Trung tâm Nghiên cứu Nông nghiệp Quốc tế Australia (ACIAR) được thành lập vào tháng 6 năm 1982 qua một Đạo luật của Quốc hội Australia. Nhiệm vụ chính của Trung tâm là giúp xác định những vấn đề nông nghiệp cần giải quyết ở các nước đang phát triển và giúp hợp tác nghiên cứu giữa các nhà khoa học của Australia và của các nước đang phát triển trong những lãnh vực mà Australia có thế mạnh đặc biệt. Khi các tên thương mại được dùng, điều này không có nghĩa là Trung tâm ủng hộ hay phân biệt đối với bất cứ sản phẩm nào.
Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Lester W Burgess Timothy E Knight Len Tesoriero Phan Thúy Hiền 2009 Trung tâm Nghiên cứu Nông nghiệp Quốc tế Australia (ACIAR) thành lập vào tháng năm 1982 qua Đạo luật Quốc hội Australia Nhiệm vụ Trung tâm giúp xác định vấn đề nông nghiệp cần giải nước phát triển giúp hợp tác nghiên cứu nhà khoa học Australia nước phát triển lãnh vực mà Australia mạnh đặc biệt Khi tên thương mại dùng, điều khơng có nghĩa Trung tâm ủng hộ hay phân biệt sản phẩm LOẠT TÀI LIỆU CHUYÊN KHẢO CỦA ACIAR Loạt tài liệu gồm kết nghiên cứu ban đầu ACIAR hỗ trợ, tài liệu xem có liên quan đến mục tiêu nghiên cứu phát triển ACIAR Loạt tài liệu phân phối khắp giới, chủ yếu nước phát triển © Liên bang Australia 2009 Cơng trình có quyền Ngoài sử dụng phép theo Luật Bản quyền 1968, không phần phép chép lại tiến trình mà khơng có văn cho phép trước Chính quyền Liên bang Australia Các yêu cầu liên quan đến việc chép lại quyền cần gửi đến Ban Quản trị Bản quyền Liên bang Úc, Bộ Tổng Chưởng lý, Văn phòng Robert Garran, National Circuit, Barton, ACT, 2006 gửi đến http://www.ag.gov.au/cca Xuất Trung tâm Nghiên cứu Nông nghiệp Quốc tế Australia (ACIAR) GPO Box 1571, Canberra ACT 2601, Australia Điện thoại: 61 6217 0500 aciar@aciar.gov.au Burgess L.W., Knight T.E., Tesoriero L Phan H.T 2009 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Chuyên khảo ACIAR số 129a, 210 pp ACIAR: Canberra ISBN 978 921434 79 (bản in) ISBN 978 921434 80 (trực tuyến) Biên tập kỹ thuật Biotext Pty Ltd hiết kế Clarus Design Pty Ltd In Goanna Print Pty Ltd Dịch: All Language Typesetters & Printers Pty Ltd Hiệu đính dịch: Phan húy Hiền Lời nói đầu Bệnh hại trồng tiếp tục gây thiệt hại mùa màng đáng kể Việt Nam khu vực khác có khí hậu nhiệt đới Đông Nam Á Bệnh dịch vàng lùn lùn xoắn lúa miền Nam Việt Nam gần đánh dấu tác động đáng kể bệnh kinh tế xã hội cấp quốc gia Sự bùng phát dịch bệnh trồng có giá trị kinh tế tác động lớn đến hộ nơng dân địa phương có trồng thay phù hợp – phức hợp bệnh héo gừng Quảng Nam ví dụ Việc chẩn đốn xác tác nhân gây bệnh yếu tố quan trọng định thành công biện pháp phòng trừ Tuy nhiên, nhiều bệnh hại có triệu chứng giống nhau, khiến cho việc chẩn đốn chỗ gặp nhiều khó khăn, đơi khơng thể thực Vì vậy, phịng thí nghiệm chẩn đốn thành phần khơng thể thiếu mạng lưới bảo vệ thực vật Cán nhận trách nhiệm làm cơng việc chẩn đốn bệnh cần phải trải qua trình đào tạo trình độ đại học sau đại học kỹ nghiên cứu phịng thí nghiệm ngồi đồng ruộng, ngồi cịn phải nắm vững khái niệm bệnh quản lý bệnh hại tổng hợp Việc chẩn đốn xác tác nhân gây bệnh vô cần thiết cho việc xây dựng phát triển sở liệu bệnh quốc gia cách khoa học Cơ sở liệu bệnh Việt Nam phần then chốt cho thành công công tác kiểm dịch thực vật Hơn nữa, sở liệu quốc gia phần quan trọng biện pháp an ninh sinh học liên quan tới vấn đề trao đổi thương mại hàng nông sản, đặc biệt quốc gia thành viên Tổ chức hương mại hế giới Cuốn cẩm nang biên soạn nhằm giúp nhà nghiên cứu bệnh phát triển kỹ việc chẩn đoán tác nhân gây bệnh, chủ yếu bệnh nấm rễ thân Những bệnh thường ẩn, không biểu triệu chứng gây tổn thất đáng kể mặt kinh tế xã hội Việt Nam Lời nói đầu Nội dung sách dựa kinh nghiệm tác giả nhiều đồng nghiệp Australia Việt Nam qua chương trình tập huấn liên quan đến dự án khác tài trợ Trung tâm Nghiên cứu Nơng nghiệp Quốc tế Australia (ACIAR), chương trình nâng cao lực cho Nông nghiệp Phát triển Nông thôn AusAID, Quỹ tài trợ Crawford Viện Khoa học Kỹ thuật Công nghệ Cuốn cẩm nang bổ sung cho ấn phẩm khác ACIAR nhiều đồng nghiệp khác Việt Nam Peter Core Tổng Giám Đốc Trung tâm Nghiên cứu Nông nghiệp Quốc tế Australia Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Nội dung Lời nói đầu Lời tựa 17 Lời cảm ơn 19 Giới thiệu 21 1.1 Tổng quan sức khỏe thực vật 24 2.1 Cỏ dại 25 2.2 Sâu hại 26 2.3 huốc bảo vệ thực vật 26 2.4 Dinh dưỡng 26 2.5 Tình trạng đất 28 2.6 Môi trường 29 2.7 Lịch sử trồng 30 Quy trình chẩn đốn 32 3.1 Tài liệu tham khảo 23 Nghiên cứu cụ thể 32 Triệu chứng bệnh 43 4.1 Các triệu chứng thường gặp 43 4.2 Các bệnh lá, hoa 45 4.2.1 Sự sản sinh bào tử bệnh 46 4.2.2 Nấm tác nhân giống nấm ký sinh chuyên tính 47 4.2.3 Nấm bệnh sản sinh hạch nấm mô bệnh 48 Nội dung 5 4.3 Các bệnh rễ, gốc thân 49 4.4 Tài liệu tham khảo 49 Trên đồng ruộng 51 5.1 Dụng cụ cần thiết cho cơng tác chẩn đốn đồng ruộng 54 5.2 Tiến hành điều tra đồng ruộng 56 Trong phòng thí nghiệm 59 6.1 6.2 6.3 Kiểm tra mẫu bệnh phịng thí nghiệm 59 6.1.1 Héo còi cọc 60 6.1.2 Các bệnh 60 Kính lúp soi kính hiển vi 61 6.2.1 Sử dụng kính lúp soi 61 6.2.2 Sử dụng kính hiển vi 62 6.2.3 Chuẩn bị mẫu lam kính 63 Phân lập nấm gây bệnh 65 6.3.1 Phân lập từ thân 66 6.3.2 Phân lập từ rễ mảnh, nhỏ 68 6.3.3 Phân lập từ rễ thân gỗ 69 6.3.4 Bẫy đất 69 6.3.5 Phương pháp pha loãng dung dịch đất 71 6.4 Cấy truyền từ đĩa phân lập 74 6.5 Làm mẫu nấm 76 6.5.1 Cấy đơn bào tử 76 6.5.2 Cấy đỉnh sinh trưởng sợi nấm 78 6.6 Nhận biết mẫu nấm 79 6.7 Giám định nấm gây bệnh 81 6.8 Tài liệu tham khảo 82 Phân loại nấm tác nhân gây bệnh 83 7.1 Các đặc tính chủ yếu nấm vi sinh vật giống nấm 83 7.2 Phân loại nấm gây bệnh thực vật 84 7.3 Tài liệu tham khảo 87 Lây bệnh nhân tạo 88 8.1 Các phương pháp lây bệnh nhân tạo 89 8.1.1 Lây bệnh lên thân 90 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam 8.1.2 8.2 10 Lây bệnh vào đất 91 Chuẩn bị nguồn bệnh cho trình lây bệnh nhân tạo 92 8.2.1 Dịch bào tử 92 8.2.2 Môi trường hạt kê/vỏ trấu (thể tích 50:50) 92 Quản lý bệnh hại tổng hợp 95 9.1 Luân canh 96 9.2 Quản lý trồng 97 9.2.1 hoát nước tốt 97 9.2.2 Làm ngập ruộng 100 9.3 Cây giống, hạt giống nguồn giống bệnh khác 100 9.4 Kiểm dịch 101 9.5 Dùng giống kháng bệnh chống chịu bệnh 101 9.6 Dùng gốc ghép kháng bệnh 101 9.7 huốc trừ nấm 102 9.8 Vệ sinh 103 9.9 Tài liệu tham khảo 104 Các bệnh thối rễ thân có nguồn gốc từ đất 105 10.1 Sclerotinia sclerotiorum 109 10.2 Sclerotium rolfsii 112 10.3 Các loài Rhizoctonia 113 10.4 Phytophthora Pythium 116 10.4.1 Sinh sản vơ tính 116 10.4.2 Sinh sản hữu tính 117 10.4.3 Xác định phân biệt Phytophthora Pythium 117 10.4.4 Chu kỳ bệnh nấm Oomycete - Phytophthora Pythium 119 10.4.5 Các loài Pythium 119 10.4.6 Các loài Phytophthora 123 10.5 Fusarium 126 10.5.1 Giới thiệu 126 10.5.2 Nấm Fusarium gây bệnh Việt Nam 126 10.5.3 Phân lập nấm Fusarium gây héo 131 10.5.4 Fusarium oxysporum Fusarium solani—các đặc điểm hình thái giúp cho việc giám định 132 Nội dung 10.6 Verticillium albo-atrum V dahliae—nấm gây bệnh héo ngoại lai 134 10.7 Tuyến trùng ký sinh thực vật 137 10.7.1 Tách tuyến trùng khỏi đất rễ nhỏ 139 10.8 Bệnh vi khuẩn gây 142 10.8.1 Héo vi khuẩn 142 10.8.2 Phân lập vi khuẩn gây bệnh 144 10.9 Bệnh vi rút gây 148 10.10 Tài liệu tham khảo 150 11 12 Các bệnh phổ biến số trồng quan trọng 151 11.1 Các bệnh phổ biến ớt 151 11.2 Các bệnh phổ biến cà chua 154 11.3 Các bệnh phổ biến lạc 156 11.4 Các bệnh nấm phổ biến hành 158 11.5 Các bệnh nấm phổ biến ngô 160 Nấm, người động vật: vấn đề sức khỏe 162 12.1 Các nấm có độc tính chủ yếu Việt Nam 164 12.2 Các lồi Aspergillus có độc tính 165 12.2.1 Aspergillus lavus 165 12.2.2 Aspergillus niger 166 12.2.3 Aspergillus ochraceus 167 12.3 Các lồi Fusarium có độc tính 168 12.3.1 Fusarium verticillioides 168 12.3.2 Fusarium graminearum 169 13 Phịng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới 171 13.1 Phịng thí nghiệm chẩn đốn 171 13.1.1 Vị trí phịng thí nghiệm 171 13.1.2 Phòng chuẩn bị 172 13.1.3 Phòng 172 13.2 Bố trí phịng thí nghiệm 173 13.3 hiết bị phịng thí nghiệm 174 13.3.1 hiết bị cho phòng 174 13.3.2 hiết bị cho phòng chuẩn bị 176 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam 13.4 Nhà lưới cho việc nghiên cứu bệnh 177 13.4.1 Khu chuẩn bị 179 13.4.2 Hỗn hợp giá thể 179 13.4.3 Vệ sinh nhà lưới 180 13.4.4 Quản lý dinh dưỡng 181 Phụ lục Cách làm que cấy dẹp 183 Phụ lục Sức khỏe an toàn 185 Phụ lục Môi trường, khử trùng bảo quản mẫu vi sinh vật 186 Các chữ viết tắt 204 Chú giải thuật ngữ 205 Tủ sách 208 Bảng Bảng 8.1 Các phương pháp lây bệnh nhân tạo 89 Bảng 10.1 Các đặc tính tác nhân gây bệnh phổ biến tồn đất Việt Nam 106 Bảng 10.2 Đặc tính Sclerotinia sclerotiorum 109 Bảng 10.3 Đặc tính Sclerotium rolfsii 112 Bảng 10.4 Đặc tính lồi Rhizoctonia 115 Bảng 10.5 Đặc tính loài Pythium 122 Bảng 10.6 Đặc tính lồi Phytophthora 123 Bảng 10.7 Fusarium oxysporum (héo tắc bó mạch) 128 Bảng 10.8 Đặc điểm bệnh héo Fusarium 130 Bảng 10.9 Các đặc điểm để phân biệt Fusarium oxysporum Fusarium solani 134 Bảng 10.10 Đặc điểm Verticillium albo-atrum V dahliae 136 Bảng 11.1 Các bệnh phổ biến ớt 152 Bảng 11.2 Các bệnh phổ biến cà chua 154 Bảng 11.3 Các bệnh phổ biến lạc 156 Bảng 11.4 Các bệnh nấm phổ biến hành 158 Bảng 11.5 Các bệnh nấm phổ biến ngô 160 Bảng 12.1 Các nấm có độc tính chủ yếu Việt Nam 164 Bảng A3.1 Các chất kháng sinh thông dụng 188 Nội dung Khử trùng nhiệt Nhiệt độ thời gian cần thiết để tiêu diệt vi sinh vật tỷ lệ nghịch với Bảng A3.2 cho thấy thời gian tối thiểu cần cho khử trùng hiệu mức nhiệt độ cho hai loại nóng ẩm nóng khơ: Bảng A3.2 Thời gian cần cho việc khử trùng nóng ẩm nóng khơ mức nhiệt độ khác Nhiệt độ Nóng ẩm 100 °C 20 110 °C 2,5 121 °C 15 phút 130 °C 2,5 phút 140 °C Nóng khô 8,0 2,5 Những thời gian không bảo đảm tiệt trùng hồn tồn Đó mức thời gian tính tốn dựa kinh nghiệm mức độ lẫn tạp bình thường vi sinh vật chịu nhiệt Lồi, chủng khả hình thành bào tử vi sinh vật ảnh hưởng lớn đến tính mẫn cảm vi sinh vật nhiệt Trong điều kiện khử trùng nồi hấp, dạng sinh trưởng sinh dưỡng hầu hết loại vi khuẩn, nấm men, nấm hầu hết virút gây bệnh động vật bị tiêu diệt khoảng nhiệt độ từ 50oC đến 60oC 10 phút Tuy nhiên bào tử vi khuẩn cần 15 phút nhiệt độ từ 100°C đến 121°C Trong điều kiện nóng khơ bào tử vi khuẩn cần 160°C Tính chất vật liệu vi sinh vật khử trùng nhiệt yếu tố quan trọng Hàm lượng chất hữu cao thường có khuynh hướng bảo vệ bào tử vi sinh vật sinh dưỡng chống lại tác động nhiệt độ Chất đạm, gelatin, đường, tinh bột, axít nuclêic, mỡ dầu tác động cách Tác động mỡ dầu mạnh điều kiện nóng ẩm chất ngăn khơng cho ẩm tiếp xúc với vi trùng Độ pH quan trọng Sự chịu nhiệt bào tử vi khuẩn cao pH trung tính giảm tăng độ axít độ kiềm Khử trùng nóng khơ Điều kiện nóng khơ tiêu diệt vi trùng q trình oxi hóa Q trình nhiệt khơ phương pháp tốt để khử trùng đồ thủy tinh khô ống nghiệm, đĩa Petri thủy tinh, bình tam giác, pipet, tất ống tiêm thủy tinh dụng cụ kẹp, dao mổ kéo Phụ lục Môi trường, khử trùng bảo quản mẫu vi sinh vật 197 Đồ thủy tinh cần gói lại cho nóng vào chỗ cần sấy Quá trình hỗ trợ hệ thống quạt tủ sấy hời gian cần cho khử trùng 160°C Tuy nhiên hầu hết tủ sấy, để nhiều, cần đến đạt nhiệt độ Như 160°C tối thiểu cho lô dụng cụ lớn Bốn tiếng đồng hồ 170°C ranh giới an tồn Khơng mở tủ sấy thời gian sấy mở cửa vài giây khiến nhiệt độ giảm tới 70°C, mà phải cần sau để tủ sấy trở lại nhiệt độ mong muốn Việc làm cho lơ dụng cụ khơng khử trùng Khử trùng nóng ẩm Nóng ẩm tiêu diệt vi sinh vật, qua việc làm đơng làm biến tính enzym protêin cấu trúc chúng, q trình cần có nước Vì tất mơi trường ni cấy khử trùng nóng ẩm cách dùng nồi hấp Hấp nhiệt độ 100°C phương pháp đáng tin cậy sử dụng rộng rãi việc khử trùng môi trường nuôi cấy Hầu hết nồi hấp nồi áp suất hoạt động 121°C, nhiệt độ thời gian tối thiểu cho việc khử trùng 15 phút Việc quan trọng tất khơng khí phải khỏi nồi hấp, khơng nồi hấp không đạt nhiệt độ Nhiều nồi hấp lớn thực việc cách tự động Nếu dùng nồi áp suất nồi hấp không tự động, để nước xì van khoảng 2-3 phút trước đóng van vặn nắp Phải dùng rổ thay hộp khơng hấp pipet hộp đựng túi khơng khí bên khiến việc khử trùng hiệu lực Nhiệt độ KHƠNG PHẢI áp suất tiêu chí thực định thành cơng q trình khử trùng Nồi hấp phải chỉnh cho áp suất không giảm q nhanh dẫn đến tượng mơi trường sôi tràn làm ướt nắp đậy Môi trường cần để yên nồi khoảng phút sau nồi trở lại áp suất khơng khí, đơi dung dịch cịn tình trạng q nóng bắn mơi trường agar sôi lên người, gây bỏng Nếu để nồi hấp lâu, bớt thể tích chân khơng tích tụ nồi hấp 198 Cẩm nang chẩn đốn bệnh Việt Nam Khơng nên hấp bình chứa mơi trường lớn nhỏ khác mẻ lượng lớn cần nhiều thời gian để đạt nhiệt độ cần thiết, làm cho lượng nhỏ nhận nhiều nhiệt Bảng A3.3 đưa dẫn thời gian cần thêm để đạt nhiệt độ mong muốn: Bảng A3.3 Thời gian khuyến cáo để khử trùng lượng dung dịch khác Thể tích dung dịch Thời gian thêm (phút) Tổng cộng thời gian 121°C (phút) chai 100 mL 10 25 chai 250 mL 12 27 chai 500 mL 18 33 chai 1000 mL 22 37 chai 2000 mL 27 42 Khử trùng dụng cụ Kẹp, que cấy dụng cụ khác phải khử trùng trước tiếp xúc với mẫu cấy nhằm tránh lẫn tạp Que cấy khử trùng tốt cách hơ cho nóng đỏ lửa Phải để que cho nguội xuống nhiệt độ phịng trước dùng Que cấy nóng nguyên nhân phổ biến làm cho việc cấy truyền, cấy đỉnh sợi nấm cấy đơn bào tử bị thất bại Kẹp dao khử trùng cách nhúng vào cồn Trước dùng, đốt cồn cách hơ qua lửa để cồn bốc cháy Đừng giữ dụng cụ lửa làm cho dụng cụ q nóng Cẩn thận khơng đặt dụng cụ nóng hơ lửa dung cụ gần cồn gây hỏa hoạn Khử trùng bề mặt nơi làm việc Khay, bàn bề mặt khác khử trùng với dung dịch khử trùng Cồn dung dịch thường dùng Cồn pha nước chất khử trùng tốt nhất, thích hợp cồn 70% Cồn mêthyl sử dụng để khử trùng Phụ lục Môi trường, khử trùng bảo quản mẫu vi sinh vật 199 A3.6 Bảo quản mẫu cấy bảo quản mẫu vi sinh vật sống Mẫu vi sinh vật sống lưu giữ dùng làm mẫu tham khảo, để sau dùng q trình lây bệnh nhân tạo thí nghiệm khác Các mẫu vi sinh vật lưu trữ sưu tập mẫu vi sinh vật quốc gia phần vật liệu tham khảo nhằm hỗ trợ sở liệu quốc gia tác nhân gây bệnh bảo quản nước cất—Pythium Phytophthora Đây phương pháp đơn giản tốn đặc biệt thích hợp cho Pythium Phytophthora Nên sử dụng tủ cấy vơ trùng để thực quy trình giữ mẫu Cắt mẩu thạch vuông cm từ viền tản nấm mọc mạnh Đặt miếng thạch có chứa nấm vào lọ McCartney có chứa nước vơ trùng vặn chặt nắp Lọ bảo quản để nơi mát Không bảo quản tủ lạnh số lồi bị chết nhiệt độ thấp Các mẫu cất giữ từ tháng đến năm, tùy theo loài Các mẫu hồi phục cách lấy miếng thạch từ lọ cấy lên môi trường cho mặt có nấm tiếp xúc với bề mặt môi trường Cần đảm bảo nước miếng thạch khơng bị tạp vi khuẩn— có mặt vi khuẩn làm cho nấm chết nhanh chóng bảo quản hạch nấm Hạch nấm lưu giữ thời gian dài điều kiện khô mát lọ thủy tinh nhỏ có nắp vặn Đây kỹ thuật thích hợp để lưu giữ lồi Sclerotium rolfsii, Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia spp (các loài tạo hạch nấm) Tại vùng nhiệt đới tốt nên lưu giữ hạch nấm giấy thấm tiệt trùng đặt bên silica gel màu xanh lọ McCartney (hoặc lọ có nắp vặn tương tự) để đảm bảo ẩm độ thấp trình bảo quản bảo quản mẩu thân bị bệnh Các mẫu vi sinh vật ni cấy WA tiệt trùng có chứa mẩu mô hạt tiệt trùng Các mẩu mơ thực vật có chứa vi sinh vật làm khô cất giữ ống thủy tinh nhỏ Một cách khác, mẫu bảo quản lọ kín giấy thấm vơ trùng đặt bên lớp silica gel màu xanh để đảm bảo điều kiện bảo quản ln khơ Để có thơng tin sâu rộng việc bảo quản mẫu vi sinh vật, tham khảo Shivas and Beasley (2005), Quản lý mẫu bệnh thực vật 200 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Làm đông khô Làm đông khơ phương pháp chọn lựa cho q trình bảo quản lâu dài nhiều loại nấm thường dùng hầu hết nơi quan trọng lưu giữ mẫu vi sinh vật Điều trở ngại cần có thiết bị chuyên môn tốn Phương pháp thích hợp cho lồi nấm mọc sinh bào tử tốt mô tiệt trùng mẩu thân lúa xanh mẩu cẩm chướng Cũng có nhiều lồi nấm khơng thể bảo quản phương pháp đông khô, nấm trứng, gỉ sắt sương mai Các mẫu nuôi cấy làm đông khô cách làm khơ miếng thân có chứa mẫu vi sinh vật ống thuỷ tinh nhỏ điều kiện chân không cao (10–1 đến 10–2 Torr) Các ống thủy tinh nút miếng gòn nhỏ hấp cốc đong đậy nắp sơ Lấy năm mẩu thân từ mẫu nuôi cấy (sau hai tuần nuôi cấy từ đơn bào tử), dùng dụng cụ vô trùng chuyển sang ống thủy tinh Ống đóng lại sau cho nhãn vào lọ, sau dùng đèn hàn hơ lửa kéo dài ống thành hình dạng đồng hồ cát Ống gắn vào máy đông khô vận hành máy 12-24 giờ, hàn kín điều kiện chân không cao bảo quản nhiệt độ thường 5°C Nhiều loài Fusarium chi nấm khác làm đông khô thành công với kỹ thuật bảo quản nhiều năm Các mẫu vi sinh vật hồi phục cách cấy mẩu thân làm đơng khơ lên mơi trường thích hợp Ống thủy tinh chứa mẫu bảo quản phải khử trùng bề mặt trước đập vỡ để lấy mẩu Các phương pháp bảo quản mẫu vi sinh vật sống khác Để bảo quản lâu, mẫu vi sinh vật lưu giữ dạng dung dịch bào tử glycerol -80°C Nhiều lồi lưu giữ thành cơng nitơ lỏng Tuy nhiên, phương pháp tốn bảo quản mẫu nấm cho mục đích trì liệu tiêu mẫu Các mẫu gốc nuôi cấy môi trường PDA phải nộp đến trung tâm lưu giữ tiêu mẫu giới công nhận việc mơ tả thức lồi công bố Các mẫu nuôi cấy từ đơn bào tử nảy mầm phát triển điều kiện nhiệt độ ánh sáng bình thường từ đến tuần Mẫu ni cấy sau xử lý chết cách để đĩa tiếp xúc với dung dịch formalin hộp kín ngày Mẫu sau bảo quản cách dùng agar glycerine Ba gram agar hòa tan 147 mL nước, sau chia thành phần mL bỏ ống nghiệm trước hấp Lật ngược nắp đĩa mẫu nuôi cấy, cho 1,5-1,75 mL glycerine mL thạch nóng lên glycerine Dùng dụng cụ vơ trùng nhấc mẫu nuôi cấy Phụ lục Môi trường, khử trùng bảo quản mẫu vi sinh vật 201 từ đĩa Petri lên đặt lên hỗn hợp nắp đĩa Các mẫu ni cấy sau khô ngăn kéo 3-5 ngày, che mảnh giấy Khi khơ, mẫu dẻo cao su lấy khỏi đĩa Petri để lưu trữ Quy trình phát triển để bảo quản loài Fusarium Trung tâm Nghiên cứu Fusarium, Đại học Bang Pennsylvania Quy trình phù hợp với nhiều loại nấm bảo quản nấm dầu khoáng Nhiều mẫu nấm bảo quản dầu khống (parain) tới 4-5 năm 15-20°C Các mẫu nên ni cấy mơi trường PDA có thêm 0,1% yeast extract (như Vegemite®) Dầu khống chuẩn bị sau: Đổ 11 mL dầu parain vào chai McCartney 25 mL khơng có nắp cao su Đậy nắp lỏng hấp khử trùng 121°C 20 phút Để cho hoàn toàn nguội nồi hấp Lấy nước khỏi dầu có, cách làm nóng tủ sấy 120°C để nguội dần tủ sấy qua đêm xuống nhiệt độ thường Loại bỏ lọ có dầu vẩn đục thực lại q trình làm nóng tủ sấy Các mẫu nấm cần nuôi cấy mặt nghiêng mơi trường PDA có thêm yeast extract lọ McCartney 25mL (khơng có nắp cao su) nấm mọc bao phủ tồn bề mặt mơi trường Để bảo quản mẫu nuôi cấy, dùng dụng cụ vô trùng thêm 11 mL dầu thô khử trùng vào mẫu trong tủ cấy vô trùng Ghi nhãn cẩn thận với số mẫu ngày cất giữ Các mẫu vi sinh vật cấy lại sau: Dùng dụng cụ tiệt trùng lấy miếng thạch nhỏ từ mẫu bảo quản hấm dầu với giấy lọc giấy thấm tiệt trùng Cấy mẩu thạch lên mơi trường thích hợp Ghi chú: Mỗi lần nên bảo quản ba mẫu từ nguồn nấm, mẫu bảo quản dầu thô cần thay sau 4-5 năm Các tác giả chân thành cảm ơn N.J Cother M.J Priest qua đóng góp mặt kỹ thuật họ 202 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Tài liệu tham khảo Andrews S and Pitt J.I 1986 Selective medium for isolation of Fusarium species and dematiaceous hyphomycetes from cereals Applied Environmental Microbiology 51(6), 1235–1238 Fisher N.L., Burgess L.W., Toussoun T.A and Nelson P.E 1982 Carnation leaves used as a substrate and for the preservation of cultures of Fusarium species Phytopathology 72, 151–153 Kelman A 1954 he relationship of pathogenicity in Pseudomonas solanacearum to colony appearance on tetrazolium medium Phytopathology 44, 693–694 Nash S.M and Snyder W.C 1962 Quantitative estimations by plate counts of propagules of the bean root rot Fusarium in ield soils Phytopathology 52, 567–572 Nirenberg H.I 1976 Untersuchungen uber die morphologische und biologische diferenzierung der Fusarium section liseola Mitt Biol Bundesanst Land Forstw Berlin-Dahlem Shivas R and Beasley D 2005 Management of plant pathogen collections Australian Government Department of Agriculture, Fisheries and Forestry At: Phụ lục Môi trường, khử trùng bảo quản mẫu vi sinh vật 203 Các chữ viết tắt 204 ACIAR Trung tâm Nghiên cứu Nông nghiệp Quốc tế Australia ATSE Viện Khoa học Kỹ thuật Công nghệ CFU đơn vị tạo tản nấm CLA thạch cẩm chướng DCNA Dichloronitroaniline DCPA dichloran chloramphenicol peptone agar DNA axít deoxyribonucleic DON Deoxynivalenol EDDHA axít ethylmediamine-di-o-hydroxyphenylacetic IDM quản lý bệnh hại tổng hợp KBM môi trường King's B PCA thạch cà rốt khoai tây PCNB pentachloronitrobenzene PDA thạch đường khoai tây PPA peptone PCNB agar (môi trường Nash-Snyder) PPSD Chi cục Bảo vệ thực vật PSM mơi trường chọn lọc Phytophthora RNA axít ribonucleic SNA Spezieller Nährstofarmer agar SPA sucrose peptone agar UV tử ngoại WA thạch nước cất Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Chú giải thuật ngữ Đĩa cành Đảm Cấu trúc sinh sản vơ tính hình đĩa sản sinh bào tử vơ tính hể hình chùy bào tử đảm hình thành Túi đực (thể đực) Cháy Bộ phận sinh dục 'đực' tìm thấy số lồi nấm Một loại bệnh có triệu chứng mô chết nhanh Chất kháng sinh Bào tử hậu Một hợp chất hóa học, tổng hợp tự nhiên nhân tạo có khả ngăn chặn tiêu diệt số vi sinh vật cụ thể Bào tử dạng bảo tồn có vách dày, hình thành qua q trình sinh sản vơ tính Hình thành tạo tản nấm Bào tử túi Bảo tử sinh sản hữu tính hình thành túi bào tử nấm túi Một trình tản nấm hình thành phát triển giá thể Cành bào tử phân sinh Nấm túi Một lớp nấm thực sản sinh bào tử túi hữu tính bên túi bào tử Sợi nấm chun biệt bào tử nấm vơ tính hình thành Bào tử nấm vơ tính Túi bào tử hể hình túi bào tử túi hình thành Bào tử nấm hình thành qua trình sinh sản vơ tính Giống trồng trọt Khơng triệu chứng Khơng hình thành triệu chứng Một giống trồng tạo cách lai giống chọn lọc Nấm đảm Chết ẻo (chết rạp) Lớp nấm sinh sản hữu tính tạo bào tử đảm đảm bào tử hối phận tiếp giáp với mặt đất, khiến cho gẫy rạp chết nhanh hường liên quan với độ ẩm cao đất Chú giải thuật ngữ 205 Nấm bất toàn Bị lây nhiễm Một nhóm lớn hỗn tạp gồm có nấm thực mà mà giai đoạn sinh sản hữu tính khơng biết đến Một phận cụ thể bị tác động số lượng lớn vi sinh vật ký sinh Lây bệnh Chẩn đốn Đặc tính dùng để phân biệt sinh vật với sinh vật khác Quá trình lây nhân tạo tác nhân gây bệnh cho ký chủ Phân lập Chu kỳ bệnh Một chuỗi kiện theo chu kỳ liên quan đến sống tác nhân gây bệnh, bao gồm giai đoạn gây nhiễm, phát triển, sinh sản bảo tồn Quá trình lấy tác nhân gây bệnh từ ký chủ phục vụ cho nghiên cứu Quy tắc Koch Sinh vật có nhân điển hình Các điều kiện Robert Koch đặt để kiểm tra xem vi sinh vật có phải tác nhân gây bệnh hay không Một sinh vật mà nhân chứa vật liệu di truyền (DNA) Giầm nát Làm vỡ thành mảnh nhỏ với nước huốc trừ nấm Một hợp chất hóa học gây độc cho nấm Khảm Dạng lồi Một loại hình góc cạnh bất thường, thường thấy bị bệnh tác nhân virút gây Một dạng sinh học chuyên tính tác nhân gây bệnh gây nhiễm chi loài thực vật Lốm đốm Giao tử Dạng hình có vùng đậm nhạt khơng đặn Một tế bào sinh sản chứa nửa lượng vật liệu di truyền cần thiết cho trình sinh sản Sợi nấm Nấm dị tản Độc tố nấm Nấm cần hai cá thể để tiến hành q trình sinh sản hữu tính, cá thể có giao tử 'đực' giao tử 'cái' Các chất chuyển hóa bậc hai nấm tạo phần bị bệnh mà gây bệnh cho gia súc người hấp thụ vào Nấm đồng tản Hoại tử Một cá thể nấm sản sinh hai giao tử 'đực' 'cái' cho việc sinh sản hữu tính Vật liệu hữu màu chết, tạo xung quanh vùng bị bệnh Sợi nấm Tuyến trùng Một tế bào xôma dạng sợi nấm tạo Một loại giun trịn khơng phân đốt Một số tuyến trùng ký sinh thực vật Một đám tế bào nấm dạng sợi Sự xâm nhiễm Sự xâm nhập vi sinh vật ký sinh vào ký chủ 206 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Các triệu chứng khơng điển hình Các triệu chứng khơng hỗ trợ cho việc chẩn đốn Túi nỗn (thể cái) Vi sinh vật hoại sinh Bộ phận sinh dục 'cái' tìm thấy số lồi giống nấm Một vi sinh vật dùng chất hữu chết làm nguồn thực phẩm Nấm trứng Hạch nấm Nhóm phân loại vi sinh vật giống nấm, số sinh sản vơ tính tạo bào tử di động có chức gây nhiễm Một đám tế bào sợi nấm dày đặc che phủ lớp đậm màu, có khả tồn lâu dài Bào tử trứng Có vách ngăn Một bào tử sinh sản hữu tính ngành Nấm trứng Sợi nấm có vách ngăn cách Khối bào tử Bảo tồn Khả sống sót tác nhân gây bệnh giai đoạn lây nhiễm ký chủ Một cấu trúc tạo bào tử vơ tính chứa đám cành bào tử phân sinh đám sợi nấm Bào tử Tác nhân gây bệnh Một sinh vật có khả gây bệnh Bộ phận sinh sản nấm Bào tử sinh sản hữu tính vơ tính Tính gây bệnh Bọc bào tử Khả gây bệnh Một cấu trúc giống túi chứa bào tử sinh sản vơ tính Trong số trường hợp, bọc bào tử đóng vai trị mầm lây nhiễm Quả thể hể sinh sản hữu tính tạo bào tử túi Tế bào sinh bào tử Một tế bào chuyên biệt bào tử vơ tính sinh Sinh vật chưa có nhân điển hình Một vi sinh vật mà nhân có màng bọc không chứa vật liệu di truyền Mầm bệnh Một phần sinh vật tách khỏi sinh vật mẹ để tạo thành sinh vật Vectơ Một sinh vật môi giới làm lan truyền tác nhân gây bệnh Tính độc Mức độ tính gây bệnh vi sinh vật Du động bào tử Một bào tử sinh sản vơ tính, có lơng roi Các lông roi giúp bào tử di chuyển nước tự Quả cành Một thể sinh sản vô tính tạo bào tử vơ tính hân rễ Một dạng thân mọc ngang đất tạo mầm rễ Chú giải thuật ngữ 207 Tủ sách Tủ sách nguồn thông tin quan trọng phịng thí nghiệm chẩn đốn Một sách có giá trị cần có tủ sách Plant Pathology (Agrios 2005) Cuốn sách chứa đựng thông tin giá trị loại tác nhân gây bệnh - nấm, vi khuẩn, virút, mycoplasma tuyến trùng Một số lượng lớn bệnh minh họa sách với nhiều sơ đồ xuất sắc Hiệp hội Bệnh Mỹ phát hành trích yếu hình ảnh bệnh hại trồng nhóm trồng Đây nguồn tài liệu quý giá khuyến cáo cho phịng thí nghiệm chẩn đốn Nhiều tổ chức quốc tế ACIAR phát hành nhiều tài liệu nhiều lĩnh vực khác với giá thấp miễn phí Một lượng lớn thơng tin sẵn có từ website thức quan nông nghiệp nhà nước trường đại học Nên tận dụng nguồn thông tin lưu trữ để tham khảo tương lai, phân loại theo trồng quan tâm theo nhóm tác nhân Tủ sách cần cập nhật liên tục với tài liệu tham khảo bệnh phương pháp chẩn đoán bệnh hành Dưới danh mục tài liệu tham khảo tác giả đề nghị thêm vào tủ sách bạn phịng thí nghiệm chẩn đoán Agrios G.N 2005 Plant pathology, 5th edition Elsevier Academic Press: San Diego, California Allen C., Proir P and Hayward A.C 2005 Bacterial wilt disease and the Ralstonia solanacearum species complex American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Andrews S and Pitt J.I 1986 Selective medium for isolation of Fusarium species and dematiaceous hyphomycetes from cereals Applied Environmental Microbiology 51(6), 1235–1238 208 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Bridge J and Starr J.L 2007 Plant nematodes of agricultural importance: a colour handbook Manson Publishing Ltd: London Cheng Y and Horne P 1998 Field experiments with forages and crops: practical tips for getting it right the irst time ACIAR Monograph No 53 Desjardins A.E 2006 Fusarium mycotoxins: chemistry, genetics and biology American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Drenth A and Guest D.I 2004 Diversity and management of Phytophthora in Southeast Asia ACIAR Monograph No 114 At: Drenth A and Sendall B 2001 Practical guide to detection and identiication of Phytophthora CRC for Tropical Plant Protection: Brisbane, Australia Dugan F.M 2006 he identiication of fungi: an illustrated introduction with keys, glossary, and a guide to literature American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Erwin D.C and Ribeiro O.K 1996 Phytophthora diseases worldwide American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Fisher N.L., Burgess L.W., Toussoun T.A and Nelson P.E 1982 Carnation leaves used as a substrate and for the preservation of cultures of Fusarium species Phytopathology 72, 151–153 Hillocks R.J and Waller J.M 1997 Soilborne diseases of tropical crops CAB International University Press: Cambridge Jones J.B., Jones J.P., Stall R.E and Zitter T.A 1991 Compendium of tomato diseases American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Kelman A 1954 he relationship of pathogenicity in Pseudomonas solanacearum to colony appearance on tetrazolium medium Phytopathology 44, 693–694 Kokalis-Burelle N., Porter D.M., Rodriguez-Kabana R., Smith D.H and Subrahmanyam P 1997 Compendium of peanut diseases 2nd edition American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Leslie J.F and Summerell B.A 2006 he Fusarium laboratory manual Blackwell Publishing: Oxford Luc M., Sikora R and Bridge J 2005 Plant parasitic nematodes in subtropical and tropical agriculture 2nd edition CABI Bioscience, Egham, Surry, U.K McMaugh T 2005 Guidelines for surveillance for plant pests in Asia and the Paciic ACIAR Monograph No 119 At: Nash S.M and Snyder W.C 1962 Quantitative estimations by plate counts of propagules of the bean root rot Fusarium in ield soils Phytopathology 52, 567–572 Tủ sách 209 Nguyễn N.C 2003 Tuyến trùng thực vật sở phòng trừ Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Nirenberg H.I 1976 Untersuchungen uber die morphologische und biologische diferenzierung der Fusarium section liseola Mitt Biol Bundesanst Land Forstw Berlin-Dahlem Ploetz R.C., Zentmyer G.A., Nishijima W.T., Rohrbach K.G and Ohr H.D 1994 Compendium of tropical fruit diseases American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Schadd N.W., Jones J.B and Chun W 2001 Laboratory guide for identiication of plant pathogenic bacteria, 3rd edition American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Schwartz H.F and Mohan S.K 2008 Compendium of onion and garlic diseases and pests 2nd edition American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Shivas R and Beasley D 2005 Management of plant pathogen collections Australian Government Department of Agriculture, Fisheries and Forestry At: Stirling G.R and Eden L.M 2007 he impact of organic amendments and mulch on root-knot nematode and Pythium root rot of capsicum Presented at the Australasian Plant Pathology Society Conference, Adelaide, 24–27 September 2007 Summerell B.A., Leslie J.F., Backhouse D., Bryden W L and Burgess L.W 2001 Fusarium: Paul E Nelson memorial symposium American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Timmer L.W., Garnsey S.M and Graham J.H 2000 Compendium of citrus diseases 2nd edition American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Waterhouse D.F 1998 Biological control of insect pests: Southeast Asian prospects ACIAR Monograph No 051 At: White D.G 1999 Compendium of corn diseases 3rd edition American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota Zitter T.A., Hopkins D.L and homas C.E 1996 Compendium of cucurbit diseases American Phytopathological Society Press: St Paul, Minnesota 210 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam ... in) ISBN 978 921434 80 (trực tuyến) Biên t? ??p kỹ thu? ?t Biotext Pty Ltd hi? ?t kế Clarus Design Pty Ltd In Goanna Print Pty Ltd Dịch: All Language Typesetters & Printers Pty Ltd Hiệu đính dịch: Phan... hình thành khối bào t? ?? thân), (d) teo th? ?t Rhizoctonia sp., (e) thối rễ ? ?t Phytophthora gây héo trầm trọng, (g) thối rễ lạc Pythium, (h) thể Gibberella zeae gây thối thân ngô 50 Hình 5.1 Trao... Management of plant pathogen collections Australian Government Department of Agriculture, Fisheries and Forestry At: Phần Giới thiệu 23 T? ??ng quan sức khỏe thực vật