ĐÁNH GIÁ đa DẠNG DI TRUYỀN của GIỐNG LAN RỪNG dendrobium THU THẬP tại THÀNH PHỐ hồ CHÍ MINH và RỪNG NAM cát TIÊN BẰNG kỹ THUẬT RAPD

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA GIỐNG LAN RƢ̀NG Dendrobium THU THẬP TẠI THÀ NH PHỚ HỒ CHÍ MINH VÀ RƢ̀NG NAM CÁT TIÊN BẰNG KỸ THUẬT RAPD Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2003 – 2007 Sinh viên thực hiện: TRƢƠNG MINH DŨNG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA GIỐNG LAN RƢ̀NG Dendrobium THU THẬP TẠI THÀ NH PHỚ HỒ CHÍ MINH VÀ RƢ̀NG NAM CÁT TIÊN BẰNG KỸ THUẬT RAPD Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2003 – 2007 Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS TRẦN THỊ DUNG TRƢƠNG MINH DŨNG TS VÕ THÁI DÂN CN LƢU PHÚC LỢI Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2007 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM TẠ Tôi xin chân thành cảm ơn: - Ban Giám Hiệu trƣờng Đại học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh - Ban Giám Đớ c Viê ̣n Công Nghê ̣ Sinh Ho ̣c và Môi Trƣờng – Đa ̣i ho ̣c Nông Lâm TP HCM - Các thầy cô Bộ môn Công Nghệ Sinh Học thầy cô trực tiếp giảng dạy suốt bốn năm qua Đã hỗ trợ tạo điều kiện tốt suốt trình học tập thực đề tài Tôi xin trân tro ̣ng gƣ̉i lời biế t ơn đế n các thầ y cô: - TS Trần Thị Dung - TS Võ Thái Dân - CN Lƣu Phúc Lợi Đã tâ ̣n tình hƣớng dẫn , chỉ bảo truyền đạt những kinh nghiệm quý báu cũng nhƣ ta ̣o điề u kiê ̣n tố t nhấ t cho viê ̣c thƣ̣c hiê ̣n và hoàn tấ t đề tài tố t nghiê ̣p này CN Huỳnh Kim Hƣng toàn thể anh chị thuộc Viện Công Nghệ Sinh Học Môi Trƣờng – Đa ̣i ho ̣c Nông Lâm TP HCM quan tâm giúp đỡ suốt thời gian phòng thí nghiệm Kỹ sƣ Huỳnh Tuấ n Anh – trƣởng Tra ̣m khuyế n nông huyê ̣n Tân Phú , tỉnh Đồng Nai tận tình hƣớng dẫn suốt thời gian thu mẫu rƣ̀ng Nam Cát Tiên Cô Nguyễn Thị Cách anh Trƣờng , Tùng, chị Vân tận tình hƣớng dẫn ś t thời gian thu mẫu ta ̣i Thành phố Hồ Chí Minh Toàn thể lớp CNSH29 thân yêu hỗ trợ, giúp đỡ động viên suốt thời gian làm đề tài Thành kính ghi ơn ba mẹ những ngƣời thân gia đình ln tạo điều kiện động viên suốt trình học tập trƣờng TP HCM, tháng 09 năm 2007 Trƣơng Minh Dũng iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÓM TẮT KHÓA LUẬN TRƢƠNG MINH DŨ NG , Đa ̣i ho ̣c Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh, 9/2007 “Đánh giá đa dạng di truyền của giống lan rừng Dendrobium thu thâ ̣p ta ̣i Thành phớ Hờ Chí Minh rƣ̀ng Nam Cá t Tiên bằ ng kỹ thuâ ̣t RAPD.” Hô ̣i đồ ng hƣớng dẫn: TS Trầ n Thi ̣Dung, TS Võ Thái Dân, CN Lƣu Phúc Lơ ̣i Điạ điể m nghiên cƣ́u: Viê ̣n Công Nghê ̣ Sinh Ho ̣c và Môi Trƣờng , Đa ̣i ho ̣c Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Viê ̣t Nam sở hƣ̃u nhiề u nguồ n gen quý hiế m , đô ̣c đáo, mới la ̣ của giố ng lan rƣ̀ng Dendrobium Các giống Dendrobium không nhƣ̃ng đe ̣p , giá trị kinh tế cao , mà cịn có giá trị y học Vì vậy, trƣớc hế t chúng ta cầ n phải khảo sát sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n của giống lan rừng Dendrobium, tạo tảng cho công tác bảo tồn tạo giố ng mới, sở đó, xây dƣ̣ng thƣơng hiê ̣u cho lan Viê ̣t Nam Thiế t lâ ̣p quy trình li trích DNA tổ ng số tƣ̀ mẫu lá có đô ̣ tinh sa ̣ch và ổ n điṇ h cao Bên ca ̣nh đó , xây dƣ̣ng phản ƣ́ng PCR với primer RAPD cho tin ́ h đa hin ̀ h cao Tƣ̀ đó, phân tić h tiń h đa da ̣ng di truyề n của 10 giố ng lan rƣ̀ng Dendrobium thu thâ ̣p Thành phố Hồ Chí Minh Nam Cát Tiên dựa phần mềm NTSYSp c Version 2.1 Winboot Quy trình li trích DNA tƣ̀ mẫu lá có đô ̣ tinh sa ̣ch và ổ n đinh ̣ cao đã đƣơ ̣c tố i ƣu thành công primer ngẫu nhiên : OPAC10, OPAH13, 0PB01, OPB08, S1384, U693 đƣơ ̣c dùng phân tić h đa da ̣ng di truyề n của các giố ng lan khảo sát bằ ng kỹ thuật RAPD Trên sở đó , xây dƣ̣ng sơ đồ phân nhóm di truyề n của 10 giố ng lan rƣ̀ng Dendrobium Sơ đồ phân nhóm di truyề n cho thấ y các giố ng lan khảo sát có sƣ̣ đa da ̣ng cao về mă ̣t di truyề n , phân thành nhóm với mức tƣơng đồng gen từ 0.39 – 0.79 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com SUMMARY Genetic diversity analysis of wild Dendrobium stem at Ho Chi Minh city and Nam Cat Tien forest by RAPD Supervisor: Tran Thi Dung1, PhD; Vo Thai Dan2, PhD; Luu Phuc Loi1, BSc Student: Truong Minh Dung1 Department of Biotechnology, Nong Lam university, Ho Chi Minh city Faculty of Agriculture, Nong Lam university, Ho Chi Minh city To analysis the genetic diversity of wild Dendrobium orchid, six decamers were used for 10 wild Dendrobium species, collected from Ho Chi Minh city and Nam Cat Tien forest (Dong Nai province) Collecting 10 species from Ho Chi Minh city and Nam Cat Tien forest (Dong Nai province), optimizing of protocols for DNA extraction and purification, constructing of protocol for RAPD, analyzing the genetic of 10 wild Dendrobium species by RAPD and constructing the dendrogram by NTSYSpc 2.1 software, Winboot program are the objective of the study Methods - To identify 10 wild Dendrobium species with genotype - Extraction of total DNA from fresh tissue of 10 wild Dendrobium species - Six random primer: OPAC10, OPAH13, OPB01, OPB08, S1384, U693 were used to analysis of genetic diversity - Following RAPD reactions, dendrogram were constructed by NTSYSpc 2.1 and Winboot program Conclusion Six decamers are enough to compare the identity of all samples We could use those primers to establish the methodology to perform genetic comparisons in Vietnam Besides, the genetic diversity among 10 wild Dendrobium species were established to support the breeder overcome difficulties in plant salection v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC CHƢƠNG Trang LỜI CẢM TẠ iii TÓM TẮT KHÓA LUẬN iv SUMMARY v MỤC LỤC vi DANH SÁCH CHƢ̃ VIẾT TẮT ix DANH SÁCH CÁC BẢNG x DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ x DANH SÁCH CÁC HÌNH xi MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu – nô ̣i dung – yêu cầ u đề tài 2 TỔNG QUAN TÀI LIÊ ̣U 2.1.Giới thiệu tổng quan giống lan rừng Dendrobium 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Các nhóm lan Dendrobium 2.1.3 Đặc điểm của 10 giống lan nghiên cứu đề tài 2.2 Quy trình li trích DNA tế bào thực vật 2.3 Giới thiệu kỹ thuật PCR 11 2.3.1 Nguyên tắc của kỹ thuật PCR 11 2.3.2 Thành phần thực phản ứng PCR 14 2.3.2.1 Mẫu 14 2.3.2.2 Primer 14 2.3.2.3 dNTP 16 2.3.2.4 MgCl2 17 2.3.2.5 Taq 17 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.3.5.6 Buffer 17 2.4 Đa dạng di truyền – số phƣơng pháp nghiên cứu đa dạng di truyền 18 2.4.1 Đa dạng di truyền 18 2.4.2 Một số phƣơng pháp nghiên cứu đa dạng di truyền 18 2.4.2.1 Phƣơng pháp chỉ thị hình thái 18 2.4.2.2 Phƣơng pháp chỉ thị isozyme 19 2.4.2.3 Phƣơng pháp dùng chỉ thị phân tử 19 2.5 Đánh giá sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n bằ ng phầ n mề m NTSYSpc và Winboot 26 2.5.1 NTSYSpc version 2.1 26 2.5.2 Winboot 28 2.6 Các cơng trình nghiên cứu có liên quan 29 2.6.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 29 2.6.2 Tình hình nghiên cứu ngồi nƣớc 31 VẬT LIÊ ̣U VÀ PHƢƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 32 3.1 Nội dung, thời gian địa điểm 32 3.1.1 Nội dung 32 3.1.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 32 3.2 Vật liệu 32 3.2.1 Các giống lan Dendrobium thí nghiệm 32 3.2.2 Thiết bị - dụng cụ 34 3.2.3 Hóa chất thí nghiệm 34 3.3 Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu 36 3.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 36 3.3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 36 KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 45 4.1 Điề u tra và thu thâ ̣p các giố ng lan rƣ̀ng Dendrobium tƣ̀ Thành phố Hồ Chí Minh và rƣ̀ng Nam Cát Tiên dƣ̣a đă ̣c điể m hin ̀ h thái 45 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 4.2 Tố i ƣu phƣơng pháp ly trích DNA tổ ng số tƣ̀ mẫu lá tƣơi cho đô ̣ tinh sa ̣ch và ổ n đinh ̣ cao 48 4.3 Xây dƣ̣ng quy trình PCR dƣ̣a kỹ thuâ ̣t RAPD cho tính đa hình cao 53 4.4 Phân tić h sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n của 10 giố ng lan rƣ̀ng Dendrobium dựa 30 primer RAPD 54 4.5 Phân tić h sƣ̣ đa da ̣ng di truyề n của 10 giố ng lan rƣ̀ng Dendrobium bằng phầ n mề m NTSYSpc version 2.1 Winboot 60 KẾT LUẬN - ĐỀ NGHỊ 69 5.1 Kế t luâ ̣n 69 5.2 Đề nghi 70 ̣ TÀI LIỆU THAM KHẢO 71 PHỤ LỤC viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC CHƢ̃ VIẾT TẮT µg: microgram µl: microlite µM: micromol/lite AFLP: Amplified Fragment Length Polymorphism bp: base pair CTAB: Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide DNA: Deoxyribonucleic acid dNTP: Deoxyribonucleotide triphosphate EB: extraction buffer EDTA: Ethylene Diamine Tetra acetic Acid mM: milimolar (milimol/lite) NCT: Nam Cát Tiên OD: Optical density PCR: Polymerase Chain Reaction pmol: Picomol RAPD: Random Amplified Polymorphic DNA RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphism RNA: Ribonucleic acid Rnase: Ribonuclease SSR: Simple Sequence Repeat Ta : Annealing tenperature (nhiệt độ bắt cặp) TAE: Tris – Acetate – EDTA TE: Tris – EDTA Tm: Melting temperature (nhiệt độ nóng chảy) TP HCM: Thành phố Hồ Chí Minh U: Đơn vị hoạt tính UPGMA: Unweighted Pair Group Method with Arithmetic VNTR: variable number tandem repeat ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG Trang Bảng 2.1 Nồng độ agarose kích thƣớc đoạn cần phân tách 11 Bảng 3.1 Primer 34 Bảng 3.2 Các giống lan thu thập từ Tp Hố Chí Minh rừng Nam Cát Tiên 37 Bảng 3.4 Điểm khác giữa quy trình li trích 40 Bảng 3.5 Thành phần hóa chất cho phản ứng PCR 42 Bảng 3.6 Quy trình PCR 42 Bảng 4.1 So sánh các đă ̣c trƣng về lá của các giố ng lan rƣ̀ng Dendrobium 46 Bảng 4.2 So sánh các đă ̣c trƣng về thân của các giố ng lan rƣ̀ng Dendrobium 47 Bảng 4.3 Tỉ lệ DNA tổng số tinh quy trình li trić h khảo sát 50 Bảng 4.4 Nờ ng ̣ DNA (ng/µl) tổng sớ theo quy trình 51 Bảng 4.5 Thành phần hóa chất cho phản ứng PCR 53 Bảng 4.6 Quy trình PCR 53 Bảng 4.7 Số band khuếch đại band đa hình số primer 55 Bảng 4.8 Hệ số đồng dạng của 10 giống lan rừng Dendrobium thu thập Thành phố Hồ Chí Minh và Nam Cát Tiên 62 DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ BIỂU ĐỒ Trang Biểu đồ 4.1 Tỉ lệ DNA mẫu tổng số tinh li trích theo quy trình khảo sát 50 Biểu đồ 4.2 Biểu đồ thể tính ổn định của quy trình khảo sát 51 x LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Thị Lang, 2002 Phương pháp nghiên cứu công nghệ sinh học Nhà xuất Nông nghiệp, Thành phố Hồ Chí Minh 219 trang Hồ Huỳnh Thùy Dƣơng, 2003 Sinh học phân tử Nhà xuất Giáo dục 301 trang Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang, 1999 Di truyền phân tử - Những nguyên tắc chọn giống trồng Nhà xuất Nông nghiệp, Thành phố Hồ Chí Minh Trang 93 – 116 Trần Văn Bảo Kỹ thuật nuôi trồng phong lan Nhà xuất trẻ Nguyễn Thị Phƣơng Dung, 2005 Xây dựng phương pháp nhận diện phân tích tính đa dạng di truyền 21 dòng cacao (Theobroma cacao L.) kĩ thuật microsatellite Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sƣ Công nghệ sinh học, Đại học Nông Lâm, Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Hồng Nhật, 2004 Nhân giống in vitro lan Dendrobium phương pháp nuôi cấy mô chồi đơn giả hành Khóa luận Tốt nghiệp Kỹ sƣ Nông học, Đại học Nông Lâm, Thành phố Hồ Chí Minh Trần Hợp, 1988 Phong lan Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật Hà Nội 137 trang Phạm Hoàng Hộ, 1999 Cây cỏ Việt Nam Nhà xuất trẻ Huỳnh Chấn Khôn, 2006 Nghiên cứu đa dạng di truyền tiêu (Piper nigrum L.) thị xã Bà Rịa thuộc tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu kĩ thuật RAPD Khóa luận Tốt nghiệp Kỹ sƣ Công nghệ sinh học, Đại học Nơng Lâm, Thành phố Hồ Chí Minh 10 Bùi Minh Trí Phạm Hồng Đức Phƣớc, 2005 Xây dựng phương pháp nhận diện số giống cacao sở kỹ thuật RAPD Tạp chí Khoa học kỹ thuật Nông Lâm nghiệp Nhà xuất Nông Nghiệp 11 Nguyễn Văn Uyển, Trần Văn Minh, 2001 Vi nhân giống phong lan nhóm Dendrobium quy mơ cơng nghiệp Nhân giống in itro TC Khoa học Công nghệ 2001, V.34, no.1, tr.1-9 - 34.31 kdm LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 72 12 Hoàng Thị Liễu, 2004 Phân tích mức độ đa dạng di truyền xây dựng phương pháp nhận diện số giống cacao sở kỹ thật PCR Luận văn tốt nghiệp Kỹ sƣ Nông học, Trƣờng Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam,63 trang TIẾNG NƢỚC NGỒI 13 Chen, T C., Lin, T J., Huang, M.D., Huang, M.C., Lee, S.Y and Wu, W L, 2004 Polymorphic microsatellite loci in orchid (Phalaenopsis amabilis) and their usefulness in other orchid species 14 F James Rohlf NTSYSpc – Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System Version 2.1, User Guide Department of Ecology and Evolution State University of New York, Stony Brook, NY 11794 – 5245 15 DING Xiao-yu, XU Luo-san, WANG Zhen-tao,et al, 2002 Allele-specific dingnostic PCR authentication of D devonianum from other Dendrobium species[J].Acta Pharm Sin, 37(2):897-901 16 DING Xiao-yu, XU Luo-san, WANG Zhen-tao, et al, 2002 Molecular authenticationof Dendrobium chrysanthum from its allied species of Dendrobium[J] China J Chin Mater Med,27(6):407-411 17 Ge Ding, Xiao-yu Ding, Jie Shen, Feng Tang, Dong-yang Liu, Jia He, Xue-xia Li, Bi-hai Chu, 2005 Gentic diversity and molecular authentication of wild population of Dendrobium officinale by RAPD 40:1028-32 18 G.H.Yue, L.Lam-Chan and Y.Hong, 2006 Development of simple sequence repeat (SSR) markers and their use in identification of Dendrobium varieties Molecular Ecology Notes 19 Kuo,Y L., Chen, T C and Wu, W L 2004 Authentication of medicinal Dendrobium species by the use of microsatellite DNA markers International Biotech Conference & Exhibition (IBC&E) 25-27 November, 2004 Kaohsiung, Taiwan Abstract book: 83 20 Kuo,Y L., Chen, T C Huang, M.C and Wu, W L 2005 Microsatellite marker development and analysis in Dendrobium species (Orchidaceae) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 73 11-14 March 18th World Orchid Conference (WOC18), Dijon, France Abstract book: 91 21 Powell, W., Morgante, M., Andre, C., Hanafey, M., Vogel, J., Tingey, S and Rafalski, A, 1996 The comparison of RFLP, RAPD, AFLP and SSR (microsatellite) markers for germplasm analysis- Molecular Breeding 2, 225–238 22 ZHANG Ming, HUANG Hua-rong, LIAO Su-mei, et al, 2001 Cluster analysis of Dendrobium by RAPD and design of specific primer for Dendrobium candidum[J] China J Chin Mater Med, 26(7):442-446 23 Doyle, J J and E E Dickson 1987 Preservation of plant samples for DNA restriction endonuclease analysis Taxon 36:715-722 24 Doyle, J J and J L Doyle 1987 A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue Phytochemical Bulletin 19: 11-15 25 Doyle, J J and J L Doyle 1990 A rapid total DNA preparation procedure for fresh plant tissue Focus 12:13-15 26 Doyle, J J 1991 DNA protocols for plants pp 283-293 in: G Hewitt, A W B Johnson, and J P W Young (eds.), Molecular Techniques in Taxonomy NATO ASI Series H, Cell Biology Vol 57 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 74 TRANG WEB 27 http://www.dalatrose.com/forum/forum.asp?FORUM_ID=43 Dalatrose 28 http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/microsatellite.html Microsatellite DNA methodology 29 http://users.ugent.be/~avierstr/principles/pcr.html Principle of the PCR 30 http://www.orchidsonline.com.au/ Orchid photos and Information 31 http://en.wikipedia.org/wiki/DNA_extraction Wikipedia LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com PHỤ LỤC Hình: Kế t quả li trích li trích theo quy trin ̀ h3 Lane 1: Long tu (TP HCM); lane 2: Giả hạc (TP HCM) Lane 3: Thủy tiên trắng (TP.HCM); lane 4: Thủy tiên vàng (TP HCM) Lane 5: Vẩ y rồ ng (TP.HCM); lane 6: Kim điê ̣p (TP.HCM) Lane 7: Thái Bình (TP.HCM); lane 8: Nhấ t điể m hoàng (TP.HCM) Lane 9: Thủy tiên mỡ gà (TP.HCM); lane 10: Long nhañ (TP.HCM) Lane 11: Long tu (Nam Cát Tiên); lane 12: Giả hạc (Nam Cát Tiên) Lane 13: Thủy tiên trắng (Nam Cát Tiên); lane 14: Thủy tiên vàng (Nam Cát Tiên) Lane 15: Vẩ y rồ ng (Nam Cát Tiên); lane 16: Kim điê ̣p (Nam Cát Tiên) Lane 17: Thái Bình (Nam Cát Tiên); lane 18: Nhấ t điể m hoàng (Nam Cát Tiên) Lane 19: Thủy tiên mỡ gà (Nam Cát Tiên); lane 20: Long nhañ (Nam Cát Tiên) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com KẾT QUẢ ĐO OD - HÀM LƢỢNG DNA TỔNG SỐ - PHA LOÃ NG MẪU THEO QUY TRÌ NH DNA Mẫu pha loãng Ratio Abs Abs (ng/ul) 2.00 0.09 0.05 416 1.57 0.09 0.06 373 1.87 0.11 0.06 484 10 1.91 0.10 0.05 449 1.34 0.11 0.08 392 1.81 0.15 0.08 652 13 1.73 0.17 0.10 703 14 1.22 0.13 0.10 419 2.08 0.08 0.04 342 1.89 0.16 0.09 717 14 1.75 0.07 0.04 281 2.05 0.08 0.04 357 1.72 0.16 0.09 675 13 1.90 0.08 0.04 356 2.12 0.08 0.04 361 2.04 0.08 0.04 347 1.95 0.09 0.05 390 1.93 0.16 0.08 709 14 1.93 0.12 0.06 558 11 1.75 0.09 0.05 367 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com KẾT QUẢ ĐO OD - HÀM LƢỢNG DNA TỔNG SỐ - PHA LOÃ NG MẪU THEO QUY TRÌ NH Mẫu Ratio Abs Abs DNA (ng/ul) pha loãng 2.3 1.11 0.26 0.24 797 16 2.3 1.02 0.28 0.27 770 15 2.3 1.19 0.27 0.22 876 18 2.6 1.26 0.21 0.17 715 14 2.6 1.18 0.23 0.20 762 15 2.6 1.42 0.17 0.12 650 13 2.8 1.26 0.12 0.09 403 2.8 1.19 0.11 0.09 368 2.8 1.42 0.15 0.11 559 11 2.9 1.22 0.20 0.16 656 13 2.9 1.32 0.20 0.15 709 14 2.9 1.52 0.21 0.20 617 12 KẾT QUẢ ĐO OD - HÀM LƢỢNG DNA TỔNG SỐ - PHA LOÃ NG MẪU THEO QUY TRÌ NH Mẫu Ratio Abs Abs DNA (ng/ul) pha loãng 2.3 1.59 0.86 0.54 1467 29 2.3 1.64 0.22 0.13 887 18 2.3 1.72 0.23 0.13 944 19 2.6 1.78 0.29 0.16 1252 25 2.6 2.18 0.17 0.08 790 16 2.6 2.72 0.14 0.05 707 14 2.8 2.62 0.05 0.02 868 17 2.8 1.52 0.30 0.20 1166 23 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.8 1.86 0.20 0.11 855 17 2.9 1.66 0.52 0.31 1156 23 2.9 1.70 0.35 0.21 1457 29 2.9 2.02 0.13 0.07 604 12 KẾT QUẢ ĐO OD - HÀM LƢỢNG DNA TỔNG SỐ - PHA LOÃ NG MẪU THEO QUY TRÌ NH Mẫu Ratio Abs Abs DNA (ng/ul) pha loãng 2.3 2.00 0.08 0.04 381 19 2.3 1.84 0.08 0.04 357 18 2.3 1.73 0.09 0.05 365 18 2.6 2.06 0.10 0.05 447 22 2.6 1.85 0.11 0.06 486 24 2.6 1.90 0.08 0.04 344 17 2.8 1.92 0.12 0.06 522 26 2.8 2.08 0.11 0.05 491 25 2.8 2.17 0.10 0.05 485 24 2.9 1.99 0.10 0.05 454 23 2.9 1.83 0.11 0.06 490 25 2.9 1.85 0.08 0.04 347 17 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com KẾT QUẢ SCORE BAND primer band opac10 1300 1 1 1 1 1 1 1 1200 0 0 0 0 0 1 0 1000 1 1 1 1 1 1 1 1 900 0 0 0 0 0 0 800 1 1 1 1 0 0 700 0 1 0 0 0 0 600 1 0 1 0 0 1 500 0 0 0 0 0 0 0 1 450 0 0 1 0 0 0 1 0 400 1 1 1 1 1 0 0 1 300 0 1 0 0 0 0 200 0 0 0 1 0 0 0 150 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1500 0 0 0 0 0 0 0 0 1000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 900 0 1 0 0 0 0 0 800 0 0 0 0 1 0 0 700 0 0 0 0 0 0 0 0 650 0 0 0 1 0 0 0 1 500 1 1 1 1 1 1 1 opah13 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 1.10 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9 2.10 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com opb01 opb08 s1384 450 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 400 0 0 0 1 0 0 1 250 1 1 1 1 1 1 1 1 1400 1 0 1 0 1 0 1 0 1300 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1200 1 0 1 1 0 1100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 700 0 0 0 1 0 0 0 0 500 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1000 0 0 0 0 0 0 0 0 900 0 0 0 0 0 0 1 0 0 850 0 0 0 0 0 0 0 0 0 800 0 0 0 0 0 0 0 0 700 0 1 0 0 0 0 0 0 0 600 0 0 0 0 0 0 0 0 1 500 1 1 0 1 1 1 1 0 450 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1400 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1000 0 0 0 0 0 0 0 1 900 0 0 0 0 0 0 0 0 0 800 0 0 1 0 0 0 0 700 1 1 1 1 1 1 1 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com u693 600 1 0 0 0 1 0 0 0 500 0 1 0 1 0 0 400 1 0 1 1 0 1 300 0 0 0 0 1 0 0 1400 0 0 1 0 0 0 0 0 1200 0 0 0 0 0 0 0 1000 0 0 0 0 0 0 0 0 900 1 0 0 0 0 0 800 0 1 1 0 0 1 0 700 1 1 1 0 1 1 0 600 0 0 0 0 0 0 0 0 0 500 0 0 0 0 0 0 0 1 450 0 0 0 0 1 0 0 1 400 0 0 1 0 0 0 0 0 300 0 0 0 0 0 0 0 0 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com FILE INPUT TRONG PHẦN MỀM NTSYSpc 58 20 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 1.10 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9 2.10 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 0 1 1 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MẪU PHIẾU ĐIỀU TRA NÔNG DÂN Ngày điều tra Họ tên chủ vƣờn: Nơi chốn: Ấp: Xã, phƣờng: Huyện: Tổng số giố ng lan rƣ̀ng: (giố ng) Số cây:……………… Các giống lan trồng số đặc điểm của chúng Tên S Dài giống TT Rộng (cm) (cm) Gâ n Màu Dạn sắc g S TT Tên giống Kiể u thân Dài thân (cm) Hình dạng Ngày……… tháng…… năm 2006 Ngƣời điều tra LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com Hình: Bản đồ địa lý Thành phố Hồ Chí Minh (Sài Gòn) rừng Nam Cát Tiên LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... Tp Hồ Chí Minh D1.3 Thu? ?y tiên trắng Tp Hồ Chí Minh D1.4 Thu? ?y tiên vàng Tp Hồ Chí Minh D1.5 Vẩy rồng Tp Hồ Chí Minh D1.6 Kim điệp Tp Hồ Chí Minh D1.7 Thái bình Tp Hồ Chí Minh D1.8 Nhất điểm hồng... Hồ Chí Minh D1.9 Thu? ?y tiên mỡ gà Tp Hồ Chí Minh D1.10 Long Nhãn Tp Hồ Chí Minh D2.1 Long tu Rừng Nam Cát Tiên D2.2 Giả hạc Rừng Nam Cát Tiên D2.3 Thu? ?y tiên trắng Rừng Nam Cát Tiên D2.4 Thu? ?y... đó , đa? ? tiế n hành nghiên cƣ́u và thƣ̣c hiê ̣n đề tài : ? ?Đa? ?nh giá đa dạng di truyền giống lan rừng Dendrobium thu thập ta ̣i Thành ph ố Hồ Chí Minh và rƣ̀ng Nam Cát Tiên bằ ng kỹ thu? ?