LUẬN văn THẠC sĩ HAY nghiên cứu thành phần và hàm lượng lipid, axit béo của một số loài rong nâu tại vùng biển việt nam​

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUY N V N TUY N NH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN VÀ HÀM LƯỢNG LIPID, XIT BÉO CỦ MỘT SỐ LOÀI RONG NÂU TẠI VÙNG BIỂN VIỆT N M LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÀ NỘI, 11/2018 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUY N V N TUY N NH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN VÀ HÀM LƯỢNG LIPID, XIT BÉO CỦ MỘT SỐ LOÀI RONG NÂU TẠI VÙNG BIỂN VIỆT N M Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm - Hóa sinh Mã ngành: 8.42.01.14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hướng dẫn khoa học : TS Lê Tất Thành Đơn vị : Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên HÀ NỘI, 11/2018 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com L I C M ĐO N Tôi xin cam đoan: Đây cơng trình nghiên cứu riêng tơi s hướng d n hoa h c TS Lê T t Thành C c t qu nghiên cứu thu đư c luận văn hoàn toàn trung th c chưa đư c công bố b t ỳ cơng trình khác Tác giả luận văn Nguy n Văn Tuy n nh i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com L I CẢM N Với lòng bi t ơn chân thành sâu sắc, xin gửi lời c m ơn tới TS Lê T t Thành, người th y đ tận tình hướng d n hoa h c, ch hướng nghiên cứu cho tôi, c ng đ ng viên gi p đ suốt qu trình th c luận văn Tơi xin trân tr ng c m ơn GS.TS Ph m Quốc Long, Viện trưởng Viện Ho h c c c h p ch t thiên nhiên đ đ ng viên, t o u iện cho h c tập làm việc đ c th th c tốt c c công việc đ t đư c t qu b o c o luận văn Tôi xin chân thành c m ơn c c anh ch , c c b n đ ng nghiệp Trung tâm Nghiên cứu Ph t tri n c c s n ph m thiên nhiên, Phòng Ho sinh h u - Viện H a h c c c h p ch t thiên nhiên đ gi p đ , đ ng g p nhi u ý i n quý b u suốt qu trình th c luận văn Tôi xin chân thành c m ơn c c đ ng nghiệp Phòng Ho sinh so s nh – Trung tâm Khoa h c Quốc gia v Sinh h c bi n, Phân viện Vi n Đông, Viện Hàn lâm Khoa h c L Nga đ h tr tơi qu trình th c nghiệm Cuối cùng, tơi xin chân thành c m ơn gia đình b n bè đ đ ng viên tơi hồn thành tốt b n luận văn Luận văn hoàn thành với s h tr inh ph t đ tài ", VAST TĐ DL 05/16-18 X â ọ ả ! ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC L I CAM ĐOAN i L I C M N ii DANH M C NG v DANH M C H NH, S Đ VÀ I U Đ vi MỞ ĐẦU .1 CHƯ NG 1: TỔNG QUAN .3 1.1 Rong bi n 1.1.1 Giới thiệu chung 1.1.2 Rong Nâu 1.1.2.1 Nghiên cứu rong Nâu th giới 1.1.2.2 Nghiên cứu rong Nâu Việt Nam .7 1.2 Lipid 1.2.1 C c lớp ch t lipid 10 1.2.2 ng d ng phương ph p hối ph phân t ch c u tr c lipid 11 1.2.3 Phương ph p hối ph (Mass Spectrometry - MS) 12 1.2.4 M t số nghiên cứu v lớp ch t lipid rong, c bi n 14 CHƯ NG 2: TH C NGHIỆM 19 2.1 D ng c , thi t b , h a ch t 19 1.1.3 D ng c , thi t b 19 2.1.3 Dung môi, h a ch t 19 2.2 Đối tư ng nghiên cứu .19 2.3 Phương ph p nghiên cứu 22 2.3.1 Phương ph p thu b o qu n m u 22 2.3.2 Phương ph p chi t lipid t ng 22 2.3.3 Phân t ch thành ph n hàm lư ng c c lớp ch t lipid 23 2.3.4 Phương ph p x c đ nh thành ph n hàm lư ng c c axit b o lipid t ng 24 2.3.5 Phương ph p x c đ nh d ng phân tử c u tr c c c h p ch t 25 CHƯ NG III K T QU NGHI N C U 26 3.1 Hàm lư ng lipid t ng c c m u rong Nâu nghiên cứu 26 3.2 K t qu nghiên cứu thành ph n hàm lư ng c c lớp ch t lipid lipid t ng c c m u rong nghiên cứu 27 3.3 K t qu đ nh lư ng thành ph n hàm lư ng c c lớp ch t lipid lipid t ng c c m u rong nghiên cứu 32 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.4 Thành ph n hàm lư ng c c axit b o lipid t ng c c m u rong Nâu nghiên cứu .34 3.5 K t qu x c đ nh d ng phân tử lớp ch t 38 3.5.1 D ng phân tử lớp monogalactosyldiacylglycerol (MGDG) 39 3.5.2 D ng phân tử lớp digalactosyldiacylglycerol (DGDG) 41 3.5.3 D ng phân tử lớp sulfoquinovosyldiacylglycerol (SQDG) 43 3.5.4 D ng phân tử lớp phosphatidylglycerol (PG 45 3.5.5 D ng phân tử lớp phosphatidylinositol (PI 48 3.5.6 D ng phân tử lớp phosphatidylcholine (PC 50 CHƯ NG IV K T LUẬN VÀ KI N NGH 54 TÀI LIỆU THAM KH O 55 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com D NH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành ph n lồi phân bố rong Nâu Khánh Hịa Bảng 2.1 Danh s ch 11 m u rong Nâu nghiên cứu 20 Bảng 3.1 Hàm lư ng lipid t ng c c m u rong Nâu nghiên cứu ( hối lư ng m u tươi 26 Bảng 3.2 Đ nh t nh thành ph n hàm lư ng c c lớp ch t lipid t ng 28 Bảng 3.3: K t qu hàm lư ng c c lớp ch t lipid lipid t ng 32 Bảng 3.4 Thành ph n hàm lư ng c c axit b o c c m u nghiên cứu 34 Bảng 3.5: Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp MGDG m u rong 1KT 40 Bảng 3.6 Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp DGDG m u rong 1KT 42 Bảng 3.7 Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp SQDG m u rong 1KT 44 Bảng 3.8 Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp PG m u rong bi n 1KT47 Bảng 3.9 Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp PI m u rong 1KT 50 Bảng 3.10 Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp PC m u rong 1KT 52 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com D NH MỤC H NH, S ĐỒ VÀ BIỂU ĐỒ Hình 1.1 M t số loài rong bi n Hình 1.2 C u t o phân tử lipid Hình 1.3 C u t o lipid sở glycerol 10 Hình 1.4 C u t o lipid sở sphingozin 10 Hình 1.5 L a ch n i u t o ion .12 H nh 3.1 C u tr c h a h c d ng phân tử MGDG .39 Hình 3.2 Sắc ý đ d ng phân tử MGDG 39 Hình 3.3 Ph MS1[E+] [E-] lớp ch t MGDG 39 H nh 3.4 Ph MS2 [E+] d ng phân tử MGDG 18:4/20:5 40 H nh 3.5 C u tr c h a h c d ng phân tử DGDG 41 Hình 3.6 Sắc ý đ d ng phân tử DGDG 41 H nh 3.7 Ph MS1 [E+] MS1 [E-] lớp ch t DGDG 42 H nh 3.8 Ph MS2 [E-] d ng phân tử DGDG 16:0/18:1 42 H nh 3.9 C u tr c h a h c d ng phân tử SQDG 43 Hình 3.10 Sắc ý đ d ng phân tử SQDG 43 H nh 3.11 Ph MS1 [E-] lớp ch t SQDG 43 H nh 3.12 Ph MS2 [E-] d ng phân tử SQDG 16:0/18:1 44 Hình 3.13 C u tr c h a h c d ng phân tử PG 45 Hình 3.14 Sắc ý đ d ng phân tử PG 46 H nh 3.15 Ph MS1 [E-] lớp ch t PG .46 Hình 3.16 Ph MS2 [E-] d ng phân tử PG 16:1/18:1 .47 Hình 3.17 C u tr c h a h c d ng phân tử PI 48 H nh 3.18 Sắc ý đ d ng phân tử PI .48 H nh 3.19 Ph MS [E-] lớp ch t PI 49 Hình 3.20 Ph MS2 [E-] d ng phân tử PI 16:0/18:1 49 Hình 3.21 C u tr c h a h c d ng phân tử PC 50 H nh 3.22 Sắc ý đ d ng phân tử PC 51 H nh 3.23 Ph MS [E+] lớp ch t PC 51 H nh 3.24 Ph MS [E-] MS2 [E-] d ng phân tử PC 16:0/18:1 52 Sơ đồ 2.1 Th c nghiệm chi t lipid t ng 23 Sơ đồ 2.2 Th c nghiệm phân t ch thành ph n hàm lư ng c c lớp ch t lipid .24 Bi u đồ 3.1 Hàm lư ng lipid t ng c c m u 27 Bi u đồ 3.2 Thành ph n hàm lư ng c c lớp ch t lipid c c m u rong bi n 33 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com D NH MỤC TỪ VI T TẮT Pol Polar lipid Lipid phân c c ST Sterol Sterol FFA Free fatty acid Axit b o t TG Triacylglycerol Triacylglycerol DG Diacylglycerol Diacylglycerol MADG Monoalkyldiacylglycerol Monoalkyldiacylglycerol HW Hydrocarbon wax Hydrocarbon sáp MUFA Monounsaturated fatty acids Axit b o hông no nối đôi PUFA Polyunsaturated fatty acids Axit b o đa nối đôi EPA Eicosapentaenoic acid Axit Eicosapentaenoic DHA Docosahexanenoic acid Axit Docosahexanenoic GC Gas chromatography Sắc ý h GC-MS Gas chromatography mass spectroscopy Sắc ý h MGDG Monogalactosyldiacylglycerol Monogalactosyldiacylglycerol DGDG Digalactosyldiacylglycerol Digalactosyldiacylglycerol SQDG Sulfoquinovosyldiacylglycerol Sulfoquinovosyldiacylglycerol PG Phosphatidylglycerol Phosphatidylglycerol PC Phosphatidylcholine Phosphatidylcholine PI Phosphatidylinositol Phosphatidylinositol TLC Thin layer chromatography Sắc ý lớp m ng hối ph vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỞ ĐẦU Lipid m t nh ng thành ph n sinh h a b n đ ng th c vật, với protein, axit nucleic, carbonhydrat, lipid t o thành c u tử sở t t c c c t bào Lipid đ ng vai trò quan tr ng ngu n cung c p lư ng cho th sinh vật với ho ng 8-9 kcal/gam, đ ng thời chứa c c vitamin tan d u c ng axit béo thi t y u Đ nh nghĩa lipid theo nghĩa r ng m t h p ch t h u c ngu n gốc sinh h c c th chi t t vật liệu h u c c dung môi h c Theo nghĩa hẹp, lipid ch c c d n xu t axit b o m ch dài Hiện chưa c s thống nh t chung v hệ thống phân lo i lipid Theo phân lo i loor, lipid đư c chia thành c c lo i: lipid đơn gi n este axit b o với alcol khác (v d : glyceride, sáp ong, steroid) Lipid phức t p d ng este hi thủy phân gi i ph ng ngồi alcol axit b o cịn c c c thành ph n h c axit phosphoric, c c đường… Phospholipid c c lo i lipid phức t p đ nh m hydroxyl bậc h p ph n alcol (glycerol, sphingosine, diol… đư c este h a với axit phosphoric monoester axit phosphoric ao g m glycerophospholipid spingophospholipid; glycolipid lipid phức t p c chứa m t axit béo, shingosin cacbohydrat; lipid phức t p khác: sulfolipid, aminolipid Ti n ch t lipid d n xu t lipid bao g m c c axit béo, glycerol alcol khác, steroid, sterol, aldehyde ch t b o c c th cetone, hydrocarbon, vitamin hormone Trong t t c c c màng sinh h c bên c nh hàng lo t c c lo i lipid h c nhau, hàm lư ng phospholipid thường chi m ưu th với t lệ 40-90% lipid t ng số c u tr c màng Trong đ nhi u c phosphatidylcholin, phosphatidilylethanolamin, phosphatidylserine cardiolipin Trong c c ho t ch t t sinh vật bi n, lipid c ng h p ch t c ho t t nh sinh h c cao, đư c nghiên cứu h nhi u, đặc biệt ph n lipid phân c c Nghiên cứu Khotimchen o ch c c h p ch t glycolipid m t số loài h i miên c ho t t nh gây đ c t bào, h ng n m, h ng hu n, h ng virus, tăng cường mi n d ch, ho t t nh chống sốt r t C c h p ch t sphingolipid t sinh vật bi n c h kháng virus, ức ch DNA polymerase ức ch s tăng trưởng t bào ung thư… Ngoài ph n lipid phân c c th c vật, đ ng vật, sinh vật bi n c ng đư c ch c ho t t nh chống oxy h a Lipid rong bi n đư c bi t đ n có chứa nhi u axit b o thi t y u axit b o hông no nhi u nối đôi PUFA (Poly Unsaturated Fatty Acids) C c nghiên cứu trước đ ch rong bi n c chứa đ y đủ c c lớp ch t b n lipid phân c c, sterol, diacylglycerol, axit b o t do, triacyglycerol, monoalkydiacyglycerol, hydrocarbon sáp Tuy nhiên, việc phân lập nghiên cứu c c lớp ch t chưa c LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Trên ph ion âm, ion phân tử [M-H]- c t n hiệu m nh nh t t i gi tr m/z 819.5165 Ion phân tử âm đư c l a ch n đ bắn ph l n thứ (hình 3.12), ph MS2 [E-] thu đư c đ ng thời c c t n hiệu t i m/z 581 2991, tương ứng với m nh trung hòa m t c hối lư ng m/z 238.2174 axit béo C16:0 b m t phân tử nước; m/z 563 2831, tương ứng với m nh trung hòa m t c hối lư ng m/z 256.2334 tương ứng với axit b o C16:0 M nh m/z 537.2705 phân tử SQDG m t m nh trung hòa axit béo C18:1 m nh m/z 281.2489 anion axit béo Như vậy, với c c d liệu phân t ch đư c cho th y t n hiệu m nh nh t t i gi tr m/z 819.5165 tương ứng với d ng phân tử thu đư c SQDG 16:0/18:1 H nh 3.12 Ph MS2 [E-] d ng phân tử SQDG 16:0/18:1 C c d ng phân tử h c phân lớp SQDG đư c x c đ nh biện luận tương t K t qu chi ti t đư c trình bày b ng Bảng 3.7 Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp SQDG m u rong 1KT [M-H]- C ng thức phân tử Dạng phân tử % Thời gian lưu 10.09 10.82 10.94 11.63 933.6654 931.6486 905.6325 903.6170 C51 H98 O12 S C51 H96 O12 S C49 H94 O12 S C49 H92 O12 S 2.09 0.71 4.85 0.17 11.75 877.6017 C47 H90 O12 S 12.8 849.5704 C45 H86 O12 S 13.22 13.22 847.5562 835.5563 C45 H84 O12 S C44 H84 O12 S 13.61 821.5376 C43 H82 O12 S 16:0/26:0 16:0/26:1 16:0/24:0 16:0/24:1 16:0/22:0 14:0/24:0 16:0/20:0 18:0/18:0 18:0/18:1 16:0/19:0 16:0/18:0 14:0/20:0 TT 0.71 1.48 0.61 0.10 5.83 44 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 10 13.61 833.5376 C44 H82 O12 S 11 13.64 845.5369 C45 H82 O12 S 12 13 14 15 16 17 13.85 14.00 14.42 14.54 14.54 14.77 843.5163 819.5166 793.5107 817.5065 841.4987 779.4909 C45 H80 O12 S C43 H80 O12 S C41 H78 O12 S C43 H78 O12 S C45 H78 O12 S C40 H76 O12 S 18 14.78 791.4931 C41 H76 O12 S 19 14.9 815.4871 C43 H76 O12 S 21 22 23 24 25 26 14.9 15.35 15.17 15.47 15.56 15.62 839.4834 789.4757 765.4771 837.4736 751.4631 763.4619 C45 H76 O12 S C41 H74 O12 S C39 H74 O12 S C45 H74 O12 S C38 H72 O12 S C39 H72 O12 S 27 15.95 737.4474 C37 H70 O12 S 17:0/18:1 16:0/19:1 16:0/20:2 18:1/18:1 16:0/20:3 16:0/18:1 16:0/16:0 16:0/18:2 16:0/20:4 15:0/16:0 14:0/18:1 16:0/16:1 16:0/18:3 14:0/20:3 16:0/20:5 14:0/18:2 14:0/16:0 16:0/20:6 14:0/15:0 14:0/16:1 14:0/14:0 12:0/16:0 ∑ 0.77 1.79 0.45 21.21 13.68 3.21 2.10 0.63 9.70 0.73 2.30 0.71 21.78 1.58 0.44 0.74 1.63 100 Đ x c đ nh đư c 27 d ng phân tử lớp SQDG, đ c d ng phân tử SQDG 14:0/16:0, SQDG 16:0/18:1 SQDG 16:0/16:0 c hàm lư ng cao (>10%) với 21 78 , 21.21% 13.68% C c d ng l i c hàm lư ng chủ y u K t qu t i b ng cho th y c c axit b o no chi m thành ph n chủ y u c c d ng phân tử lớp SQDG, đ axit b o C14:0 C16:0 chi m tỷ lệ cao nh t 3.5.4 ạng phân tử ủ l p phosphatidylglycerol (PG) Phosphatidylglycerol (PG) c công thức c u t o chung sau: Hình 3.13 C u tr c h a h c d ng phân tử PG 45 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình 3.14 Sắc ý đ d ng phân tử PG Lớp ch t PG sau hi đư c phân lập phân t ch ph hối phân gi i cao, t qu cho th y: Trên ph ion âm MS1 [E-], quan s t đư c t n hiệu c c ion phân tử [M-H]-, đ t n hiệu m nh nh t t i gi tr m/z 745.4960, tương ứng với công thức phân tử C40H75O10P Inten (x1,000,000) 745.496 2.5 743.479 731.486 0.0 730.0 732.5 735.156 737.399 735.0 737.5 740.0 742.5 745.0 763.181 748.514 747.5 750.0 759.454 753.410 752.5 755.0 757.5 760.0 m/z H nh 3.15 Ph MS1 [E-] lớp ch t PG Ion phân tử âm c gi tr m/z 745.4960 đư c l a ch n đ bắn ph l n thứ 2, ph MS2 [E-] (hình 3.16) thu đư c đ ng thời c c t n hiệu t i m/z 253.2204 tương ứng với anion axit b o C16:1; m/z 255.2310 tương ứng với anion axit béo C16:0; m/z 279.2420 tương ứng với anion axit b o C18:2 m/z 281.2460 tương ứng với anion axit b o C18:1 C c gi tr thu đư c m/z 491.2720, m/z 509,2830 m/z 417,2390 l n lư t tương ứng với c c d ng phân tử PG b m t m nh trung hòa axit C16:1; phân tử PG b m t m nh [R-CH=C=O]; phân tử PG b m t m nh axit C16:1 phân tử glycerol Như vậy, t i gi tr ion phân tử này, t n t i hai d ng phân tử riêng biệt PG 16:0/18:2 PG 16:1/18:1, đ PG 16:1/18:1 chi m hàm lư ng ch nh 46 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Inten (x1,000,000) 509.283 5.0 2.5 281.246 0.0 417.239 282.254 255.231 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0 425.0 491.272 450.0 475.0 500.0 m/z Inten (x1,000,000) 1.75 281.246 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 255.231 279.242 0.00 252.5 255.0 257.5 260.0 262.5 265.0 267.5 270.0 272.5 275.0 277.5 280.0 m/z Hình 3.16 Ph MS2 d ng phân tử PG 16:1/18:1 C c d ng phân tử h c phân lớp PG đư c x c đ nh biện luận tương K t qu chi ti t đư c trình bày b ng t Bảng 3.8 Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp PG m u rong bi n 1KT TT Thời gian lưu [M-H]- 5.78 5.9 773.5310 771.5138 C ng thức phân tử PG C42 H79 O10 P C42 H77 O10 P 5.9 747.5158 C40 H77 O10 P 6.08 745.4960 C40 H75 O10 P 6.08 721.5006 C38 H75 O10 P 6.11 769.4938 C42 H75 O10 P 6.26 6.38 793.4985 719.4851 C44 H75 O10 P C38 H73 O10 P 6.41 743.4833 C40 H73 O10 P 10 6.41 767.4820 C42 H73 O10 P Dạng phân tử % 18:1/18:1 16:0/20:3 16:0/18:1 18:0/16:1 16:1/18:1 16:0/18:2 16:0/16:0 16:0/20:4 16:1/20:3 18:1/20:5 16:0/16:1 16:1/18:2 16:0/18:3 16:2/18:1 16:0/20:5 16:1/20:4 3.83 1.64 14.27 41.83 1.07 1.72 0.45 4.94 11.07 11.22 47 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 11 6.59 693.4690 C36 H71 O10 P 12 6.62 717.4698 C38 H71 O10 P 13 14 15 6.62 6.71 6.89 765.4675 741.4682 691.4524 C42 H71 O10 P C40 H71 O10 P C36 H69 O10 P 14:0/16:0 16:1/16:1 14:1/18:1 16:1/20:5 16:1/18:3 14:0/16:1 ∑ 0.74 0.85 4.68 1.38 0.31 100 T ng c ng 15 d ng phân tử phân lớp PG đ đư c x c đ nh, đ gi tr m/z ph ion âm c th t n t i m t số d ng phân tử h c C c d ng phân tử c hàm lư ng cao phân lớp PG bao g m PG 16:1/18:1 (hoặc 16:0/18:2) chi m 41 83%; d ng phân tử PG 16:0/18:1 (hoặc 18:0/16:1) chi m 14 27 , d ng PG 16:0/20:5 (hoặc 16:1/20:4 chi m 11 22 d ng PG 16:1/18:2 (hoặc 16:0/18:3-16:2/18:1) chi m 11 07 C c d ng phân tử l i c hàm lư ng a axit b o chi m hàm lư ng cao nh t c c d ng phân tử axit b o C16:0, C16:1 C18:1 3.5.5 Dạn p n ủ l p phosphatidylinositol (PI) Phosphatidylinositol (PI) có cơng thức c u t o chung sau: Hình 3.17 C u tr c h a h c d ng phân tử PI H nh 3.18 Sắc ý đ d ng phân tử PI 48 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Lớp ch t PI sau hi đư c phân lập phân t ch ph hối phân gi i cao, t qu cho th y: Trên ph ion âm MS1 [E-], quan s t đư c t n hiệu c c ion phân tử [M-H]- c t n hiệu m nh nh t t i gi tr m/z 835.5280, tương ứng với công thức phân tử C43H81O13P Inten (x100,000) 835.528 7.5 5.0 857.511 2.5 0.0 619.245 656.878 650 703.275 741.211 777.374 809.513 700 750 800 887.397 850 1030.516 971.490 900 950 1000 1050 1100 1144.511 1150 m/z H nh 3.19 Ph MS1 [E-] lớp ch t PI Ion phân tử âm c gi tr m/z 835.5280 đư c l a ch n đ bắn ph l n thứ 2, ph MS2 [E-] (hình 3.20) thu đư c t n hiệu m/z 297 0380 đặc trưng ứng với m nh phân tử PI m t axit; đ ng thời c c t n hiệu t i m/z 255 2330 tương ứng với anion axit b o C16:0; t n hiệu m/z 281 2450 tương ứng với anion axit béo C18:1 C c m nh l i m/z 553.275, m/z 571,286 m/z 391.2240 l n lư t tương ứng với c c d ng phân tử PI b m t m nh trung hòa ứng với axit C18 :1; phân tử PI b m t gốc [R-CH=C=O] phân tử PI m t m nh axit với gốc inositol Như vậy, t d liệu ph hối thu đư c đ chứng minh d ng phân tử x t phân lớp PI PI 16:0/18:1 Inten (x100,000) 391.224 2.0 553.275 255.233 281.245 1.0 392.232 297.038 0.0 200 250 300 350 571.286 400 450 500 550 600 650 m/z Hình 3.20 Ph MS2 [E-] d ng phân tử PI 16:0/18:1 C c d ng phân tử h c phân lớp PI đư c x c đ nh biện luận tương t K t qu chi ti t đư c trình bày b ng 49 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Bảng 3.9 Thành ph n d ng phân tử phân lớp PI m u rong 1KT TT Thời gian lưu [M-H]- C ng thức phân tử Dạng phân tử PI % PI 19.04 835.5280 C43 H81 O13 P 16:0/18:1 44.09 19.25 857.5103 C45 H79 O13 P 16:0/20:4 15.43 19.31 809.5144 C41 H79 O13 P 16:0/16:0 239 19.34 833.5120 C43 H79 O13 P 16:0/18:2 8.77 19.49 855.4971 C45 H77 O13 P 16:0/20:5 1.40 19.52 807.4966 C41 H77 O13 P 14:0/18:1 16:0/16:1 6.27 19.52 831.4957 C43 H77 O13 P 16:0/18:3 2.60 19.70 781.4797 C39 H75 O13 P 14:0/16:0 1.81 19.76 805.4830 C41 H75 O13 P 14:0/18:2 0.82 10 18.83 859.5269 C45 H81 O13 P 16:0/20:3 12.14 11 Khác 4.27 ∑ 100 Trong phân lớp PI đ xác đ nh đư c 10 d ng phân tử, chi m hàm lư ng cao nh t PI 16:0/18:1 c ion phân tử ph ion âm cho t n hiệu t i m/z 835.5280 với hàm lư ng 44 09 X p thứ hai thứ ba c c d ng phân tử PI 16:0/20:4 16:0/20:3 với hàm lư ng l n lư t 15.43 12.14% D ng phân tử c hàm lư ng th p nh t PI 14:0/18:2 với 82 Trong phân lớp c c axit b o no v n nh ng axit b o chi m tỷ lệ cao, đ axit b o C16:0 c mặt h u h t t t c c c d ng phân tử PI m u rong bi n 1KT 3.5.6 ạn p n ủ l p p o p lcholine (PC) Phosphatidylcholine (PC) c công thức c u t o chung sau: Hình 3.21 C u tr c h a h c d ng phân tử PC 50 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com H nh 3.22 Sắc ý đ d ng phân tử PC Lớp ch t PC sau hi đư c phân lập phân t ch ph hối phân gi i cao, t qu cho th y: Trên ph ion dương MS1 [E+], quan s t đư c t n hiệu c c ion phân tử [M+H]+ c t n hiệu m nh nh t t i gi tr m/z 706.5404, tương ứng với công thức phân tử C38H76NO8P Trên ph MS1 [E-], quan s t đư c t n hiệu ion âm [M-CH3]- m nh nh t t i gi tr m/z 690.4998 Inten (x100,000) 4.0 706.5404 3.0 728.5208 775.6190 782.5690 700.4877 2.0 754.5401 758.5731 734.5722 678.5084 783.5731 1.0 665.2082 0.0 660 670 680 690 726.5056 716.4607 692.5169 700 710 720 744.5001 730 740 762.5979 750 760 770 780 m/z H nh 3.23 Ph MS1 [E+] lớp ch t PC Ion phân tử âm c m/z 690.4998 đư c l a ch n đ bắn ph l n thứ 2, ph MS2 [E-] thu đư c đ ng thời c c t n hiệu m/z 227 1901 ứng với anion axit b o C14:0 t n hiệu t i m/z 255 2325 ứng với anion axit b o C16:0 Như vậy, d liệu ph hối đ chứng minh d ng phân tử x t phân lớp PC PC 14:0/16:0 Inten (x100,000) 1.25 690.4998 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100 1200 1300 m/z 51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Inten (x100,000) 255.2325 1.00 0.75 0.50 227.1901 0.25 0.00 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 m/z H nh 3.24 Ph MS [E-] MS2 [E-] d ng phân tử PC16:0/18:1 C c d ng phân tử h c phân lớp PC đư c x c đ nh biện luận tương t K t qu chi ti t đư c trình bày b ng 10 Bảng 3.10 Thành ph n c c d ng phân tử phân lớp PC m u rong 1KT TT Thời gian lưu [M+H]+ [M-CH3]- 8,65 8,74 9,07 9,01 9,01 9,25 9,25 9,40 9,91 762.6003 786.5970 784.5839 760.5819 808.5837 758.5678 782.5719 734.5677 756.5515 746.5542 770.5715 768.5552 744.5522 792.5555 742.5293 766.5321 718.5247 740.5082 C ng thức phân tử PC C42 H84 N O8 P C44 H84 N O8 P C44 H82 N O8 P C42 H82 N O8 P C46 H82 N O8 P C42 H80 N O8 P C44 H80 N O8 P C40 H80 N O8 P C42 H78 N O8 P 10 9,85 732.5494 716.5145 C40 H78 N O8 P 11 12 13 14 10,30 10,21 11,38 706.5404 754.5364 678.5056 C38 H76 N O8 P 690.5017 C42 H76 N O8 P 738.5033 C36 H72 N O8 P 662.4712 Khác ∑ Dạng phân tử % 14:0/20:0 16:0/20:2 16:0/20:3 16:0/18:1 18:1/20:4 16:0/18:2 16:0/20:4 16:0/16:0 14:0/20:3 14:0/18:1 16:0/16:1 14:0/16:0 14:0/20:4 14:0/14:0 1,.06 2.66 5.54 7.00 5.31 5.84 10.64 4.07 3.25 6.44 19.30 7.81 15.33 5.75 100 Đối với phân lớp PC, ch ng đ x c đ nh đư c 13 d ng phân tử Trong đ chi m hàm lư ng cao nh t d ng phân tử PC 14:0/16:0 với 19,30%, d ng phân tử c t n hiệu ion phân tử m nh nh t t i m/z 706 5404 Ti p theo c c d ng phân tử PC 14:0/14:0 (15,33%) PC 16:0/20:4 (10,64%) Hai axit béo no C14:0 C16:0 c mặt h u h t c c d ng phân tử PC m u 52 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com K t qu phân t ch d ng phân tử c c phân lớp lipid m u rong 1KT cho th y t t c c c d ng phân tử MGDG, DGDG, SQDG, PG, PC PI xác đ nh đư c đ u c c diacyl glycolipid diacyl phospholipid Trong đ , c c d ng phân tử đư c hình thành t axit C16:0 C18:1 thường c t n hiệu m nh nh t c c phân lớp DGDG, SQDG, PI PC 53 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com CHƯ NG IV K T LUẬN VÀ KI N NGH K t luận: Sau qu trình nghiên cứu th c nghiệm ch ng đ thu đư c c c t qu sau: Đ đ nh danh 11 m u rong bi n sử d ng làm nguyên liệu nghiên cứu Hàm lư ng lipid 11 m u nghiên cứu đ t t 11-1 10 hối lư ng rong tươi với 26 d ng axit béo thành ph n lipid t ng đ đư c nhận d ng Thành ph n hàm lư ng c c lớp ch t lipid lipid t ng 11 m u Pol, ST, DG, FFA, TG, MADG HW đ đư c x c đ nh phương ph p TLC b n m ng Sorbfil Trong đ , chi rong mơ Sargassum c 3-4 lớp ch t, c c chi rong Nâu h c c lớp ch t, ch c nh t loài rong Padina boryana Thivy (17KT) chi Padina c đ y đủ lớp ch t lipid b n L n đ u tiên x c đ nh đư c 74 d ng phân tử c c lớp ch t MGDG, DGDG, SQDG, PG, PC PI t loài rong Distromium decumbens (Okamura) Levring (đây loài cho hu hệ rong bi n Việt Nam Trong đ chi m hàm lư ng cao nh t m i phân lớp c c d ng phân tử MGDG 18:4/20:5 với 13 92 , DGDG 16:0/18:1, SQDG 14:0/16:0 với 21 78 , PG 16:1/18:1 (hoặc 16:0/18:2 với 41 83 , PI 16:0/18:1 với 44 09 PC 14:0/16:0 với 19,30 Ki n nghị: Ti p t c nghiên cứu sâu v thành ph n hàm lư ng lipid, c ng c c d ng phân tử c c lớp ch t lipid nhằm cung c p c c d liệu nghiên cứu b n v thành ph n lipid c c loài rong bi n Việt Nam Mở r ng nghiên cứu c đ nh hướng ứng d ng đối tư ng rong bi n c c ngành inh t Việt Nam 54 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÀI LIỆU TH M KHẢO Tài liệu ti ng Việt: Đàm Đức Ti n, 2016, ỉ â Q ả đế Q ả ì ề e , T p ch Khoa h c ĐHQGHN, tập 32, số 2, trang 58-64 Đàm Đức Ti n, 2002, k q đả S , Luận n Ti n s Sinh h c, Lưu t i Thư viện Quốc gia, Hà N i, 156 trang Đ Anh Duy, Đ Văn Khương, 2013, Hiện tr ng v đa d ng thành ph n loài rong bi n c c đ o đ h o s t thu c vùng bi n Việt Nam, T p ch Khoa h c Công nghệ i n; Tập 13, Số 2; 2013: trang 105-115 Lê Như Hậu, V Thành Trung, Nguy n Th Hương V Th Mơ, 2011, P ô ă ụ ụ y ả l n thứ 5, tr 332-337 ọ H i ngh Khoa h c cơng nghệ bi n tồn quốc Lê T t Thành c ng s , 2013, K ả Hy e , H i ngh H a h c h u cơ, trang 132-137 Lê T t Thành, 2016, ọ â ạ , Luận n ti n sĩ, 130tr đỏ Nguy n Văn Ti n ,1994, ― ‖ Chuyên h o bi n Việt Nam, IV (ngu n l i Sinh vật c c hệ sinh th i bi n Trung tâm Khoa h c T nhiên & Công nghệ Quốc Gia, Hà N i tr 236-280 Nguy n Văn T Lê Như Hậu, 2013, Gó ngành rong Nâu (ochrophytae y e e) ― i n Đông 2012‖, Nha Trang, trang 119-129 , Kỷ y u H i ngh Quốc t Phan Tống Sơn, Phan Minh Giang, 2016, Hó X K ọ Kỹ , 415tr ọ 10 Ph m Quốc Long, Châu Văn Minh, 2005, L ọ ó , NX Khoa h c K thuật, 215tr 11 Ph m Quốc Long, 2015, L Đô 12 Ph m Quốc Long, 2018, o c o t ng t qu í t đ tài O ” VAST TĐ ĐA 05/13-15 oc o ó S hoa h c đ tài ", VAST TĐ DL 05/16-18 55 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 13 Tr n Đình To i, Châu Văn Minh, 2004, ề ă , NXB Khoa h c K thuật, 168tr Tài liệu ti ng nh: 14 Bligh E G and Dyer W.J., Arapid method of total lipid extraction and purification, Canadian Journal of Biochemistry and Physiology, Vol (No) 37(8), pp 911-917 (1959) 15 Carreau J P & Dubacq J P., 1978, Adaptation of a macroscale method to the micro-scale for fatty acid methyl transesterification of biological lipid extracts J Chromatogr 151: 384-390 16 Chih Hua C., Ho Cheng H., Yang Chang W., Chung Kuang L., Chang Feng D., Jyh Horng S (2007); Glycolipits from the Formosan soft coral Lobophytum crassum Chem Pharm Bull.; 55(12): 1720—1723 17 Dembitsky Valery M , Olga A Rozentsvet and Elena E Pechenkina, 1990, Glycolipids, phospholipids and fatty acids of brown algae species,Phytochemistry, Vol 29, No 11, pp 3417-3421 18 Dimitrios M.K., Sofia K.M., 2003, Sphingophosphonolipid molecular species from edible mollusks and a jellyfish, Jour Comparative Biochemistry and Physiology, part B, 136, p.27-44 19 Eko Susanto, Akhmad Suhaeli Fahmi, Masayuki Abe, Masashi Hosokawa, Kazuo Miyashita, 2015, Lipids, Fatty Acids, and Fucoxanthin Content from Temperate and Tropical www.sciencedirect.com Brown Seaweeds, Available online at 20 Elisabete da Costa, Tania Melo, Ana S P Moreira, Carina Bernardo, Luisa Helguero, Isabel Ferreira, Maria Teresa Cruz, Andreia M Rego, Pedro Domingues, Ricardo Calado, Maria H Abreu and Maria Rosário Domingues, 2017, Valorization of Lipids from Gracilaria sp Through Lipidomics and Decoding of Antiproliferative and Anti-Inflammatory Activity, Mar Drugs 2017, 15, 62 21 Emilie G., Jean Michel N., Gaetane W C., Carine H., 2003, Glycolipids from marine sponge: Monoglycosylceramides and alkyldiglycosylglycerols: Isolation, characterization and biological activity, Boll Mus Ist Biol Univ Genova; 68; 327-334 22 Folch J F., Lees M, Sloane Stanley G H (1957); A simple method for the isolation and purification of total lipits from animal tissue; J Biol Chem.; 226: 497– 509 56 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 23 Goncharova S N., Sanina N M and Kostetsky E Y., 2000, Role of lipids in molecular thermoadaptation mechanisms of seagrass Zostera marina, Biochemical Society Transactions., Volume 28, part 24 Guiry M.D &Guiry G.M.AlgaeBase World-wide electronic publication, National University of Ireland, Galway (2013) http://www.algaebase.org; searched on 20 August 2013 25 Imbs A.B., 2013, Fatty acids and other lipids of corals: composition, distribution, and biosythesis, Russia J Mar Biol 39:153-168p 26 Imbs A.B et al, 2015, Fatty acid, lipid class, and phospholipid molecular species composition of the soft coral Xenia sp, (Nha Trang bay, Vietnam), Lipids, V.50, N.6, p.575-589 27 Khotimchenko S.V., 1991, Lipids in large multicellular seaweed and seagrass Structure - Distribution – Analysis, Moskva Publishing House, 187p 28 Khotimchenko S V , 1993, Fatty acids and polar lipids of seagrasses from the sea of Japan, Phytocftemisrry, Vol 33, No 2, pp 369-372 29 Nguyen Van Tu, 2013, Seaweed diversuty in Vietnam with an emphasis on the brown algal genus Sargassm Ghent Univ 196 p 30 Nichols PD, Danaher KT, Koslow JA, 2003, Occurence of high levels of tetracosahexaenoic acid in the jellyfish Aurelia sp., Lipids; 38; 1207-1210 31 Masaki Honda,TakashiIshimaru and YutakaItabashi, 2016, Lipid classes, Fatty Acid Composition, and glycerolipid Molecular Species of the Red Algae Gracilaria vermiculophylla, a Prostaglandin-Producing Seaweed, Journal of Oleo Science, 65, (9)723-732 32 Melha Kendel, Gaëtane Wielgosz-Collin, Samuel Bertrand, Christos Roussakis, Nathalie Bourgougnon and Gilles Bedoux, 2015, Lipid Composition, Fatty Acids and Sterols in the Seaweeds Ulva armoricana, and Solieria chordalis from Brittany (France): An Analysis from Nutritional, Chemotaxonomic, and Antiproliferative Activity Perspectives, Mar Drugs, 13, 5606-5628 33 Mikhail Vyssotski, Kirill Lagutin, Andrew MacKenzie, Kevin Mitchell, Dawn Scott, 2017, Phospholipids of New Zealand Edible Brown Algae, Lipids 52:629–639 34 М М Голлербах, 1977,, Водоросли и лишайники” Жизнь растений, Москва, Том Изд-во ―Просвещение, 487 p 35 Muralidhar P., Radhika P., Krishna N., Venkata Rao D., Bheemasankara Rao C., 2003; Sphingolipits from Marine Organisms: A Review; Natural Product Sciences; 9(3); 117-142 57 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 36 Obchinnikov Y.A, 1987, Bio-oganic chemistry, Moskva Publishing House 37 Phattanawasin P., Sotanaphun U., Sriphong L., Kanchanphibool I., and Piyapolrungroj N., 2011, A comparison of image analysis software for quantitative TLC of ceftriaxone sodium, Silpakorn University Science & Technology Journal, (1): 7-13 38 Philip size, 1997 A biology of the Algae Boston , New Yorkm San Francisco, California, 251p 39 Svetashev, V.T., and Vaskovsky, V.E., 1972,A simplified technique for thinlayer microchromatography of lipids, Journal of Chromatography A, 67(2): 376378 40 Titlyano E A., and T V Titlyanova, 2012 Marine Plants of the asian Pacific region countries, their use and cultivation P H Vladivostok Dalnauka 376 p 41 Viso A C , Pesando D., Bernard P and Marty J C., 1993, lipid components of the mediterranean seagrass Posidonia oceanica, Phytochemistry, Vol 34, No 2, pp 381-387 42 Waldemar Eichenberger, Shigeru Arak and Dieter G Mollerj, 1993, Betaine lipids and phospholipids in brown algae, Phytochemistry, Vol 34, No 5, pp 1323-1333 43 Wynne, M J., 1981, The Biology of seaweeds, In Lobban, C S.; Wynne, M J Phaeophyta: Morphology and Classification Botanical Monographs 17 University of California Press p 52 ISBN 978-0-520-04585-9 58 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUY N V N TUY N NH NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN VÀ HÀM LƯỢNG LIPID, XIT BÉO CỦ MỘT SỐ LOÀI RONG NÂU TẠI VÙNG BIỂN VIỆT N M Chuyên... 3.2 K t nghiên cứu thành phần hàm lượng lớp chất lipid lipid tổng mẫu rong nghiên cứu Việc nghiên cứu h o s t đ nh t nh thành ph n c c lớp ch t lipid đ ng vai trò quan tr ng c c nghiên cứu v lipid... 17KT với hàm lư ng 7.50% Hàm lư ng lớp ch t tương đương với c c sinh vật bi n hai đ đư c nghiên cứu [11,12] 3.4 Thành phần hàm lượng a it b o lipid tổng mẫu rong Nâu nghiên cứu Thành ph n hàm lư