào với giá trị IC50 lớn từ 4-7 lần Các dẫn xuất có hoạt tính tốt nghiên cứu tiếp tục để tìm chất chống ung thư tiềm Bảng 4.30 Giá trị IC50 hợp chất GA1-GA9 TT Ký hiệu mẫu 10 11 GA1 GA2 GA3 GA4 GA5 GA6 GA7 GA8 GH1 Ellipticine Giá trị IC50 (M) Hep-G2 LU-1 RD 0,52 0,59 0,55 0,54 0,43 4,08 4,71 1,13 1,24 1,10 1,10 1,03 4,83 - 0,27 0,50 0,42 0,33 0,30 2,17 3,40 0,52 0,69 0,97 1,29 1,34 1,26 0,45 0,54 0,77 Nhận xét: Nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào ung thư in vitro hợp chất phân lập tổng hợp cho thấy acid gambogic (GH1) thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh dòng tế bào ung thư nghiên cứu HT-29, HeLa, Hep-G2, RD LU-1 với giá trị IC50 0,79; 0,99; 0,69; 0,54 1,34 μM (bảng 4.254.27) Kết khảo sát thành phần hóa học nhựa thân cành G hanburyi cho thấy acid gambogic thành phần chính, chiếm hàm lượng lớn với khoảng 5% khối lượng nhựa [126] Những yếu tố giúp acid gambogic (GH1) ứng dụng chất chống ung thư tiềm 147 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đã nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học nhựa tai chua (G cowa) Kết nghiên cứu thành phần hóa học xác định cấu trúc 18 hợp chất, gồm 17 xanthone polyoxygen thế: cowaxanthone I-K (GC1-GC3), norcowanol A-B (GC4-GC5), garcinone F (GC6), fuscaxanthone A (GC7), 7-O- methylgarcinone E (GC8), cowagarcinone A (GC9), cowaxanthone (GC10), rubraxanthone (GC11), cowanin (GC12), norcowanin (GC13), cowanol (GC14), kaennacowanol A (GC15), garcinone D (GC16), fuscaxanthone I (GC17) 01 hợp chất tocotrienol: parvifoliol F (GC18) Trong đó, 06 hợp chất: cowaxanthone I-K, norcowanol A-B, garcinone F (GC1-GC6) xác định hợp chất mới, 03 hợp chất: garcinone D, fuscaxanthone I, parvifoliol F (GC16-GC18) xác định lần phân lập từ G cowa Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học cho thấy hợp chất GC12, GC13 GC15 thể hoạt tính chống oxygen hóa mạnh, giá trị IC50 hợp chất GC12 theo phương pháp DPPH 20,39 µM nhỏ giá trị IC50 trolox (IC50 24,25 µM) chưa 1/2 lần giá trị IC50 acid ascorbic (IC50 55,35 µM) Các hợp chất GC12-GC16 thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh dịng tế bào ung thư đại trực tràng HT-29 với giá trị IC50 1,6-3,90 µM Các hợp chất GC13-GC14 thể hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase mạnh với giá trị IC50 17,23-33,53 µM khoảng 1/10 giá trị IC50 chất chứng dương acarbose Đã nghiên cứu thành phần hóa học nhựa thân cành đằng hồng (G hanburyi) Kết nghiên cứu thành phần hóa học xác định cấu trúc 08 xanthone lồng, gồm acid gambogic (GH1), acid isogambogic (GH2), acid morellic (GH3), acid isomorellic (GH4), isomorellin (GH5), desoxymorellin (GH6), isomoreollin B (GH7) acid 10α-butoxygambogic (GH8) Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học cho thấy hợp chất GH8 thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh dòng tế bào ung thư đại trực tràng HT-29 với giá trị IC50 0,95 µM Đặc biệt acid gambogic (GH1) thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh dịng tế bào nghiên cứu gồm ung thư đại trực tràng (HT-29), cổ tử cung (HeLa), gan (Hep-G2), mô liên kết (RD) phổi (LU-1) với giá trị IC50 nhỏ, từ 0,35-1,34 μM 148 Đã khảo sát số tính chất động học phân tử GA phân lập từ nhựa đằng hoàng (G hanburyi) phương pháp thực nghiệm DSC BDS kết hợp với phương trình phần mềm lý thuyết VFT, ECNLE Kết thu nhiệt độ chuyển gương GA Tg = 338 K với tốc độ gia nhiệt 10 K/phút, thời gian ổn định động học 2,31.109 ngày độ giòn vật liệu mp = 103 Điều cho thấy GA đáp ứng tiêu chuẩn hoạt chất có tiềm ứng dụng thực tế, làm sở để nghiên cứu chuyển hóa acid gambogic Kết chuyển hóa acid gambogic thu 08 dẫn xuất, có 02 dẫn xuất ester methyl gambogate (GA1), ethyl gambogate (GA2) 06 dẫn xuất amide N,N-diallylgambogamide (GA3), N-piperidinylgambogamide (GA4), N-morpholinegambogamide (GA5), 1(4-trifluoromethylbenzene-piperazinyl)gambogamide difluorobenzyl)piperazinylgambogamide (GA7) (GA6), 1-(2,5- N-(2-thiophen-2- yl)ethylgambogamide (GA8) Trong 05 dẫn xuất N,N-diallylgambogamide (GA3), N-morpholinegambogamide (GA5), 1(4-trifluoromethylbenzene- piperazinyl)gambogamide (GA6), 1-(2,5-difluorobenzyl)piperazinylgambogamide (GA7) N-(2-thiophen-2-yl)ethylgambogamide (GA8) hợp chất Kết thử nghiệm hoạt tính sinh học cho thấy dẫn xuất GA1-GA8 thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư mạnh ba dòng tế bào ung thư gan (HepG2), phổi (LU-1) mô liên kết (RD) Trong dẫn xuất GA1-GA5, GA8 có hoạt tính mạnh so với acid gambogic ba dòng tế bào ung thư nghiên cứu với giá trị IC50 nhỏ từ 15-50% so với IC50 acid gambogic Kiến nghị Từ kết nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học hai loài thực vật tai chua (G cowa) đằng hồng (G hanburyi) thấy hai lồi thực vật có nhiều tiềm việc phát hợp chất hợp chất có nhiều hoạt tính sinh học quan trọng, đặc biệt hoạt tính gây độc tế bào ung thư Vì vậy, cần tiếp tục nghiên cứu hai loài thực vật nhằm phát hợp chất có cấu trúc độc đáo hoạt tính sinh học tiềm Acid gambogic phân lập từ đằng hoàng thể nhiều hoạt tính sinh học quan trọng, đặc biệt hoạt tính gây độc tế bào nhiều dịng tế bào ung thư Vì cần tiếp tục nghiên cứu chuyển hóa acid gambogic nhằm thu dẫn xuất có hoạt tính sinh học cao hơn, độc tính thấp chất đầu; đồng thời tiến hành thử nghiệm hoạt tính sinh học sâu để hiểu chế tác dụng GA dẫn xuất nhằm ứng dụng sản phẩm hỗ trợ điều trị bệnh 149 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN  Đã nghiên cứu thành phần hóa học nhựa tai chua (G cowa) thu Quỳ Châu, Nghệ An, Việt Nam Kết phân lập xác định cấu trúc 18 hợp chất, đó, 06 hợp chất cowaxanthone I-K (GC1-GC3), norcowanol A-B (GC4GC5), garcinone F (GC6) xác định hợp chất mới, 03 hợp chất garcinone D (GC16), fuscaxanthone I (GC17) 01 hợp chất tocotrienol: parvifoliol F (GC18) xác định lần phân lập từ G cowa  Đã nghiên cứu thành phần hóa học nhựa thân cành đằng hoàng (G hanburyi) thu Phú Quốc, Kiên Giang Kết phân lập xác định cấu trúc 08 xanthone lồng  Đã nghiên cứu tính chất động học nhiệt động học acid gambogic phương pháp thực nghiệm DSC BDS kết hợp với phương trình phần mềm lý thuyết VFT, ECNLE Kết thu nhiệt độ chuyển gương GA Tg = 338 K với tốc độ gia nhiệt 10 K/phút, thời gian ổn định động học 2,31.109 ngày độ giòn vật liệu mp = 103  Đã nghiên cứu chuyển hóa acid gambogic phân lập từ nhựa đằng hoàng (G hanburyi) Kết tổng hợp 08 dẫn xuất, N,N-diallylgambogamide (GA3), N-morpholinegambogamide (GA5), 1(4-trifluoromethylbenzenepiperazinyl)gambogamide (GA6), 1-(2,5-difluorobenzyl)piperazinylgambogamide (GA7) N-(2-thiophen-2-yl)ethylgambogamide (GA8) dẫn xuất  Đã khảo sát hoạt tính chống oxygen hóa hợp chất GC7-GC17 GH1GH8 theo hai phương pháp ABTS DPPH Kết cho thấy hợp chất GC12, GC13 GC15 thể hoạt tính chống oxygen hóa mạnh  Đã khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase hợp chất GC12-GC17 Kết cho thấy hợp chất GC13-GC14 thể hoạt tính mạnh với giá trị IC50 17,23-33,53 µM khoảng 1/10 giá trị IC50 chất chứng dương acarbose  Đã khảo sát hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập chuyển hóa số dịng tế bào ung thư người, kết cho thấy: - Acid gambogic (GH1) thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh dòng tế bào nghiên cứu gồm ung thư đại trực tràng HT-29, cổ tử cung HeLa, gan HepG2, mô liên kết RD phổi LU-1 với giá trị IC50 nhỏ, từ 0,35-1,34 μM - Các hợp chất GC12-GC16 GH8 thể hoạt tính gây độc tế bào mạnh dòng tế bào ung thư đại trực tràng HT-29 với giá trị IC50 0,95-3,90 µM - Các dẫn xuất GA1-GA8 thể hoạt tính gây độc tế bào ung thư mạnh ba dòng tế bào ung thư gan (Hep-G2), phổi (LU-1) mơ liên kết (RD) 150 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CỦA LUẬN ÁN Anh D Phan, Tran Thi Thu Thuy, Nguyen Thi Kim An, Justyna KnapikKowalczuk, Marian Paluch, Katsunori Wakabayashi - Molecular relaxations in supercooled liquid and glassy states of amorphous gambogic acid: dielectric spectroscopy, calorimetry and theoretical approach AIP Advances 2020, 10, 025128 DOI: 10.1063/1.5139101 (SCIE, Q2) Thi Kim An Nguyen, Gyu Won Huh, Dai Quang Ngo, Quoc Long Pham, Jae Wook Lee and Thi Thu Thuy Tran - Antiproliferative xanthones from the latex of Garcinia cowa Roxb Phytochemistry, 2020, submitted (SCIE, Q1) Nguyen Thi Kim An, Ngo Dai Quang, Pham Quoc Long, Tran Thi Thu Thuy - Cytotoxic xanthoneoids from the sterm bark of G hanburyi collected in Vietnam, Vietnam Journal of Science and Technology, 2020, 58(2), 133-142 DOI: 10.15625/2525-2518/58/2/14367 (ACI) Nguyen Thi Kim An, Ngo Dai Quang, Pham Quoc Long, Tran Thi Thu Thuy Polyprenylated caged xanthones from the resin of G hanburyi growing in Vietnam, Journal of Chemistry, 2019, 57(4e3,4), 306-274 (ESCI) Nguyễn Thị Kim An, Đinh Thị Hà, Trần Thị Thu Thủy - Phân lập hai xanthone tetraoxygen từ dịch chiết điclometan nhựa Garcinia cowa khảo sát hoạt tính gây độc tế bào ung thư in vitro chúng Tạp chí Khoa học Công nghệ - Trường Đại học Công nghiệp Hà Nội, 2019, 52, 97-100 Nguyen Thi Kim An, Dinh Thi Ha, Pham Quoc Long, Tran Thi Thu Thuy Tetraoxygenated xanthones from the latex of Garcinia cowa growing in Viet Nam, Vietnam Journal of Science and Technology, 2018, 56(5): p, 560-566 DOI: 10.15625/2525-2518/56/5/11826 (ACI) Nguyen Thi Kim An, Ngo Dai Quang, Pham Quoc Long, Tran Thi Thu Thuy – Cytotoxic compounds from the latex of Garcinia cowa, Vietnam Journal of Science and Technology, 2020, thảo gửi tạp chí (ACI) Đinh Thị Hà, Nguyễn Thị Kim An, Trần Thị Hồng Hà, Phạm Quốc Long, Trần Thị Thu Thủy - Bán tổng hợp thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào dẫn xuất acid gambogic Tạp chí Hóa học, 2017, 55(5E34), 137-142 (ESCI) Bằng độc quyền sáng chế: Phân lập acid gambogic từ nhựa Garcinia hanburyi quy trình tổng hợp dẫn xuất amide có hoạt tính gây độc tế bào acid gambogic - Trần Thị Thu Thủy, Phạm Quốc Long, Đinh Thị Hà, Nguyễn Thị Kim An, Lê Tất Thành, Phạm Minh Quân Chấp nhận đơn 151 PHỤ LỤC 1 ... chua G cowa 1.2.2 Tình hình nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học 1.2.2.1 Tình hình nghiên cứu giới Cây G cowa nghiên cứu lần năm 1968 [133] với kết tìm hai geranyl xanthone cowaxanthone (19) cowanin... khảo sát hoạt tính sinh học hợp chất từ Garcinia cowa cho thấy hợp chất phân lập thể nhiều hoạt tính sinh học phong phú hoạt tính gây độc tế bào, hoạt tính kháng khuẩn, kháng viêm, hoạt tính chống... thể hoạt tính cao gấp 4-6 lần GA (IC50 = 5,61 µM) [187] Ở Việt Nam chưa có cơng bố nhóm nghiên cứu khác việc chuyển hóa GA Do việc nghiên cứu chuyển hóa hóa học GA khảo sát hoạt tính sinh học