Nghiên cứu sử dụng chỉ thị phân tử ISSR (inter –simple sequence repeat) để đánh giá sự đa dạng di truyền của cây chôm chôm (nephelium lappaceum l

KHOA HỌC CÔNG NGHÊ NGHIÊN cuu su DỤNG CHI THỊ PHAN TU IS5R [INTER-SIMPLE SEQUENCE REPEAT] ĐỂ ĐÁNH GIÁ SỤ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA CÂY CHỊM CHƠM {ỈXÍephehum lappaceum L.) Phan Thị Thu Hiền1 TĨM TẮT Cây chơm chơ n (Nepheliuin lappaceum L.) loại ăn nhiệt đói có hương vị thom ngon, giàu vitamin kho; ng chất Nghiên cứu sử dụng mồi ISSR 03, ISSR 22 ISSR 31 để đánh giá đa dạng di truyền 15 mẫu giống chôm chôm Kết điện di cho thấy, mồi ISSR 03 có băng đa hình (chiếm 77,7%) t 'ên băng khuếch đại; mồi ISSR 22 có băng đa hình, chiếm 50% tổng số băng khuếch đại nồi ISSR 31 có băng đa hình (chiếm 71,42%) tổng băng khuếch đại Tổng họp kết phân tích đa hình thu 24 băng ADN khuếch đại, có 16 băng đa hình, chiếm 66,6% tổng số b íng khuếch đại Kết xây dựng giản đồ phân nhánh UPGMA với thị ISSR cho thấy, mức độ tưong C ồng mẫu dao động phạm vi 0,75 - 0,96, cho thấy tưong đồng di truyền cao mễ u giống nghiên cứu Phàn tích kết họp thị ISSR 03, ISSR 22 ISSR 31 giúp phân biệt rác mẫu giống chôm chôm nghiên cứu Kết nghiên cứu góp phần khẳng định thêm ý ng hĩa thị ISSR nghiên cứu đa dạng di truyền, nhận biết giống trồng nói chung chơm chơm nói riêng Việt Nam Từ khóa: Nepht Hum lappaceum L, ISSR, đa dạng di truyền ĐẶT VÃN ĐỂ Chôm chôm (Nephelium lappaceum L.) [oại trái nhiệt đói thuộc họ Sapindaceae - Bồ Hịn, loại trái có nguồn gốc từ Malaysia, có tên bắt nguồn từ tiếng Malay “Rambut” có nghĩa ‘ Hair” (tóc), liên quai đến gai mềm bao phủ bề mặt trái Quả chôm chơm có hình trứng lới vỏ màu đỏ vàng Quả bao phủ r hững gai mềm có màu sắc khác từ vàng C ến đỏ xanh [4], Cây có chiều cao trung t inh vói thường xanh mọc từ 12-20 m rộng - 15 cm dài 10 - 30 cm, đon, phiến inh trái xoan, đầu đuôi nhọn, mọc cách Lá nhỏ màu xanh non, gi: I xanh đậm [4] Hiện nay, việc á]) dụng thị phân tử vào việc phân tích đa dạn ĩ sử dụng rộng rãi tliế giới Trong k ại thị phân tử thường sỉ dụng, chuỗi lặp ki đon giản (ISSR - InterSimple Sequence Repeat) thường sử dụng để đánh giá sai khác di truyền thực vật Kỹ thuật ISSR sử dụng rộng rãi nghiên cứu đa d Ịng di truyền, nghiê cứu đặc điểm di truyền quần thể, lấy dấu di truyền, đánh dấu gen, xác định trồng, phân tích nguồn gốc, xác định thay đổi genome đánh giá lai [6] Andi cs (2018) sử dụng 31 đoạn mồi ISSR để đánh giá đặc tính di truyền chơm chơm gồm có ISSR 1, ISSR 5, ISSR 10, ISSR 15, ISSR 23, UBC 807 Mức độ tưong đồng số giống chôm chôm từ liệu ISSR nghiên cứu giới dao động từ 48-93%, thị ISSR có tiềm việc xác định đặc tính chơm chơm [1], Chỉ thị ISSR sử dụng nghiên cứu đa dạng di truyền loài trồng khác Mahdi Hadipour cs (2020) [5] đánh giá đa dạng di truyền Anh túc (Papaver bracteatum L.) cách sử dụng phưong pháp AFLP ISSR (ISSR 1, ISSR 6, ISSR 9, ISSR 13, ISSR 23, ISSR 27, ISSR 30) ứng dụng ISSR phát biến dị di truyền sử dụng rộng rãi giai đoạn đầu nghiên cứu chọn tạo giống trồng Cucumis spp., Cicer arietinum [3] Sorghum bicolor [2] VẬT UỆU VÀ PHUONG PHÁP NGHIÊN cuu 2.1 Vật liệu Choa Sinh - KTNN, Tr rờng Đại học Sư phạm Hà Nội E nail:phanthithuhien@h pu2.edu 15 mẫu thuộc giống chôm chôm Nhân, chôm chôm Java, chôm chôm Thái chôm chôm thu NƠNG NGHIỆP VẢ PHÁT TRIEN nơng thơn - KỲ - THÁNG 5/2022 15 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ (khoảng thứ 3,4 từ đọt non), thu đảm bảo khơng có sâu, bệnh mẫu tỉnh Tiền Giang, Bến Tre, Vĩnh Long, Hậu Giang thành phố cần Thơ Chọn lụa Bảng Danh sách mẫu giống chôm chôm sử dụng nghiên cứu STT Ký hiệu mẫu giống Tên mẫu giống Tên giống PT Thái Phong Điền Chôm chôm Thái PN Nhãn Phong Điền Chôm chôm Nhãn PJ Java Phong Điền Chôm chôm Java Pt ta Phong Điền Chôm chôm Ta VT Thái Vĩnh Long Chôm chôm Thái VN Nhãn Vĩnh Long Chôm chôm Nhãn VJ Java Vĩnh Long Chôm chôm Java HT Thái Hậu Giang Chôm chôm Thái HN Nhãn Hậu Giang Chôm chôm Nhãn 10 HJ Java Hậu Giang Chôm chôm Java 11 BT Thái Bến Tre Chôm chôm Thái 12 BN Nhãn Bến Tre Chôm chôm Nhãn 13 BJ Java Bến Tre Chôm chôm Java 14 TN Nhãn Tiền Giang Chịm chơm Nhãn 15 Tt ta Tiền Giang Chôm chôm Ta 2.2 Phương pháp Chỉ thị phân tử ISSR Mẫu chôm chôm giống thu thực địa (Bảng 1), mẫu đánh số thứ tự, ghi rõ nguồn gốc Qui trình tách chiết ADN tổng số thực theo phương pháp mô tả Rogers Bendich (1988) (qui trinh CTAB) có cải biến [8] Phân tích kiểu gen bàng thị phân tử ISSR sử dụng mồi theo trình tự trình bày bảng Bảng Trình tự mồi sử dụng nghiên cứu Tên mồi Trình tự mồi (5’-3’) ISSR03 GAGAGAGAGAGAGAGAT ISSR22 TGTGTGTGTGTGTGTGCC AGAGAGAGAGAGAGT ISSR31 Trinh tự khuếch đại ISSR 16 Địa điểm thu thập Vườn trái Hồng, Phong Điền, Cần Thơ Long Hồ, Vĩnh Long Vườn chôm chôm Hùng, Nga Bảy, Hậu Giang Chợ Lách, Bến Tre Vườn trái Chính Thương, Cai Lậy, Tiền Giang Phản ứng PCR tiéín hành với thành phần thể bảng chu tr ình nhiệt bảng Sản phẩm PCR điện di trê n gel agarose 3% vói diện Ethidium Bro mide, hiệu điện u = 60 V Kết điện di chụp ảnh đèn ƯV, đoạn ADN khuếch đại s ẽ ghi nhận phân tích Bảng Thành phần p hản ứng PCR với thị phân tử [SSR Nồng độ Thể tích Thành phần cuối (ụL) 12 H2O Mồi ISSR 20 pmol/pl Master Mix 2X 10 ADN tổng số 50 ng 25 Tổng thể tích phản ứng Bảng Chu kỳ nhiệt phân ứng PCR vời thị phân tử ISSR Nhiệt độ, thòi 40 chu kỳ Nhiệt độ, thời gian biến tính gian kéo dài cuối Bắt cặp Kéo dài Biến tính ban đầu 72°c 72°c 50°C 94°c 94°c phút 45 giây phút phút phút Bảo quản 10°C 00 NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIEN nông thôn - KỲ - THÁNG 5/2022 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ Sản phẩm khch đại thị phân tử ISSR giống chôm chôm phân tích đa dạng di truyền phần mihn NTSYSpc2.1 KÉT QUÁ NGHIÊNI cúu VÀ THÀO LUẬN 3.1 Kết ẫn di phân tích đa dạng di truyền thị f hân tử ISSR Ỉ Điền, Pt: cc ta Phong Điền, VT: cc Thái Vĩnh Long, VJ: cc Java Vĩnh Long, VN: cc Nhãn Vĩnh Long, HT: cc Thái Hậu Giang, HJ: cc Java Hậu Giang, HN: cc Nhãn Hậu Giang, BT: cc Thái Bến Tre, BJ: cc Java Bến Tre, BN: cc Nhãn Bến Tre, TN: cc Nhãn Tiền Giang, Tt: cc ta Tiền Giang Kết điện dií mồi gel agarose 3% cho băng sáng, rõ đủ điều kiện để phân tích /à xây dựng giản đồ phân nhánh giống :hôm chôm Tuy nhi