BỆNH KÝ SINH TRÙNG MÁU DO Ehrlichia và Anaplasma

SHAPE MERGEFORMAT BỆNH KÝ SINH TRÙNG MÁU DO Ehrlichia và Anaplasma Các Rickettsiae mà gây bệnh nhiễm Ehrlichia (ehrlichiosis) và bệnh nhiễm Anaplasma (anaplasmosis) được xếp vào nhóm vi khuẩn α pro.

BỆNH KÝ SINH TRÙNG MÁU DO Ehrlichia Anaplasma Các Rickettsiae mà gây bệnh nhiễm Ehrlichia (ehrlichiosis) bệnh nhiễm Anaplasma (anaplasmosis) xếp vào nhóm vi khuẩn α-proteobacteria Các vi khuẩn làm trung gian cho virus dạng ký sinh nội bào bắt buộc, vi khuẩn sử dụng oxygen, có enzyme trao đổi chất, có mẫn cảm với số thuốc kháng sinh, có thành tế bào Các thành viên α-proteobacteria, họ Rickettsiaceae Anaplasmataceae thuộc Rickettsiales, theo phân loại lài vào năm 2001 Phân loại lại thực sau phân tích rõ kết chuỗi phân tử gen 16S rRNA gen groESL Giống Ehrlichia Wolbachia chuyển từ họ Rickettsiaceae đến họ Anaplasmataceae Giống Rickettsia Orientia họ Rickettsiaceae Ngoài ra, loài trước bao gồm giống Ehrlichia (Ehrlichia phagocytophilum, Ehrlichia equi, Ehrlichia platys) chuyển đến giống Anaplasma, Ehrlichia risticii Ehrlichia sennetsu chuyển đến giống Neorickettsia Một giống đề xuất, Neoehrlichia, có chứa vi sinh Candidatus Neoehrlichia mikurensis, mà phân lập từ loài gặm nhấm người bị bại huyết Các vi sinh có liên quan gần khác, phát thấy ve lồi hoang dã, chưa xếp loại Giống Ehrlichia gồm vi khuẩn gram âm truyền lây qua ve ký sinh nội bào bắt buộc, nhiễm chủ yếu đến bạch cầu – leukocytes (bạch cầu đơn nhân – monocytes, đại thực bào – macrophages, bạch cầu hạt – granulocytes) Dạng cầu trực khuẩn nhạy với độ acid có đường kính khoảng 0,5 μm hiếu khí, khơng phân giải glycogen (non-glycolytic pathway) Ehrlichia canis, Ehrlichia chaffeensis, Ehrlichia ewingii, Ehrlichia muris thuộc giống Ehrlichia Ehrlichia ruminantium (trước có tên Cowdria ruminantium), tác nhân gây bệnh tim nước (heartwater disease) bò Châu Phi, thêm vào giống Họ Anaplasmataceae gồm vi sinh gram âm nội bào bắt buộc, ký sinh bạch cầu, hồng cầu, tế bào nội mạc hay tiểu cầu Các tác nhân gây bệnh truyền lây tự nhiên đến người nhiều lồi gia súc bao gồm chó mèo, qua trung gian ve bị nhiễm từ hút máu thú có vú hoang dã nguồn tàng trữ mầm bệnh Anaplasma phagocytophilum phân bổ vào nhóm gồm: tất dòng Ehrlichia hướng ký sinh bạch cầu hạt người (human granulocytotropic Ehrlichia – HGE) phát thấy khắp giới, Ehrlichia equi miền tây nước Mỹ, mầm bệnh Châu Âu nhiễm đến thú nhai lại gây bệnh sốt ve Ehrlichia phagocytophila/um Các vi sinh thể giống sinh học, ngoại trừ vị trí địa lý, ký chủ khả gây bệnh Các khác biệt nhỏ gen di truyền, mô tả sau phần nói A phagocytophilum, giúp giải thích biến thiên khả gây bệnh phân bố cua visinh Anaplasma bovis, Anaplasma platys, A phagocytophilum xếp vào giống Anaplasma chúng có liên quan gần gen di truyền với Anaplasma marginale Dữ liệu phân tử gen di truyền cho thấy chó Nhật Bản bị nhiễm A bovis Về lịch sử, vi sinh đặt tên theo giống tác nhân gây bệnh, tế bào mục tiêu ký sinh thú vật ký chủ (như canine monocytotropic ehrlichiosis [vi sinh chủ yếu cư ngụ bạch cầu đơn nhân đại thực bào], canine/feline granulocytotropic anaplasmosis [vi sinh chủ yếu nhiễm vào bạch cầu trung tính – neutrophils bạch cầu ưa acid – eosinophils], canine thrombocytotropic anaplasmosis [vi sinh ký sinh tiểu cầu]) (Bảng 26-1) Với tiến xét nghiệm di truyền phân tử để xác nhận giống loài vi sinh gây bệnh, để tránh nhầm lẫn, chương sử dụng tên gọi theo chuyên mơn cho vi sinh BỆNH NHIỄM EHRLICHIA Ở CHĨ (EHRLICHIA CANIS INFECTION) Shimon Harrus, Trevor Waner, T Mark Neer I- Tác nhân gây bệnh Dịch tễ học Bệnh nhiễm Ehrlichia hướng bạch cầu đơn nhân chó (canine monocytotropic ehrlichiosis – CME) vi sinh nội bào bắt buộc có tên E canis (xem Bảng 26-1) Đây vi khuẩn gram âm đa hình thái, cỡ nhỏ, thấy bào tương bạch cầu đơn nhân đại thực bào cụm tập trung vi sinh gọi bọc mầm (morulae, Hình 26-1) Vi sinh ban đầu phát thấy chó Donetein Lestoquard Algeria năm 1935.223 Tuy nhiên, bệnh không ý nhiều có số lượng lớn quân khuyển Mỹ, phần lớn giống chó German shepherds, bị chết bệnh Chiến tranh Việt Nam E canis có tầm quan trọng thêm vào cuối năm 1980 có nghi ngờ sai nhiễm rickettsia người Tuy nhiên, đến năm 1991, loài thuộc giống Ehrlichia, E chaffeensis, cho thấy gây bệnh nhiễm Ehrlichia nhiễm bạch cầu đơn nhân người (human monocytotropic ehrlichiosis) BẢNG 26-1 Các loài Ehrlichia Anaplasma hướng bạch cầu đơn nhân (monocytotropic Ehrlichia and Anaplasma Species) nhiễm đến gia súc Ký chủ loài thú Dạng tế bào Trung gian Nguồn tàng Hoang dã, Thực Loài (bệnh) Phân bố địa lý bị nhiễm truyền lây trữ Thuần dưỡng nghiệma EHRLICHIA HƯỚNG BẠCH CẦU ĐƠN NHÂN (EHRLICHIA MONOCYTOTROPIC) Ehrlichia canis Khắp giới, Mono, Rhipicephalus Các lồi chó Họ chó Chỉ chó (Canine vùng ơn đới macro sanguineus, hoang dã (Canids) monocytotropic nhiệt đới, Dermacentor dưỡng ehrlichiosis) ngoại trừ variabilisb Australia (E canis) Venezuela Mono, R sanguineus ? Người, chó Chuột nhắt (Venezuelan macro (mice) ehrlichiosis agent) Ehrlichia Mỹ (chủ yếu Mono, Amblyomma Hươu đuôi Người, chó, dê, Chuột chân chaffeensis phía nam), macro, neut, americanum, trắng, chó sói vượn cáo trắng (white(Human Missouri, lymph Amblyomma đồng cỏ, thú có (lemurs) footed mice), monocytotropic Cameroon testudinarium, D túi opossums, cáo đỏ (red ehrlichiosis) variabilis, Ixodes chồn raccoons, foxes) ovatus, chuột đồng Haemaphysalis (voles) yeni, Haemophysalis flava, Ixodes persulcatus Ehrlichia Vùng Cận Amblyomma Lồi móng Bị, cừu, dê, chó Chó ruminantium Sahara, Châu Phi Endothel, hebraeum guốc hoang dã? (Bệnh tim nước – mono, heartwater) macro, neut Ehrlichia spp Mỹ, Pháp, Tây Mono ? ? Mèo ? Ấn Độ, Brazil, Kenya, Thái Lan EHRLICHIA HƯỚNG BẠCH CẦU HẠT (GRANULOCYTOTROPIC EHRLICHIA) Ehrlichia ewingii Miền tây nam Granulocyte A americanum Chó, lồi Chó, người ? nước Mỹc s chó hoang? ANAPLASMA HƯỚNG BẠCH CẦU HẠT (GRANULOCYTOTROPIC ANAPLASMA) Anaplasma Khắp giới, Granulocyte Ixodes spp Hươu Chó, mèo, Giống ký phagocytophilum Bắc Bán Cầu s trắng, chuột người, ngựa, bị, chủ tự nhiên vùng ơn đới cống (wild cừu, dê, lạc đà loài mice), sóc linh trưởng chuột khơng phải (chipmunk), người chuột đồng (vole), loài chim di trú ANAPLASMA HƯỚNG TIỂU CẦU (THROMBOCYTOTROPIC ANAPLASMA) Anaplasma Khắp giới Tiểu cầu Ve, trung gian Các lồi chó? Chó, cừu Chỉ chó platys (platelets) truyền lây hút Thú nhai lại Nam Phi? máu khác nhỏ? Dê Thổ Nhĩ Kỳ? Endothel, Endothelial cells – tế bào nội mạc; lymphocytes – tế bào lâm ba; macrophages – đại thực bào; monocytes – bạch cầu đơn nhân; neutrophils – bạch cầu trung tính; ? – khơng rõ Các ký chủ bị nhiễm tự nhiên bị nhiễm thực nghiệm; nhiên cột Một số bệnh nhiễm thực nghiệm cận lâm sàng hay tạm thời - Chỉ bệnh nhiễm thực nghiệm ghi nhận với trung gian truyền lây Nhận diện ban đầu E ewingii Brazil Cameroon phân tích phân tử gen di truyền, cần có nghiên cứu thêm để xác định mức độ phân bố tầm quan trọng mầm bệnh vùng - E canis diện khắp nơi gây tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ tử vong cho chó Vi sinh phân bố khắp giới bao gồm Châu Á, Châu Phi, Châu Âu Châu Mỹ Úc cho khơng có bệnh nhiễm E canis Bệnh báo cáo Nhật Bản Các ký chủ có xương sống E canis bao gồm thành viên thuộc họ chó (family Canidae) Chó sói đồng cỏ (coyote), cáo (fox), chó rừng (jackal), ngồi chó nhà, cho ký chủ tàng trữ (xem Bảng 26-1) Một nghiên cứu thấy E canis hay vi sinh có liên quan gần nhiễm đến mèo (xem phần Bệnh nhiễm Ehrlichia hướng bạch cầu đơn nhân mèo – Feline Monocytotropic Ehrlichiosis) Loài chân đốt làm trung gian truyền lây cho E canis ve chó nâu (brown dog tick: Rhipicephalus sanguineus, Hình 26-2) Lồi ve ký chủ ưa thích hút máu chó tất giai đoạn chu kỳ sống sống mơi trường nhà có ni chó Trong thực nghiệm, bệnh truyền lây ve chó Mỹ (Dermacentor variabilis) Kiểu truyền lây qua giai đoạn sống (transstadial), mầm bệnh truyền đến giai đoạn chu kỳ sống ve, không truyền đến trứng qua hệ sau Ve nhiễm E canis gia đoạn ấu trùng lẫn thiếu trùng, hút máu chó bị nhiễm rickettsia truyền mầm bệnh thời gian 155 sau đến chó có mẫn cảm Khả cho phép mầm bệnh tồn qua mùa đơng ve sau đến mùa xuân nhiễm đến chó có mẫn cảm Hầu hết trường hợp CME xảy vào mùa ấm nóng, có nhiều ve trung gian truyền lây; nhiên, bệnh xảy quanh năm giai đoạn cận lâm sàng kéo dài thú bệnh nhiễm mãn tính Thời gian tối thiểu cần thiết cho ve công để truyền E canis xác định Chó sống vùng hay đến vùng dịch bệnh thường bị nhiễm II- Sinh bệnh học Việc phân tích kết chuỗi toàn gen di truyền E canis giúp nhận diện gen liên quan đến tiến trình bệnh, cho phép hiểu rõ sinh bệnh học CME Gen di truyền gồm nhiễm sắc thể vịng đơn (single circular chromosome) có 1.315.030 nucleotides Đáng ý phần gen có kích thước nhỏ (984 genes) liên quan đến ehrlichia khác Theo thể ký sinh nội bào bắt buộc, gen di truyền vi sinh nhiều mã hóa cho enzyme trao đổi chất Do có gen di truyền gần gũi E canis E chaffeensis, cho phát vi sinh phát vi sinh E chaffeensis nghiên cứu nhiều có tầm quan trọng người Các protein gây phản ứng miễn dịch bề mặt cho yếu tố kết bám, nhận diện E chaffeensis E ruminantium mà có đơn vị lặp lại chứa nhiều serine threonine Người ta cho yếu tố bám dính giúp cho ehrlichial kết bám xâm nhập vào tế bào ký chủ Do thiếu nhiều gen liên quan đến trao đổi chất, vi sinh phải thu thập nhiều dưỡng chất khác từ môi trường xung quanh qua lỗ hay kênh màng bao Các protein màng ngồi P28 OMP-1F E chaffeensis có hoạt tính hở lỗ giúp vi sinh điều chỉnh dưỡng chất thu nạp trình phát triển nội bào Phân tích gen 16S rDNA gen mã hóa kháng nguyên cho thấy có nhiều nhánh (clades) E canis exist Thơng tin giúp ích cho mục đích phân loại dịch tễ HÌNH 26-1 A, Bọc mầm (morula) Ehrlichia canis bào tương bạch cầu đơn nhân mẫu máu (X 1000) B, Bọc mầm tế bào ni DH82 hiển thị kính hiễn vi quang học (X 400) C, Bọc mầm tế bào ni DH82 soi kính hiển vi điện tử (X 20,000) Lưu ý thấy nhiều vi sinh bọc mầm Có thể thấy hai vi sinh giai đoạn phân chia nhị phân (Tài liệu Dr Itamar Aroch, Koret School of Veterinary Medicine, The Hebrew University of Jerusalem, Israel.) Thời gian nung bệnh CME từ đến 20 ngày Vi sinh sinh sôi đại thực bào hệ thống thực bào đơn nhân phân chia nhị phân (xem Hình 26-1, C) phát tán khắp thể (Hình 26-3) Vi sinh lan truyền tế bào cách thoát chui vào tế bào kế cận mấu lồi bào tương Quá trình nhân vi sinh diễn không bào (vacuole) nối đến màng tế bào, bảo vệ cho vi sinh khỏi kiểm soát hệ thống miễn dịch, thể dung giải trung gian phản ứng oxygen Một chế thích nghi cho phép ehrlichiae cư ngụ không bào liên hệ với tế bào ký chủ qua mạng lưới nội bào phát nhóm gen ankyrin mã hóa cho protein cho làm trung gian cho tương tác đặc trưng protein-protein Các protein dạng ankyrin ảnh hưởng đến thể chất tiết tiền viêm tế bào (proinflammatory cytokine) điều chỉnh giảm chu kỳ phát triển tế bào Ehrlichiae phóng thích đến tế bào mới, theo đường vỡ bể màng tế bào cuối giai đoạn hình thành bọc mầm Giống ehrlichiae khác, E chaffeensis thiếu enzyme sinh tổng hợp peptidoglycans lipopolysaccharide (LPS) để củng cố màng vi sinh Việc thiếu LPS peptidoglycans ảnh hưởng nhiều đến khả gây nhiễm sống sót vi sinh ehrlichia ký chủ thú vật ve Hệ thống miễn dịch ve có khả đáp ứng với diện LPS, tình trạng thiếu LPS vi sinh ehrlichia có lợi cho chúng Ở ký chủ thú có vú, đại thực bào hay bạch cầu trung tính sử dụng thụ thể dạng ghi nhớ (pattern-recognition receptors), thụ thể dạng Toll (Toll-like receptors), để kết nối đến phân tử riêng biệt mầm bệnh, LPS hay peptidoglycan Phản ứng tạo đáp ứng miễn dịch hướng đến tiêu diệt mầm bệnh; đó, tình trạng thiếu LPS peptidoglycan tạo cho E chaffeensis, vi sinh tương tự rickettsia có thêm lợi sống sót bạch cầu HÌNH 26-2 Ve chó nâu (brown dog tick: Rhipicephalus) Ve đực (bên trái) ve hút no máu (bên phải) (Tài liệu Prof Israel Yeruham, Koret School of Veterinary Medicine, The Hebrew University of Jerusalem, Israel.) HÌNH 26-3 Chu kỳ phát triển Ehrlichia canis tế bào chó (Tài liệu Kip Carter © 2004 University of Georgia Research Foundation Inc.) Thời gian nung bệnh gồm ba giai đoạn liên tiếp: cấp tính, cận lâm sàng mãn tính Giai đoạn cấp tính kéo dài từ đến tuần Hầu hết chó hồi phục từ bệnh cấp tính điều trị đầy đủ Chó khơng điều trị khơng điều trị đầy đủ có thê khỏi bệnh lâm sàng sau chuyển sang giai đoạn cận lâm sàng, thấy bất thường tổng số tiểu cầu máu (platelet counts) Những chó giai đoạn thể “lâm sàng khỏe mạnh” mang trùng cho E canis đến hàng tháng có hàng năm, nêu nghiên cứu năm Các kết gây nhiễm thực nghiệm cho thấy lách có khả chứa chấp E canis gian đoạn cận lâm sàng CME quan cuối cịn chứa rickettsia trước chúng bị tiêu diệt hoàn toàn Hơn nữa, bệnh nhiễm tự nhiên, thường phát thấy bọc mầm mẫu dịch hút lách nhiều so với mẫu máu ngoại biên phết kính Lách cho có vai trị quan trọng sinh bệnh học dẫn đến thể lâm sàng bệnh Những chó phẫu thuật cắt bỏ lách (splenectomized dogs) thực nghiệm gây nhiễm E canis thể bệnh lâm sàng nhẹ so với chó khơng bị phẫu thuật cắt bỏ lách Chó bị nhiễm kéo dài tự động khỏi bệnh, hay phát triển bệnh mãn tính nặng nề Khơng phải tất chó tiến triển đến giai đoạn mãn tính CME, điều kiện dẫn đến phát triển bệnh mãn tính chưa rõ So sánh 16S rRNA từ ehrlichiae phân lập chó giai đoạn cấp tính mãn tính bệnh khơng thấy có khác biệt, cho thấy khác biệt theo dịng ehrlichiae khơng dẫn đến khác biệt triệu chứng lâm sàng thấy chó Tuy nhiên, 16S rRNA gen riêng vi sinh, phải thực so sánh vi sinh Giảm nặng nề tế bào máu (severe pancytopenia), hậu thoái triển tủy xương, phát điển hình bệnh mãn tính Tương tự, tổng số bạch cầu tiểu cầu giảm thấp giảm thể tích tế bào máu (hematocrit) trở thành nguy cao dẫn đến tử vong Giảm nặng nề bạch cầu máu, thiếu máu, kéo dài thời gian kích hoạt thromboplastin tạo đông máu (activated partial thromboplastin time – aPTT) tăng hàm lượng K+ máu tiên lượng xác cho tỷ lệ tử vong với xác suất đến 100% Chết hậu xuất huyết phụ nhiễm Các biến đổi huyết học CME có liên quan đến q trình viêm miễn dịch khởi phát bệnh nhiễm Giảm tiểu cầu máu (thrombocytopenia), bất thường phổ biến huyết học chó bị nhiễm E canis, thấy tất giai đoạn bệnh Thể nặng giảm tiểu cầu máu nặng nề, khả phát 16S rRNA E canis máu cao, chó vùng dịch Có nhiều chế khác tham gia sinh bệnh học tình trạng giảm tiểu cầu máu, mà bao gồm gia tăng tiêu thụ tiểu cầu giảm thời gian tồn tiểu cầu, hậu vấn đề lách hủy hoại qua trung gian miễn dịch Các kháng thể kháng tiểu cầu tuần hoàn máu kết nối đến tiểu cầu phát thấy máu nguyên huyết chó giai đoạn cấp tính bệnh nhiễm tự nhiên thực nghiệm E canis Ngoài ra, chất tiết tế bào huyết (serum cytokine), yếu tố ức chế xâm nhập tiểu cầu (platelet migration-inhibition factor – PMIF), thấy có chó bệnh nhiễm Ehrlichia, hàm lượng chất tiết tỷ lệ nghịch với tổng số tiểu cầu Các hàm lượng cao PMIF có liên quan đến dịng độc lực cao E canis PMIF ức chế xâm nhập tiểu cầu tạo tế bào lâm ba, tế bào tiếp xúc với bạch cầu đơn nhân bị nhiễm Giảm sản sinh tiểu cầu hậu thoái triển tủy xương, tình trạng cho chế chịu trách nhiệm gây giảm tiểu cầu máu giai đoạn mãn tính Mặc dù có rối loạn tủy xương giảm tế bào máu chó bệnh nhiễm mãn tính, khơng thấy có tình trạng thối hóa dạng sợi tủy xương (myelofibrosis) Tình trạng giảm tiểu cầu máu kèm theo rối loạn chức tiểu cầu chó bệnh Rối loạn chức tiểu cầu, tình trạng giảm số lượng tiểu cầu, góp phần cho xuất huyết thấy CME Các kháng thể kháng tiểu cầu (anti-platelet antibodies) tham gia bệnh tiểu cầu CME cách cạnh tranh kết nối đến thụ thể tiểu cầu Hầu hết chó bị nhiễm E canis phát triển tăng protein máu (hyperproteinemia) tăng gammaglobulin máu (hypergammaglobulinemia), globulin thường đa giá, đơn giá số chó Vai trị kháng thể kháng E canis tuần hoàn máu việc triệt tiêu ehrlichial nhiễm nội bào thấp Các hiệu giá cao kháng thể kháng E canis không tạo bảo hộ thử thách gây nhiễm Hơn nữa, kháng thể gây ảnh hưởng phá hủy tiến trình bệnh, hậu tương tác miễn dịch – mầm bệnh Những chó mà có bệnh tích đơn giá (monoclonal gammopathy) phát triển tăng độ nhớt máu (hyperviscosity) liên quan đến dấu hiệu bệnh tích (như xuất huyết võng mạc – subretinal hemorrhage tróc võng mạc dẫn đến mù cấp tính) Có chứng cho thấy chế siêu miễn dịch liên quan đến sinh bệnh học CME Một số chế làm sáng tỏ Các chế bao gồm gia tăng thấm nhập tế bào huyết tương vào tủy xương nhu mô quan; gia tăng gammaglobulin đa giá máu (polyclonal hypergammaglobulinemia) mà không liên quan đến hiệu giá kháng thể tương ứng kháng E canis; kết dương tính xét nghiệm Coombs ngưng kết tự động (autoagglutination test); giảm sản sinh kháng thể kháng tiểu cầu sau bị nhiễm tự nhiên hay thực nghiệm; diện phức hợp miễn dịch tuần hồn máu chó bệnh nhiễm tự nhiên hay thực nghiệm E canis Mặc dù số thể bệnh tích lâm sàng CME cho qua trung gian phức hợp miễn dịch, kháng thể kháng nhân (antinuclear antibodies) không thấy chó bị nhiễm tự nhiên hay thực nghiệm E canis Các kháng thể IgG kháng E canis xuất khoảng 15 ngày sau gây nhiễm thực nghiệm Kháng thể IgG2 phản ứng với E canis phản ứng thấy tất giai đoạn CME Người ta cho chuyển đổi theo chủng phân nhóm kháng thể IgG2 chó có liên quan đến đáp ứng tế bào lâm ba T trợ giúp type (T-helper type 1) có sản sinh tương ứng chất cản nhiễm γ (interferon [IFN]-γ) Giả thiết củng cố phát tồn dai dẳng IFN-γ và RNA thông tin (messenger RNA – mRNA) cho yếu tố gây sưng hoại tử α (tumor necrosis factor [TNF]-α), phát thấy từ ngày đến sau gây nhiễm cho chó dòng Oklahoma E canis thấy tồn đến ngày thứ 56 sau gây nhiễm Hơn nữa, IFN-γ TNF-α thể tác động kháng rickettsia qua kích thích sinh tổng hợp nitric acid Rõ ràng miễn dịch kích thích tế bào lâm ba T xuất tiết IFN-γ đóng vai trị hồi phục bệnh nhiễm ehrlichia Kháng thể IgM có vai trị thực chất CME khơng phát thấy giai đoạn cấp tính bệnh Chó giống German shepherd thấy có mẫn cảm với CME, so với giống chó khác, thể bệnh nặng nề với tỷ lệ tử vong cao Đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào chó giống German shepherd thấy so với chó giống beagle, dù không thấy khác biệt đáp ứng miễn dịch dịch thể hai giống chó Phát chứng minh vai trị miễn dịhc qua trung gian tế bào bệnh nhiễm E canis E canis tồn lâu vượt qua hệ thống miễn dịch Khả có vi sinh thường xuyên thay đổi kháng nguyên bề mặt thể dạng khác protein Theo hướng này, protein có phận lắp ghép đóng vai trò quan trọng khả gây bệnh tương tác mầm bệnh – ký chủ nhiễm Anaplasma hướng tiểu cầu phải lưu ý đến kháng nguyên Anaplasma sử dụng xét nghiệm ELISA FA Do phản ứng chéo với kháng thể A platys điều trị tốt cho hai bệnh doxycycline Nuôi cấy vi sinh (Organism Cultivation) Các dịng A phagocytophilum ni cấy ngoại môi trường té bào nuôi từ phôi trứng ve tế bào lâm ba HL-60 người Phương pháp áp dụng rộng rãi phòng xét nghiệm để nghiên cứu bệnh này; nhiên, phương pháp khơng sẵn có thương mại việc phân lập vi sinh cần đến vài tuần nuôi cấy tế bào ni Các phát bệnh tích Các bệnh tích nhiễm A phagocytophilum nhẹ hầu hết bệnh nhân chó, mèo, khỉ, chuột, ngựa cừu gây nhiễm thực nghiệm Không ghi nhận thấy bệnh nhiễm tự nhiên gây tử vong chó mèo Trong thú vật thí nghiệm (chuột nhắt, khỉ rhesus macaques), cạn kiệt tế bào lâm ba lách hay giảm tế bào máu thể với bệnh tích thực bào mơ (histiocytosis) thực bào hồng cầu (erythrophagocytosis) Các hạch lâm ba thể bệnh tích tế bào lành tính với giảm tế bào lâm ba máu giảm nhẹ kích thước vùng chứa tế bào lâm ba T hạch lâm ba dạng lành tính (benign mild paracortical hyperplasia) Các bệnh tích gan bao gồm chết tế bào gan theo lập trình thể rải rác, thấm nhập tế bào lâm ba bệnh mức độ nhẹ quanh cửa gan hay quanh ống mật, viêm nhẹ thùy gan, viêm nhẹ lành tính vùng tế bào thực bào hạch lâm ba (sinusoidal histiocytosis) Ở nhiều mơ, thấy thấm nhập nhẹ tế bào lâm ba bệnh Tủy xương bình thường tế bào hay giảm tế bào thể gia tăng tế bào huyết tương mơ (plasmacytosis) bệnh tích mơ bào dạng nhẹ Một bệnh nhân giai đoạn khỏi bệnh phát triển bệnh tế bào gốc tủy xương với nang lâm ba tủy xương Thấm nhập kẽ phổi quan sát thấy số bệnh nhân Trong nghiên cứu ngựa, viêm mạch máu tập hợp tế bào viêm xương gân ghi nhận báo cáo Điều trị Bằng thử nghiệm khả mẫn cảm ngoại môi trường, A phagocytophilum bị ức chế doxycycline, rifampin, levofloxacin Các dẫn xuất tetracycline hầu hết không khuyên cho điều trị bệnh nhiễm A phagocytophilum Với chó năm tuổi, chloramphenicol khuyên sử dụng để tránh vàng răng, nhiên, doxycycline có khả gây vàng so với tetracyclines hòa tan nước (xem phần Công thức Thuốc Phụ lục) Do doxycycline thường định điều trị; xem Bảng 26-6 để biết liều lượng khuyên áp dụng cho loại thuốc Do số chó bị nhiễm lúc với B burgdorferi, hai vi sinh có phân bố địa lý truyền lây trung gian truyền lây, khuyên điều trị doxycycline với liệu trình kéo dài tuần Một nghiên cứu Bắc Carolina đánh giá chó bệnh lâm sàng A phagocytophilum điều trị doxycycline tuần Trong 15 chó bị nhiễm tự nhiên, khơng chó có kết xét nghiệm PCR dương tính sau điều trị đến 30 ngày sau ngưng điều trị doxycycline Do khơng có chứng minh cho việc khun điều trị kéo dài có ích lợi, khơng có chứng bệnh mãn tính nhiễm dai dẳng A phagocytophilum chó mèo Bệnh lâm sàng khơng quan sát thấy bốn chó gây nhiễm thực nghiệm có tình trạng nhiễm mãn tính mà điều trị doxycycline khơng hóa giải tình trạng mang trùng Hầu hết chó có đáp ứng nhanh chóng với điều trị thường có hồi phục lâm sàng từ 24 đến 48 sau bắt đầu điều trị; nhiên, chủ ni đơi có báo cáo chó họ thường cần đến hàng tuần hay hàng năm để hồi phục hoàn toàn 265 Điều chó bị nhiễm lúc vi sinh khác không đáp ứng với điều trị doxycycline Bệnh nhiễm lúc phải đuợc điều trị đắn Nếu tình trạng bệnh đáp ứng với dẫn xuất tetracycline, thú y viên phải cân nhắc đến chẩn đốn khác Phịng bệnh Hiện khơng sẵn có vaccin cho phòng ngừa bệnh nhiễm A phagocytophilum Phòng bệnh dựa vào (1) tránh phơi nhiễm đến ve trung gian truyền lây, từ mùa xuân đến cuối thu (2) điều trị dự phòng thuốc trị ve (acaricides) (3) điều trị dự phịng doxycycline hay tetracycline thú ni đến vùng dịch tễ A phagocytophilum Mặc dù việc loại trừ ve thủ cơng ngăn ngừa bệnh nhiễm, khơng khả thi với chó thường hoạt động trời BẢNG 26-6 Điều trị kháng sinh bệnh nhiễm Anaplasma phagocytophilum Thuốca Tetracycline Doxycycline Minocycline Chloramphenicol Liều lượngb (mg/kg) 22 5-10 10 25-50 Đường cấp thuốc (đường cấp khác) PO PO (IV) PO (IV) PO (IV, SC) Khoảng cách thời gian (giờ) 12-24 12 Liệu trìnhc (ngày) 14-21 10-21 10 14-21 IV, Intravenously – tiêm mạch máu; PO, by mouth – cấp đường miệng; SC, subcutaneously – tiêm da a Xem phần Công thức Thuốc Phụ lục để biết thêm thông tin b Liều lượng lần cấp thuốc theo khoảng cách thời gian định c Với bệnh nhiễm E canis, liệu trình khuyên 28 ngày; nhiên, liệu trình ngắn có hiệu Rickettsia khác BỆNH NHIỄM ANAPLASMA PHAGOCYTOPHILUM (BỆNH NHIỄM ANAPLASMA HƯỚNG BẠCH CẦU HẠT Ở MÈO FELINE GRANULOCYTOTROPIC ANAPLASMOSIS) Michael R Lappin Edward B Breitschwerdt Tác nhân gây bệnh Dịch tễ học A phagocytophilum (trước có tên E equi, E phagocytophila, Ehrlichia hướng bạch cầu hạt chó - canine granulocytotropic Ehrlichia, mầm bệnh HGE) biết nhiễm đến nhiều loài thú vật, bao gồm thú có vú nhỏ, sư tử núi (mountain lions), chó sói đồng cỏ (coyotes), cừu, bị, hươu, chó, ngựa, người Các biến thể sinh học khác vi sinh khác ký chủ tàng trữ ve trung gian truyền lây khác khả gây bệnh Xem thêm phần Dịch tễ học bệnh nhiễm Anaplasma chó (canine anaplasmosis) để biết thêm thơng tin chu kỳ hoang dã mầm bệnh dòng vi sinh phát thấy vùng địa lý khác giới Khả mẫn cảm mèo bệnh nhiễm A phagocytophilum ghi nhận thực nghiệm gây nhiễm Mặc dù bất thường lâm sàng khơng có báo cáo, có 2/5 mèo cấy “E equi” phát triển bọc mầm bạch cầu ưa acid (eosinophils) gia tăng bạch cầu ưa acid (eosinophilia) Trong nghiên cứu, mèo không nhiễm virus gây lỗi hỏng miễn dịch mèo (feline immunodeficiency virus - FIV) cấy A phagocytophilum phát triển dấu hiệu lâm sàng bệnh, nhiên mèo bị nhiễm FIV có đáp ứng yếu sinh chất tiết tế bào DNA thực chất với A phagocytophilum phát thấy máu mèo nhà bị nhiễm tự nhiên Phần Lan, Thụy Điển, Đan Mạch, Ai Len, Thụy Sĩ, Anh Quốc, Ý, Mỹ DNA Ehrlichia spp Hay Anaplasma spp khuyếch đại từ mèo Tây Ban Nha, khơng có liệu phân tích đầy đủ kết chuỗi DNA Bọc mầm thực chất A phagocytophilum phát thấy mẫu mô bào học bạch cầu trung tính mèo bị nhiễm Thụy Điển, Brazil, Kenya, Ý Ngòai trường hợp xác nhận gen di truyền Thụy Điển, có hay khơng cấu trúc giống bọc mầm A phagocytophilum hay vi sinh khác điều chưa rõ Việc xét nghiệm kháng thể kháng A phagocytophilum áp dụng để theo dõi dịch tễ lưu hành bệnh nhiễm mèo nội địa ngoại lai Trong vùng dịch tễ có ve Ixodes spp., kháng thể kháng A phagocytophilum thường phát thấy huyết mèo Thí dụ, tỷ lệ lưu hành huyết mèo miền đông bắc nước Mỹ Bồ Đào Nha 38% 13.5% Không may là, xét nghiệm huyết học cho kết dương tính sai, phương pháp xét nghiệm, FA gián tiếp, áp dụng cho nguyên vẹn vi sinh làm kháng nguyên Tình trạng giống chó; xem Bảng Trang mạng 26-1 để biết thêm nội dung Do đó, nghiên cứu lưu hành ước tính q mức tỷ lệ phơi nhiễm Các phòng xét nghiệm cung cấp kết xét nghiệm huyết học vùng dịch tễ Ixodes spp phải thực thêm xét nghiệm khác thấm thấu miễn dịch hay sử dụng kháng nguyên tái tổ hợp mà phát kháng thể đặc hiệu kháng A phagocytophilum A phagocytophilum ký chủ mèo truyền lây ve Ixodes spp Ở mèo bị nhiễm tự nhiên có DNA A phagocytophilum máu, tất mèo sống vùng dịch tễ có ve I scapularis, I pacificus, hay I ricinus, tất mèo có hoạt động ngồi trời, có mèo bị nhiễm Ixodes spp thời điểm khám kiểm Do đó, giống ve có khả truyền lây A phagocytophilum đến mèo C felis thu thập từ Mỹ, Bồ Đào Nha Úc có kết DNA âm tính với Anaplasma spp Và Ehrlichia spp Các loài gặm nhấm thường bị nhiễm A phagocytophilum; nhiên, chưa rõ có hay khơng việc ăn thịt loài gặm nhấm hay tiếp xúc trực tiếp với lồi gặm nhấm ngun nhân gây bệnh nhiễm A phagocytophilum mèo Sinh bệnh học Sinh bệnh học bệnh liên quan đến bệnh A phagocytophilum mèo chưa rõ Dựa vào phát lâm sàng, xét nghiệm vùng địa lý, có khả sinh bệnh học bệnh mèo giống sinh bệnh học loài khác (xem phần trên, Bệnh nhiễm Anaplasma phagocytophilum (Bệnh nhiễm Anaplasma hướng bạch cầu hạt chó – Canine Granulocytotropic Anaplasmosis) Một số mèo thực nghiệm gây nhiễm A phagocytophilum phát triển kháng thể kháng nhân gia tăng mRNA mã hóa IFN-γ cho thấy sinh bệnh học miễn dịch bệnh góp phần cho thể lâm sàng Các phát lâm sàng Mặc dù có nhiều báo cáo bệnh này, thông tin phần này, tổng hợp Bảng Trang mạng 26-7, đề cập đến mèo xác nhận bệnh nhiễm A phagocytophilum dựa vào xét nghiệ PCR dương tính phân tích kết chuỗi gen di truyền Sốt, bỏ ăn, nước lờ đờ bất thường lâm sàng phổ biến Mèo Thụy Điển thể thở gấp (tachypneic) Ve Ixodes phát thấy 5/8 mèo Về tổng thể, dấu hiệu lâm sàng liên quan đến bệnh nhiễm A phagocytophilum mèo nhẹ hóa giải nhanh chóng sau bắt đầu điều trị truyền dịch thuốc tetracyclines Các dấu hiệu lâm sàng hóa giải nhanh chóng điều trị tương tự 15 mèo khác có báo cáo nghi ngờ nhiễm A phagocytophilum dựa vào phát bọc mầm bạch cầu trung tính Chẩn đốn Các phát xét nghiệm Mỗi mèo liệt kê Bảng Trang mạng 26-7 có số lượng hồng cầu giới hạn bình thường Tìng trạng giảm tiểu cầu máu (giới hạn bình thường từ 175.000 đến 500.000/μL) phát thấy mèo số (còn 118.000/μL), mèo số (84.000/μL), mèo số (66.000/μL), cụm tiểu cầu kết lại báo cáo mèo số Tình trạng giảm bạch cầu trung tính với hướng chuyển trái giảm tế bào lâm ba máu thấy có mèo số Bọc mầm thấy có 24% bạch cầu trung tính mèo số 96 Các bất thường hóa giải nhanh chóng sau bắt đầu điều trị doxycycline Tình trạng tăng nhẹ đường huyết (hyperglycemia) phát thấy mèo số 6, có liên quan đến căng thẳng Khơng thấy có bất thường sinh hóa huyết mèo Ở mèo số 5, xét nghiệm nước tiểu (urinalysis) cho kết bình thường cấy hiếu khí mẫu nước tiểu khơng thấy phát triển vi sinh Tất mèo có kết âm tính kháng nguyên p27 virus gây giảm bạch cầu máu mèo (feline leukemia virus) âm tính với kháng thể kháng FIV huyết Quan sát vi sinh Phát vi thể thể vùi bạch cầu trung tính phương cách nhanh chóng cho chẩn đốn; nhiên, kết thường âm tính, phương pháp huyết học hay phát nucleic acid thường cần thiết cho xác nhận chẩn đoán Trong báo cáo, thể vùi phát thấy với tỷ lệ từ 1% đến 21% bạch cầu trung tính, phương cách khác để xác nhận A phagocytophilum quan sát áp dụng Ở mèo có DNA A phagocytophilum máu, mèo phát thấy có bọc mầm (xem Bảng Trang mạng 26-7) Có mèo (mèo số 6) âm tính tất xét nghiệm tế bào học Các phát huyết học Như nêu phần trên, kháng thể huyết phát xét nghiệm FA gián tiếp không đặc hiệu với nhiễm A phagocytophilum (xem phần Tác nhân gây bệnh Dịch tễ học) Hơn nữa, xét nghiệm chỗ dot-ELISA sử dụng kháng nguyên tái tổ hợp áp dụng cho chó (IDEXX Laboratories) khơng cho kết xác mèo Phát dương tính xét nghiệm huyết học khơng cho phép phân biệt với nhiễm trước Do đó, gặp phải bệnh cấp tính thực chất nhiễm Anaplasma mèo, mẫu huyết cấp tính huyết khỏi bệnh phải thu thập để xét nghiệm áp dụng xét nghiệm PCR (trình bày phần dưới) để chứng minh bệnh nhiễm Giống bệnh nhiễm Ehrlichia chó (canine ehrlichiosis), thể lâm sàng phát triển trước mèo có chuyển hóa huyết (xem Bảng Trang mạng 26-7, mèo số 6), đó, kết kháng thể âm tính mèo bệnh cấp tính khơng loại trừ bệnh nhiễm Hai mèo có kết xét nghiệm âm tính với kháng thể kháng A phagocytophilum theo xét nghiệm FA gián tiếp vào ngày 0, có 7/8 mèo cuối có kháng thể huyết kháng A phagocytophilum (xem Bảng Trang mạng 26-7) Ngoài ra, DNA A phagocytophilum khuyếch đại từ máu sư tử núi (mountain lions: Felis concolor) mà không phát thấy kháng thể huyết xét nghiệm FA gián tiếp Kiểm tra lại hiệu giá kháng thể mèo số thấy cấp thuốc kháng sinh giai đoạn cấp tính bệnh nhiễm, dẫn đến chuyển hóa huyết khơng hồn chỉnh (xem Bảng Trang mạng 26-7) Khơng có mèo Bảng Trang mạng 26-7 có phát triển kháng thể phản ứng với bọc mầm E canis, cho thấy kết xét nghiệm FA gián tiếp đặc hiệu A phagocytophilum số mèo Phát Nucleic Acid Ngoài xét nghiệm huyết học, khuyên máu mèo có nghi ngờ bệnh lâm sàng nhiễm Ehrlichia hay Anaplasma phải xét nghiệm tiếp xét nghiệm PCR đặc hiệu với giống vi sinh, mà khuyếch đại tất kết chuỗi Ehrlichia spp Anaplasma spp hay phải đánh giá xét nghiệm bao gồm đoạn mồi E canis A phagocytophilum Nếu áp dụng xét nghiệm PCR đặc hiệu với giống, sản phẩm PCR sử dụng tiếp để xác định Ehrlichia spp hay Anaplasma spp nguyên nhân gây nhiễm hay có hay khơng bệnh nhiễm lúc DNA A phagocytophilum phát thấy mèo báo cáo Bảng Trang mạng 26-7 vào ngày 0, xét nghiệm PCR nhạy so với xét nghiệm kháng thể dùng chẩn đoán bệnh nhiễm cấp tính Anaplasma Các phát bệnh tích Khơng có mèo bị nhiễm tự nhiên với A phagocytophilum mà sinh thiết mô hay khám tử; khơng có phát bệnh tích Khơng có bệnh tích đại thể hay vi thể đặc trưng với bệnh nhiễm A phagocytophilum mèo gây nhiễm thực nghiệm Điều trị Chăm sóc hỗ trợ bao gồm cấp chất cân điện giải da hay tiêm mạch máu cho tất mèo có bọc mầm bệnh nhiễm A phagocytophilum Các liều lượng cho điều trị mèo tổng hợp Bảng 26-4 Điều trị kháng sinh áp dụng cho mèo có danh sách Bảng Trang mạng 26-7 cho 15 mèo có bọc mầm giống A Phagocytophilum bạch cầu trung tính Enrofloxacin (cho mèo số 2), penicillin gentamicin (cho mèo số 3), hay chloramphenicol (cho mèo số 4) sử dụng cấp theo đường nhu mô ngày trước cấp doxycycline liều lượng khoảng mg/kg, đường miệng, 28 đến 30 ngày Mèo số tiêm mạch máu liều lượng doxycycline phát triển tình trạng sưng mạch máu (phlebitis) vị trí tiêm Ampicillin cấp ngày, mèo xuất viện sau liệu trình amoxicillin cộng với clavulanate liều lượng 13,75 mg/kg, cấp đường miệng, 10 ngày Tình trạng lờ đờ bỏ ăn tái phát sau ngưng cáp thuốc kháng sinh.476 Với kết dương tính với A Phagocytophilum, thú y viên định áp dụng tetracycline liều 22 mg/kg, cấp đường miệng, cách giờ, 21 ngày Mèo số điều trị ban đầu doxycycline liều lượng 10 mg/ kg, tiêm mạch máu, liều, sau cấp doxycycline đường uống với liều lượng 10 mg/kg, hàng ngày, 20 ngày Mèo số cấp doxycycline 20 ngày Mèo số điều trị với liều lượng 8,4 mg/kg doxycycline 30 ngày Tất mèo (riêng mèo số sau tái phát dấu hiệu lâm sàng) cải thiện tình trạng lâm sàng 24 đến 48 sau bắt đầu cấp tetracycline, không thấy báo cáo tái phát Các bất thường lâm sàng huyết học mèo nhẹ hóa giải mà không cần phải điều trị Mèo bệnh lâm sàng với chứng huyết học hay phân tử bệnh nhiễm giống nhiễm E canis thường thể bệnh tế bào máu nặng nề khó điều trị so với mèo mô tả (xem Bảng Trang mạng 26-7) Ở chó, bệnh nhiễm E canis gây bệnh nặng nề so với nhiễm A phagocytophilum hay nhiễm E ewingii Sau 21 đến 30 điều trị tetracycline, huyết mèo số đến số Bảng Trang mạng 26-7 cịn kháng thể có phản ứng huyết với A Phagocytophilum, xét nghiệm lúc 32 ngày đến 242 ngày sau ngưng điều trị Các kết tương tự chó bệnh nhiễm E canis, mà thường có hiệu giá kháng thể tồn dai dẳng sau điều trị Mèo số kết PCR dương tính máu lúc 17 ngày 90 ngày sau điều trị (xem Bảng Trang mạng 26-7); chó thực nghiệm gây nhiễm bị nhiễm đến hàng tháng Các kết này, kết hợp với tồn dai dẳng kháng thể, cho thấy việc điều trị tetracyclines 21 đến 30 ngày khơng đủ để triệt tiêu vi sinh thể Có mèo có kết âm tính với xét nghiệm PCR tình trạng bị nhiễm dai dẳng, dù qua điều trị, với vi sinh số lượng thấp mô lách, giống thấy chó Cho đến nay, có hay khơng mèo bị tái nhiễm chưa biết rõ Phòng bệnh A phagocytophilum truyền lây đến người mèo qua trung gian ve Ixodes spp Do đó, cần tránh phơi nhiễm mèo đến trung gian truyền lây lồi chân đốt hay trì kiểm sốt ve sản phẩm diệt côn trùng phép sử dụng cho mèo A phagocytophilum truyền lây theo máu; đó, mèo sử dụng máu phải theo dõi bệnh nhiễm xét nghiệm huyết học hay PCR, mèo có kết xét nghiệm dương tính phải bị loại trừ khỏi danh sách cho máu (cũng xem phần Các phòng ngừa Sản phẩm Truyền máu, Chương 93) BỆNH NHIỄM ANAPLASMA PLATYS (BỆNH NHIỄM ANAPLASMA HƯỚNG TIỂU CẦU - THROMBOCYTOTROPIC ANAPLASMOSIS) John W Harvey Tác nhân gây bệnh cho chó Bệnh giảm tiểu cầu máu truyền nhiễm theo chu kỳ chó Anaplasma platys, ký sinh nhỏ thuộc họ Rickettsia ký sinh tiểu cầu, trước phân loại E platys Tuy nhiên, dựa vào so sánh kết chuỗi gen 16S rRNA, vi sinh có liên quan gần gũi với Anaplasma so với Ehrlichia Việc phân loại thành loài Anaplasma củng cố thêm dựa vào kết chuỗi nucleotide xác định gen protein sốc nhiệt groEL (groEL heat shock protein gene), cụm gen sốc nhiệt groEL (groESL heat shock operon), gen tổng hợp citrate gltA (gltA citrate synthase gene) A platys báo cáo lần đầu Mỹ vào năm 1978 sau có báo cáo phía bắc Châu Âu, Châu Á, Nam Mỹ, vùng Trung Đông, Úc, vùng Caribe, Châu Phi A platys thể thể vùi màu xanh lơ tiểu cầu, mẫu máu phết kinh nhuộm Giemsa hay màu new methylene blue (Hình 26-17) Về siêu cấu trúc, vi sinh có đường kính từ 350 đến 1250; hình trịn, bầu dục hay hình hạt đậu; bao bọc màng kép Các tiểu cầu bị nhiễm chứa đến ba khơng bào có màng bao chứa đến 15 vi sinh (Hình 26-18) Vi sinh thể xâm nhập vào tiểu cầu bám dính đến bề mặt tiểu cầu, sau q trình vùi nuốt (endocytosis) Do đó, màng khơng bào chứa vi sinh có nguồn gốc từ màng tiểu cầu Phân chia nhị phân liên tục vi sinh khơng bào dẫn đến hình thành bọc mầm HÌNH 26-17 Vi sinh Anaplasma platys tiểu cầu chó bệnh nhiễm Anaplsama hướng tiểu cầu (thrombocytic anaplasmosis) (nhuộm Giemsa, X 2500) Hình nhỏ, Tiểu cầu chứa bọc mầm (morula) A platys (nhuộm màu new methylene blue; X 2300) HÌNH 26-18 Siêu cấu trúc Anaplasma platys Tiểu cầu không bào bao mọc màng tiểu cầu chứa vi sinh nhìn thấy (Trích từ tài liệu tham khảo 369 Được phép Đại học Chicago) HÌNH 26-19 Tỷ lệ tiểu cầu bị nhiễm ký sinh số lượng tiểu cầu chó cấy gây bệnh theo đường tiêm mạch máu Anaplasma platys, giá trị trục hoành thể ngày cấy gây bệnh (Trích từ tài liệu tham khảo 369, phép Đại học Chicago.) Các tế bào khổng lồ tủy xương (megakaryocytes) không chứa vi sinh này, kể trước thời gian nhiễm ký sinh máu Kháng nguyên A platys nhận diện đại thực bào cách nhuộm miễn dịch huỳnh quang cho mô đông lạnh lúc 14 ngày sau gây nhiễm thực nghiệm, thể tổn hại tiểu cầu thể cho vị trí bị nhiễm Các cố gắng để nuôi cấy vi sinh không thành công Một vi sinh liên quan đến Anaplasma nuôi cấy tế bào ve, cho thấy tiếp cận thành cơng với A platys Mèo động vật khác Các thể vùi giống với A platys quan sát thấy tiểu cầu mẫu máu phết kính mèo Brazil, cố gắng gây nhiễm cho mèo tiêm mạch máu dịng phân lập từ chó Florida khơng thành cơng Soi kính hiển vi chuyển điện tử cho mẫu máu linh dương impala Nam Phi phát vi sinh tương tự tiểu cầu Ngoài ra, máu cừu Nam Phi, kết chuỗi gen 16S rRNA tương đồng đến 99,5% với A platys, A platys có báo cáo phát máu dê Cyprus mà thể tương đồng 100% với dòng công bố vi sinh này; nhiên, không thấy có báo cáo hình thái ký sinh hay tế bào chúng nhiễm vào Bệnh nhiễm A platys nghi ngờ người Venezuela dựa vào thể tể thể vùi tiểu cầu nhuộm phết kính Tuy nhiên, hình thái thể vùi soi kính hiển vi điện tử không thực chất với A platys, huyết bệnh nhân không cho phản ứng với kháng nguyên A platys Sinh bệnh học Kiểu truyền lây tự nhiên vi sinh chứng minh được, có tham gia trung gian truyền lây ve Mặc dù cố gắng để truyền mầm bệnh ve R sanguineus không thành công, A platys phát thấy PCR ve R sanguineus Okinawa, Nhật Bản, Cộng hòa Dân chủ Congo, Châu Phi,750 Ý Kết chuỗi phân đoạn gen 16S rRNA làm khuyếch đại từ ve giống với kết chuỗi thu từ chó bị nhiễm ve A platys phát thấy ve Dermacentor auratus thu thập từ chó Thái Lan, ve Haemaphysalis longicornis (ấu trùng, thiếu trùng trưởng thành) ve Ixodes persulcatus thu thập từ thú nhai lại nhỏ hoang dã môi trường Hàn Quốc Ngoài ve, chứng DNA A platys phát thấy rận chó (dog chewing louse: Heterodoxus spiniger) Úc Giai đoạn nung bệnh sau gây nhiễm thực nghiệm đường tiêm mạch máu chó đến 15 ngày Tỷ lệ cao tiểu cầu bị nhiễm ký sinh giai đoạn đầu nhiễm ký sinh máu (Hình 26-19) Trong vịng vài ngày sau xuất tiểu cầu bị nhiễm ký sinh, số lượng tiểu cầu giảm rõ rệt, vi sinh thường khơng cịn phát thấy Số lượng tiểu cầu thường giảm xuống 20.000/μL liên quan đến giai đoạn nhiễm ký sinh máu Sau vi sinh khơng cịn thấy được, số lượng tiểu cầu gia tăng nhanh chóng, đạt đến giá trị bình thường vòng đến ngày Các giai đoạn nhiễm ký sinh máu sau giảm tiểu cầu máu tái phát với khoảng cách từ đến tuần (xem Hình 26-19) Mặc dù tỷ lệ tiểu cầu bị nhiễm giảm xuống thấp đến 1% hay thấp với sau tình trạng nhiễm ký sinh máu, giai đoạn giảm tiểu cầu máu nặng nề giai đoạn sau bị nhiễm ký sinh máu Trong tình trạng giảm tiểu cầu máu ban đầu phát triển chủ yếu hậu tổn thương trực tiếp sinh sơi vi sinh gây bệnh, chế qua trung gian miễn dịch gây triệt tiêu tiểu cầu quan trọng giai đoạn giảm tiểu cầu máu sau Chu kỳ nhiễm ký sinh máu giai đoạn giảm tiểu cầu máu trở nên ngắn dần theo thời gian, dẫn đến tình trạng giảm tiêủ cầu máu dạng nhẹ, chậm hóa giải, liên quan đến đợt xuất vi sinh gây bệnh tiểu cầu Trong số hồn cảnh, tình trạng giảm tạm thời số lượng bạch cầu máu xảy lúc với tình trạng nhiễm ký sinh máu, giá trị thường khơng giảm xuống đến ngưỡng bình thường chó Thiếu máu nhẹ dạng số lượng tế bào máu huyết sắc tố bình thường xảy tháng đầu bệnh nhiễm Dựa vào nghiên cứu hàm lượng chất sắt máu tủy xương, tình trạng giảm huyết sắc tố góp phần thiếu máu hội chứng viêm Sự gia tăng nhẹ đến trung bình protein globulin miễn dịch giai đoạn cấp tính, tình trạng giảm nhẹ albumin phát thấy mẫu huyết Các phát lâm sàng Các dấu hiệu lâm sàng tối thiểu ghi nhận chó gây nhiễm thực nghiệm Mỹ (Khung 26-3) Sự gia tăng nhẹ nhiệt độ trực tràng đơi ghi nhận tình trạng nhiễm ký sinh máu ban đầu, tình trạng thải phân có máu tươi dạng nhẹ (hematochezia) ghi nhận thấy số chó bị giảm tiểu cầu máu Phẫu thuật cắt bỏ lách trước gây nhiễm thực nghiệm làm cho số lượng tiểu cầu bị nhiễm tăng cao hơn, khơng làm thay đổi tính chu trạng nhiễm ký sinh máu hay mức độ nặng nề dấu hiệu bệnh Lứa tuổi thú khơng ảnh hưởng nhiều đến tiến trình bệnh; phát lâm sàng huyết học nhóm ba chó cai sữa tương tự chó trưởng thành Các dấu hiệu tối thiểu thể hầu hết chó bị nhiễm tự nhiên,108 dấu hiệu nặng nề hơn, bao gồm sốt viêm giác mạc (uveitis) chó, xuất huyết lấm với xuất huyết đốm, chảy máu cam chó khác, báo cáo trường hợp nhiễm tự nhiên Mỹ KHUNG 26-3 Các bất thường lâm sàng xét nghiệm chó bị nhiễm Anaplasma platys350,367 Các dấu hiệu lâm sàng: Sốt nhẹ, viêm giác mạc, xuất huyết lấm hay xuất huyết vệt, thường không triệu chứng Các phát xét nghiệm: Giảm tiểu cầu máu (thrombocytopenia) Các dịng có khả gây bệnh A platys báo cáo có ngồi nước Mỹ Các dấu hiệu lâm sàng, bao gồm sốt, lờ đờ, màng nhày nhợt nhạt, xuất huyết lấm da màng nhày miệng, giảm thèm ăn, thể trọng, chảy nước mủ mũi sưng hạch lâm ba, báo cáo bệnh nhiễm tự nhiên lẫn nghiên cứu thực nghiệm chó gây nhiễm dòng Hy Lạp (Greek strain) A platys trường hợp bệnh nhiễm tự nhiên chó bị nhiễm A platys Israel Mặc dù xét nghiệm huyết học E canis âm tính số chó bệnh này, với chó có dương tính với A platys khơng thấy thực xét nghiệm dựa vào PCR để xác định có hay không chúng bị nhiễm bệnh khác truyền lây qua ve Khả nhiễm lúc chó bị phơi nhiễm tự nhiên loại trừ số dấu hiệu có khả báo cáo Nhiễm lúc đến mầm bệnh truyền lây qua ve (như E canis, B canis) báo cáo chó xét nghiệm dựa vào PCR, hậu bệnh nhiễm với hay nhiều mầm bệnh khác góp phần cho, hay có khả năng, thể quan sát thấy bệnh bệnh nhiễm tự nhiên A platys Nhiễm lúc làm thay đổi khả miễn dịch ký chủ, thể thành dấu hiệu chó bị nhiễm E platys Giống với bệnh nhiễm E canis, số giống chó hay cá thể thú vật bị thỏa hiệp miễn dịch nặng nề hơn, dẩn đến dấu hiệu bệnh nặng nề so với chó nghiên cứu thực nghiệm Chó bị nhiễm E platys mà có tình trạng giảm tiểu cầu máu bị chảy máu sau gặp căng thẳng tổn thương liên quan đến thương tích hay giải phẩu Cuối cùng, bệnh nhiễm A platys mầm bệnh gây bệnh lâm sàng đơn lẻ Mỹ, mầm bệnh phải quan tâm phân biệt với nguyên nhân khác gây giảm tiểu cầu máu chó Chẩn đốn Phát vi sinh Chẩn đoán nhiễm A platys lập cách phát vi sinh tiểu cầu hay mẫu máu phết kính Trong nhiều hồn cảnh, phương pháp chẩn đốn khơng tin cậy kết âm tính sai, ký sinh khơng có mặt có mặt với số lượng thấp Hơn nữa, kết dương tính sai xảy thể vùi khác đơi bị nhầm lẫn với vi sinh Một phương pháp nhuộm hóa miễn dịch mô bào với avidin-biotin (avidin-biotin immunocytochemical staining procedure) mơ tả nhận diện đặc trưng bọc mầm A platys tiểu cầu giúp phân biệt vi sinh hạt tiểu cầu lớn hay phụ phần nhân tế bào khổng lồ tủy xương.786 Ngoài ra, thể vùi tiểu cầu thể bắt màu nhuộm dương tính xét nghiệm FA gián tiếp, sử dụng huyết chuột kháng A phagocytophilum Xét nghiệm huyết học Xét nghiệm kháng thể huỳnh quang Một xét nghiệm FA gián tiếp cho phát kháng thể huyết kháng với A platys sẵn có thương mại (xem Phụ lục Trang mạng 5) Phản ứng chéo huyết A platys E canis không xảy áp dụng xét nghiệm FA gián tiếp, có phản ứng chéo A platys vi sinh khác liên quan gần với A phagocytophilum Các kết phản ứng huyết chó gây nhiễm thực nghiệm A platys biến đổi từ âm tính sang dương tính thời điểm lúc hay sau thời gian ngắn so với đỉnh điểm nhiễm ký sinh máu Dựa vào nghiên cứu huyết học, bệnh nhiễm A platys thể phân bố rộng nước Mỹ Có đến 1/3 chó tình trạng giảm tiểu cầu máu Florida Louisiana có hiệu giá dương tính, 50% chó có huyết dương tính với E canis có hiệu giả dương tính với A platys Bằng chứng cho phản ứng huyết học dương tính hai vi sinh gây bệnh mẫu huyết số chó thể bệnh nhiễm kết hợp, chó khác có hiệu giá dương tính với hai mầm bệnh Các bệnh nhiễm kết hợp A platys E canis xác nhận áp dụng PCR phân tích kết chuỗi gen 16S rRNA Xét nghiệm chỗ (Point-of-Care Testing) Một kit xét nghiệm ELISA (SNAP 4Dx Plus Test, IDEXX Laboratories, Westbrook, ME) sử dụng protein tái tổ hợp thiết kế cho phát kháng thể huyết kháng với A phagocytophilum, cho kết dương tính chó có kháng thể kháng A platys vi sinh có liên quan gần gũi.18 Thành phần xét nghiệm không cho phản ứng chéo với lồi Rickettsia khác Tuy nhiên, chó vùng dịch tễ có bệnh nhiễm A phagocytophilum (xem đồ Hình 26-15), xét nghiệm PCR cần thiết để xác định mầm bệnh gây kết xét nghiệm dương tính huyết Phát gen di truyền Các xét nghiệm dựa vào PCR áp dụng để phát bệnh nhiễm A platys chó Quan trọng lựa chọn đoạn mồi thích hợp cho xét nghiệm PCR Một đoạn mồi kết hợp cho đặc hiệu với A phagocytophilum thấy khuyếch đại A platys Các xét nghiệm dựa vào PCR áp dụng để xác định lưu hành A platys máu quần thể chó Các tỷ lệ thấp đến 4% mơ tả chó Sicily, Ý, tỷ lệ cao đến 43% mô tả cộng đồng Aboriginal Úc Các xét nghiệm PCR thực hoàn chỉnh nhạy cho chẩn đoán bệnh nhiễm A platys, kết âm tính sai xảy kể bệnh nhiễm cấp tính Trong số trường hợp, kết xét nghiệm PCR dương tính dịch hút từ quan, lách tủy xương, âm tính mẫu máu Các phát bệnh tích Sưng hạch lâm ba tồn thân phát đại thể lúc khám tử nghiên cứu thực nghiệm chó tuần đầu bệnh nhiễm 47 Các bệnh tích mơ bào học thường nhẹ gồm thoái triển lâm ba (lymphoid hyperplasia) bệnh tế bào hạch lâm ba lách, xuất huyết hình nón quanh nang lâm ba lách, thoái triển đa điểm tế bào Kupffer gan Số lượng tế bào khổng lồ tủy xương (megakaryocyte) mức bình thường hay gia tăng nhẹ Điều trị phòng ngừa Dựa vào nghiên cứu ban đầu, dạng tetracyclines enrofloxacin liều lượng theo khuyến cáo thể có hiệu A platys (Bảng 26-7) Do ve (và số lồi chân đốt khác) chịu trách nhiệm truyền lây tự nhiên bệnh, việc kiểm soát tốt trung gian truyền lây ngăn ngừa bệnh phát tán BẢNG 26-7 Thuốc kháng sinh điều trị bệnh nhiễm Anaplasma hướng tiểu cầu chó mèo (Canine and Feline Thrombocytotropic Anaplasmosis) Thuốca Tetracycline Oxytetracycline Doxycycline Minocycline Enrofloxacin Loài D Cc D D Cd D D Liều lượngb (mg/kg) 22 17-20 7.5-10 5-10 10 10 Đường cấp thuốc (đường cấp khác) PO PO IV PO PO PO (IV) PO (IV,SC) Khoảng cách thời gian (giờ) 8 12 12 12 12 Liệu trình (ngày) 14-21 14-21 14-21 10 10 10 14-21 C, Cat - mèo; D, dog – chó; IV, intravenously – tiêm mạch máu; PO, by mouth – cấp đường miệng; SC, subcutaneously – tiêm da a Xem phần Công thức Thuốc Phụ lục để biết thêm thông tin b Liều lượng lần cấp theo khoảng cách thời gian định c Các công thức thuốc dạng lỏng có cho định lượng xác mà khơng gây nguy viêm thực quản d Nếu sử dụng thuốc viên, cẩn thận viêm thực quản ...BỆNH KÝ SINH TRÙNG MÁU DO Ehrlichia Anaplasma Các Rickettsiae mà gây bệnh nhiễm Ehrlichia (ehrlichiosis) bệnh nhiễm Anaplasma (anaplasmosis) xếp vào nhóm vi khuẩn α-proteobacteria... thấy mèo bị bệnh lâm sàng nhiễm Ehrlichia Kenya Ve C felis lấy từ mèo Mỹ Úc cho kết âm tính DNA Ehrlichia spp Anaplasma spp DNA Sinh bệnh học Sinh bệnh học bệnh có liên quan đến bệnh nhiễm Ehrlichia... Ehrlichia mèo chưa rõ Dựa vào lâm sàng, xét nghiệm chụp hình X quang, sinh bệnh học bệnh có khả giống sinh bệnh học bệnh nhiễm E canis chó Trong mèo có DNA giống với E canis máu, phát có kháng thể