NCKH DLCM 2021 2022

TRƯỜNG THPT VIỆT BẮC 2 BÁO CÁO KẾT QUẢ DỰ ÁN THAM DỰ CUỘC THI KHOA HỌC KĨ THUẬT CẤP TỈNH NĂM HỌC 2021 2022 Tên đề tài chiết xuất ethyl para methoxycinnamate từ củ địa liền Và Bước đầu đánh giá khả năn.

1 BÁO CÁO KẾT QUẢ DỰ ÁN THAM DỰ CUỘC THI KHOA HỌC KĨ THUẬT CẤP TỈNH NĂM HỌC 2021 - 2022 Tên đề tài CHIẾT XUẤT ETHYL- PARA- METHOXYCINNAMATE TỪ CỦ ĐỊA LIỀN VÀ BƯỚC ĐẦU ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG HẠ ĐƯỜNG HUYẾT, ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ CỦA ETHYL- PARA- METHOXYCINNAMATE Lĩnh vực: Y sinh khoa học sức khỏe Lạng Sơn, tháng năm 2021 MỤC LỤC PHẦN I: MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Ý nghĩa tầm quan trọng đề tài 3 Mục tiêu nghiên cứu 4 Giới hạn phạm vi nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Những điểm đề tài .5 PHẦN II NỘI DUNG CHƯƠNG I: TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU .6 Tổng quan địa liền 1.1 Đặc điểm sinh học sinh thái địa liền .6 1.2 Thành phần hóa học địa liền 1.3 Các tác dụng dược lý công dụng của địa liền Bệnh tiểu đường 2.1 Tìm hiểu bệnh tiểu đường 2.2 Triệu chứng bệnh đái tháo đường .7 2.3 Biến chứng bệnh đái tháo đường .7 Ung thư CHƯƠNG II: QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU 2.1 Qui trình thực nghiệm 2.1.1 Nguyên liệu, hóa chất 2.1.2 Tách chiết cinnamate từ củ Địa liền 2.1.3 Phương pháp xác định cấu trúc phân tử 10 2.1.4 Phương pháp thử hoạt tính sinh học 10 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 11 3.1 Kết đạt 11 3.2 Hướng nghiên cứu .16 PHẦN III: KẾT LUẬN .16 CHÚ THÍCH .18 TÀI LIỆU THAM KHẢO 19 PHẦN I: MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Trong xã hội đại, bệnh lí rối loạn chuyển hóa thể người ngày tăng cao Trong bệnh tiểu đường (bệnh đái tháo đường) nhóm bệnh lí phổ biến Theo thống kê Hiệp hội Đái tháo đường Thế giới (IDF), năm 2019 tồn giới có 463 triệu người (trong độ tuổi 20-79) mắc bệnh tiểu đường, dự kiến mức 578 triệu người vào năm 2030 700 triệu người vào năm 2045, Bệnh tiểu đường gây nhiều biến chứng biến chứng mắt, tim mạch, bệnh da, bệnh nhân tiểu đường tuýp có nguy cao mắc bệnh Alzheime Riêng Việt Nam, tỷ lệ bệnh nhân mắc bệnh tiểu đường gia tăng cách nhanh chóng, số bệnh nhân tăng gấp đơi vịng 10 năm Năm 2017, số bệnh nhân đái tháo đường 3.54 triệu người (khoảng 5.5% dân số), số bệnh nhân tiền tiểu đường (có rối loạn dung nạp glucose) 4.79 triệu người (khoảng 7.4% dân số), nghĩa 7.5 người có người mắc bệnh tiểu đường tiền tiểu đường Dự đoán đến năm 2045, số tăng lên chiếm 7.7% tổng dân số Địa liền (Kaempferia galanga L.) dược liệu sử dụng từ lâu điều trị ngực bụng lạnh đau, tiêu chảy, ăn uống khó tiêu, đau dày, cảm, ho, nôn mửa, hen suyễn số tác dụng khác [1] Theo nghiên cứu nhà khoa học, củ địa liền khơ có chứa 2,4- 3,9% tinh dầu với thành phần acid p-methoxycinamic, ethyl cinamat ethyl-p- methoxycinnamat (EPMC) [2] Trong đó, EPMC tác dụng chống viêm, gây giãn khí phế quản có phổ kháng khuẩn, kháng nấm rộng, đặc biệt khả làm giảm lượng đường máu ức chế số tế bào ung thư Xuất phát từ lí nên chúng em định lựa chọn đề tài “ Bước đầu đánh giá khả hạ đường huyết ức chế tế bào ung thư ethyl- para- methoxycinnamate chiết xuất từ củ địa liền” cho ý tưởng nghiên cứu khoa học Ý nghĩa tầm quan trọng đề tài 2.1 Ý nghĩa Chứng minh củ địa liền có khả giảm glucozo máu, ức chế tế bào ung thư gan ung thư bạch cầu cấp tính người, làm sở để bào chế, sản xuất thuốc chữa bệnh có nguồn gốc thảo dược hiệu quả, an tồn 2.2 Tầm quan trọng đề tài Đề tài thực nhằm đánh giá xác khả hạ đường huyết, ức chế tế bào ung thư nhằm tạo tiền đề cho việc sử dụng địa liền công nghệ bào chế thuốc chữa bệnh Mục tiêu nghiên cứu - Chiết tách thành công ethyl- para- methoxycinnamate từ cặn chiết củ Địa liền - Làm thí nghiệm đánh giá khả giảm glucozo ethylpara- methoxycinnamate mơ hình in vitro - Thử nghiệm đánh giá khả ức chế tế bào ung thư gan ung thư bạch cầu cấp tính người Giới hạn phạm vi nghiên cứu - Đề tài thực phạm vi trường học, tính an tồn cao - Nhóm gồm hai thành viên Thời gian nghiên cứu 3,5h/ngày - Số lượng mẫu khảo sát 20 mẫu, thời gian nghiên cứu tháng Đối tượng nghiên cứu Các thành phần địa liền đặc biệt củ rễ Phương pháp nghiên cứu - Sử dụng nghiên cứu khoa học thực nghiệm + Lập kế hoạch nghiên cứu ->bố trí thí nghiệm -> tiến hành thí nghiệm ->Thu kết -> Đánh giá kết luận - Phương pháp thu mẫu - Phân lập tuyển chọn - Phương pháp chiết xuất EPMC Dựa tài liệu tham khảo [9,10] khảo sát sơ bộ, phương pháp chiết xuất EPMC từ địa liền nghiên cứu gồm: + Phương pháp cất kéo nước + Phương pháp tạo tinh thể bay - Phương pháp đánh giá khả giảm lượng đường huyết đĩa invitro ức chế tế bào ung thư Những điểm đề tài - Thực nghiệm chiết tách thành công hợp chất cinnamate từ củ Địa liền - Xác định xác khả hạ glucozo máu cinnamate chiết tách từ Địa liền - Xác định đánh giá khả ức chế tế bào ung thư gan ung thư máu cấp tính cinnamate chiết tách từ Địa liền PHẦN II NỘI DUNG CHƯƠNG I: TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU Tổng quan địa liền 1.1 Đặc điểm sinh học sinh thái địa liền Địa liền loài thực vật phân bố nhiều nước châu Á Ấn Độ, Malaysia, Indonesia, Philipine, Thái Lan, Lào, Campuchia Trung Quốc Tại Việt Nam, chi Kaempferia L có tổng cộng khoảng – 10 loài Địa liền mọc tự nhiên Tây Nguyên, số tỉnh miền núi Hà Giang, Yên Bái, Sơn La Không vậy, trồng nhiều nơi vùng đồng sông Hồng Hưng Yên, Hải Dương, Bắc Ninh, Bắc Giang…, Nghệ An, Thanh Hóa Ở Lạng Sơn củ Địa Liền người dân trồng rải rác huyện Cao Lộc, Văn Quan, Bình Gia… Địa liền loại ưa sáng, ưa ẩm có khả chịu hạn Hàng năm, mọc non vào tháng – 5, sinh trưởng nhanh vào mùa hè hoa Hoa nở ngày vào lúc sáng sớm, tàn tàn lúc 10 sáng Củ Địa Liền người dân sử dụng làm thuốc thuốc chữa bệnh lượng nhỏ củ địa liền sử dụng làm gia vị ẩm thực 1.2 Thành phần hóa học địa liền Thân rễ, củ địa liền khô chứa 2.4 – 3.9% tinh dầu, thành phần chủ yếu tinh dầu có thân rễ địa liền là: - Acid p-methoxycinamic - Ethyl cinamat - p-methoxy ethylcinamat Trong đó, hợp chất p-methoxy ethylcinamat chiếm tới 30% dễ dàng kết tinh bảo quản lạnh 1.3 Các tác dụng dược lý công dụng của địa liền Trong năm gần đây, tác dụng dược lí cinnamate chiết tách từ Địa liền quan tâm Nhiều nhà khoa học Việt Nam chiết tách hợp chất củ Địa liền trồng Việt Nam sử dụng hiệu làm thuốc chữa bệnh xương khớp Tuy nhiên, hợp chất cinnamate lại chưa đánh giá tác dụng hạ glucozo huyết Do đó, đề tài chúng em mong muốn đánh giá tác dụng dược lí cinnamate so sánh hiệu chúng với thuốc hạ glucozo sử dụng Bệnh tiểu đường 2.1 Tìm hiểu bệnh tiểu đường Bệnh tiểu đường hay gọi Bệnh đái tháo đường (ĐTĐ) bệnh rối loạn chuyển hóa khơng đồng nhất, có đặc điểm tăng glucose huyết khiếm khuyết tiết insulin, tác động insulin hai Tăng glucose mạn tính thời gian dài gây nên rối loạn chuyển hóa carbohydrate, protide, lipide, gây tổn thương nhiều quan khác nhau, đặc biệt tim mạch máu, thận, mắt, thần kinh Phân loại đái tháo đường gồm: - Đái tháo đường type (do phá hủy tế bào beta tụy, dẫn đến thiếu insulin tuyệt đối) - Đái tháo đường type (do giảm chức tế bào beta tụy tiến triển tảng đề kháng insulin) 2.2 Triệu chứng bệnh đái tháo đường Các triệu chứng đái tháo đường sau điển hình Tuy nhiên, số người đái tháo đường type có triệu chứng nhẹ nên người bệnh khơng nhận biết - Đi tiểu thường xuyên - Cảm thấy khát - Cảm thấy đói – ăn - Mệt mỏi nhiều - Nhìn mờ - Chậm lành vết thương vết loét: - Giảm cân – ăn nhiều (đái tháo đường type 1) - Ngứa ran, đau, tê tay chân (đái tháo đường type 2) 2.3 Biến chứng bệnh đái tháo đường Những người bệnh đái tháo đường có nguy cao phát triển số vấn đề sức khỏe nghiêm trọng Mức đường huyết máu cao lâu dài dẫn đến bệnh nghiêm trọng ảnh hưởng đến tim, mạch máu, mắt, thận, thần kinh Ngoài ra, người đái tháo đường có nguy cao mắc bệnh nhiễm khuẩn Ở hầu hết quốc gia có thu nhập cao, bệnh đái tháo đường nguyên nhân hàng đầu gây bệnh tim mạch, mù lòa, suy thận cắt cụt chi Người lớn đái tháo đường có nguy tăng gấp đến nhồi máu tim đột quỵ Bệnh võng mạc tiểu đường nguyên nhân quan trọng gây mù tích tụ lâu dài mạch máu nhỏ võng mạc 2,6% bệnh mù tồn cầu đái tháo đường Đái tháo đường nguyên nhân hàng đầu gây suy thận Ung thư Ung thư tập hợp bệnh lý đặc trưng phát triển bất thường tế bào phân chia không kiểm sốt có khả xâm nhập, phá hủy mơ thể bình thường Hầu hết, tế bào thể có chức cụ thể tuổi thọ cố định Trong q trình điều hịa, tế bào nhận thị để chết thể thay tế bào hoạt động tốt Với tế bào ung thư thiếu yếu tố hướng dẫn chúng ngừng phân chia chết Kết dẫn đến tích tụ thể, sử dụng oxy chất dinh dưỡng thường nuôi dưỡng tế bào khác Các tế bào ung thư xuất khu vực, sau lan rộng qua hạch bạch huyết Một số loại ung thư gây phát triển tế bào nhanh chóng, loại khác làm cho tế bào phát triển phân chia với tốc độ chậm Có 100 loại ung thư khác Ung thư thường gọi tên theo quan mà phát sinh, ví dụ: Ung thư phổi phát sinh từ tế bào phổi, ung thư đại tràng phát sinh từ tế bào đại tràng Ung thư gọi theo loại tế bào hình thành chúng ung thư biểu mơ (carcinoma) hay ung thư mơ liên kết (sarcoma) Ngồi ung thư phát triển từ máu, bệnh máu ác tính CHƯƠNG II: Q TRÌNH NGHIÊN CỨU 2.1 Qui trình thực nghiệm 2.1.1 Nguyên liệu, hóa chất - kg Địa liền tươi - Hóa chất mua hãng Merck- Đức - Mơ hình thí nghiệm in vitro Viện công nghệ sinh học – Viện hàn lâm khoa học Việt Nam - Một số hóa chất dung mơi khác sản phẩm thương mại Việt Nam Trung Quốc 2.1.2 Tách chiết cinnamate từ củ Địa liền - Tiến hành nghiên cứu khoa học thực nghiệm + Thu mua mẫu vật: kg củ Địa liền tươi thu mua vào tháng năm 2021 5kg Địa liền tươi thái mỏng, phơi khơ bóng râm, sau sấy khơ nhiệt độ 500C + Phân lập tuyển chọn phân tách dịch dùng để chiết + Phương pháp chiết xuất EPMC Lựa chọn sử dụng phương pháp bay hơi: Địa liền sau phơi khô, nghiền nhỏ thành bột, bột địa liền khô nghiền nhỏ (3000 g) cho vào bình thủy tinh, thêm 2000 ml dung mơi (metanol etanol), khuấy điều ngâm ngày, ngày thu dung môi lần thêm dung mơi Sau lọc bỏ cặn bã, làm bay dung môi thu tinh thể kết tinh Lọc rửa tinh thể dung mơi n-hexan 10 Hình Sơ đồ chiết tách ethyl- p- methoxycinnamate từ củ Địa liền Hình : Bột mịn địa liền ngâm dung dịch CH3OH Hình 3: Rửa tinh thể với dung dịch n- Hexan Hình : Tinh thể địa liền Cinnamate(DLCM) 2.1.3 Phương pháp xác định cấu trúc phân tử - Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H NMR 500MHz ghi thiết bị Brucker AV 500 spectrometer - Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C NMR 125MHz với chương trình DEPT ghi thiết bị Brucker AV 500 spectrometer - Phổ khối MS thiết bị Hewlett Packard HP5989 B MS spectrometer, serie II 2.1.4 Phương pháp thử hoạt tính sinh học 11 - Thử in vitro - Nguyên tắc : men -glucosidase gặp nối -D-glucose cắt đứt nối để giải phóng đường D-glucose Hoạt động sản sinh nhiều glucose sau ăn làm gia tăng hàm lượng glucose máu, cần ức chế hoạt động men -glucosidase để làm chậm chuyển hoá số loại thức ăn thành glucose Vì vậy, người ta sử dụng chất có liên kết  với đường D-glucose p-Nitrophenyl--D -glucopyranoside, maltose… để xây dựng phương pháp thử hoạt tính ức chế men -glucosidase phịng thí nghiệm - Phương pháp :  Hoạt tính ức chế enzyme α glucosidase hoạt chất nghiên cứu thực theo phương pháp Moradi-Afrapoli F cộng  Chất thử hòa tan DMSO pha loãng phosphate buffer 10 mM (pH 6.8) đưa vào giếng khay 96 giếng để có nồng độ 1000μg/ml, 500 μg/ml; 100 μg/ml; 20 μg/ml; μg/ml  20 µl α- glucosidase (0,5U/ml) 120 µl phosphate buffer 100 mM (pH 6.8) thêm vào giếng, trộn ủ 37oC 15 phút  Cơ chất p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside (pNPG) đưa tiếp vào giếng thí nghiệm ủ tiếp 37oC 60 phút  Đĩa thí nghiệm có mẫu thử , phosphate buffer pNPG sử dụng làm đối chứng trắng (blank) Giếng thí nghiệm có DMSO 10%, phosphate buffer, enzyme pNPG sử dụng làm đối chứng Thí nghiệm lặp lại lần để đảm bảo xác  Dừng thí nghiệm cách thêm vào 80 µl Na2CO3 0,2M đo OD bước sóng 405nm máy đo ELISA Plate Reader (Bio-Rad)  Khả ức chế enzyme α- glucosidase mẫu thử xác định theo công thức sau: % ức chế = (1 - Amẫu thử/ A đối chứng )*100 Trong đó: A đối chứng = OD đối chứng - OD blank 12 Amẫu thử = ODmẫu thử - OD blank mauthu Giá trị IC50 (nồng độ ức chế 50%) xác định nhờ vào phần mềm máy tính TableCurve CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết đạt 3.1.1 Xác định cấu trúc phân tử DLCM Hình Phổ 1H NMR TT2 (DLCM 1) Kết H- NMR tín hiệu triplet tương ứng với ba proton 1,3 ppm thuộc nhóm CH3 nhánh – CH2CH3 Trong tín hiệu quartet 4.2 ppm gán cho hai proton nhóm CH tiếp giáp với methyl liên kết với nguyên tử oxi Một đỉnh mạnh khác 3,8 ppm tương ứng với ba proton nhóm –OCH3 gắn trực tiếp vào vòng thơm Các dublet cộng hưởng 6,3 ppm (1H, d, J = 15,6 Hz) thuộc proton gắn với vị trí C-2 proton gắn vào vị trí C-3 nằm 7.6 ppm (1H, d, J = 16.2 Hz) Một cặp đôi 6,9 ppm (2H, d, J6 = J8 = 8.4 Hz) tương ứng với hai proton liên kết 13 với C-6 C-8 cặp đôi 7.5 ppm (2H, d, J5 = J9 = 9.0 Hz) gán cho hai proton gắn liền với C-5 C-9 Hình Phổ 13C NMR TT2 (DLCM 1) Kết 13C-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu 13,2 ppm ngun tử C vị trí nhóm CH Trong đó, Cacbon vị trí 10 cho tín hiệu 54,5 ppm Cực đại mức 167,7 ppm tương ứng với bậc bốn C-1 liên kết với nhóm carbonyl Tín hiệu carbon 161,7 ppm gán cho C-7 carbon bậc bốn Đỉnh mức 114,0 ppm 129,5 ppm liền kề gán cho C-6,8 C-5,9 tương ứng Cuối cùng, tín hiệu 126,9 tương ứng với C-4 Từ phân tích xác nhận chất ban đầu ethyl- p-methoxycinnmate Bảng Phân tích phổ 1H- NMR 13C- NMR DLCM Vị trí 1H- NMR 13C-NMR 14 - 167.7, C 6.3(1H,d,J=15.6 Hz) 114.9, CH 7.6(1H,d,J=16.2 Hz) 144.5, CH - 126.9, C 5;9 7.5(2H,d,J5=J9=9.0 Hz) 129.5, CH 6;8 6.9(2H,d,J6=J8=8.4 Hz) 114.0, CH - 161.7, C 10 3.8(3H,s) 54.5, OCH3 1’ 4.2(2H,q) 60.1, CH2 2’ 1.3(3H,t) 13.2, CH3 O CH3 O 2' O 1' CH3 10 Ethyl- p- methoxycinnamate 3.1.2 Đánh giá khả hạ đường huyết * Mơ hình in vitro Thí nghiệm lặp lại lần để đảm bảo tính xác thí nghiệm liệu Kết thu sau: Bảng Bảng đánh giá khả ức chế so với chất đối chứng TT Tên mẫu Nồng độ thử (µg/ml) TTC1 (DLCM) Acarbose 256 64 16 256 64 16 Phần trăm ức chế (%) 28 1 72 23 18 Giá trị IC50 (µg/ml) >256 169.80±7.05 15 Kết cho thấy DLCM có hoạt tính ức chế alpha glucosidase với giá trị IC50 256µg/ml Chất đối chứng acarbose hoạt động ổn định q trình thí nghiệm 3.1.3 Thử hoạt tính ức chế tế bào ung thư hệ DPPH Nguyên lí của phép thử: 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) chất tạo gốc tự dùng để thực sàng lọc tác dụng chống oxy hóa chất nghiên cứu Hoạt tính chống oxy hóa thể qua việc làm giảm màu DPPH, xác định phương pháp đo quang bước sóng  = 517 nm Cách tiến hành: Pha dung dịch DPPH có nồng độ 1mM Methanol (MeOH) Chất thử pha DMSO 100% cho nồng độ cuối đạt dãy nồng độ Để thời gian phản ứng 30 phút 37 0C, đọc mật độ hấp phụ DPPH chưa phản ứng máy đọc Biotek bước sóng 517 nm % bẫy gốc tự DPPH mẫu thử tính theo cơng thức sau: SC% = (OD trắng – OD mẫu thử)/ ODtrắng (%) EC50 tính theo giá trị SC tương quan với nồng độ khác chất thử, thí nghiệm lặp lại với n = Đường chuẩn biểu thị mối tương quan nồng độ DPPH mật độ quang học: -Kết thử hoạt tính chớng oxy hóa hệ DPPH 16 STT Tên mẫu Nồng độ thử (µg/ml) % bắt giữ gớc Giá trị EC50 tự (µg/ml) 256 15 64 6.5 16 32 100 45.5 0,5 TTC1 (DLCM) Chất Quercetin tha m khảo >256 9.97±0.25 - Trong thử nghiệm mẫu bước đầu xác định có ảnh hưởng chất ethyl – para – methoxycinamate lên chất thử chưa rõ rệt việc chống oxi hóa hàm lượng chất thử mẫu gửi Nên chúng em tiếp tục gửi mẫu mẫu có hàm lượng chất thử nhiều nhằm xác định rõ khả chống oxi hóa Theo tiến độ thử nghiệm kết trả vào khoảng thời gian 20/12/2021 3.2 Hướng nghiên cứu Nếu đề tài lựa chọn, chúng em tiếp tục nghiên cứu xây dựng qui trình chuẩn để chiết tách cinnamate với hiệu suất cao hơn, thao tác đơn giản - Tiến hành thu mua mẫu vật thử nghiệm có qui mơ lớn để đánh giá xác hoạt tính cinnamate - Thử nghiệm khả kháng số loại tế bào ung thư - Thử nghiệm chuột bạch thí nghiệm - Dự án thành cơng góp phần nâng cao giá trị y khoa củ Địa liền, giá trị kinh tế cho củ địa liền, nhân rộng mơ hình trồng thuốc đơng y có địa liền 17 18 PHẦN III: KẾT LUẬN Qua trình nghiên cứu chiết xuất đánh giá khả hạ đường huyết ức chế tế bào ung thư ethyl-p-methoxycinanamate, thu số kết sau : - Bước đầu xây dựng quy trình tách chiết tinh thể ethyl -paramethoxycinnamate từ củ địa liền, quy trình rửa tinh thể quy trình thử nghiệm hoạt tính sinh học Ethyl-para-methoxycinnamate - Đã chiết tách thành công ethyl- para- methoxycinnamate từ cặn chiết củ Địa liền Từ mẫu tinh thể thu đem tiến hành chụp phổ để xác định cấu trúc phân tử ethyl-para-methoxycinnamate - Chúng tơi tiến hành thử hoạt tính đánh giá khả giảm lượng glucoside ethy-para-methoxycinnamate đĩa thử invitro Kết cho thấy Ethyl-para-methoxycinamate có hoạt tính ức chế, làm giảm alpha glucosidase với giá trị IC50 >256µg/ml Chất đối chứng acarbose hoạt động ổn định q trình thí nghiệm - Thử nghiệm đánh giá khả ức chế tế bào ung thư gan ung thư bạch cầu cấp tính người 19 CHÚ THÍCH MeOH: Ancol metylic CH₃OH DLCM: tinh thể chiết tách (Địa liền cinnamate) EPMC: Ethyl-para-methoxycinnamate 20 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kĩ thuật, Hà Nội Kumar, Phytochemistry, pharmacological activities and uses of Indian traditional medicinal plant Kaempferia galanga L – An overview, Journal of Ethnopharmacology (2020) 112667 ttps://doi.org/10.1016/j.jep.2020.112667 Nguyễn Đình Triệu (2012), Các phương pháp vật lý đại ứng dụng hóa học, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập II, NXB Khoa học Kĩ thuật, Hà Nội Trần Trọng Biên “Extraction of Ethyl-p-methoxycinnamate from Kaempferia galanga L.”, Tạp chí khoa học – Đại học quốc gia Hà Nội TIẾNG ANH Archana P Raina (2015), “Chemical profiling of essential oil of Kaempferia galangaL germplasm from India” Journal of essential oil re search, 2015 Nor Hazwani Mohd Hasali (2013), “Biotransformation of ethyl pmethoxycinnamate from Kaempferia galanga L using Aspergillus niger”, International Journal of Biosciences Muhammad Ihtisham Umar, “Phytochemistry and medicinal properties of Kaempferia galanga L (Zingiberaceae) extracts”, African Journal of Pharmacy and Pharmacology Vol 5(14) N Srivastava, Ranjana, S Singh, A.C Gupta, K Shanker, D.U Bawankule, S Luqman, Aromatic ginger (Kaempferia galanga L.) extracts with ameliorative and protective potential as a functional food, beyond its flavor and nutritional benefits, Toxicol Rep (2019) 521-528 10.I Komalaa, Supandia, Nurhasnib, O.S Bethaa, Yardia, S Mufidaha, M Rezaa, M.S Alia, N.S Auliaa, Sutara, Microwave Assisted Synthesis of p- Methoxycinnamamides and p-Methoxy-β- nitrostyrenes from Ethyl p-methoxycinnamate and Screening their Anti-inflammatory Activity, 21 Natural Product Communications 12(8) (2017) 1265-1268 11.Kai Marxen, Klaus Heinrich Vanselow, Sebastian Lippemeier, Ralf Hintze, Andreas Ruser and Ulf-Peter Hansen “Determination of DPPH Radical Oxidation Caused by Methanolic Extracts of some Microalgal Species by Linear Regression Analysis of Spectrophotometric Measurements” Sensors 2007, 7, 2080-2095 12.M Burits and F Bucar, Antioxidant activity of Nigella sativa essential oil, Phytotherapy Research 14 (2000), pp 323–328 13.M Cuendet, K Hostettmann and O Potterat, Iridoid glucosides with free radical scavenging properties from Fagraea blumei, Helvetica Chimica Acta 80 (1997), pp 1144–1152 22 MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG QUÁ TRÌNH TIẾN HÀNH Củ Địa liền tươi Bột địa liền ngâm dung môi ... TableCurve CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết đạt 3.1.1 Xác định cấu trúc phân tử DLCM Hình Phổ 1H NMR TT2 (DLCM 1) Kết H- NMR tín hiệu triplet tương ứng với ba proton 1,3 ppm thuộc nhóm CH3... Tên mẫu Nồng độ thử (µg/ml) TTC1 (DLCM) Acarbose 256 64 16 256 64 16 Phần trăm ức chế (%) 28 1 72 23 18 Giá trị IC50 (µg/ml) >256 169.80±7.05 15 Kết cho thấy DLCM có hoạt tính ức chế alpha glucosidase... hành nghiên cứu khoa học thực nghiệm + Thu mua mẫu vật: kg củ Địa liền tươi thu mua vào tháng năm 2021 5kg Địa liền tươi thái mỏng, phơi khơ bóng râm, sau sấy khô nhiệt độ 500C + Phân lập tuyển