KHẢO sát sự SINH TRƯỞNG của SACCHAROMYCES SP TRÊN môi TRƢỜNG cám gạo, rỉ ĐƢỜNG và một số yếu tố ẢNH HƢỞNG đến sức SỐNG của CHÚNG TRONG CHẾ PHẨM

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ SINH TRƢỞNG CỦA SACCHAROMYCES SP TRÊN MÔI TRƢỜNG CÁM GẠO, RỈ ĐƢỜNG VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN SỨC SỐNG CỦA CHÚNG TRONG CHẾ PHẨM Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khoá: 2003-2007 Sinh viên thực hiện: VƢƠNG THỊ HỒNG VI Thành Phố Hồ Chí Minh -09/2007- LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ SINH TRƢỞNG CỦA SACCHAROMYCES SP TRÊN MÔI TRƢỜNG CÁM GẠO, RỈ ĐƢỜNG VÀ MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN SỨC SỐNG CỦA CHÚNG TRONG CHẾ PHẨM Giáo viên hƣớng dẫn: TS NGUYỄN NGỌC HẢI Sinh viên thực hiện: VƢƠNG THỊ HỒNG VI Thành Phố Hồ Chí Minh -09/2007- LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Với tất lịng kính trọng, em xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trƣờng Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban Chủ Nhiệm Bộ Mơn Công Nghệ Sinh Học, tất quý Thầy Cô truyền đạt kiến thức cho em suốt trình học trƣờng Em xin chân thành cảm ơn Ts Nguyễn Ngọc Hải hết lòng hƣớng dẫn dạy dỗ, động viên, quan tâm, ủng hộ em hoàn thành khoá luận Em xin chân thành cảm ơn Ts Lê Anh Phụng, BSTY Nguyễn Thị Kim Loan giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình hồn thành khố luận Em xin chân thành cảm ơn Phịng Vi Sinh, Khoa Chăn Ni – Thú Y cho phép tạo điều kiện thuận lợi cho em học tập nghiên cứu phịng Tơi xin cảm ơn bạn lớp CNSH 29, Thú Y 28 chia sẻ vui buồn thời gian học nhƣ hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ thời gian thực tập Sinh viên thực Vƣơng Thị Hồng Vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TÓM TẮT Đề tài “Khảo sát sinh trƣởng nấm men Saccharomyces sp môi trƣờng cám gạo, rỉ đƣờng số yếu tố ảnh hƣởng tới khả sống chúng chế phẩm” đƣợc tiến hành phòng Thực Tập Vi Sinh khoa Chăn Nuôi Thú Y Trƣờng Đại Học Nông Lâm TP.HCM, thời gian từ tháng đến tháng năm 2007 Đề tài đƣợc thực với mục đích tìm hiểu số điều kiện quy trình sản xuất sinh khối nấm men Saccharomyces sp nhằm ứng dụng để sản xuất chế phẩm sinh học sử dụng cho gia súc, gia cầm Kết ghi nhận đƣợc: Chúng phân lập đƣợc từ dịch nho chủng nấm men thuộc loài S cerevisiae từ chế phẩm sinh học chủng nấm men thuộc loài S boulardii Cả chủng có khả sinh trƣởng tốt môi trƣờng rỉ đƣờng 60B môi trƣờng cám gạo Tuy nhiên, mơi trƣờng cám gạo thích hợp cho sinh trƣởng lồi S boulardii mơi trƣờng rỉ đƣờng 60B Thu hoạch S boulardii vào thời điểm 60 sau nuôi cấy cho kết số lƣợng tế bào sống chế phẩm nhiều 36 48 Ngƣợc lại, loài S cerevisiae sinh trƣởng môi trƣờng rỉ đƣờng 60B mạnh môi trƣờng cám gạo Và thời điểm thu hoạch S cerevisiae thích hợp 36 sau nuôi cấy Vitamin C chất (cám gạo, bột mì) khơng ảnh hƣởng đến sức sống nấm men chế phẩm (sau 22 ngày sản xuất) Việc nuôi cấy chung vi khuẩn sB subtilis không ảnh hƣởng đến số lƣợng tế bào nấm men S cerevisiae LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com ABSTRACT The study on the growth of Saccharomyces sp on rice bran medium, sugar cane molasses medium and some factors influence on their vitality power for the purpose of producing probiotic Our topic is done from March to August, 2007 at Microbiology - Infectious Diseases Department, Husbandry and Veterinary Faculty, Nong Lam University, Ho Chi Minh city S boulardii was isolated from probiotic and S cerevisiae was isolated from grapes They grew well both on rice bran medium and sugar cane molasses medium Experimental results showed S boulardii grew better on rice bran than on sugar cane molasses medium The best time for harvesting S boulardii biomass was 60 hours after culturing But, S cerevisiae grew better on sugar cane molasses medium and the best time for harvesting their biomass was 36 hours after culturing The rate acid ascorbic and background substance (wheat flour or rice bran) didn’t show the influence to yeast vitality No considerable oscillations of S cerevisiae biomass occurred in co-culture with Bacillus subtilis LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC CHƢƠNG TRANG Trang tựa Lời cảm ơn iii Tóm tắt iv Abstract v Mục lục vi Danh sách hình ix Danh sách bảng x Chƣơng PHẦN MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Yêu cầu đề tài Chƣơng TỔNG QUAN 2.1 Đặc điểm chung nấm men .3 2.2 Vai trò nấm men 2.3 Các hình thức sinh sản nấm men 2.3.1 Sinh sản vơ tính 2.3.1.1 Sinh sản vô tính hình thức nảy chồi 2.3.1.2 Sinh sản vơ tính hình thức phân chia tế bào 2.3.2 Sinh sản hữu tính .6 2.3.2.1 Sinh sản hữu tính bào tử túi (ascospore) 2.3.2.2 Sinh sản hữu tính bào tử bắn (ballistospore) .6 2.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa nấm men 2.5 Đặc điểm giống Saccharomyces 2.5.1 Saccharomyces cerevisiae .10 2.5.2 Saccharomyces boulardii 10 2.6 Sự sinh trƣởng phát triển nấm men 11 2.6.1 Giai đoạn thích nghi 11 2.6.2 Giai đoạn logarit 11 2.6.3 Giai đoạn ổn định 12 2.6.4 Giai đoạn thoái hóa 12 2.7 Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh trƣởng nấm men điều kiện nuôi cấy thu sinh khối tế bào 12 2.7.1 Môi trƣờng nuôi cấy 12 2.7.2 Nhiệt độ 14 2.7.3 pH môi trƣờng 14 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 2.7.4 Tốc độ sục khí khuấy trộn 14 2.8 Cơ sở việc sử dụng nấm men sản xuất chế biến thức ăn 15 2.9 Những nghiên cứu ứng dụng nấm men chăn nuôi 18 2.9.1 Ở nƣớc 18 2.9.2 Ở nƣớc 19 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21 3.1 Thời gian địa điểm thực đề tài 21 3.1.1 Thời gian 21 3.1.2 Địa điểm 21 3.2 Vật liệu thí nghiệm 21 3.2.1 Mẫu khảo sát 21 3.2.2 Thiết bị dụng cụ 21 3.2.3 Hóa chất 21 3.2.4 Môi trƣờng nuôi cấy 21 3.3 Nội dung nghiên cứu 22 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 3.4.1 Phân lập nấm men 22 3.4.1.1 Mẫu chế phẩm sinh học men bánh mì 22 3.4.1.2 Mẫu đu đủ nho .22 3.4.2 Thí nghiệm 1: Khảo sát phát triển chủng phân lập đƣợc môi trƣờng rỉ đƣờng 60B 23 3.4.2.1 Mục đích 23 3.4.2.2 Thông số cố định 23 3.4.2.3 Chỉ tiêu theo dõi .23 3.4.2.4 Bố trí thí nghiệm 23 3.4.3 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy thời gian thu hoạch lên sinh trƣởng nấm men Saccharomyces .24 3.4.3.1 Mục đích 24 3.4.3.2 Thông số cố định 24 3.4.3.3 Chỉ tiêu theo dõi .24 3.4.3.4 Bố trí thí nghiệm 25 3.4.4 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hƣởng acid ascorbic (vitamin C) chất lên thời gian sống nấm men chế phẩm 25 3.4.4.1 Mục đích 25 3.4.4.2 Thông số cố định 25 3.4.4.3 Chỉ tiêu theo dõi .26 3.4.5 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy, chất thời gian thu hoạch lên sức sống nấm men chế phẩm 26 3.4.6 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hƣởng vi khuẩn Bacillus subtilis lên sinh trƣởng nấm men Saccharomyces cerevisiae điều kiện nuôi cấy chung 26 3.4.6.1 Mục đích 26 3.4.6.2 Thông số cố định 26 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 3.4.6.3 Chỉ tiêu theo dõi .27 3.4.6.4 Bố trí thí nghiệm 27 3.4.7 Phƣơng pháp đếm số tế bào nấm men buồng đếm hồng cầu 27 3.4.8 Phƣơng pháp đếm số tế bào sống ( số khuẩn lạc đĩa thạch) 28 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát sinh trƣởng chủng phân lập môi trƣờng rỉ đƣờng 60B 30 4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hƣởng môi trƣờng nuôi cấy thời gian thu hoạch lên sinh trƣởng nấm men Saccharomyces 33 4.2.1 Saccharomyces boulardii 33 4.2.2 Saccharomyces cerevisiae .35 4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hƣởng acid ascorbic (vitamin C) chất lên sức sống nấm men chế phẩm 37 4.3.1 Saccharomyces boulardii 38 4.3.2 Saccharomyces cerevisiae .38 4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hƣởng mơi trƣờng nuôi cấy, chất thời gian thu hoạch lên sức sống nấm men chế phẩm 39 4.4.1 Saccharomyces boulardii 39 4.4.2 Saccharomyces cerevisiae .42 4.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hƣởng vi khuẩn Bacillus subtilis lên sinh trƣởng nấm men Saccharomyces cerevisiae điều kiện nuôi cấy chung 43 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .47 5.1 Kết luận 47 5.2 Đề nghị .47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 PHỤ LỤC 51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 4.1: Phân lập nấm men từ chế phẩm sinh học Ultra Levure 31 Hình 4.2: Phân lập nấm men từ dịch nho 31 Hình 4.3: Hình thái S boulardii 32 Hình 4.4: Hình thái S cerevisiae 32 Hình 7.1: Bình ni cấy nấm men 51 Hình 7.2: Khuẩn lạc Saccharomyces sp mơi trƣờng Sabouraud 51 Hình 7.3: Chế phẩm sinh học chứa nấm men Saccharomyces 51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 2.1: Thành phần hoá học nấm men 17 Bảng 2.2: Thành phần acid amin nấm men 17 Bảng 2.3: Thành phần khoáng nấm men 18 Bảng 2.4: Thành phần vitamin nấm men 18 Bảng 4.1: Số lƣợng tế bào nấm men ml dịch nuôi cấy 30 Bảng 4.2: Số lƣợng tế bào S boulardii ml dịch nuôi cấy 33 Bảng 4.3: Số lƣợng tế bào S boulardii g chế phẩm 34 Bảng 4.4: Số lƣợng tế bào S cerevisiae ml dịch nuôi cấy 35 Bảng 4.5: Số lƣợng tế bào S cerevisiae g chế phẩm 36 Bảng 4.6: Số lƣợng tế bào S boulardii g chế phẩm 38 Bảng 4.7: Số lƣợng tế bào S cerevisiae g chế phẩm 38 Bảng 4.8: Số lƣợng tế bào S boulardii g chế phẩm 41 Bảng 4.9: Số lƣợng tế bào S cerevisiae g chế phẩm 41 Bảng 4.10: Số lƣợng tế bào S cerevisiae ml dịch nuôi cấy 43 Bảng 4.11: Số lƣợng tế bào S cerevisiae g chế phẩm 44 Bảng 7.1: Số lƣợng tế bào nấm men ml dịch nuôi cấy 48 Bảng 7.2: Số lƣợng tế bào S boulardii ml dịch nuôi cấy 48 Bảng 7.3: Số lƣợng tế bào S boulardii g chế phẩm 48 Bảng 7.4: Số lƣợng tế bào S cerevisiae ml dịch nuôi cấy 49 Bảng 7.5: Số lƣợng tế bào S cerevisiae g chế phẩm 49 Bảng 7.6: Số lƣợng tế bào S boulardii g chế phẩm 50 Bảng 7.7: Số lƣợng tế bào S cerevisiae g chế phẩm 50 Bảng 7.8: Số lƣợng tế bào S cerevisiae ml dịch nuôi cấy 51 Bảng 7.9: Số lƣợng tế bào S cerevisiae g chế phẩm 51 Bảng ANOVA 7.1 51 Bảng ANOVA 7.2 51 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com 46 Ta nhận thấy ban đầu số lƣợng tế bào S cerevisiae nuôi cấy riêng cao nuôi cấy chung với B subtilis (8,461>8,423), nhƣng sau 22 ngày bảo quản số lƣợng tế bào S cerevisiae nuôi cấy riêng chết nhiều nuôi cấy chung (8,720