CÔNG NGHẸ NANO

LỜI CẢM ƠN LỜI CẢM ƠN Để đạt kết hơm nay, tơi xin gửi lịng tri ân sâu sắc đến: Ban chủ nhiệm Khoa Khoa Học Ứng Dụng Trường Đại Tôn Đức Thắng, tất quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho suốt q trình học trường Kính gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến TS Lê Thị Hồng Nhan, hết lòng hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cơ, anh chị mơn Kỹ thuật Hóa hữu cơ, trường đại học Bách Khoa tạo điều kiện sở vật chất để thực thí nghiệm tốt Cảm ơn bạn làm thí nghiệm phịng thí nghiệm Cấu trúc vật liệu ln động viên, giúp đỡ tơi thực khóa luận Tơi kính gửi lời cảm ơn sâu sắc đến q thầy hội đồng chấm khóa luận dành thời gian quý báu để xem xét góp ý cho khóa luận hồn thiện Sau xin cảm ơn sâu sắc đến gia đình ln bên cạnh động viên, chỗ dựa vững vật chất lẫn tinh thần để n tâm hồn thành tốt khóa luận thời gian qua Thành Phố Hồ Chí Minh, ngày 28 tháng 12 năm 2012 NGUYỄN THANH TÚ Trang i TÓM TẮT TÓM TẮT Trong đề tài này, nghiên cứu thực để tạo hệ phân tán nano rutin 1% việc sử dụng thiết bị đồng hóa tốc độ cao (máy Phillips Hr 1361, máy nghiền bi cao tốc) máy đồng hóa cao áp (APV2000) Việc sử dụng polyethylene glycol (PEG), polymer chất hoạt động bề mặt giúp hệ huyền phù rutin có kích thước nhỏ, ổn định so với hệ không sử dụng PEG Nhìn chung, kích thước hạt ổn định hệ phân tán rutin chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố loại chất hoạt động bề mặt, nồng độ rutin, thời gian, tốc độ đồng hóa thiết bị đồng hóa Hệ phân tán rutin sử dụng chất ổn định PEG400 0,1% đồng hóa máy Phillips HR 1361vời tốc độ 13500 v/phút, thời gian 15 phút có kích thước hạt trung bình 3184 nm 1442 nm tương ứng với hệ chứa 1% % rutin Và đồng hóa máy nghiền bi cao tốc 60 phút, kích thước hạt giảm xuống 389 nm 2719 nm tương ứng với hệ chứa 1% % rutin Đặc biệt, kích thước hạt giảm đáng kể trường hợp kết hợp máy Phillips máy đồng hóa cao áp, với kích thước hạt trung bình 251 nm sau 10 chu kỳ 464 nm sau 15 chu kỳ cho hệ chứa rutin 1% 5% Các đặc tính hóa lý, cấu trúc, kích thước hạt nồng độ xác định phương pháp đại như: phân tích nhiễu xạ X-ray (XRD), sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), UV - VIS, màu sắc ngoại quan dựa hệ thống màu CIELCh, MLP, phổ nhiễu xạ tia laser (LDS), kính hiển vi điện tử quét (SEM) Trang ii MỤC LỤC MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG BIỂU x DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT xi DANH MỤC PHỤ LỤC xiii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ RUTIN 1.1.1 Tính chất vật lý hóa học 1.1.2 Hoạt tính sinh học rutin 1.1.3 Rutin từ hoa hòe Sophora Japonica L 1.2 CÔNG NGHỆ NANO 1.2.1 Tổng quan vật liệu nano 1.2.2 Kỹ thuật công nghệ nano 1.3 MỘT SỐ CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ HỆ PHÂN TÁN NANO RUTIN 18 1.3.1 Hạt nano tinh thể rutin dược phẩm 18 1.3.2 Hạt nano tinh thể rutin mỹ phẩm 20 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 22 Trang iii MỤC LỤC 2.1 MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 22 2.1.1 Mục tiêu đề tài 22 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.2 Dụng cụ - thiết bị hóa chất 24 2.2.1 Nguyên liệu - hoá chất 24 2.2.2 Dụng cụ - thiết bị: 24 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.3.1 Đánh giá đặc tính nguyên liệu 25 2.3.2 Phân tích hệ phân tán huyền phù rutin 28 2.4 NỘI DUNG THỰC NGHIỆM 32 2.4.1 Đánh giá đặc tính nguyên liệu 32 2.4.2 Nghiên cứu tạo hệ phân tán huyền phù rutin 33 2.4.3 Nghiên cứu hệ phân tán huyền phù rutin với phương pháp đồng hóa nâng cao 37 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 40 3.1 ĐÁNH GIÁ ĐẶC TÍNH NGUYÊN LIỆU 40 3.1.1 Tính chất nguyên liệu 40 3.1.2 Phân tích nhiễu xạ XRD 40 3.1.3 Xác định độ tinh khiết nguyên liệu 41 3.2 NGHIÊN CỨU TẠO HỆ PHÂN TÁN HUYỀN PHÙ RUTIN 43 3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng PEG 43 3.2.2 Ảnh hưởng chất hoạt động bề mặt 50 3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ thời gian đồng hóa 52 3.2.4 Ảnh hưởng chất đồng hoạt động bề mặt (ethanol) nồng độ rutin 57 Trang iv MỤC LỤC 3.3 NGHIÊN CỨU HỆ PHÂN TÁN HUYỀN PHÙ RUTIN VỚI CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỒNG HÓA NÂNG CAO 60 3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng máy nghiền bi cao tốc 60 3.3.2 Ảnh hưởng thiết bị đồng hóa cao áp APV 64 3.3.3 Ảnh hưởng loại thiết bị đồng hóa đến kích thước hạt hệ phân tán rutin 69 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 PHỤ LỤC 76 Trang v DANH MỤC HÌNH DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cơng thức cấu tạo rutin Hình 1.2: Công thức cấu tạo quercetin Hình 1.3: Cây hoa hòe - Sophora Japonica L Hình 1.4: Sự tăng đáng kế diện tích bề mặt nhờ giảm kích cỡ hạt Hình 1.5: Hiệu đường kính hạt rắn thí dụ gỉa định tính tan Hình 1.6: Giảm khoảng cách khuếch tán h tăng gradient nồng độ (cs-cx)/h cuối tăng tốc độ hòa tan dc/dt = D.A (cs-cx)/h Hình 1.7: Kích thước loại vật liệu nano ( L kích thước khơng phải kích thước nano) Hình 1.8: Nguyên lý Bottom-up(A)và Top-down(B) Hình 1.9: Cơ chế hình thành phát triển hạt nano dung dịch 10 Hình 1.10: Hệ nhũ tương nước dầu dầu nước 11 Hình 1.11: Cơ chế hoạt động phương pháp vi nhũ tương 12 Hình 1.12: Piston-gap method (A) and jet-stream method (B) 14 Hình 1.13: Hạt nano hệ polymer 16 Hình 1.14: Liposome 18 Hình 1.15: Micelle 18 Hình 1.16: Ảnh bột mịn rutin (a) tinh thể nano rutin sau đồng hóa cao áp (b)dưới kính hiển vi 20 Hình2.1: Sơ đồ nghiên cứu tổng quát…………………………………………… 23 Hình 2.2: Ảnh minh họa chiếu đèn laser qua mẫu 28 Hình 2.3: Không gian màu CIE-LCh 30 Trang vi DANH MỤC HÌNH Hình 2.4: Máy so màu Minolta CR 300 30 Hình 2.5: Giá để cuvet sử dụng đo màu máy so màu Minolta 31 Hình 2.6: Quá trình sa lắng 31 Hình 2.7: Qui trình đánh giá đặc tính ngun liệu rutin 33 Hình 2.8: Quy trình tạo hệ phân tán huyền phù nano rutin 33 Hình 3.1: Kết nhiễu xạ tia X Rutin nguyên liệu ………… 42 Hình 3.2: HPLC nguyên liệu rutin (A), rutin chuẩn (B), quercetin chuẩn (C) 42 Hình 3: Ảnh hưởng PEG đến thay đổi giá trị độ đục hệ phân tán rutin theo thời gian 44 Hình 3.4: Ảnh hưởng PEG đến thay đổi sai biệt màu sắc hệ phân tán rutin theo thời gian 45 Hình 3.5: Ảnh hưởng PEG đến thay đổi giá trị MLP hệ phân tán rutin theo thời gian 45 Hình 3.6: Ảnh hưởng PEG đến kích thước hạt hệ phân tán rutin đồng hóa máy Phillips 46 Hình 3.7: Ảnh hưởng nồng độ PEG400 đến thay đổi sai biệt màu sắc hệ phân tán rutin theo thời gian 47 Hình 3.8: Ảnh hưởng nồng độ PEG400 đến thay đổi giá trị MLP hệ phân tán rutin theo thời gian 47 Hình 3.9: Ảnh hưởng nồng độ PEG400 đến thay đổi giá trị độ đục hệ phân tán rutin theo thời gian 48 Hình 3.10: Ảnh hưởng nồng độ PEG 400 đến kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn đồng hóa máy Phillips 49 Hình 3.11: Kết đo SEM cho hệ phân tán 1% rutin sử dụng PEG 400 0,1% 49 Hình 12: Ảnh hưởng CHĐBM đến độ sa lắng theo thời gian hệ phân tán huyền phù rutin 50 Trang vii DANH MỤC HÌNH Hình 3.13: Ảnh hưởng CHĐBM đến thay đổi giá trị độ đục hệ phân tán huyền phù rutin theo thời gian 51 Hình 3.14: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên thay đổi giá trị độ đục hệ phân tán rutin theo thời gian 53 Hình 3.15: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên thay đổi sai khác màu sắc hệ phân tán rutin theo thời gian 53 Hình 3.16: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên thay đổi giá trị MLP hệ phân tán rutin theo thời gian 53 Hình 3.17: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên kích thước hạt hệ phân tán rutin 54 Hình 3.18: Ảnh hưởng tốc độ đồng hóa đến độ sa lắng hệ phân tán huyền phù rutin 55 Hình 3.19: Ảnh hưởng tốc độ đồng hóa đến thay đổi giá trị độ đục hệ phân tán huyền phù rutin theo thời gian 56 Hình 3.20: Ảnh hưởng tốc độ đồng hóa đến sai biệt màu sắc hệ phân tán huyền phù rutin 56 Hình 3.21: Ảnh hưởng tốc độ đồng hóa đến giá trị MLP hệ phân tán huyền phù rutin 56 Hình 3.22: Ảnh hưởng tốc độ đồng hóa đến kích thước hạt hệ phân tán huyền phù rutin 57 Hình 3.23: Ảnh hưởng ethanol đến giá trị MLP hệ phân tán huyền phù rutin 58 Hình 3.24: Ảnh hưởng ethanol đến độ sa lắng hệ phân tán huyền phù rutin 58 Hình 3.25: Ảnh hưởng ethanol đến kích thước hạt hệ phân tán huyền phù rutin 59 Hình 3.26: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên độ sa lắng hệ phân tán huyền phù rutin 61 Trang viii DANH MỤC HÌNH Hình 3.27: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên giá trị MLP hệ phân tán huyền phù rutin 61 Hình 3.28: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên kích thước hệ phân tán huyền phù rutin 62 Hình 3.29: Sự phân bố kích thước hạt hệ phân tán 1% rutin với thời gian nghiền 15 phút (a), 30 phút (b), 45 phút (c) 60 phút (d) 62 Hình 3.30: Phân bố kích thước hạt hệ phân tán huyền phù rutin nồng độ 5% đồng hóa máy nghiền bi 64 Hình 3.31: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa đến thay đổi giá trị độ đục hệ phân tán huyền phù rutin đồng hóa máy đồng hóa cao áp APV 65 Hình 3.32: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa đến thay đổi sai biệt màu sắc hệ phân tán huyền phù rutin đồng hóa máy đồng hóa cao áp APV 66 Hình 3.33: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa đến thay đổi giá trị MLP hệ phân tán huyền phù rutin đồng hóa máy đồng hóa cao áp APV 66 Hình 3.34: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa đến thay kích thước hệ phân tán huyền phù rutin đồng hóa máy đồng hóa cao áp APV 66 Hình 3.35: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên thay đổi giá trị MLP hệ phân tán huyền phù rutin 5% đồng hóa máy đồng hóa cao áp APV 67 Hình 3.36: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên sa lắng hệ phân tán huyền phù rutin 5% đồng hóa máy đồng hóa cao áp APV 67 Hình 3.37: Ảnh hưởng thời gian đồng hóa lên kích thước hệ phân tán huyền phù rutin nồng độ 5% đồng hóa máy APV 68 Hình 3.38: Ảnh hưởng thiết bị đồng hóa lên kích thước hệ phân tán huyền phù rutin nồng độ 1% 69 Trang ix DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1: Công thức tạo mẫu R-NS 19 Bảng 1.2: Kết đường kính hạt số PI R-NS 20 Bảng 2.1: Bảng thông số vận hành hệ thống HPLC 26 Bảng 3.1: Độ ẩm nguyên liệu ban đầu 40 Trang x CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Như vậy, qua thời gian thực hiện, đề tài tạo hệ phân tán nano rutin nồng độ cao cách sử dụng phương pháp thực đơn giản, hiệu kinh tế Mặc dù hệ phân tán rutin đạt kích thước nanomet phân bố kích thước hạt cịn tương đối rộng Hơn nữa, hệ phân tán nano rutin sử dụng PEG400 0,1% chưa đạt độ ổn định cao Vì vậy, cần phải nghiên cứu thêm yếu tố sử dụng hoạt động bề mặt khác, bổ sung phụ gia (ví dụ polymer) để nâng cao độ bền hệ Bên cạnh đó, cách so sánh hiệu phương pháp đồng hóa khác nhau, đồng hóa áp suất cao (bằng APV2000) kết hợp đồng hóa máy nghiền bi đồng hóa cao áp APV2000 nên khảo sát để tạo hệ bền, kích thước hạt nhỏ, đồng Đề tài thực gói gọn hệ phụ gia PEG thu kết khả quan có giá trị Những kết tảng cho nghiên cứu hệ phân tán Đồng thời, đề tài hỗ trợ thông tin để định hướng cho nghiên cứu sau, nâng cao giá trị sử dụng ứng dụng vật liệu rutin tương lai Trang 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Đức Nghĩa, Hoá học nano, Nhà xuất Hà Nội, 2007 Nguyễn Minh Thái Vương Ngọc Chính, Lê Thị Hồng Nhan and Phan Thanh Sơn Nam, In Tạp chí Khoa Học & Cơng Nghệ, 2010, Vol 48 pp 381-387 Bandyukova, V.A and N.V Sergeeva, Rutin in some cultivated plants Chemistry of Natural Compounds, 1974 Brechignac, C., P Houdy, and M Lahmani, Nanomaterials and Nanochemistry, 2007 Deschner, E.E., et al., Quercetin and rutin as inhibitors of azoxymethanolinduced colonic neoplasia Carcinogenesis, 1991 12(7): p 1193-6 Guardia, T., et al., Anti-inflammatory properties of plant flavonoids Effects of rutin, quercetin and hesperidin on adjuvant arthritis in rat Farmaco, 2001 56(9): p 683-7 Gupta, R.B and K Uday B, Nanoparticle Technology for Drug Delivery, ed 159 2006, New York: Taylor & Francis Group Horvathova, K., et al., Determination of free radical scavenging activity of quercetin, rutin, luteolin and apigenin in H2O2-treated human ML cells K562 Neoplasma, 2004 51(5): p 395-9 Jung, C.H., et al., Anti-asthmatic action of quercetin and rutin in conscious guinea-pigs challenged with aerosolized ovalbumin Arch Pharm Res, 2007 30(12): p 1599-607 10 Kipp, J.E., The role of solid nanoparticle technology in the parenteral delivery of poorly water-soluble drugs Int J Pharm, 2004 11 Keck, C.M., Particle size analysis of nanocrystals: Improved analysis method International Journal of Pharmaceutics, 2010 390(1): p 3-12 Trang 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO 12 K V Sri, A Kondaiah, J V Ratna, et al., Preparation and characterization of quercetin and rutin cyclodextrin inclusion complexes Drug Dev Ind Pharm, 2007 33 (3), 245-253 13 Le Thi Hong Nhan, B.T.D., Phan Duc Hai, Phan Nguyen Quynh Anh, Phan Thi My Trang, Capacity of increasing rutin concentration of nano dispersion Vietnamese Journal of Science and Technology, 2012 50 (3A): p 56-41 14 Le Thi Hong Nhan, Nguyen Thi Kim Hanh and Khuu Chau Quang, Investigation of nano-rutin system formation Vietnamese Journal of Science and Technology, 2010 15 Lopez-Revuelta, A., et al., Membrane cholesterol contents influence the protective effects of quercetin and rutin in erythrocytes damaged by oxidative stress Chem Biol Interact, 2006 161(1): p 79-91 16 M.Sc, A.K and D.K Ph.D, Protective Effect of Rutinnext term on the Ischemia/Reperfusion Induced Damage in Rat Kidney Journal of Surgical Research, 2009 17 Peterson, R., Nanosrystal for use in topical cosmetic formulations and methods of production thereof, 2007: Germany 18 Polushina, N.D., et al., The effects of the combined use of mineral water with ascorbic acid and rutin experimentally and clinically Vopr Kurortol Fizioter Lech Fiz Kult, 2000(2): p 31-4 19 Robert W Dursta and Jungmin Lee Ronald E Wrolstad, Tracking color and pigment changes in anthocyanin products Trends in Food Science & Technology, 2005 20 R Mauludin, R.H Muller, and C.M Keck, Development of an oral rutin nanocrystal formulation Int J Pharm, 2008 21 R Mauludin, R.H Muller, and C.M Keck, Kinetic solubility and dissolution velocity of rutin nanocrystals Eur J Pharm Sci, 2009 36(4-5): p 502-10 22 Shegokar, R and R.H Müller, Nanocrystals: Industrially feasible multifunctional formulation technology for poorly soluble International Journal of Pharmaceutics, 2010 399(1–2): p 129-139 Trang 74 actives TÀI LIỆU THAM KHẢO 23 Sorata, Y., U Takahama, and M Kimura, Protective effect of quercetin and rutin on photosensitized lysis of human erythrocytes in the presence of hematoporphyrin Biochim Biophys Acta, 1984 799(3): p 313-7 24 Sri, K.V., et al., Preparation and Characterization of Quercetin and Rutin Cyclodextrin Inclusion Complexes Drug Development and Industrial Pharmacy, 2007 33(3): p 245-253 25 Taha, I.K., J.M Favid, and M.A Mahmoud, Rutin In: Florey, K (Ed.), Analytical Profiles of Drug Substances Academic Press Inc., 1983: p 623– 681 Trang 75 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Phụ Lục 1: Phổ hấp thu rutin chuẩn Phụ Lục 2: Phổ hấp thu rutin ghi nhận đầu dị DAD phân tích HPLC Phụ Lục 3: Phổ hấp thu quercetin chuẩn Phụ Lục 4: Phổ hấp thu rutin ghi nhận đầu dò DAD phân tích HPLC Phụ Lục 5: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG 0%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 3521.7 Mean 3556.6 Trang 76 PHỤ LỤC Phụ Lục 6: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG400 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 3184.9 Mean 3159.6 Phụ Lục 7: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG1500 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 3633.2 Mean 3637.9 Phụ Lục 8: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG2000 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 3825.3 Mean 3809.2 Phụ Lục 9: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG4000 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 3804.6 Mean 3797.3 Trang 77 PHỤ LỤC Phụ Lục 10: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG6000 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 4394.3 Mean 3951.4 Phụ Lục 11: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG10000 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 4163.0 Mean 4034.9 Phụ Lục 12: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG400 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian phút d (nm) Median 3250.5 Mean 3219.3 Phụ Lục 13: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG400 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 10 phút d (nm) Median 3220.3 Mean 3260.4 Trang 78 PHỤ LỤC Phụ Lục 14: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG400 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 20 phút d (nm) Median 3470.9 Mean 3445.7 Phụ Lục 15: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% (PEG400 0,1%) đồng hóa máy Phillips tốc độ 15000 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 3291.7 Mean 3237.5 Phụ Lục 16: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% ethanol 5% đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 1780.4 Mean 2228.9 Phụ Lục 17: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 5% sử dụng PEG400 0,1% ethanol 5% đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 1300.0 Mean 1823.6 Trang 79 PHỤ LỤC Phụ Lục 18: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 5% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy Phillips tốc độ 13500 v/phút thời gian 15 phút d (nm) Median 1441.7 Mean 1964.6 Phụ Lục 19: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy nghiền bi cao tốc thời gian 15 phút d (nm) Median 232.1 Mean 439.1 Phụ Lục 20: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy nghiền bi cao tốc thời gian 30 phút d (nm) Median 370.7 Mean 743.6 Phụ Lục 21: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy nghiền bi cao tốc thời gian 45 phút d (nm) Median 531.7 Mean 581.7 Trang 80 PHỤ LỤC Phụ Lục 22: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy nghiền bi cao tốc thời gian 60 phút d (nm) Median 389.2 Mean 525.4 Phụ Lục 23: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 5% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy nghiền bi cao tốc thời gian 60 phút d (nm) Median 2719.0 Mean 2777.1 Phụ Lục 24: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy đồng hóa cao áp (APV2000) sau chu kỳ d (nm) Median 570.5 Mean 880.2 Phụ Lục 25: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy đồng hóa cao áp (APV2000) sau 10 chu kỳ d (nm) Median 251.0 Mean 334.6 Trang 81 PHỤ LỤC Phụ Lục 26: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy đồng hóa cao áp (APV2000) sau 15 chu kỳ d (nm) Median 548.1 Mean 757.1 Phụ Lục 27: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 1% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy đồng hóa cao áp (APV2000) sau 20 chu kỳ d (nm) Median 606.9 Mean 677.1 Phụ Lục 28: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 5% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy đồng hóa cao áp (APV2000) sau chu kỳ d (nm) Median 590.1 Mean 916.1 Phụ Lục 29: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 5% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy đồng hóa cao áp (APV2000) sau 10 chu kỳ d (nm) Median 507.2 Mean 656.2 Trang 82 PHỤ LỤC Phụ Lục 30: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 5% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy đồng hóa cao áp (APV2000) sau 15 chu kỳ d (nm) Median 464.4 Mean 611.8 Phụ Lục 31: Kích thước hạt hệ phân tán huyền phù ruitn 5% sử dụng PEG400 0,1% đồng hóa máy đồng hóa cao áp (APV2000) sau 20 chu kỳ d (nm) Median 466.7 Mean 511.5 Phụ Lục 32: Xây dựng đường chuẩn rutin xác định hàm lượng rutin nguyên liệu Bằng phân tích HPLC, diện tích peak rutin chuẩn ứng với nồng độ xác dung dịch rutin chuẩn methanol bước sóng 360 nm trình bày bảng sau: Diện tích peak rutin chuẩn bước sóng 360nm ứng với nồng độ khác Nồng độ rutin chuẩn (mg/ml) Diện tích peak rutin chuẩn 0 0.02 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 274.25 668.59 1287.5 1913.2 2499.4 3037.8 Trang 83 PHỤ LỤC Quan hệ tuyến tính nồng độ diện tichpeak rutin chuẩn Bằng cách sử dụng phương pháp bình phương cực tiểu, phương trình đường chuẩn liên hệ nồng độ diện tích peak rutin (có độ lệch chuẩn R2 = 0.9995) sau: A=12201.2 x C+40.85 (*) Ở đây, A diện tích peak rutin phổ HPLC, C nồng độ rutin (mg/ml) Để xác định hàm lượng rutin nguyên liệu, dung dịch rutin nguyên liệu pha methanol nồng độ 0.1 (mg/ml) 0.15 (mg/ml) để phân tích HPLC Mỗi mẫu nồng độ cố định thí nghiệm lần diện tích peak rutin trung bình bước sóng 360nm ghi nhận phổ HPLC Áp dụng công thức xác định hàm lượng (%) rutin phần thực nghiệm, hàm lượng rutin nguyên liệu xác định Kết tính tốn hàm lượng rutin ngun liệu HPLC Nồng độ dung dịch nguyên liệu methanol (mg/ml) 0.1 0.15 Diện tích peak rutin trung bình mẫu ngun liệu (Am) 1311.7 1877.7 Diện tích peak rutin tính từ phương trình đường chuẩn (Ac) ứng với nồng độ dung dịch 1261 1871 Hàm lượng rutin nguyên liệu (%) 98.82 95.342 Trang 84 PHỤ LỤC Như vậy, hàm lượng rutin nguyên liệu cao 95% (phù hợp với kết công bố nhà sản xuất) Phụ Lục 33: Xây dựng đường chuẩn quercetin xác định hàm lượng quercetin nguyên liệu Bằng phân tích HPLC, diện tích peak quercetin chuẩn ứng với nồng độ xác dung dịch quercetin chuẩn methanol bước sóng 375nm trình bày bảng sau: Diện tích peak quercetin chuẩn bước sóng 375nm ứng với nồng độ khác Nồng độ quercetin chuẩn (mg/ml) Diện tích peak quercetin chuẩn 1.E-05 1.E-04 1.E-03 5.E-03 1.E-02 1.50 6.60 37.97 183.67 366.49 3394.05 Quan hệ tuyến tính nồng độ diện peak quercetin chuẩn Trang 85 1.E-01 PHỤ LỤC Bằng cách sử dụng phương pháp bình phương cực tiểu, phương trình đường chuẩn liên hệ nồng độ diện tích peak quercetin (có độ lệch chuẩn R2 = 0.9999) sau: A’= 33883x C’+ 8.0237 (**) Ở đây, A’ diện tích peak quercetin phổ HPLC, C’ nồng độ quercetin (mg/ml) Để xác định hàm lượng quercetin nguyên liệu, dung dịch quercetin nguyên liệu pha methanol nồng độ 0.1 (mg/ml) để phân tích HPLC Diện tích peak quercetin bước sóng 375nm ghi nhận phổ HPLC Áp dụng công thức xác định hàm lượng (%) quercetin phần thực nghiệm, hàm lượng quercetin nguyên liệu xác định Kết tính tốn hàm lượng quercetin nguyên liệu HPLC Nồng độ dung dịch nguyên liệu methanol (mg/ml) 0.1 Diện tích peak quercetin mẫu nguyên liệu (A’m) 39.723 Diện tích peak quercetin tính từ phương trình đường chuẩn (A’c) ứng với nồng độ dung dịch 0.1 mg/ml 3396.324 Hàm lượng quercetin nguyên liệu (%) 1.11 Như vậy, hàm lượng quercetin nguyên liệu xấp xỉ 1% Trang 86 ... chứa hợp chất rutin, chất có hoạt tính sinh học cao có tác dụng tăng cường sức chịu đựng mao mạch Tuy nhiên, rutin không tan nước nên khả hấp thụ vào thể Vì vậy, vấn đề nhà khoa học quan tâm làm... lên Hơn nữa, khơng có báo cáo mỹ phẩm tăng hoạt tính sinh học sử dụng chúng dạng tinh thể nano Tuy nhiên, có ý kiến cho hạt tinh thể nano rutin đóng vai trị quan trọng mỹ phẩm cho da [17] Hiệu... rutin chuẩn hòa tan hồn dung mơi methanol với nồng độ xác Bằng phân tích phổ HPLC, mối quan hệ tuyến tính nồng độ diện tích peak hấp thu bước sóng 360nm (bước sóng hấp thu cực đại rutin) lập