Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử ADN trong chọn tạo giống đậu tương kháng bệnh rỉ sắt I ĐẶT VẤN ĐỀ 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Bệnh gỉ sắt do nấm Phakopsora pachyrhizi Sydow gây ra, là một trong nh.
Nghiên cứu ứng dụng thị phân tử ADN chọn tạo giống đậu tương kháng bệnh rỉ sắt I: ĐẶT VẤN ĐỀ TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Bệnh gỉ sắt nấm Phakopsora pachyrhizi Sydow gây ra, bệnh hại đậu tương, làm giảm nghiêm trọng đến suất nhiều nước châu Á có Việt Nam Để phịng chống bệnh có nhiều biện pháp khác nhau, chọn tạo trồng giống kháng bệnh mang lại hiệu kinh tế cao, không gây ô nhiễm môi trường, tạo nông sản Hiện nay, nhà khoa học phát có gen kháng bệnh, ký hiệu Rpp1, Rpp2, Rpp3, Rpp4, Rpp5, Rpp6 Rpp1b Phần lớn gen kháng lập đồ xác định thị phân tử ADN liên kết Theo đó, gen kháng Rpp1 xác định nằm nhiễm sắc thể (NST) số 18 liên kết với thị Sct_187 Sat_064 với khoảng cách di truyền 0,4 cM; Rpp2 nằm NST số 16, liên kết với thị Sat_255, Satt620 Satt215 với khoảng cách di truyền 8,1 cM, 4,3 cM 4,3 cM; Rpp3 nằm NST số 6, liên kết với thị Satt460, Sat_263 Sat_251 với khoảng cách di truyền 0,5 cM, 0,9 cM 4,1 cM; Rpp4 NST số 18, liên kết với thị Satt288 Sat_191 với khoảng cách di truyền 1,19 cM 6,24 cM gen kháng Rpp5 nằm NST số 3, liên kết với thị Sat_275 Sat_280 với khoảng cách di truyền 4,6 cM 6,3 cM Tuy nhiên, tác giả sử dụng vật liệu mẫu giống để xác định thị phân tử liên kết có khác nên khoảng cách di truyền thị với gen khác Ngoài ra, khoảng cách di truyền gen thay đổi theo genome, đồng thời áp dụng chọn giống phân tử tùy thuộc vào loại thị điều kiện sở vật chất Vì thế, trước tiến hành chọn giống phân tử nói chung chọn giống kháng bệnh gỉ sắt nói riêng cần phải lựa chọn thị có liên kết chặt với gen kháng hữu hiệu với chủng nấm bệnh quan tâm loại thị dễ thực Để chọn tạo thành công giống đậu tương Việt nam kháng bệnh gỉ sắt ứng dụng thị phân tử ADN cần thiết phải có nguồn gen kháng phong phú, tiếp đến phải đánh giá nguồn gen xác định gen kháng hữu hiệu chủng nấm gỉ sắt Việt nam lựa chọn thị phân tử có liên kết chặt với gen kháng tiến hành lai quy tụ nhiều gen kháng gen kháng hữu hiệu vào giống tốt để tạo dòng, giống kháng bệnh bền vững việc làm cần thiết cấp bách TÌNH HÌNH SẢN XUẤT ĐẬU TƯƠNG Cùng với tăng lên diện tích, sản lượng đậu tương giới tăng lên nhanh chóng qua năm Năm 1960 sản lượng đậu tương giới đạt 25,20 triệu tấn, năm 1990 tăng lên 104,19 triệu Đến năm 2000, sản lượng đậu tương toàn giới đạt 151,41 triệu tấn, tăng lần so với năm 1960 Đến năm 2016 sản lượng đậu tương toàn giới đạt 323,70 triệu tấn, tăng gần 12,6 lần so với năm 1960 Ở Việt Nam theo Phạm Văn Thiều (2006), đậu tương trồng nước ta từ sớm Tuy nhiên, trước cách mạng tháng 8/1945 diện tích trồng cịn (30.000 năm 1944) Sau đất nước thống (1976) diện tích trồng bắt đầu mở rộng Những năm gần đây, diện tích sản lượng đậu tương có nhiều biến động có xu hướng giảm dần diện tích Diện tích trồng đậu tương nước ta năm 1995 121,10 nghìn ha, tăng dần qua năm đạt cao vào năm 2005 với 204,10 nghìn sau giảm xuống cịn 146,20 nghìn vào năm 2009, đến năm 2016 diện tích tồn quốc cịn 110,0 nghìn (FAO, 2017) BỆNH GỈ SẮT, PHÂN BỐ VÀ TẦM QUAN TRỌNG Nấm gỉ sắt gây bệnh phát Nhật Bản vào năm 1902 ghi nhận Đông Nam Á Australia vào năm 1934, Ấn Độ vào năm 1951 (Sharma and Mehta, 1996), Hawaii năm 1994 (Killgore and Heu, 1994) châu Phi vào năm 1996 (Akinsanmi, 2001) Ở Nam Mỹ, Brazil mức độ gây hại bệnh ghi nhận vào năm 2001 (Yorinori et al., 2005) Tiếp sau năm bệnh hại thơng báo Argentina, Bolivia Colombia (Rossi et al., 2003) Năm 2004, bệnh gỉ sắt đậu tương công bố nước Mỹ (Schneider et al., 2005) Tại vùng bị nhiễm bệnh nặng, thu hoạch giảm tới 80% Một số nước thông báo mức độ thiệt hại bệnh gỉ sắt đậu tương gây Thái Lan làm giảm suất từ 10-40%, Ấn Độ giảm từ 10-90%, nam Trung Quốc 10-50%, Đài Loan 23-90% giảm 40% Nhật Bản (Jason and Pedersen, 2009) Báo cáo sớm biến chủng gây bệnh nấm Phakopsora pachyrhizi sydow từ Đài Loan vào năm 1966 (Lin, 1966) Sau đó, Úc vào năm 1980 người ta xác định phân lập chủng nấm bệnh (McLean & Byth, 1980) Kể từ đó, chủng khác nấm P pachyrhizi xác định phân lập tồn cầu Nghiên cứu tính độc chủng P pachyrhizi số tác giả sau (Schmitz et al., 2014; Reis et al., 2015; Song et al., 2015; Chang et al., 2016) nhận định chung tính kháng gen kháng có khả trì thời gian ngắn trình biến đổi tạo chủng sinh lý nấm bệnh liên tục xảy Ở Việt Nam, nghiên cứu Pham et al (2009), cho tính độc chủng P pachyrhizi khơng ổn định số kiểu gen kháng định Tuy nhiên, có quán kiểu gen kháng với chủng nấm bệnh Việt Nam thời gian dài Ví dụ, giống ĐT2000 có khả kháng cao chủng nấm phân lập Việt Nam từ năm 1990 (Nguyễn Thị Bình, 1990), đến ĐT2000 kháng mạnh với nhiều chủng nấm biểu cho kiểu vết bệnh RB điển hình có số AUDPC thấp Nên ĐT2000 thường dùng làm giống đối chứng kháng chuẩn nghiên cứu nấm bệnh gỉ sắt (Nguyễn Thị Bình cs., 2007; Vũ Thanh Trà, 2013) ỨNG DỤNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ TRONG CHỌN TẠO GIỐNG CÂY TRỒNG Hiện nay, số thị phân tử ADN sử dụng phổ biến chương trình chọn giống phân tử RAPD, SSR, STS, SNP Kỹ thuật RAPD ứng dụng rộng rãi cho nhiều loại đối tượng trồng khác Việt Nam lúa, ngô, đậu tương, lạc, chuối việc đánh giá đa dạng di truyền loài phạm vi loài (Bùi Văn Thắng cs., 2003; Phan Hữu Tơn., 2005), phân tích đánh giá genome thực vật nhằm xác định thay đổi dòng chọn mức độ phân tử (Đinh Thị Phòng, 2008) Ở thực vật, tần số số lượng SSR xác định nhiều đối tượng trồng có đậu tương (Barakat et al., 2009) Các thị SSR dùng để chọn dòng kháng bệnh khảm virus đậu tương (Akkaya et al., 1992), xác định đa dạng di truyền đậu tương (Vũ Thanh Trà cs., 2006; Triệu Thị Thịnh cs., 2010) Một vài mơ hình MAS nhà khoa học đưa phân tích cặn kẽ (Avise, 2012, Charcosset and Moreau, 2004; Shingh et al., 2011; Prasanna et al., 2010) Theo số mơ hình, cần tiến hành lai qua hệ không cần đến hệ, quần thể chọn lọc có kích thước nhỏ liệu thị phân tử bị hạn chế Thành công MAS cịn phụ thuộc vào vị trí thị so với gen quan tâm (Basyirin et al., 2009) Hiện nay, việc ứng dụng MAS Việt Nam chọn tạo giống đạt nhiều thành tựu nhiều đối tượng trồng lúa, ngô, đậu tương (Phan Hữu Tôn cs., 2005; Huyen et al., 2012; Dương Xuân Tú cs., 2016) Gần đây, nhà khoa học đưa phương pháp chọn giống phân tử – “Chọn giống hồi giao nhờ thị phân tử Marker Assited Backcrossing – MABC” (Bùi Chí Bửu Nguyễn Thị Lang, 2004) Phương pháp đặc biệt hiệu trường hợp cần đưa gen quý nhiều gen khác vào gen ưu việt Ở Việt Nam, nhóm tác giả Viện Di truyền nông nghiệp chọn tạo thành cơng dịng mang gen/ QTL Saltol chịu mặn Sub1 chịu gập có di truyền giống lúa trồng phổ biến Việt Nam Bắc Thơm 7- Saltol, AS996- Saltol, Bắc Thơm 7- Sub1, AS996- Sub1, Khang Dân 18Sub1, OM6976- Saltol (Le et al., 2011; 2012) II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VẬT LIỆU • 70 mẫu giống đậu tương địa phương nhập nội gồm dòng đậu tương mang gen chuẩn kháng với bệnh gỉ sắt: PI200492 (Rpp1), PI230970 (Rpp2), PI462312 (Rpp3), PI459025B (Rpp4) PI200256 (Rpp5); Giống đậu tương ĐT2000 (Giống đối chứng kháng - Nguyễn Thị Bình, 1990); Giống đậu tương V74, ĐT12 (Giống mẫn cảm với bệnh gỉ sắt) • chủng nấm gây bệnh gỉ sắt (IS-15: Miền Bắc; IS-17: Miền Trung; IS-28: Miền Nam) • 12 cặp mồi thị SSR liên kết với gen kháng công bố PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU • Đánh giá đặc điểm nơng học, hình thái, suất, chất lượng khả chống chịu thực vụ Xuân 2013, bố trí theo phương pháp khảo sát tập đồn, tuần tự, khơng nhắc lại, giống trồng 10m2, đối chứng giống DT84 Các tiêu theo dõi phương pháp đánh giá theo QCVN 01• 68:2011/BNNPTNT cho đậu tương Phương pháp nhiễm bệnh nhân tạo đánh giá tính kháng nhiễm thực theo quy trình Nguyễn Thị Bình cs (1990) Khi non có kép mở hồn toàn, tiến hành nhiễm bệnh phương pháp phun dịch bào tử lên bề mặt với liều lượng 0,5 ml/dm2 Tạo độ ẩm che phủ ni lông từ 12 - 24 đầu Đánh giá tính kháng/nhiễm bệnh tiến hành sau nhiễm bệnh 14 ngày, đánh giá từ - lần, lần cách từ - 10 ngày giống đối chứng đạt cấp bệnh cao với tiêu: - Mức độ nhiễm bệnh: Đánh giá theo% diện tích bị bệnh với thang cấp, giống đánh giá Cấp 1: 0%; Cấp 2: < 10%; Cấp 3: 10 20%; Cấp 4: 20 - 30%; Cấp 5: 30 - 50%; Cấp 6: 50 - 75%; Cấp 7: > - 75% Màu sắc ổ bệnh: Ổ bệnh có màu nâu đỏ nâu đậm, đặc trưng cho giống kháng bệnh, ký hiệu RB Ổ bệnh có mầu nâu vàng, đặc trưng cho giống nhiễm bệnh ký hiệu TAN Trên có hai loại vết bệnh - TAN RB giống có phản ứng trung gian, ký hiệu MIX Mức độ hình thành bào tử: Được đánh giá theo% số lượng vết bệnh có hình thành bào tử tổng số vết bệnh đơn vị diện tích theo thang điểm: Điểm 0: Khơng có bào tử; Điểm 1: Khơng hình thành bào tử; Điểm 2: Bào tử ≤ 25%; Điểm 3: 25% < Bào tử ≤ 50%; Điểm 4: 50% - < Bào tử ≤ 75%; Điểm 5: Bào tử ≥ 75% Đánh giá mức kháng/nhiễm: Các giống đậu tương kháng bệnh phải đạt tiêu chuẩn sau: (1) Có vết bệnh kiểu: RB; (2) Mức độ nhiễm bệnh thấp so với giống đối chứng kháng; (3) Bào tử hình thành đạt điểm từ - Từng chủng nấm trì thường xuyên giống mẫn cảm (ĐT12) trồng lồng lưới cách ly • Lựa chọn thị phân tử: Sử dụng quần thể F2 tổ hợp lai giống mẫn cảm bệnh làm mẹ, bố giống chuẩn kháng Đánh giá kiểu gen kháng thị phân tử nghiên cứu, đánh giá kiểu hình kháng/ nhiễm lây nhiễm nhân tạo Khoảng cách liên kết (cM) thị ADN gen kháng tính dựa tần số trao đổi chéo gen kháng thị hình thành giao tử F1 biểu (%) sai khác kiểu gen kiểu hình hệ F2 • Lai tạo chọn lọc: Lai tạo theo phương pháp truyền thống, sử dụng thị phân tử chọn cá thể mang gen mục tiêu hệ phân ly (MAS) chọn cá thể nhận phép lai lại (MABC) So sánh dịng triển vọng, bố trí theo khối ngẫu nhiên đầy đủ (RCBD), lần nhắc lại, đối chứng giống DT84 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU • Số liệu thí nghiệm so sánh dịng triển vọng phân tích phương sai (ANOVA) phần mềm IRRISTAT 5.0 theo khối hoàn toàn ngẫu nhiên (RCBD) thống kê chương trình Excel III: KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ NÔNG SINH HỌC VÀ NĂNG SUẤT - Kết theo dõi số đặc điểm nông sinh học mẫu giống đậu tương cho thấy, chiều cao mẫu giống đậu tương có biến động lớn từ 27,1 cm đến 70,5 cm phần lớn mẫu giống có chiều cao trung bình, điển AK03, TL7, Đ8, OMDN122 DT96 Đa số mẫu giống có chiều cao đóng tập trung khoảng từ 11 - 13 cm TGST mẫu giống dao động từ 81 - 105 ngày, có 12 mẫu giống có TGST thuộc nhóm ngắn ngày, điển hình giống Đ2601, M103, AK03, DT84, Parent D43 Còn lại phần lớn mẫu giống có TGST thuộc nhóm trung dài ngày Kết đánh giá suất yếu tố cấu thành suất cho thấy, giống có số quả/ cao (> 38 quả) AK03, Đ8, TL7, AK03 M103 Còn lại phần lớn mẫu giống có số dao động từ 25- 35 Có mẫu giống có tỷ lệ hạt lớn > 40% AK03, DT84, TL7 Đ9804 Còn lại đa số mẫu giống có tỷ lệ hạt dao động từ 10 – 30% Về khối lượng nghìn hạt, có 27 mẫu giống - có M1000 hạt thuộc nhóm hạt to, điển Đ8, DT84 DT96 Kết đánh giá suất cho thấy mẫu giống có suất dao động từ 2,0g (Parent) – 11,9g (M103) Có 12 mẫu giống cho suất cao (> 10g/ cây) giống Đ9804, Đ2101, Đ8, ĐT26, TL7, AK03, M103 DT84 Những mẫu giống cịn lại có suất cá thể thuộc nhóm trung bình khá, dao động khoảng từ – g/cây Qua kết đánh giá đặc nông sinh học, suất nhận thấy số mẫu giống đậu tương tốt (TGST < 100 ngày, suất cá thể ≥ 10g) sử dụng lai tạo giống Đ9804, Đ2101, Đ8, TL7, AK03, DT84, M103, ĐH4 PHÁT HIỆN NGUỒN GEN KHÁNG BỆNH GỈ SẮT Sử dụng 12 thị phân tử ADN khảo sát 70 mẫu giống đậu tương Cụ thể, để phát gen kháng Rpp1 sử dụng thị Sct_187 Sat_064; Phát gen kháng Rpp2 sử dụng thị Satt215, Satt620 Sat_255; Phát gen kháng Rpp3 sử dụng thị Satt460, Sat_251 Sat_263 Phát gen kháng Rpp4 sử dụng thị Sat_191 Satt288; Phát gen kháng Rpp5 sử dụng thị Sat_275 Sat_280 Đối chứng phát gen giống thị PI chứa đơn gen kháng định Mẫu giống cho đa hình vạch band kháng có kích thước giống với đối chứng kháng kết luận có mang gen kháng Hình điện di đại diện gen Rpp2, Rpp4 Rpp5 đưa Hình 4.1 kết phát gen kháng trình bày bảng 4.1 Kết bảng 4.1 cho thấy, có mẫu giống phát chứa gen kháng Rpp1, mẫu giống phát chứa gen kháng Rpp2, mẫu giống chứa gen kháng Rpp3, mẫu giống chứa gen kháng Rpp4 mẫu giống chứa gen kháng Rpp5 Đặc biệt số mẫu giống chứa đồng thời nhiều gen kháng Nhất Tiến HLLS chứa gen Rpp2, Rpp4 Rpp5, Cao Bằng U8325 chứa gen Rpp1 Rpp2, giống ĐT2000 chứa gen Rpp2 Rpp5, giống Như Khê chứa gen Rpp2 Rpp4 giống DT95 chứa gen Rpp1 Rpp4 Nghiên cứu khả kháng gen kháng với chủng nấm gỉ sắt Việt Nam cho thấy, mẫu giống chứa gen kháng Rpp1 Rpp3 HL07-15, Đ8, ĐH4, Dòng OT, Đ2501, Đ2102 dòng kháng chuẩn PI200492 (Rpp1) PI462312 (Rpp3) hầu hết cho phản ứng nhiễm với chủng nấm gây bệnh Trong đó, mẫu giống chứa gen kháng Rpp2 Rpp4 D43, Chandra, OMDN112, ĐT26 dòng kháng chuẩn PI23097 (Rpp2) PI459025B (Rpp4) biểu kháng tốt với chủng nấm gây bệnh gỉ sắt đậu tương Việt Nam Những mẫu giống chứa gen kháng Rpp5 CLVR 64, ĐVN 10, ĐVN 11, MTĐ 652-5 dòng kháng chuẩn PI200256 (Rpp5) hầu hết cho phản ứng nhiễm với chủng bệnh thuộc khu vực miền Bắc IS - 15 kháng tốt với chủng bệnh thuộc khu vực tỉnh miền Nam IS - 28 Từ kết này, kết luận gen kháng Rpp2 Rpp4 gen kháng hữu hiệu với chủng nấm bệnh gỉ sắt Việt Nam, gen Rpp5 kháng hữu hiệu với chủng bệnh khu vực miền Nam Việt Nam Một số mẫu giống mang gen kháng hữu hiệu Như Khê, DT95, ĐT2000, Cao Bằng U8325, Nhất Tiến HLLS, ĐT92, OMDN112, PI230970, PI459025B sử dụng làm vật liệu lai tạo chọn giống đậu tương kháng bệnh gỉ sắt Việt Nam KẾT QUẢ LỰA CHỌN CHỈ THỊ PHÂN TỬ LIÊN KẾT VỚI GEN QUY ĐỊNH TÍNH KHÁNG Kết phân tích kiểu gen kháng kết hợp với đánh giá tính kháng/nhiễm cá thể quần thể F2 tổ hợp lai trình bày bảng 4.3 Kết phân tích cho thấy thị lựa chọn có liên kết với gen kháng bệnh gỉ sắt đậu tương tương đối chặt, khoảng cách di truyền < 5cM: Rpp2 liên kết với thị Satt620 khoảng cách di truyền 3,33cM; Rpp4 liên kết với thị Satt288 khoảng cách di truyền 2,5 cM Rpp5 liên kết với thị Sat_275 khoảng cách di truyền 4,16cM Các thị lựa chọn (Satt620 – Rpp2; Satt288 – Rpp4; Sat_275 – Rpp5) sử dụng để nhận diện gen kháng lai tạo chọn lọc dòng đậu tương kháng bệnh gỉ sắt tập đồn vườn dịng chọn 4 KẾT QUẢ LAI BACKCROSS VÀ CHỌN LỌC MABC Để chuyển gen kháng vào gen giống tốt khơng có gen kháng bệnh, số tổ hợp lai backcross thiết lập từ vụ Xuân 2014, bảng 4.32, bố giống cho gen kháng gồm Cao Bằng U8325 (Rpp2), Nhất Tiến HLLS (Rpp2, Rpp4, Rpp5), DT95 (Rpp4), mẹ giống tốt như: AK03, ĐH4, Đ8, DT84 TL7 Con lai F1 tổ hợp lai sử dụng lai lại với dạng mẹ liên tục đến BC3F1 để chuyển gen kháng Rpp2, Rpp4 Rpp5 Liên tục đời lai lại, dùng thị phân tử chọn lai có chứa gen kháng dị hợp tử lai lại với giống làm mẹ (cây nhận gen) Đến vụ đông 2015, thu hệ BC3F1, vụ sau tự thụ BC3F2 vụ xuân 2016, sử dụng chọn phân tử chọn 38 cá thể mang gen kháng đồng hợp tử (Bảng 4.10) Các cá thể tách dòng thành BC3F3, BC3F4, đánh giá chọn 22 lọc đặc điểm hình thái, nơng sinh học, suất so theo mẹ lai lại Kết chọn lọc đến vụ thu đơng 2016, 12 dịng hệ BC3F4, mang gen kháng gỉ sắt hữu hiệu, có nhiều đặc điểm tốt dạng mẹ (Bảng 4.11) Kết kiểm tra gen kháng tính kháng (bảng 4.12) cho thấy, có 10/12 dịng chứa gen kháng mục tiêu tương tự bố Kết lây nhiễm nhân tạo sử dụng chủng cho thấy, tất dòng biểu kháng tốt đến kháng vừa, kháng hẳn dịng mẹ lai lại Có dịng VDBC1-2, VDBC3-1, VDBC3-3 VDBC4-4 biểu kháng cao tương đương với bố kháng Các dòng lưu giữ Viện Cây lương thực CTP tiếp tục gieo, đánh giá chọn lọc vụ IV: KẾT LUẬN Khảo sát đặc điểm hình thái, nơng sinh học, suất, chất lượng, khả chống chịu sâu bệnh đồng ruộng tập đoàn 70 mẫu giống đậu tương phát 11 mẫu giống tốt là: Đ9804, Đ2010, Đ8, AK03, DT84, M103, ĐH4, 24 HL0715, HLĐN29, ĐT26 Đ2105, có dạng hình đẹp, cao phân cành trung bình, thân to chống đổ tốt, TGST < 100 ngày, suất cá thể cao > 10 g/ cây, sử dụng làm bố mẹ lai tạo giống kháng bệnh gỉ sắt Bằng thị phân tử ADN lây nhiễm bệnh nhân tạo phát mẫu giống: Nhất Tiến HLLS, Cao Bằng U8325, DT95, ĐT2000, Như khê OMĐN112 chứa gen kháng biểu tính kháng tốt với chủng nấm gây bệnh gỉ sắt đậu tương Việt Nam Xác định gen kháng hữu hiệu với chủng nấm bệnh gỉ sắt đại diện cho vùng sản xuất đậu tương Việt Nam (gen Rpp2 Rpp4 kháng hữu hiệu với chủng nấm gây bệnh gỉ sắt khu vực phía Bắc phía Nam, gen Rpp5 kháng hữu hiệu với chủng khu vực phía Nam) lựa chọn thị liên kết chặt với gen kháng hữu hiệu trên; thị Satt620 liên kết chặt với gen Rpp2 với khoảng cách di truyền 3,33cM, thị Satt288 liên kết chặt với gen Rpp4 với khoảng cách 2,50cM thị Sat_275 liên kết với gen Rpp5 với khoảng cách di truyền 4,16cM Lai tạo 18 tổ hợp lai đơn tổ hợp lai backcross Ứng dụng thành công thị phân tử ADN chọn lọc 89 cá thể F2 từ tổ hợp lai đơn 38 cá thể BC3F2 từ tổ hợp lai backcross, kiểu hình đẹp, có nhiều đặc điểm nông sinh học tốt, suất cao chứa gen kháng bệnh gỉ sắt hữu hiệu Chọn tạo 13 dòng đậu tương tốt có triển vọng từ tổ hợp lai đơn 12 dòng từ tổ hợp lai backcross chứa từ gen kháng hữu hiệu gen: Rpp2, Rpp4 Rpp5, có nhiều ưu điểm tốt Chọn tạo dòng đậu tương triển vọng VD1-2-1 (Đ9) VD1- 9-1 (Đ10) chứa gen kháng Rpp2, thời gian sinh trưởng ≤ 100 ngày, suất đạt ≥ 25 tạ/ha vụ Xuân kháng tốt với nhiều chủng nấm bệnh gỉ sắt Việt Nam.Nam V: TÀI LIỆU THAM KHẢO Abdelnoor R V, Maria Cristina, Kazuhiro Suenaga, Naoki Yamanaka (2009) Characterization of genes Rpp2, Rpp4, and Rpp5 for resistance to soybean rust Plant and Animal Genomes XV Conf., poster 413: 322 - 331 David L H, James R Smith, Reid D Frederick, Mark L Tucker, Qijian Song and Perry B Cregan (2009) A High Density Integrated Genetic Linkage Map of Soybean and the Development of a 1536 Universal Soy Linkage Panel for Quantitative Trait Locus Mapping Crop Sci., 36: 451 - 460 3 Garcia A, Calvo ES, de Souza Kiihl RA, Harada A, Hiromoto DM and Vieira LG (2008) Molecular mapping of soybean rust (Phakopsora pachyrhizi) resistance genes: Discovery of a novel locus and alleles Theor Appl Genet., 117: 545 - 553 Hyten D L, Hartman G L, Nelson R L., Frederick R D., Concibido V C., Narvel J M and Cregan P B (2007) Map Location of the Rpp1 Locus That Confers Resistance to Soybean Rust in Soybean Crop Sci., 47: 837 - 840 Nguyễn Thị Bình (1990) Nghiên cứu đánh giá khả chống chịu bệnh gỉ sắt (Phacopsora pachyrhizi Sydow) tập đoàn đậu tương miền Bắc Việt Nam Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Khoa học kỹ thuật nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội, tr 66 - 68 ... làm giống đối chứng kháng chuẩn nghiên cứu nấm bệnh gỉ sắt (Nguyễn Thị Bình cs., 2007; Vũ Thanh Trà, 2013) ỨNG DỤNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ TRONG CHỌN TẠO GIỐNG CÂY TRỒNG Hiện nay, số thị phân tử ADN. .. hữu hiệu với chủng nấm bệnh quan tâm loại thị dễ thực Để chọn tạo thành công giống đậu tương Việt nam kháng bệnh gỉ sắt ứng dụng thị phân tử ADN cần thiết phải có nguồn gen kháng phong phú, tiếp... liệu lai tạo chọn giống đậu tương kháng bệnh gỉ sắt Việt Nam KẾT QUẢ LỰA CHỌN CHỈ THỊ PHÂN TỬ LIÊN KẾT VỚI GEN QUY ĐỊNH TÍNH KHÁNG Kết phân tích kiểu gen kháng kết hợp với đánh giá tính kháng/ nhiễm