PHÂN lập VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TRONG PHÂN HEO và THỬ đối KHÁNG với e COLI gây BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** NGUYỄN QUỲNH NAM PHÂN LẬP VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TRONG PHÂN HEO VÀ THỬ ĐỐI KHÁNG VỚI E COLI GÂY BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ***000*** PHÂN LẬP VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS TRONG PHÂN HEO VÀ THỬ ĐỐI KHÁNG VỚI E COLI GÂY BỆNH TIÊU CHẢY TRÊN HEO Luận văn kỹ sƣ Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện: TS.Nguyễn Ngọc Hải Nguyễn Quỳnh Nam Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 8/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY ***000*** ISOLATE BACILLUS SUBTILIS IN PIG FECES AND TEST THE ANTAGONISM WITH E COLI K88 Graduation thesis Major: Biotechnology Professor Student Dr Nguyễn Ngọc Hải Nguyễn Quỳnh Nam Term: 2002 - 2006 Ho Chi Minh City 09/2006 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM TẠ Con xin thành kính khắc ghi cơng lao khó nhọc cha mẹ, Ngƣời sinh thành, dƣỡng dục hy sinh tất anh em ăn học nên ngƣời Con xin cảm ơn gia đình chỗ dựa vững cho vững bƣớc qua khó khăn Em xin chân thành cảm ơn: Ban Giám Hiệu Trƣờng Đại Học Nông Lâm Tp HCM, ban Chủ Nhiệm môn Công Nghệ Sinh Học tạo điều kiện cho em thực thành cơng khóa luận TS Nguyễn Ngọc Hải tận tình hƣớng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi trang bị cho em kiến thức cần thiết để em hồn tất khóa luận Tồn thể Thầy, Cơ trang bị cho em kiến thức q báu Các Thầy, Cơ phịng thực tập vi sinh hết lòng giúp đỡ cho em kinh nghiệm q báu để em thực thành cơng khóa luận Các anh chị, bạn thực tập phịng vi sinh khuyến khích , ủng hộ giúp đỡ để em thực tốt khóa luận Các bạn lớp công nghệ sinh học 28 ln bên mình, động viên nhiệt tình giúp đỡ suốt thời gian học tập nhƣ lúc thực khóa luận Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng 07 năm 2006 Nguyễn Quỳnh Nam iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÓM TẮT Enterotoxigenic E coli nguyên nhân gây bệnh tiêu chảy phổ biến heo heo cai sữa, hạn chế kháng sinh việc khống chế E coli gây bệnh tiêu chảy, chế phẩm sinh học từ Bacillus subtilis chƣa thực hiệu phòng trị bệnh Trong đề tài phân lập chủng Bacillus subtilis phân heo có khả ức chế mạnh phát triển E coli gây bệnh tiêu chảy heo Chúng phân lập đƣợc 22 chủng Bacillus subtilis phân heo, có 13 chủng tạo đƣợc vịng kháng khuẩn với E coli, tổng hợp kháng sinh ức chế phát triển E coli đƣợc kích thích nồng độ E coli đủ lớn, kháng sinh đƣợc Bacillus subtilis tổng hợp từ giai đoạn sớm phát triển ( - 12 ) có diện E coli Có chủng cho thấy ức chế mạnh mẽ E coli nhạy cảm với loại kháng sinh đƣợc thử nghiệm trừ colistin iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm tạ i Tóm tắt ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt iv Danh sách hình v Danh sách bảng vi MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 E coli gây bệnh tiêu chảy 2.2 Enterotoxigenic E coli 2.2.1 Độc tố nhạy nhiệt LT 2.2.1.1 Cấu tạo LT-1 2.2.1.2 Cơ chế tác động độc tố LT-1 2.2.2 Độc tố kháng nhiệt 2.2.2.1 Độc tố kháng nhiệt STa 2.2.2.2 Độc tố kháng nhiệt STb 2.2.3 Yếu tố gắn vào thành tế bào ruột ETEC 2.3 Chế phẩm sinh học 2.3.1 Định nghĩa 2.3.2 Cơ chế tác động 2.3.3 Ứng dụng chế phẩm sinh học 2.3.4 Yêu cầu chế phẩm sinh học 10 2.3.5 Đặc điểm chế phẩm sinh học dạng bào tử Bacillus subtilis 10 2.4 Bacillus subtilis 11 2.4.1 Đặc điểm phân loại 11 2.4.2 Đặc điểm hình thái 11 2.5 Kháng sinh đƣợc tổng hợp Bacillus subtilis 13 2.5.1 Giới thiệu 13 2.5.2 Peptide antibiotic đƣợc tổng hợp ribosome 14 2.5.2.1 Subtilin 14 2.5.2.2 Subtilosin 15 2.5.2.3 Sublancin 16 2.5.2.4 TasA 16 2.5.3 Peptide antibiotic không đƣợc tổng hợp ribosome 18 2.5.3.1 Surfactin 17 2.5.3.2 Fengycin 19 2.5.3.3 Mycosubtilin 29 2.5.3.4 Bacilysocin 20 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.1 Thời gian địa điểm thực đề tài 22 3.1.1 Thời gian 22 3.1.2 Địa điểm 22 3.2 Vật liệu thí nghiệm 22 3.2.1 Mẫu thí nghiệm 22 3.2.2 Hóa chất 22 3.2.3 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 22 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 3.3.1 Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis phân heo 22 3.3.2 Các phản ứng thử sinh hóa 23 3.3.3 Thử đối kháng với E coli môi trƣờng TSA 24 3.3.4 Đánh giá đối kháng với E coli môi trƣờng TSB 24 3.3.5 Thử kháng sinh đồ 24 3.3.6 Đánh giá khả phân giải tinh bột môi trƣờng thạch tinh bột 1% 24 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Kết 25 4.1.1 Kết phân lập Bacillus subtilis phân heo 25 4.1.2 Kết thử đối kháng với E coli môi trƣờng TSA 27 4.1.3 Kết đối kháng môi trƣờng TSB 29 4.1.4 Kết thử kháng sinh đồ 30 4.1.5 Kết đánh giá khả phân giải tinh bột 32 4.2 Thảo luận 32 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 33 5.1 Kết luận 33 5.2 Đề nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 PHỤ LỤC 39 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT ETEC : Enterotoxigenic E coli EAEC : Enteroaggregative E coli LT : Heat-labile toxin ST : Heat-stable toxin CT : Cholera enterotoxin EAST : Enteroaggreative stable-toxin ENS : Enteric nervous system GC-C : Guanylate cyclase C ABC : ATP-binding cassette vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 4.1 : Kết phân lập môi trƣờng TSA 25 Hình 4.2 : Đối kháng Bacillus subtilis với E coli môi trƣờng TSA với nồng độ pha loãng canh khuẩn E coli 10-2 27 Hình 4.3 : Kết kháng sinh đồ 31 Hình 4.4 : Hình phân giải tinh bột Bacillus subtilis Biểu đồ 4.1: Biểu đồ biểu thay đổi E coli qua thời điểm 28 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 4.1 : Kết độ lớn vòng kháng khuẩn chủng Bacillus subtilis phân lập đƣợc với E coli nồng độ pha loãng 10-2 môi trƣờng TSA 27 Bảng 4.2 : Kết số lƣợng CFU/ml E coli qua khoảng thời gian giờ, 12 giờ, 24 giờ, 36 29 Bảng 4.3 : Kết thử kháng sinh đồ chủng đƣợc thử đối kháng 30 Bảng 4.4 : Kết tạo vòng phân giải tinh bột chủng Bacillus subtilis phân lập đƣợc môi truờng thạch tinh bột 1% 32 ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 32 4.2 Thảo luận Enterotoxigenic E coli nguyên nhân gây bệnh tiêu chảy phổ biến ngƣời heo, tính chất đề kháng nhanh với nhiều loại kháng sinh khác nhau, việc sử dụng kháng sinh để kiểm soát E coli trở nên hiệu quả, bên cạnh sử dụng kháng sinh làm xáo trộn hệ vi sinh vật nội xuất ngày nhiều chủng vi khuẩn đề kháng với kháng sinh gây lo ngại cho ngƣời tiêu dùng, cần tìm biện pháp để thay kháng sinh phịng trị bệnh tiêu chảy nói riêng bệnh đƣờng ruột nói chung Sử dụng probiotic đƣợc giải pháp thay hiệu thời điểm Có nhiều sản phẩm probiotic thị trƣờng để phòng bệnh đƣờng ruột, sản phẩm đƣợc dán nhãn bào tử Bacillus subtilis nhiên nghiên cứu gần cho thấy, phần lớn sản phẩm bào tử của loài Bacillus khác nhƣ Bacillus clausii, Bacillus pumilus số chủng Bacillus cereus (Le H Duc, 2004) Những nghiên cứu gần làm gia tăng lo ngại ngƣời tiêu dùng tính an toàn sản phẩm này, sản phẩm chứa bào tử chủng Bacillus cereus, nguyên nhân gây nhiều bệnh đƣờng ruột Bên cạnh chủng đề kháng đƣợc với nhiều loại kháng sinh nguồn phổ biến gene kháng kháng sinh cho vi sinh vật đƣờng ruột Trong 22 chủng Bacilus subtilis phân lập đƣợc phân heo, có chủng đối kháng mạnh với E coli môi trƣờng TSA TSB, kết kháng sinh đồ cho thấy chủng nhạy cảm với đa số kháng sinh đƣợc thử nghiệm trừ colistin có tác động chuyên biệt với vi khuẩn gram (-) Các chủng ứng cử viên để tạo sản phẩm probiotic có tác dụng khống chế E coli gây bệnh LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 33 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Có diện vi khuẩn Bacillus subtilis có khả đối kháng với E coli gây bệnh tiêu chảy phân heo Có thể tổng hợp kháng sinh ức chế phát triển E coli gây bệnh tiêu chảy heo Bacillus subtilis đƣợc kích thích nồng độ vi khuẩn E coli đủ lớn Kháng sinh ức chế phát triển E coli đƣợc tổng hợp từ giai đoạn đầu phát triển Năm chủng Bacillus subtilis cho thấy khả ức chế mạnh phát triển E coli nhạy cảm với tất kháng sinh đƣợc thử nghiệm trừ colistin Chủng 18 ứng cử viên để tạo sản phẩm probiotic có chức năng: Một khống chế E coli gây bệnh, hai tăng hiệu chuyển hóa thức ăn thú  5.1 Đề nghị Sự tổng hợp kháng sinh ức chế phát triển Bacillus subtilis đƣợc kích thích diện E coli môi trƣờng điều khác biệt so với q trình điều hịa tổng hợp kháng sinh khác Bacillus subtilis tiết Chúng tơi có số đề nghị sau  Đánh giá hàm lƣợng kháng sinh tiết môi trƣờng nuôi cấy qua thời điểm  Đánh giá khả đối kháng với nhiều loại vi sinh vật khác  Kiểm tra an toàn chủng chuột  Đánh giá khả chống chịu bào tử với pH thấp enzyme pepsin dày, khả đề kháng với muối mật LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Trần Linh Thƣớc, 2003 Phƣơng pháp phân tích vi sinh vật nƣớc, thực phẩm mỹ phẩm, NXB Giáo Dục, 232 trang PGS.TS.Trần Thị Dân, 2005.Công nghệ sinh học chăn nuôi gia súc, NXB Nơng Nghiệp Tài liệu tiếng nƣớc ngồi Gabriella Casula and Simon M Cutting, 2002 Bacillus Probiotics: Spore Germination in the Gastrointestinal Tract Appl Environ Microbiol 68(5): 2344– 2352 American Society for Microbiology, American Ngo Thi Hoa, Loredana Baccigalupi, Ashley Huxham, Andrei Smertenko, Pham Hung Van, Sergio Ammendola, Ezio Ricca, and Simon M Cutting, 2000 Characterization of Bacillus Species Used for Oral Bacteriotherapy and Bacterioprophylaxis of Gastrointestinal Disorders Appl Environ Microbiol 66(12): 5241–5247 American Society for Microbiology.American Irina V Pinchuk, Philippe Bressollier, Bernard Verneuil, Bernard Fenet, Irina B Sorokulova, Francis Mégraud, and Maria C Urdaci,2001 In Vitro AntiHelicobacter pylori Activity of the Probiotic Strain Bacillus subtilis Is Due to Secretion of Antibiotics Antimicrob Agents Chemother 45(11): 3156–3161 American Society for Microbiology.American Teresa M Barbosa, Cláudia R Serra, Roberto M La Ragione, Martin J Woodward, and Adriano O Henriques,2005 Screening for Bacillus Isolates in the Broiler Gastrointestinal Tract Appl Environ Microbiol 71(2): 968–978 American Society for Microbiology.American Le H Duc, Huynh A Hong, Neil Fairweather, Ezio Ricca, and Simon M Cutting, 2003 Bacterial Spores as Vaccine Vehicles Infect Immun 2003 71(5): 2810–2818 American Society for Microbiology.American Dennis J Henner AND James A Hoch,1980 The Bacillus subtilis Chromosome.Microbiological Review, p 57-82 American Society for Microbiology American LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 35 Rial D Rolfe, 2000 The Role of Probiotic Cultures in the Control of Gastrointestinal Health Journal of Nutrition.130:396S-402S The American society for nutritional sciences.American 10 Steven S Branda, José Eduardo González-Pastor, Sigal Ben-Yehuda, Richard Losick, and Roberto Kolter, 2001 Fruiting body formation by Bacillus subtilis Proc Natl Acad Sci U S A 98(20): 11621–11626 The National Academy of Sciences 11 Emil M Berberov, You Zhou, David H Francis, Michael A Scott, Stephen D Kachman, and Rodney A Moxley,2004 Relative Importance of Heat-Labile Enterotoxin in the Causation of Severe Diarrheal Disease in the Gnotobiotic Piglet Model by a Strain of Enterotoxigenic Escherichia coli That Produces Multiple Enterotoxins Infection and Immunity, p 3914-3924 Vol 72, No American society for microbiology.American 12 James P Nataro and James B Kaper,1998 Diarrheagenic E Coli Clin Microbiol, 11(1): 142–201 American Society for Microbiology 13 WIM GAASTRA AND FRITS K DE GRAAF,1982 Host-Specific Fimbrial Adhesins of Noninvasive Enterotoxigenic Escherichia coli Strains MICROBIOLOGICAL REVIEWS, p 129-161 Vol 46, No 14 Ronggai Sun, Timothy J Anderson, Alan K Erickson, Eric A Nelson, and David H Francis, 2000 Inhibition of Adhesion of Escherichia coli K88ac Fimbria to Its Receptor, Intestinal Mucin-Type Glycoproteins, by a Monoclonal Antibody Directed against a Variable Domain of the Fimbria Infection and Immunity, p 3509-3515, Vol 68, No American society for microbiology.American 15 Le H Duc, Huynh A Hong, Teresa M Barbosa, Adriano O Henriques, Simon M.Cutting, 2004 Characterization of Bacillus Probiotics Available for Human Use Appl Environ Microbiol, 70(4): 2161–2171 American society for microbiology.American 16 Robert E W Hancock and Daniel S Chapple, 1999 Peptide Antibiotics Antimicrob Agents Chemother, 43(6): 1317–1323 American society for microbiology.American LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 36 17 Norimasa Tamehiro, Yoshiko Okamoto-Hosoya, Susumu Okamoto, Makoto Ubukata, Masa Hamada, Hiroshi Naganawa, and Kozo Ochi, 2002 Bacilysocin, a Novel Phospholipid Antibiotic Produced by Bacillus subtilis 168 Antimicrob Agents Chemother, 46(2): 315–320 American society for microbiology.American 18 Tsuey-Pin Lin, Chyi-Liang Chen, Li-Kwan Chang, Johannes Scheng-Ming Tschen, and Shih-Tung Liu, 1999 Functional and Transcriptional Analyses of a Fengycin Synthetase Gene, fenC, from Bacillus subtilis J Bacteriol, 181(16): 5060–5067 American society for microbiology.American 19 Erwin H Duitman, Leendert W Hamoen, Martina Rembold, Gerard Venema, Harald Seitz, Wolfram Saenger, Frank Bernhard, Richard Reinhardt, Manuel Schmidt, Christian Ullrich, Torsten Stein, Frank Leenders, and Joachim Vater, 1999 The mycosubtilin synthetase of Bacillus subtilis ATCC6633: A multifunctional hybrid between a peptide synthetase, an amino transferase, and a fatty acid synthase Proc Natl Acad Sci U S A, 9; 96(23): 13294–13299 The National Academy of Sciences 20 Valérie Leclère, Max Béchet, Akram Adam, Jean-Sébastien Guez, Bernard Wathelet, Marc Ongena, Philippe Thonart, Frédérique Gancel, Marlène CholletImbert, and Philippe Jacques, 2005 Mycosubtilin Overproduction by Bacillus subtilis BBG100 Enhances the Organism's Antagonistic and Biocontrol Activities Appl Environ Microbiol, 71(8): 4577–4584, American society for microbiology.American 21 Sun H Paik, Anu Chakicherla, and J Norman Hansen, Identification and Characterization of the Structural and Transporter Genes for, and the Chemical and Biological Properties of Sublancin 168, a Novel Lantibiotic Produced by Bacillus subtilis 168 22 Ronald Dorenbos, Torsten Stein, Jorrit Kabel, Claude Bruand, Albert Bolhuis, Sierd Bron, Wim J Quax, and Jan Maarten van Dij, 2002 Thiol-Disulfide Oxidoreductases Are Essential for the Production of the Lantibiotic Sublancin 168, J Biol Chem, doi:10.1074/jbc.M201158200 American society for microbiology.American LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 37 23 Torsten Stein, Stefanie Düsterhus, Anke Stroh, and Karl-Dieter Entian, 2004, Subtilosin Production by Two Bacillus subtilis Subspecies and Variance of the sbo-alb Cluster, Appl Environ Microbiol, 10.1128/AEM.70.4.2349-2353.2004 American society for microbiology.American 24 Guolu Zheng, Robin Hehn, and Peter Zuber, 2000 Mutational Analysis of the sbo-alb Locus of Bacillus subtilis: Identification of Genes Required for Subtilosin Production and Immunity, J Bacteriol, 182(11): 3266–3273 American Society for Microbiology 25 Guolu Zheng, Liang Z Yan, John C Vederas, and Peter Zuber, 1999 Genes of the sbo-alb Locus of Bacillus subtilis Are Required for Production of the Antilisterial Bacteriocin Subtilosin, Journal of Bacteriology p 7346-7355, Vol 181, No 23 0021-9193/99/$04.00+0 American Society for Microbiology 26 Torsten Stein, Stefan Heinzmann, Stefanie Düsterhus, Stefan Borchert,1 and Karl-Dieter Entian, 2005 Expression and Functional Analysis of the Subtilin Immunity Genes spaIFEG in the Subtilin-Sensitive Host Bacillus subtilis MO1099, Journal of Bacteriology, No.3 0021-9193/05/$08.00+0 American Society for Microbiology American 27 C KLEIN, C KALETTA, AND K.-D ENTIAN, 1993 Biosynthesis of the Lantibiotic Subtilin Is Regulated by a Histidine Kinase/Response Regulator System, Applied and Enviromental Microbiology, 0099-2240/93/01029608$02.00/0 American Society for Microbiology American 28 C KLEIN AND K.-D ENTIAN, 1994 Genes Involved in Self-Protection against the Lantibiotic Subtilin Produced by Bacillus subtilis ATCC 6633, Applied and Enviromental Microbiology No 0099-2240/94/$04.00+0 American Society for Microbiology American 29 YONG JOON CHUNG, MARK T STEEN, AND J NORMAN HANSEN, 1992 The Subtilin Gene of Bacillus subtilis ATCC 6633 Is Encoded in an Operon That Contains a Homolog of the Hemolysin B Transport Protein, Journal of Bacteriology, o 4, 21-9193/92/041417-06$02.00/0, Journal of Bacteriology American Society for Microbiology American LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 38 30 Axel G Stöver and Adam Driks, 1999 Regulation of Synthesis of the Bacillus subtilis Transition-Phase, Spore-Associated Antibacterial Protein TasA Journal of Bacteriology No 17 0021-9193/99/$04.00+0 American Society for Microbiology American 31 Harold Tjalsma, Axel G Stöver, Adam Driks, Gerard Venema, Sierd Bron, and Jan Maarten van Dijl, 2000 Conserved Serine and Histidine Residues Are Critical for Activity of the ER-type Signal Peptidase SipW of Bacillus subtilis J Biol Chem 33, 25102-25108, American Society for Microbiology American 32 Axel G Stöver and Adam Driks, 1999 Control of Synthesis and Secretion of the Bacillus subtilis Protein YqxM Journal of Bacteriology, No 22 00219193/99/$04.00+0 American Society for Microbiology American 33 Axel G Stöver and Adam Driks, 1999 Secretion, Localization, and Antibacterial Activity of TasA, a Bacillus subtilis Spore-Associated Protein J Bacteriol 181(5): 1664–1672 American Society for Microbiology American 34 Stephan A Sieber and Mohamed A Marahiel, 2003 Learning from Nature's Drug Factories: Nonribosomal Synthesis of Macrocyclic Peptides J Bacteriol, (24): 7036–7043 American Society for Microbiology American 35 DIRK VOLLENBROICH,1 GEORG PAULI,2 MUHSIN OZEL,2 AND JOACHIM VATER1, 1997 Antimycoplasma Properties and Application in Cell Culture of Surfactin, a Lipopeptide Antibiotic from Bacillus subtilis Appied and enviromental microbiology No 0099-2240/97/$04.0010 American Society for Microbiology American 36 Harold Tjalsma, Albert Bolhuis, Jan D H Jongbloed, Sierd Bron, and Jan Maarten van Dij, 2000 Signal Peptide-Dependent Protein Transport in Bacillus subtilis: a Genome-Based Survey of the Secretome Microbiol Mol Biol Rev, 64(3): 515–547 American Society for Microbiology American LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 39 PHỤ LỤC A B CHình 2.2 : A , cấu trúc subtilin , B, thứ tự gene operon spaIFEG LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 40 Hình 2.3A : A , cấu trúc subtilocin B , trình tự amino acid presubtilocin Hình 2.3B: Cấu trúc operon subtilocin Operon subtilocin gồm gene sboA mã hóa cho tiền peptide subtilocin gene albA , albB , albC , albD , albE , albF , albG mã hóa cho protein tổng hợp phân tiết subtilocin Giữa gene sboA albA có cấu trúc terminator LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 41 Hình 2.4A : Cấu trúc sublancin Có Cys chuỗi peptide sublancin hình thành cầu nối disulfic , cầu nối sulfic -methyllanthionine dehydrobutyrine Trong cấu tạo sublancin cịn có dehydroxyalanine vị trí amino acid vị trí 16 Hình 2.4 B: Trình tự chuỗi amino acid pre-sublancin Trên trình tự chuỗi tín hiệu có motif GS giúp cho phần peptide có hoạt tín peptidase SunT nhận biết cắt đoạn tín hiệu để giải phóng sublancin dạng hoàn chỉnh LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 42 Hình 2.5 : A , trình tự amino acid tiền chất TasA B , cấu trúc operon TasA Hình 2.5B : Vị trí TasA trình hình thành bào tử LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 43 A B C Hình 2.6 : A , cấu trúc surfactin B , cấu trúc q trình điều hịa srf operon C , trình tổng hợp chuỗi peptide surfactin : Cầu nối lacton LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 44 A B C Hình 2.7 : A, cấu trúc fengycin B, cấu trúc operon fengycin C trình tự nucleotide phần upstream operon fen promotor vị trí -35 -10 có điểm khởi đầu dịch mã TATGG +1(6) đƣợc điều hòa yếu tố điều hòa A , promotor vị trí -35F -10F có điểm khởi đầu dịch mã CTTTT +1(20) đƣợc điều hòa yếu tố điều hòa : Cầu nối macrolacton LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 45 A Hình 2.8A : Cấu trúc mycosubtilin : Cầu nối Macrolactam B Hình 2.8B : Cấu trúc Mycosubtilin operon Hình 2.8C : Qúa trình tổng hợp acid béo , gắn nhóm amine vào vị trí tạo liên kết với Asn LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 46 Hình 2.9 : Quá trình tổng hợp bacilysocin , phản ứng đƣợc thực enzyme CDP diglyceride synthase , phản ứng đƣợc xúc tác phosphatidylglycerolphosphate synthase , phản ứng đƣợc xúc tác phosphatidylglycerol-phosphate phosphatase LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ... TỪ VI? ??T TẮT ETEC : Enterotoxigenic E coli EAEC : Enteroaggregative E coli LT : Heat-labile toxin ST : Heat-stable toxin CT : Cholera enterotoxin EAST : Enteroaggreative stable-toxin ENS : Enteric... gây bệnh khác nhau, dựa vào tƣơng tác E coli với tế bào thành ruột chia chủng E coli gây bệnh thành loại: enterotoxigenic E coli (ETEC), enterohemorrhagic E coli (EHEC), enteroaggregative E coli. .. enteroaggregative E coli (EAEC), enteropathogenic E coli (EPEC), enteroinvasive E coli (EIEC), diffusely adherent E coli (DAEC) (12) Các chủng E coli gây bệnh đƣợc phân biệt với phản ứng ngƣng kết kháng nguyên