KHẢO sát sự tác ĐỘNG của AUXIN lên sự SINH TRƢỞNG và SINH TỔNG hợp ALKALOID của cây TRƢỜNG XUÂN HOA (catharanthus roseus) IN VITRO

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ TÁC ĐỘNG CỦA AUXIN LÊN SỰ SINH TRƢỞNG VÀ SINH TỔNG HỢP ALKALOID CỦA CÂY TRƢỜNG XUÂN HOA (Catharanthus roseus) IN VITRO Ngành học: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa : 2003-2007 Sinh viên thực hiện: CAO THỊ THANH LOAN Thành phố Hồ Chí Minh 2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************************** KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ TÁC ĐỘNG CỦA AUXIN LÊN SỰ SINH TRƢỞNG VÀ SINH TỔNG HỢP ALKALOID CỦA CÂY TRƢỜNG XUÂN HOA (Catharanthus roseus) IN VITRO Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS TRẦN THỊ LỆ MINH CAO THỊ THANH LOAN ThS NGUYỄN VĂN CƢỜNG Thành phố Hồ Chí Minh 2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm ơn: - Ban Giám Hiệu trƣờng Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho tơi suốt thời gian học tập - Các thầy cô Bộ môn Công nghệ sinh học thầy cô trực tiếp giảng dạy suốt bốn năm qua - TS Trần Thị Lệ Minh Th.S Nguyễn Văn Cƣờng tận tình hƣớng dẫn động viên thời gian thực đề tài tốt nghiệp - TS Phan Phƣớc Hiền anh chị phụ trách phòng Hóa Lý thuộc Trung tâm phân tích thí nghiệm trƣờng Đại học Nông Lâm Tp.HCM - KS Trần Ngọc Hùng anh chị thuộc Trung tâm Công nghệ Sinh học Đại học Nơng Lâm Tp.HCM - Bạn Hồng Thị Thu toàn thể lớp CNSH29 thân yêu hỗ trợ, giúp đỡ động viên suốt thời gian làm đề tài Con thành kính ghi ơn ba mẹ ngƣời thân gia đình ln tạo điều kiện động viên suốt trình học tập trƣờng Tháng 08 năm 2007 Cao Thị Thanh Loan iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TĨM TẮT CAO THỊ THANH LOAN, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh Tháng 8/2007 “KHẢO SÁT SỰ TÁC ĐỘNG CỦA HORMONE TĂNG TRƢỞNG AUXIN LÊN SỰ SINH TRƢỞNG VÀ SINH TỔNG HỢP ALKALOID CỦA CÂY TRƢỜNG XUÂN HOA (Catharanthus roseus) IN VITRO” Hội đồng hướng dẫn: TS Trần Thị Lệ Minh Th.S Nguyễn Văn Cường Đề tài thực Bộ môn Công nghệ Sinh học Trung tâm phân tích thí nghiệm trường Đại học Nông lâm Tp.HCM đối tượng Trường xuân hoa Tiến hành tạo Trường xuân hoa in vitro từ chồi Trường xuân hoa trồng vườn thực nghiệm môn Công nghệ Sinh học Khả sinh trưởng Trường xuân hoa in vitro môi trường MS có bổ sung NAA theo dõi giai đoạn 7, 14, 21, 28, 35 ngày Bên cạnh thay đổi nồng độ NAA, IAA sử dụng nhằm chọn loại chất kích thích tăng trưởng thích hợp thông qua tiêu theo dõi chiều cao cây, số rễ chiều dài rễ; xác định tạo thành indol alkaloid in vitro thuốc thử Wagner qua tượng tạo kết tủa với thuốc thử Bằng hệ thống điện di mao quản, thực phân tích định lượng alkaloid đặc trưng Trường xuân hoa in vitro catharanthine, vindoline… Những kết thu được: Khả sinh trưởng Trường xuân hoa in vitro: sử dụng NAA 0,5 mg/l IAA mg/l có tác động tốt lên tăng trưởng chiều dài rễ số rễ Định tính indol alkaloid thuốc thử Wagner: kết định tính cho thấy có diện indol alkaloid tất mẫu Trường xuân iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com hoa in vitro Và lượng kết tủa quan sát nhiều mẫu sau 28 ngày nuôi cấy mơi trường chứa NAA 0,5 mg/l Phân tích định lượng indol alkaloid Trường xuân hoa in vitro hệ thống điện di mao quản: Hàm luợng catharanthine vindoline Trường xuân hoa in vitro cao so với hàm luợng catharanthine vindoline in vivo, hàm lượng catharanthine đạt cao sau 28 ngày nuôi cấy vindoline sau ngày ni cấy mơi trường có bổ sung NAA 0,5 mg/l v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com SUMMARY “STUDY ON IMPACT OF AUXIN ON THE GROWTH AND THE SYNTHEIS ALKALOID IN Catharanthus roseus IN VITRO” The effect of different growth regulator on growth and production of indol alkaloid were studied in Catharanthus roseus Shoots were grown in MS solid medium containing different concentrations of growth regulators Extracted alkaloids were qualitative with Wagner reagent and analyzed by CE for determination of indol alkaloid quantities The growth regulators on the experiment were NAA, IAA and the data were viewed for 7, 14, 21, 28, 35 days The experiment result showed that NAA at concentration of 0,5 mg/l and IAA mg/l resulted in elongation of roots and higher number of roots The qualitative results of all in vitro plants have appeared precipitates which the 28 - day plant sample on the medium containing NAA 0,5 mg/l had the most Analyses by CE showed that the concentration of indol alkaloid (catharanthine and vindoline) in the in vitro plant is more than in vivo plant, and these plants produce the highest catharanthine after 28 days and vindoline after days cultured in MS medium adding NAA 0,5 mg/l vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tựa i Lời cảm ơn iii Tóm tắt iv Summary vi Mục lục vii Danh sách bảng xi Danh sách hình sơ đồ xiii Danh sách chữ viết tắt xv CHƢƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Yêu cầu CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Hợp chất tự nhiên 2.1.1 Tầm quan trọng hợp chất thứ cấp 2.1.2 Sự phân loại hợp chất thứ cấp 2.2 Alkaloid 2.3 Sơ lƣợc đặc điểm Trƣờng xuân hoa Catharanthus roseus 2.3.1 Nguồn gốc Trường xuân hoa 2.3.2 Đặc điểm thực vật học sinh thái Trường xuân hoa 2.3.3 Thành phần hoá học Trường xuân hoa 2.3.4 Sự phân bố alkaloid Trường xuân hoa 13 2.3.5 Tính chất dược lý Trường xuân hoa 13 2.3.6 Ứng dụng alakloid Trường xuân hoa điều trị bệnh 14 2.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến sản xuất hợp chất thứ cấp 15 2.4.1 Các chất điều hòa sinh trưởng 15 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.4.2 Nguồn đạm 16 2.4.3 Nguồn cacbon 16 2.4.4 Nhiệt độ, pH, ánh sáng oxygen 16 2.4.5 Các chất khác 16 2.5 Các phƣơng pháp chiết xuất alkaloid 17 2.5.1 Nguyên tắc chiết xuất 17 2.5.2 Phương pháp ly trích dung mơi hữu 17 2.5.3 Chiết dung dịch acid loãng cồn nước 18 2.6 Các phƣơng pháp định tính diện alkaloid 18 2.6.1 Phản ứng tạo tủa 19 2.6.2 Phản ứng tạo màu 19 2.7 Các phƣơng pháp định lƣợng alkaloid 20 2.7.1 Phương pháp cân 20 2.7.2 Phương pháp trung hòa 20 2.7.3 Định lượng alkaloid môi trường khan 21 2.7.4 Phương pháp so màu 21 2.7.5 Các phương pháp định lượng alkaloid đại 22 2.7.5.1 Hệ thống sắc kí lỏng cao áp 22 2.7.5.2 Hệ thống điện di mao quản 22 2.8 Các nghiên cứu việc tăng cƣờng sản xuất hợp chất thứ cấp 23 2.8.1 Chọn lọc dịng tế bào có sức sản xuất cao 24 2.8.2 Xử lý với Elicitor 24 2.8.3 Sự bổ sung tiền chất biến đổi sinh học 24 2.8.3.1 Sự bổ sung tiền chất 24 2.8.3.2 Sự biến đổi sinh học 25 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung nghiên cứu 26 3.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 26 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.3 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hƣởng IAA, NAA lên sinh trƣởng Trƣờng xuân hoa in vitro 26 3.3.1 Vật liệu 26 3.3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 26 3.3.1.2 Thiết bị dụng cụ 26 3.3.2 Điều kiện môi trường nuôi cấy 26 3.3.3 Phương pháp nghiên cứu 27 3.3.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát khả sinh trưởng Trường xuân hoa in vitro mơi trường MS có bổ sung NAA 27 3.3.3.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ NAA, IAA đến sinh trưởng Trường xuân hoa in vitro 27 3.3.4 Phương pháp tiến hành 29 3.4 Nội dung 2: Xác định tạo alkaloid Trƣờng xuân hoa in vitro bổ sung IAA, NAA 29 3.4.1 Vật liệu 29 3.4.1.1 Mẫu kiểm tra 29 3.4.1.2 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 29 3.4.1.3 Hóa chất 30 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 30 3.4.2.1 Thí nghiệm 1: Xác định diện alkaloid Trường xuân hoa in vitro thuốc thử Wagner 30 3.4.2.2 Thí nghiệm 2: Thử nghiệm ly trích alkaloid Trường xuân hoa 31 3.4.2.3 Thí nghiệm 3: Xác định hàm lượng alkaloid Trường xuân hoa in vitro Trường xuân hoa in vivo 31 3.4.2.4 Thí nghiệm 4: Kiểm tra hàm lượng alkaloid Trường xuân hoa giai đoạn phát triển CE 32 3.4.3 Phương pháp tiến hành 32 3.4.3.1 Định tính alkaloid mẫu Trường xuân hoa 32 ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.4.3.2 Ly trích alkaloid từ mẫu Trường xuân hoa 32 3.4.3.3 Phân tích xác định hàm lượng alkaloid CE 34 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Đề nghị 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC x LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 21 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 3.6296 3.629630 128 7257 Within groups 1474.0741 52 28.347578 -Total (corrected) 1477.7037 53 missing value(s) have been excluded Table of means for DC21DAY.DAITHAN by DC21DAY.NT -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 27 45.185185 9168213 1.0246513 43.730962 46.639409 27 44.666667 1.1221672 1.0246513 43.212443 46.120890 -Total 54 44.925926 7245379 7245379 43.897635 45.954217 Multiple range analysis for DC21DAY.DAITHAN by DC21DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -2 27 44.666667 X 27 45.185185 X -contrast difference limits - 0.51852 2.90845 -* denotes a statistically significant difference 28 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 0185 018519 000 9841 Within groups 2332.0741 52 44.847578 -Total (corrected) 2332.0926 53 missing value(s) have been excluded Table of means for DC28DAY.DAITHAN by DC28DAY.NT -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 27 47.111111 1.3891453 1.2888062 45.281989 48.940233 27 47.148148 1.1799654 1.2888062 45.319026 48.977270 -Total 54 47.129630 9113236 9113236 45.836245 48.423014 Multiple range analysis for DC28DAY.DAITHAN by DC28DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 47.111111 X 27 47.148148 X -contrast difference limits - -0.03704 3.65824 -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 35 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 29.6296 29.629630 725 4075 Within groups 2125.4074 52 40.873219 -Total (corrected) 2155.0370 53 missing value(s) have been excluded Table of means for DC35DAY.DAITHAN by DC35DAY.NT -Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean -1 27 49.666667 1.3888034 1.2303751 47.920472 51.412861 27 51.148148 1.0482705 1.2303751 49.401954 52.894342 -Total 54 50.407407 8700066 8700066 49.172662 51.642153 Multiple range analysis for DC35DAY.DAITHAN by DC35DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 49.666667 X 27 51.148148 X -contrast difference limits - -1.48148 3.49239 -* denotes a statistically significant difference Kết thống kê số rễ Trƣờng xuân hoa in vitro 14 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 12.518519 12.518519 44.161 0000 Within groups 14.740741 52 283476 -Total (corrected) 27.259259 53 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for SR14DAY.SORE by SR14DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 2.2222222 X 27 3.1851852 X -contrast difference limits - -0.96296 0.29084 * -* denotes a statistically significant difference 21 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 20.166667 20.166667 16.734 0001 Within groups 62.666667 52 1.205128 -Total (corrected) 82.833333 53 missing value(s) have been excluded LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Multiple range analysis for SR21DAY.SORE by SR21DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 3.0000000 X 27 4.2222222 X -contrast difference limits - -1.22222 0.59968 * -* denotes a statistically significant difference 28 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 25.351852 25.351852 47.332 0000 Within groups 27.851852 52 535613 -Total (corrected) 53.203704 53 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for SR28DAY.SORE by SR28DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 4.7407407 X 27 6.1111111 X -contrast difference limits - -1.37037 0.39979 * -denotes a statistically significant difference 35 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 71.185185 71.185185 105.873 0000 Within groups 34.962963 52 672365 -Total (corrected) 106.14815 53 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for SR35DAY.sore by SR35DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -2 27 6.0370370 X 27 8.3333333 X -contrast difference limits - 2.29630 0.44793 * -* denotes a statistically significant difference Kết thống kê chiều dài rễ Trƣờng xuân hoa in vitro 14 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 389.35185 389.35185 1333.293 0000 Within groups 15.18519 52 29202 -Total (corrected) 404.53704 53 missing value(s) have been excluded LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Multiple range analysis for DR14DAY.DAIRE by DR14DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 2.2222222 X 27 7.5925926 X -contrast difference +/limits - -5.37037 0.29520 * -* denotes a statistically significant difference 21 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 4.166667 4.1666667 7.927 0069 Within groups 27.333333 52 5256410 -Total (corrected) 31.500000 53 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for DR21DAY.DAIRE by DR21DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 5.2222222 X 27 5.7777778 X -contrast difference limits - 0.55556 0.39605 * -* denotes a statistically significant difference 28 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 266.66667 266.66667 216.166 0000 Within groups 64.14815 52 1.23362 -Total (corrected) 330.81481 53 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for DR28DAY.DAIRE by DR28DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 5.629630 X 27 10.074074 X -contrast difference +/limits - -4.44444 0.60673 * -* denotes a statistically significant difference 35 ngày Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 317.79630 317.79630 157.108 0000 Within groups 105.18519 52 2.02279 -Total (corrected) 422.98148 53 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for DR35DAY.daire by DR35DAY.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -1 27 7.592593 X 27 12.444444 X -contrast difference limits - -4.85185 0.77692 * -* denotes a statistically significant difference XỬ LÝ SỐ LIỆU CÂY TRUỜNG XUÂN HOA IN VITRO TRÊN MÔI TRƯỜNG CHỨA NAA CAO CÂY TRÊN MOI TRUƠNG CÓ NAA Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 1124.938 224.98765 2.785 0194 Within groups 12603.704 156 80.79297 -Total (corrected) 13728.642 161 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for CCNAA.Caocay by CCNAA.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -6 27 49.296296 X 27 49.518519 X 27 51.814815 XX 27 51.851852 XX 27 55.666667 X 27 55.925926 X -contrast difference limits - 0.03704 4.83333 - -3.81481 4.83333 - -4.07407 4.83333 - 2.33333 4.83333 - 2.55556 4.83333 - -3.85185 4.83333 - -4.11111 4.83333 - 2.29630 4.83333 - 2.51852 4.83333 - -0.25926 4.83333 - 6.14815 4.83333 * - 6.37037 4.83333 * - 6.40741 4.83333 * - 6.62963 4.83333 * - 0.22222 4.83333 * denotes a statistically significant difference SỐ RỄ TRÊN MOI TRUƠNG CÓ NAA Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 216.27160 43.254321 147.401 0000 Within groups 45.77778 156 293447 -Total (corrected) 262.04938 161 missing value(s) have been excluded LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Multiple range analysis for SRNÁA.SORE by SRNAA.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -6 27 6666667 X 27 1.9259259 X 27 2.9259259 X 27 3.0000000 X 27 3.6666667 X 27 4.1851852 X -contrast difference limits - -0.07407 0.29129 - -1.25926 0.29129 * - -0.74074 0.29129 * - 1.00000 0.29129 * - 2.25926 0.29129 * - -1.18519 0.29129 * - -0.66667 0.29129 * - 1.07407 0.29129 * - 2.33333 0.29129 * - 0.51852 0.29129 * - 2.25926 0.29129 * - 3.51852 0.29129 * - 1.74074 0.29129 * - 3.00000 0.29129 * - 1.25926 0.29129 * * denotes a statistically significant difference DÀI RỄ TRÊN MOI TRUỜNG CÓ NAA Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 462.86420 92.572840 187.280 0000 Within groups 77.11111 156 494302 -Total (corrected) 539.97531 161 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for DRNAA.DAIRE by DRNAA.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -6 27 1.1111111 X 27 2.4444444 X 27 4.1851852 X 27 5.2222222 X 27 5.4814815 XX 27 5.6296296 X -contrast difference +/limits - -1.03704 0.37806 * - -1.29630 0.37806 * - -1.44444 0.37806 * - 1.74074 0.37806 * - 3.07407 0.37806 * - -0.25926 0.37806 - -0.40741 0.37806 * - 2.77778 0.37806 * - 4.11111 0.37806 * - -0.14815 0.37806 - 3.03704 0.37806 * - 4.37037 0.37806 * - 3.18519 0.37806 * - 4.51852 0.37806 * - 1.33333 0.37806 * -* denotes a statistically significant difference LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com XỬ LÝ SỐ LIỆU CÂY TRUỜNG XUÂN HOA IN VITRO TRÊN MÔI TRƯỜNG CHỨA IAA CAO CÂY TRÊN MOI TRUƠNG CÓ IAA Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 560.9938 112.19877 2.637 0256 Within groups 6638.3704 156 42.55366 -Total (corrected) 7199.3642 161 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for CCIAA.CAOCAY by CCIAA.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -6 27 46.333333 X 27 48.740741 XX 27 49.407407 XX 27 50.407407 X 27 51.518519 X 27 51.851852 X -contrast difference limits - 2.44444 3.50775 - 1.44444 3.50775 - 0.33333 3.50775 - 3.11111 3.50775 - 5.51852 3.50775 * - -1.00000 3.50775 - -2.11111 3.50775 - 0.66667 3.50775 - 3.07407 3.50775 - -1.11111 3.50775 - 1.66667 3.50775 - 4.07407 3.50775 * - 2.77778 3.50775 - 5.18519 3.50775 * - 2.40741 3.50775 -* denotes a statistically significant difference * denotes a statistically significant difference SỐ RỄ TRÊN MOI TRUƠNG CÓ IAA One-Way Analysis of Variance -Data: SRIAA.SORE Level codes: SRIAA.NT Labels: Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 191.30864 38.261728 104.242 0000 Within groups 57.25926 156 367047 -Total (corrected) 248.56790 161 missing value(s) have been excluded LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Multiple range analysis for SRIAA.SORE by SRIAA.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -6 27 2.5925926 X 27 2.6666667 XX 27 2.9259259 X 27 4.0370370 X 27 4.2962963 X 27 5.6296296 X -contrast difference limits - -1.37037 0.32578 * - -1.11111 0.32578 * - -2.70370 0.32578 * - 0.25926 0.32578 - 0.33333 0.32578 * - 0.25926 0.32578 - -1.33333 0.32578 * - 1.62963 0.32578 * - 1.70370 0.32578 * - -1.59259 0.32578 * - 1.37037 0.32578 * - 1.44444 0.32578 * - 2.96296 0.32578 * - 3.03704 0.32578 * - 0.07407 0.32578 * denotes a statistically significant difference DÀI RỄ TRÊN MOI TRUỜNG CÓ IAA Analysis of variance -Source of variation Sum of Squares d.f Mean square F-ratio Sig level -Between groups 88.938272 17.787654 41.902 0000 Within groups 66.222222 156 424501 -Total (corrected) 155.16049 161 missing value(s) have been excluded Multiple range analysis for DRIAA.DAIRE by DRIAA.NT -Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups -6 27 3.7777778 X 27 4.1851852 X 27 4.6666667 X 27 4.8148148 X 27 5.6666667 X 27 5.8518519 X -contrast difference +/limits - -0.62963 0.35035 * - -1.48148 0.35035 * - -1.66667 0.35035 * - -0.48148 0.35035 * - 0.40741 0.35035 * - -0.85185 0.35035 * - -1.03704 0.35035 * - 0.14815 0.35035 - 1.03704 0.35035 * - -0.18519 0.35035 - 1.00000 0.35035 * - 1.88889 0.35035 * - 1.18519 0.35035 * - 2.07407 0.35035 * - 0.88889 0.35035 * LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com * denotes a statistically significant difference PHỤ LỤC Khối lƣợng Trƣờng xuân hoa trƣớc sau đơng khơ Trung bình Trọng lượng tươi 0,5287 0,5202 0,4794 0,5394 0,4653 0,471 1,043 0,8399 0,7234 0,5919 0,8955 1,10151 0,6832675 Trọng lượng khô 0,0673 0,1117 0,0589 0,0645 0,0558 0,064 0,1259 0,1006 0,0937 0,0797 0,1154 0,119 0,088041667 Hàm lượng nước mẫu tươi = (0,683 - 0,088)*100/0,683 =87,1% 0,6 g vật liệu tươi = 0,6*(100 – 87,1)/100 = 0,0774 (g) =77,4 (mg) chất khô x (mg) alkaloid/ 0,6 (g) vật liệu tươi = x*100/ 77,4(mg) alkaloid/100 mg chất khô PHỤ LỤC Kết chất chuẩn catharanthine (20mg/l) phân tích CE LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Kết chất chuẩn vindoline (20mg/l) phân tích CE Kết mẫu Trƣờng xn hoa khơ phân tích CE Kết CE phân tích mẫu Trƣờng xuân hoa tƣơi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Kết CE phân tích mẫu Trƣờng xuân hoa in vitro Kết CE phân tích mẫu Trƣờng xuân hoa in vivo Sắc kí đồ CE phân tích mẫu Trƣờng xuân hoa ngày tuổi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Sắc kí đồ CE phân tích mẫu Trƣờng xuân hoa 14 ngày tuổi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Sắc kí đồ CE phân tích mẫu Trƣờng xuân hoa 21 ngày tuổi 10 Sắc kí đồ CE phân tích mẫu Trƣờng xuân hoa 28 ngày tuổi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 11 Sắc kí đồ CE phân tích mẫu Trƣờng xuân hoa 35 ngày tuổi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... Lâm Tp Hồ Chí Minh Tháng 8/2007 “KHẢO SÁT SỰ TÁC ĐỘNG CỦA HORMONE TĂNG TRƢỞNG AUXIN LÊN SỰ SINH TRƢỞNG VÀ SINH TỔNG HỢP ALKALOID CỦA CÂY TRƢỜNG XUÂN HOA (Catharanthus roseus) IN VITRO? ?? Hội đồng... đề tài ? ?Khảo sát tác động IAA, NAA lên sinh trƣởng sinh tổng hợp alkaloid Trƣờng xuân hoa (Catharanthus roseus) in vitro? ?? nhằm kích thích khả sản xuất indol alkaloid Trường xuân hoa in vitro nhờ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ************************** KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ TÁC ĐỘNG CỦA AUXIN LÊN SỰ SINH TRƢỞNG VÀ SINH TỔNG