xác định tỷ lệ nhiễm cryptosporidiidae spp trên bò

TRƯỜNG ĐH NÔNG LÂM HUẾ Khoa Chăn nuôi – Thú y BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NCKH SINH VIÊN NĂM 2016 TÊN ĐỀ TÀI Xác định tỷ lệ nhiễm Cryptosporidium spp ở trâu bò nuôi tại huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế Giáo viên hướng dẫn BSTY Nguyễn Thị Thùy Nhóm sinh viên thực hiện đề tài 1 Nguyễn Đức Chiến 2 Lê Minh Đức 3 Trần Thị Trang 4 Nguyễn Đình Tuấn 5 Huỳnh Thị Thanh Hoa Huế, ngày 23 tháng 11 năm 2016 Thông tin chung đề tài Tên đề tài Xác định tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp ở trâu bò nuôi tại huyện Q.

TRƯỜNG ĐH NƠNG LÂM HUẾ Khoa: Chăn ni – Thú y BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NCKH SINH VIÊN NĂM 2016 TÊN ĐỀ TÀI: Xác định tỷ lệ nhiễm Cryptosporidium spp.ở trâu bị ni huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế Giáo viên hướng dẫn: BSTY: Nguyễn Thị Thùy Nhóm sinh viên thực đề tài: 1: Nguyễn Đức Chiến 2: Lê Minh Đức 3: Trần Thị Trang 4: Nguyễn Đình Tuấn 5: Huỳnh Thị Thanh Hoa Huế, ngày 23 tháng 11 năm 2016 Thông tin chung đề tài • • • Tên đề tài: Xác định tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp.ở trâu bị ni huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế Chủ nhiệm đề tài: BSTY: Nguyễn Thị Thùy Danh sách sinh viên tham gia: 1: Nguyễn Đức Chiến 2: Lê Minh Đức 3: Trần Thị Trang 4: Nguyễn Đình Tuấn 5: Huỳnh Thị Thanh Hoa • Nội dung đăng ký đề tài: - Xác định tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp đàn bò, bê nuôi xã Quảng Lợi , huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế - So sánh tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp theo nhóm tuổi, với độ tuổi: ≤ tháng tuổi, - 18 tháng tuổi, > 18 tháng tuổi - So sánh tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp Theo tính biệt: Đực – - So sánh tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp theo tình trạng phân : Tiêu chảy, khơng tiêu chảy • • Thời gian nghiên cứu: Từ tháng năm 2016 đến tháng 11 năm 2016 Kinh phí duyệt năm: đồng Huế, ngày … tháng … năm 2016 Nhómtrưởng ký Giáo viên hướng dẫn TRƯỞNGKHOA PHÒNGKHCN&HTQ KÝ Mục Lục LỜI NĨI ĐẦU Trong ngành chăn ni đặc biệt ngành chăn ni bị ngày phát triển bệnh dịch ln mối nguy hàng đầu, bệnh dịch ảnh hưởng đến khả sinh trưởng phát triển, phẩm chất chất lượng thịt, gây chết cho vật nuôi, gây ảnh hưởng lớn tới ngành chăn nuôi làm giảm hiệu kinh tế Một vấn đề cần quan tâm chăn ni bị bệnh Cryptosporidiosis bệnh lây chung động vật người, trùng bào tử Cryptosporidiidae spp gây Người động vật bị nhiễm bệnh nuốt phải trứng trưỡng thành người động vật nhiễm thải theo phân, nhiễm vào thức ăn nước uống , nước tắm Một điểm đáng ý nỗn nang Cryptosporidium spp Có sức đề kháng cao, tồn lâu mơi trường sống sót nước khử trùng clo nồng độ tối đa Vì bệnh lây qua đường nước quan trọng gây nhiều tổn thất cho bà chăn ni bị người nhiễm bệnh Đây vấn đề trăn trở chung người chăn ni, người làm cơng tác phịng trị bệnh thú y nhân y Điều thơi thúc chúng tơi phải điều tra tình hình dịch bệnh Cryptosporidium spp bị từ có cài nhìn tổng quát tác động cryptosporidiidae spp để có biện pháp phịng trừ hiệu đạt lợi ích kinh tếvà mơi trường Được giúp đỡ Nhà trường, khoa đặc biệt Cô Nguyễn Thị Thùy thực đề tài nghiên cứu khoa học: “ Xác định tỷ lệ nhiễm Cryptosporidium spp bị ni huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế ” Do kiến thức kinh nghiệm hạn chế, thời gian khơng cho phép nên đề tài cịn có sai sót, hạn chế, thiết kế thí nghiệm triển khai cơng việc khẩn trương nghiêm túc khơng thể khơng có sai sót Chúng tơi mong có đóng góp ý kiến hội đồng để đề tài hồn thiện nhất, từ có điều chỉnh để đề tài có tính khả thi nhất, áp dụng vào thực tiễn Nhóm nghiên cứu xin chân thành cám ơn Nhà trường, khoa Chăn Nuôi Thú y đặc biệt cám ơn Cơ Nguyễn Thị Thùy tận tình hướng dẫn nhóm triển khai đề tài, giải đáp hỗ trợ mặt chun mơn để nhóm thực tốt đề tài Thừa Thiên Huế, ngày 23 tháng 11 năm 2016 Trưởng nhóm đề tài Lê Minh Đức PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài Cryptosporidiosis bệnh đơn bào Cryptosporidiidae spp gây ra, bệnh gây ảnh hưởng đến hệ tiêu hóa, đặc biệt niêm mạc ruột động vật có xương sống người, đặc biệt bệnh nhân có hệ miễn dịch suy yếu người nhiễm AIDS hay sử dụng thuốc ức chế hệ miễn dịch điều trị [1] Một điểm đáng ý Cryptosporidiidae spp noãn nang mầm bệnh có sức đề kháng cao, tồn lâu mơi trường sống sót nước khử Clo nồng độ tối đa (có nghĩa nước máy chứa mầm bệnh) [2] Vì vậy, bệnh lây qua đường nước quan trọng, có tỷ lệ nhiễm cao xuất khắp giới đặc biệt nghiêm trọng nước phát triển[3] Ở Việt Nam tỉ lệ nhiễm tương đối cao tỉnh khác, 41.6%, 32% 28.7% tỉnh Quảng Ngãi, Khánh Hòa Đắk Lắk hai năm 2005 2006 (theo Nguyễn Thị Sâm cs), tỷ lệ nhiễm Cryptosporidium parvum bị địa bàn tồn tỉnh Quảng Nam 33.33% (theo nghiên cứu Lê Quốc Việt cs, 2011) Với xu phát triển kinh tế, xã hội hội nhập với khu vực quốc tế, nước ta có nhiều sách khuyến khích nơng nghiệp phát triển Chính ngành chăn ni, đặc biệt chăn ni trâu bị quan tâm đẩy mạnh số tỉnh miền trung nước ta, có Thừa Thiên Huế, tỷ lệ trâu bị nhiễm Cryptosporidiidae spp cao 38.49% (theo Đinh Thị Bích Lân cs, 2012) Huyện Quảng Điền huyện có số lượng trâu bị lớn Thừa Thiên Huế, tiếp giáp với huyện Phong Điền huyện chăn nuôi phát triển, tập quán sử dụng nguồn nước ao hồ để làm nước sinh hoạt cho gia súc sữ dụng , nguy lây lan bệnh vùng sang vùng khác cao Hiện nay, chưa có nghiên cứu cụ thể Cryptosporidiide spp Quảng Điền gia súc bị tiêu chảy người ta nghĩ đến nguyên nhân ký sinh trùng, nhóm nghiên cứu tiến hành thực nghiên cứu tỷ lệ nhiễm bệnh Cryptosporidium spp.ở huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế với mong muốn điều tra tình hình dịch bệnh góp phần giảm thiểu tình hình nâng cao sức khỏe người 1.2 Mục Tiêu + Mục tiêu chung: Điều tra tình hình dịch bệnh Cryptosporidium spp gây địa bàn huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế + Mục tiêu cụ thể: Xác định tỷ lệ nhiễm Cryptosporidium spp địa bàn huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế Góp phần làm giảm thiệt hại kinh tế nâng cao sức khỏe cho người thông qua khuyến cáo sau nắm tình tình hình dịch bệnh thơng qua tiêu ngghiên cứu 1.3 Ý Nghĩa - Ý nghĩa khoa học: kết nghiên cứu tài liệu người dân, sinh viên cán thú y tham khảo Ý nghĩa thực tiễn: điều tra tình hình dịch bệnh địa phương, dựa tiêu theo dõi để đưa khuyến cáo cho người chăn ni số vấn đề phịng bệnh cho người vật nuôi Hiệu kinh tế mơi trường đề tài: Góp phần giúp người dân phòng bệnh Cryptosporidium spp gây cho gia súc giảm thiệt hại kinh tế PHẦN TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 Đặc điểm sinh học Cryptosporidiidaespp 2.1.1 Giới thiệu Cryptosporidiidaespp Cryptosporidiidae spp.là ký sinh trùng đơn bào, thuộc: Ngành: Protista Phân ngành: Apicomplexa Lớp: Coccidia Phân lớp: Coccidiasina Bộ: Eucoccidiorida Phân bộ: Eimeriorina Họ: Crytosporidiidae Giống: Cryptosporidium Loài: Cryptosporidium parvum Cryptosporidium andersoni Cryptosporidium baileyi Cryptosporidium felis Cryptosporidium hominis Cryptosporidium meleagridis Cryptosporidium muris Cryptosporidium nasorum Cryptosporidium saurophilum Cryptosporidium serpentis Cryptosporidium wrairi Trong họ Crytosporidiidae spp có tất 11 lồi với vị trí ký sinh chủ yếu niêm mạc ruột (chủ yếu hồi tràng)[2] Phần lớn Cryptospridiosis người C parvum, số người bị bệnh Cryptosporidiidae ghi nhận 40 nước, châu lục[1] 2.1.2 Đặc điểm hình thái sức đề kháng • Hình Thái Mỗi lồi cầu trùng có kích thước hình dạng khác nhau, nhiên dạng trưởng thành cầu trùng có hình trịn, trứng bầu dục (Joyner L.P Và Kendall S.B, 1963; Trịnh Văn Thịnh, 1982) Bảng 2.1 Vị trí ký sinh, kích thước khả gây nhiễm cho người động vật lồi Cryptosporidiidae Lồi Chiều dài nỗn nang (μm) Chiều rộng nỗn nang (μm) • Cryptosoridiidae parvum 4,5 – 5,4 4,2 – 5,2 Cryptosporidiidae andersoni 6,6 – 8,1 5,0 – 6,5 Cryptosporidiidae baileyi 6,0 – 7,5 4,8 – 5,7 Cryptosporidiidae felis 3,2 – 5,1 3,0 – 4,0 Cryptosporidiidae hominis 4,4 – 5,4 4,4 – 5,9 Cryptosporidiidae meleagridis 4,5 – 6,9 4,2 – 5,3 Cryptosporidiidae muris 6,5 – 8,7 4,6 – 6,3 Cryptosporidiidae nasorum 3,5 – 4,7 4,2 – 5,0 Cryptosporidiidae saurophilum 4,4 – 5,6 4,2 – 5,2 Cryptosporidiidae serpentis 5,6 – 6,6 4,8 – 5,6 Cryptosporidiidae wrairi 4.8 - 5.6 4.0 - 5.0 Sức đề kháng Nhiệt độ Nỗn nang Cryptosporidiidae spp có sức đề kháng cao với nhiệt độ, Fayer cộng (1998) [4]cho rằng: Ở 67oC nỗn nang sống có khả gây nhiễm khoảng phút Từ khoảng –5oC xuống –20oC noãn nang sống với –5oC nỗn nang có khả gây nhiễm tuần, –10oC ngày, –15oC 24 –20oC gây nhiễm giờ[4]–[6] Nếu ủ khoảng nhiệt độ từ 10oC đến 30oC mơi trường nước sau 336 giờ, oocyst cịn có khả gây nhiễm[7] Độ PH Nỗn nang giảm khả sống sót độ pH < pH > 11[8] Khả gây nhiễm noãn nang bị ức chế nước trái chứa acid Amoniac làm tăng bất hoạt noãn nang, pH tăng cao giảm xuống thấp[8] Ảnh hưởng chất khử trùng Nỗn nang Cryptosporidiidae spp tồn môi trường khử Clo hay Monochloramine Với lượng Clo bể bơi, hầu hết mầm bệnh (E.coli, Salmonella,…) bị tiêu diệt, Cryptosporidiidae tồn nhiều ngày Vì vậy, bệnh lây qua đường nước quan trọng, có tỷ lệ nhiễm cao, có mặt khắp giới đặc biệt nghiêm trọng nước phát triển[10] 2.1.3 Chu trình phát triển Cryptosporidiidae spp Chu trình phát triển Cryptosporidiidae spp bao gồm giai đoạn: Giai đoạn sinh sản vơ tính sinh sản hữu tính Khi thể bị nhiễm mầm bệnh nuốt phải nõn nang có vỏ dày, gây nhiễm vào dày ảnh hưởng số yếu tố lý, hóa thể nhiệt độ, pH, muối mật enzyme tuyến tụy lớp vỏ, noãng nang vỡ giải phóng thoi trùng ngồi Lập tức, đầu thoi trùng gắn vào lớp tế bào biểu mô bề mặt ruột vật chủ, lấy màng tế bào vi nhung mao làm màng giả phủ xung quanh tạo thành dưỡng thể bắt đầu giai đoạn sinh sản vơ tính[2] Giai đoạn sinh sản vơ tính: Các dưỡng thể phát triển phân chia theo hình thức liệt phân thành nhiều thể phân lập hệ I (Meront loại I) Ngay bên thể phân lập hệ I có chứa thể phân lập trung gian Khi thể phân lập thể hệ I vỡ giải phóng thể phân lập trung gian hệ I tự mơi trường ruột Các thể 10 Hình 2.2.Vịng đời phát triển Cryptosporidiidae 2.2.2 Cơ chế sinh bệnh Bệnh Cryptosporidiosis động vật nguyên bào Cryptosporidiidae, thường gây bệnh niêm mạc ruột Khi thể nuốt phải noãn nang có khả cảm nhiễm vào dày, ảnh hưởng nhiệt độ, pH, muối mật enzyme tuyến tụy, lớp vỏ noãn nang vỡ giải phóng thoi trùng (sporozoite) ngồi Lập tức, đầu thoi trùng gắn vào lớp tế bào biểu mô bề mặt ruột vật chủ, lấy màng tế bào vi nhung mao làm màng giả phủ xung quanh tạo thành dưỡng thể bắt đầu giai đoạn nhân lên[2], [13] Trong niêm mạc ruột, cầu trùng họ Cryptosporidiidae phát triển mạnh, gây tổn thương lan tràn niêm mạc ruột, từ số lượng lớn tế bào biểu mô, lớp niêm mạc, mạch quản, thần kinh bị phá hủy Sự phá hủy làm cho tính toàn vẹn vách ruột bị tổn thương nghiêm trọng Những vùng ruột bị hủy hoại làm cho nhiều đoạn ruột khơng tham gia vào q trình tiêu hóa, làm cho vật bị thiếu dinh dưỡng dai dẳng, dẫn tới phù nề quan mô bào Sự sinh sản mạnh Cryptosporidiidae niêm mạc ruột phá hủy tế bào biểu mô ruột dẫn tới hậu vùng tế bào bị chết, hệ vi khuẩn gây mủ sinh sản, làm nặng 12 thêm trình viêm ruột, gây rối loạn chức trình hấp thụ nhu động ruột, dẫn đến vật bị tiêu chảy[2] Mức độ nghiêm trọng triệu chứng phụ thuộc vào khả đáp ứng miễn dịch vật chủ Nguyên nhân gây tiêu chảy vật chủ Cryptosporidiidae liên quan tới việc hấp thu tăng cường tiết dịch Mặc dù phương thức xác để Cryptosporidiidae gây tiêu chảy rõ, nhiều chế gây tiêu chảy Cryptosporidiidae đề xuất giảm sút vi nhung bề mặt ruột dẫn đến hấp thu tiêu hóa ký chủ, có mặt độc tố sản xuất ký sinh trùng ký chủ hoạt động ruột (enteroxin) yếu tố bám dính ký sinh trùng cơng vào tế bào vật chủ[2] Theo Keusch cộng (1995), yếu tố bám dính đặc hiệu lectin sporozoit xác định yếu tố công vào bề mặt ruột[13] Sau công vào tế bào biểu mơ ruột, khiến tế bào biểu mơ ruột giải phóng cytokine có tác dụng kích hoạt đại thực bào tới nơi cư trú Những tế bào kích hoạt giải phóng yếu tố hịa tan làm tăng tiết nước, clorua ức chế hấp thụ đường ruột Yếu tố hòa tan yếu tố kích hoạt tiểu cầu có tác động phần khác thể, bao gồm dây thần kinh ruột tế bào biểu mô ruột Do đó, tế bào biểu mơ ruột bị tổn thương hai chế sau: (1) Ký sinh trùng xâm nhập, nhân lên thoát khỏi tế bào làm tế bào niêm mạc bị chết; (2) Tế bào ruột bị tổn hại trình viêm, sản xuất vi nhung bị giảm sút[4] PHẦN ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1Nguyên vật liệu nghiên cứu 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu • Bò bê thuộc lứa tuổi số thơn xóm thuộc huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế 3.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị loại mơi trường, hóa chất + Mẫu phân 210 cá thể bò, bê lứa tuổi khác + Thiết bị: 13 - Thùng xốp giữ nhiệt,đá khô, túi nilon, tăm bơng, kéo - Kính hiển vi quang học, buồng đếm Mc Master, lam kính, pipet bóng đèn, cốc thủy tinh, rây lọc, đữa thủy tinh, giá đỡ lam kính, đèn cồn dụng cụ thí nghiệm khác +Hóa Chất: Carbon fuchsin, xanh methylen 1%, dung dịch cồn – acid chlorhydric, dung dịch đường bảo hòa 3.3 Nội dung nghiên cứu - Xác định tỷ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp đàn bị, bê ni xã Quảng Lợi , huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế - So sánh tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp theo nhóm tuổi với độ tuổi: ≤ tháng tuổi, - 18 tháng tuổi, > 18 tháng tuổi - So sánh tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp Theo tính biệt: Đực – - So sánh tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp theo tình trạng phân : Tiêu chảy, không tiêu chảy - Đánh giá hiệu điều trị Cryptosporidiidae spp thuốc trị cầu trùng bệnh Cryptosporidiidae 3.4 Phương pháp nghiên cứu 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu Phân bò bê lấy sau vừa thải lấy trực tiếp từ trực tràng Để riêng mẫu vào túi nilon ký hiệu bên Mỗi mẫu cần ghi chép cẩn thận số thông tin như: Tuổi, tính biệt, tình trạng phân, vùng, ngày lấy mẫu, chủ hộ Mẫu phân sau thu bảo quản tủ lạnh (4oC) 3.4.2 Phương pháp xử lý số liệu Số liệu thu được xử lý phương pháp thống kê excel phần mềm SPSS 14 3.4.3 Phương pháp xét nghiệm Xác định Cryptosporidiidae spp phân phương pháp nhuộm acid nhanh cải tiến (Ziehl Neelsen) Phương pháp nhuộm acid nhanh cải tiến dùng để phát trực tiếp noãn nang mẫu phân Đây phương pháp nhuộm truyền thống hiệu để phát có mặt oocyst Cryptosporidiidae spp [14] Khi tiến hành nhuộm acid nhanh cải tiến theo phương pháp Ziehl – Neelsen, soi kính hiển vi với vật kính 40x, thấy nỗn nang có hình trịn oval, bắt màu hồng sẫm, sáng rõ màu xanh lục tiêu bản, kích thước – 6µm[15] Tiến hành: Bước 1: Phết phân mỏng lên lam kính Để khơ ngồi khơng khí cố định cách hơ nóng qua lửa đèn cồn Bước 2: Nhuộm tiêu cacbon fuchsin thời gian phút, dùng đèn cồn hơ nóng tránh đun sơi thuốc nhuộm Để nguội, sau rửa nhẹ vịi nước Bước 3: Tẩy màu alcohol acid đến tiêu màu Sau rửa nhẹ nước Bước 4: Nhuộm màu dung dịch methylen blue 1% thời gian phút sau rửa nước Để khơ mẫu nhiệt độ phịng hay tủ ấm, soi kính hiển vi thường vật kính 40x [15] Xác định cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp phân buồng đếm Mc Master Buồng đếm Mc Master có buồng nhỏ, chia thành ơ, có kích thước 1cm x 1cm x 1,5mm[16] Các bước tiến hành: - Cân gam phân vào cốc thủy tinh, thêm 56 ml dung dịch đường bão hòa, khuấy cho tan phân 15 - Lọc dung dịch phân thu qua rây lọc vào cốc khác khuấy Trong khuấy, dùng pipet bóng đèn hút lấy dung dịch phân nhỏ đầy hai buồng đếm Mc Master (mỗi buồng đếm có dung tích 0,15 ml) Để yên phút kiểm tra kính hiển vi với vật kính 10x - Gọi số nỗn nang đếm ô hai buồng đếm Z, tiến hành tính theo cơng thức: Số nỗn nang có 1g phân = = Z x 50 (Tổng số noãn nang buồng đếm số oocyst có dung dịch phân) (19) Phương pháp tính tốn kết Số mẫu dương tính Ty lê nhiêm = x 100% Số mẫu xet nghiêm Cường độ nhiễm: Căn vào số noãn nang/gam phân biểu lâm sàng bò, bê quy định mức cường độ nhiễm sau[16]–[18]: - ≤ 500 Noãn nang/g phân: cường độ nhiễm nhẹ (+) - > 500 - 1000 noãn nang/g phân: cường độ nhiễm trung bình (++) - > 1000 - 5000 noãn nang/g phân: cường độ nhiễm nặng (+++) - > 5000 noãn nang/g phân: cường độ nhiễm nặng (++++) % Cường độ nhiễm = x 100 3.5 Phương pháp xử lý số liệu Số liệu xử lý phương pháp thống kê phần mềm SPSS Kết thí nghiệm trình bày dạng bảng biểu 16 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 Tỷ lệ cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp bò theo địa phương - 210 mẫu phân thu địa phương Quảng Phú, Quảng Lợi, Quảng Ngạn kiểm tra phương pháp nhuộm acid nhanh cải tiến (Ziehl Neelsen) để xác định mẫu dương tính với cryptosporididae spp., sau Xác định cường độ nhiễm Cryptosporididae spp phân buồng đếm Mc Master Kết xét nghiệm trình bày bảng 4.1 4.2 Bảng 4.1 Chi tiết số lượng mẫu phân thu Địa điểm Quảng Phú Quảng Lợi Quảng Ngạn Tổng ≤ tháng tuổi 12 29 6-18 tháng tuổi 23 19 66 > 18 tháng tuổi 28 58 29 115 Tổng 60 90 60 210 Độ tuổi bò 24 Bảng 4.2 Tỷ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp bò theo xã Xã Tỷ lệ nhiễm Cường độ nhiễm N n+ % ++ % +++ % Quảng Phú 60 18 30% 16.67% 15 83.33% Quảng Lợi 90 29 32.22% 11.54% 26 88.46% Quảng Ngạn 60 17 28.33% 29.41% 12 70.59% 210 64 30,47% 11 17.18% 53 Tổng (Trung bình) 82.82% Chú thích: n: Số mẫu kiểm tra n+: Số mẫu dương tính với Cryptosporidiidae spp 17 %: Tỷ lệ mẫu dương tính %: Tỷ lệ mẫu dương tính Kết từ bảng 4.2 cho thấy, tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp bò, bê Quảng Điền 30.47% với cường độ nhiễm mức “++” 17.18% mức “++ +” 82.82% Dựa vào cường độ nhiễm ta thấy, bò bê chủ yếu nhiễm Cryptosporidiidae spp mức độ nặng (82.82%), nguyên nhân theo Cryptosporidiidae spp bệnh chủ yếu lây qua đường nước, bị bê Quảng Điền sử dụng chung nguồn nước sông bồ, Phá Tam Giang với vệ sinh chuồng trại không đảm bảo nên sức đề kháng bò bê kém, tiếp xúc với mầm bệnh lâu dài dẫn đến tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp mức “+++” cao Tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp xã Quảng phú, Quảng Lợi, Quảng Ngạn 32.22% 28.33% 30.47% Qua bảng 4.2 ta thấy tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp khơng có khác biệt lớn xã Theo nhận xét tôi, điều kiện tự nhiên, kinh tế - xã hội xã tương đối giống nhau, bên cạnh xã có tập qn chăn ni bán chăn thả nên dẫn đến khơng có sai khác nhiều tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp xã Quảng Phú, Quảng Lơi, Quảng Ngạn Từ kết thấy tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp xã Phong Sơn tương đối cao (32.22%), tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp xác định nhiều nơi nước Sơn La – 60,98%, Hà Nội – 48,48%, Thừa Thiên Huế - 38,49%, Quảng Bình – 22,40%, Quãng Ngãi – 24,60%, Đak Lak – 14,97%, Quảng Nam – 12,40% [2] 4.2 Tỷ lệ cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp bị theo tính biệt Trong q trình nghiên cứu chúng tơi chia bị, bê làm nhóm theo giới tính để tìm hiểu xem liệu có khác tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp theo giới tính hay khơng Kết nghiên cứu trình bày theo bảng 4.3 Bảng 4.3 Tỷ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp bị theo tính biệt Tính biệt Tỷ lệ nhiễm Cường độ nhiễm 18 N n+ % ++ Đực 66 22 33.33% Cái 144 42 29.16% % 22.72% 16.67% +++ % 17 77,28% 36 83.33% Chú thích: n: Số mẫu kiểm tra n+: Số mẫu dương tính với Cryptosporidiidae spp %: Tỷ lệ mẫu dương tính %: Tỷ lệ mẫu dương tính Qua bảng 4.3 ta thấy, tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp bò bò đực tương ứng 29.16% 33.33% Tuy nhiên, phân tích tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp theo tính biệt đực tơi thấy khơng có sai khác lớn, sai khác tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp theo tính biệt (đực, cái) khơng có ý nghĩa mặt thống kê Như vậy, nói khả gây nhiễm Cryptosporidiidae spp bị khơng bị ảnh hưởng yếu tố tính biệt (đực, cái) Kết nghiên cứu có khác với nghiên cứu Đinh Thị Bích Lân cộng (2011), tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp bò cao bò đực với tỷ lệ nhiễm 38,00% 25,67%[2] Nguyên nhân cho khác theo tơi bị đực Quảng Điền chủ yếu lứa tuổi sơ sinh đến 10-12 tháng tuổi lúc bị lứa tuổi sơ sinh đến tiểu chiếm phần nhỏ số tổng đàn bò 4.3 Tỷ lệ cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp bị theo nhóm tuổi Bị độ tuổi khác khả sinh trưởng, phát triển sức đề kháng để chống chọi với mầm bệnh khác Đồng thời loại mầm bệnh gây cảm nhiễm độ tuổi gia súc khác nhau, có mầm bệnh gây tác hại cho gia súc non, số loài lại gây tác hại cho gia súc trưởng thành Để tìm hiểu ảnh hưởng Cryptosporidiidae spp đến bị theo giai 19 đoạn phát triển, tơi thu thập mẫu nhóm tuổi khác để tiến hành xét nghiệm Kết thu nghiên cứu tình hình nhiễm Cryptosporidiidae spp bị theo tháng tuổi chúng tơi trình bày bảng Bảng 4.4 Tỷ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp bị theo nhóm tuổi Tỷ lệ nhiễm Tuổi Cường độ nhiễm (tháng) N n+ % ++ % +++ % ≤ tháng 29 13 44.83% 15.38% 11 84.61% > 6-18 tháng 66 31.81% 23.8% 16 76.2% > 18 tháng 115 26.08% 13.33% 26 86.67% 21 30 Chú thích: n: Số mẫu kiểm tra n+: Số mẫu dương tính với Cryptosporidiidae spp %: Tỷ lệ mẫu dương tính Từ kết bảng 4.4 ta thấy bò, bê nhiễm Cryptosporidiidae spp tất lứa tuổi Tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp nhóm tuổi 6, 6-18 18 tháng tuổi 44.83%, 31.81% 26.08%, lứa tuổi nhiễm Cryptosporidiidae spp cao lứa tuổi tháng (44,83%), cao gần gấp đôi lứa tuổi nhiễm Cryptosporidiidae spp 18 tháng (26,08%) Sỡ dĩ theo lứa tuổi tháng tuổi khả ngăng tự thể cịn thấp, thay đồi hồn tồn điệu kiện sống với việc thường xuyên tiếp xúc với bò mẹ đối tượng thường xuyên tiếp xúc với cryptosporidiidae spp nên lây nhiễm cho bị dẫn đến tỷ lệ nhiễm bò tháng tuổi cao (44.83%) cường độ nhiễm lứa tuổi tập trung chủ yếu mức độ nhiễm nặng, lứa tuổi tháng tuổi có 84.61% mức độ nặng, 15.38% mức độ trung bình, – 18 tháng có 76,2% mức độ nhiễm nặng, 23.8% mức độ nhiễm trung bình, lứa tuổi 18 tháng tuổi có 86.67% mức độ nhiễm nặng, 13.33% mức độ trung bình Sự chênh lệch tỷ lệ cường độ nhiễm lứa tuổi khơng nhiều Cường độ nhiễm nặng bị 18 tháng tuổi cao (86.67%) Theo tơi bị trưởng thành 20 có nhiều hội tiếp xúc với mầm bệnh trở thành vật mang trùng kết hợp với việc không điều trị nên cường độ nhiễm nặng mức cao Vì vậy, chúng lây truyền bệnh cho người gia súc khác qua đường tiêu hóa Tuy nhiên, khác biệt tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp nhóm tuổi khơng có ý nghĩa mặt thống kê (P > 0,05) Kết nghiên cứu tương đối giống với kết nghiên cứu Nguyễn Thị Sâm cộng (2007) Theo Nguyễn Thị Sâm cộng (2007) tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp cao nhóm tuổi tháng (51,2%)[19] 4.4 Tỷ lệ cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp bị theo tình trạng phân Hội chứng tiêu chảy gây nhiều thiệt hại lớn cho ngành chăn ni.Trâu, bị bị tiêu chảy làm ảnh hưởng đến khả cày kéo, khả sinh trưởng phát triển Theo nhiều nghiên cứu, Cryptosporidiidae spp có vai trị định bệnh tiêu chảy bị bê Vì vậy, nhiên cứu này, tơi tiến hành nhóm bị phân theo tình trạng phân phân tiêu chảy phân không bị tiêu chảy để kiểm tra xem liệu có mối quan hệ tình hình nhiễm Cryptosporidiidae spp với triệu chứng tiêu chảy bò bê không Kết nghiên cứu thể bảng 4.5 Bảng 4.5 Tỷ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp bò theo triệu chứng lâm sàng Triệu chứng lâm sang Tỷ lệ nhiễm Cường độ nhiễm N n+ % ++ % +++ Không tiêu chảy 144 34 23.61% 26.47% 25 73.52% Tiêu chảy 66 30 45.45% 6.66% 93.33% 28 % 21 (Trong cột, giá trị có số mũ chữ khác khác mặt thống kê (P < 0,05)) Chú thích: n: Số mẫu kiểm tra n+: Số mẫu dương tính với Cryptosporidiidae spp %: Tỷ lệ mẫu dương tính Qua bảng 4.5 ta thấy Cryptosporidiidae spp có mặt 45.45% mẫu phân bị bị tiêu chảy bị khơng bị tiêu chảy 23.61% Cường độ nhiễm nặng(+++) bò bị tiêu chảy (93,33%) cao so với bị khơng bị tiêu chảy (73.52%) Điều cho thấy vai trò quan trọng Cryptosporidiidae spp hội chứng tiêu chảy bò Kết thu có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,05) tương đối giống với kết nhà nghiên cứu khác Theo Nguyễn Thị Sâm cộng (2007), nguy bị tiêu chảy bò nhiễm Cryptosporidiidae spp tỉnh Nam Trung Bộ Tây Nguyên, Việt nam 1,6 lần[20] Đinh Thị Bích Lân cộng (2011) cho thấy tỷ lệ nhiễm C parvumở bò bị tiêu chảy 58,39%, tỷ lệ nhiễm bị khơng bị tiêu chảy 28,18% Theo tổ chức giám sát sức khỏe động vật Mỹ năm 1994 (National Animal Health Monitoring System) nguy tiêu chảy bê nhiễm C parvum gấp 1,6 lần so với bê không bị nhiễm C parvum Còn nghiên cứu San Bemardino, California cho thấy nguy tiêu chảy bê nhiễm C parvum gấp 11 lần so với bê không bị nhiễm C parvum(47mp) PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Qua trình thu thập, xét nghiệm mẫu phân phương pháp nhuộm acid nhanh cải tiến (Zielh Neelsen) sử dụng buồng đếm Mc Master để kiểm tra tình hình nhiễm Cryptosporidiidae spp bị tai huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế, tơi có kết luận sau: Tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp chung huyện Quảng Điền 30.47% Tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp xã Quảng Phú, Quảng Ngạn, Quảng Lợi 22 30%, 32,22% 28,33% Tuy nhiên sai khác khơng có ý nghĩa mặt thống kê (P > 0,05) Tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp bò 29,16% bò đực 33,33% Tuy nhiên sai khác khơng có ý nghĩa mặt thống kê (P > 0,05) Tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp nhóm tuổi 6, 6-18 18 tháng tuổi 44,83%, 31,81% 26,08% Trong lứa tuổi nhiễm Cryptosporidiidae spp.cao lứa tuổi tháng (44,83%), lứa tuổi nhiễm Cryptosporidiidae spp thấp lứa tuổi 18 tháng (26,08%) Tuy nhiên, khác biệt tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp nhóm tuổi nghiên cứu khơng có ý nghĩa mặt thống kê (P > 0,05) Tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp có mặt bị bị tiêu chảy 45.45% cao nhiều so với tỷ lệ nhiễm bị khơng bị tiêu chảy 23.61% Kết thu nghiên cứu cho thấy tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp có ý nghĩa mặt thống kê (P < 0,05) 5.2 Kiến nghị - Trong phạm vi nghiên cứu hẹp với số lượng mẫu cịn hạn chế, để có kết xác phục vụ cho công tác nghiên cứu , học tập sản xuất nhóm chung tơi xin đưa số kiến nghị sau: - Đối với nhà trường cần tiếp tục triển khai đề tài diện rộng sâu tiêu sinh lý bệnh, thử nghiệm nhiều loại thuốc đặc trị hơn, xác định thời gian tái nhiễm… - Đối với địa phương kết nghiên cứu nhóm chúng tơi tài liệu bước đầu chưa tồn diện thỏa mãn trước mắt để phục vụ cho cơng tác chăn ni Bà xem tài liệu phòng trị bệnh cầu trùng bò - Tuyên truyền nâng cáo ý thức người chăn nuôi việc vệ sinh thú y, xử lý chất từ chăn nuôi 23 Tài Liệu Tham Khảo [1] Lê Công Dần, “Nghiên cứu nguyên gây tiêu chảy cấp người cryptosporidium parvum Mễ Trì Từ Liêm Hà Nội,” 2001 [2] Đinh Thị Bích Lân et al., “Xác định tỷ lệ nhiễm Cryptosporidium parvum bị kỹ thuật PCR,” Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y (Hội thú y Việt Nam), vol XX, no 7, pp 65–70, 2013 [3] G L M C Duhain, A Minnaar, and E M Buys, “Effect of Chlorine, Blanching, Freezing, and Microwave Heating on Cryptosporidium parvum Viability Inoculated on Green Peppers,” J Food Prot., vol 75, no 5, pp 936–941, 2012 [4] C M Carey, H Lee, and J T Trevors, “Biology, persistence and detection of Cryptosporidium Parvum and Cryptosporidium Hominis oocyst,” Water Res., no 38, pp 818 – 862, 2003 [5] J E Moore, L Crothers, B C Millar, E Crothers, and P J Rooney, “Low Incidence of Concurrent Enteric Infection Associated with Sporadic and OutbreakRelated Human Cryptosporidiosis in Northern Ireland,” J Clin microbiolgy, vol 40, no 8, p 3107–3108., 2002 [6] R Fayer, J M Trout, and M C Jenkins, “Infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts stored in water at environmental temperatures,” J Parasitol., vol 84, no 6, pp 1165–1169, 1998 [7] R Fayer and T Nerad, “Effects of low temperatures on viability of Cryptosporidium parvum oocysts,” Appl Environ Microbiol., vol 62, no 4, pp 1431–1433, 1996 [8] R Fayer, “Effect of high temperature on infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts in water,” Appl Env Microbiol, vol 60, no 8, pp 2732–2735, 1994 [9] R Fayer, J M Trout, and T Nerad, “Effects of a wide range of temperatures on infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts,” J Eukaryot Microbiol, vol 43, no 5, p 64, 1996 [10] K E Kniel et al., “Effect of organic acids and hydrogen peroxide on Cryptosporidium parvum viability in fruit juices.,” J Food Prot., vol 66, no 9, pp 24 1650–1657, 2003 [11] L J Robertson, A T Campbell, and H V Smith, “Survival of Cryptosporidium parvum oocysts under various environmental pressures,” Appl Environ Microbiol., vol 58, no 11, pp 3494–3500, 1992 [12] M B Jenkins, D D Bowman, and W C Ghiorse, “Inactivation of Cryptosporidium parvum oocysts by ammonia,” Appl Environ Microbiol., vol 64, no 2, pp 784–788, 1998 [13] D G Korich, J R Mead, M S Madore, N A Sinclair, and C R Sterling, “Effects of ozone, chlorine dioxide, chlorine, and monochloramine on Cryptosporidium parvum oocyst viability,” Appl Environ Microbiol., vol 56, no 5, pp 1423–1428, 1990 [14] Lê Thị Xuân and Trần Vinh Hiển, “Bệnh trùng bào tử (Coccydia) đường ruột,” Tạp chí y học thành phố Hồ Chí Minh, vol 1, no 2, pp 22 – 27, 1997 [15] M F Heyworth, “Immunology of giardia and cryptosporidium infections,” J Infect Dis., vol 166, no 3, pp 465–472, 1992 [16] Greg Hannahs and Kenyon College, “Cryptosporidium parvum: an emerging pathogen.” [Online] Available: http://biology.kenyon.edu/slonc/bio38/hannahs/crypto.htm [17] Lê Công Dần, Phùng Khắc Cam, and Hoàng Thủy Long, “Bệnh tiêu chảy cấp Cryptosporidium,” Tạp chí y học dự phịng, p 25, 1998 [18] Lê Quang Đang, Trần Thị Kim Dung, Trần Phủ Minh Siêu, Đình Nguyễn Huy Mẫn, and Trần Vinh Hiển, “Tình hình nhiễm trùng bào tử đường ruột Cryptosporidium sp, Trung tâm bệnh Nhiệt Đới thành phố Hồ Chí Minh từ 1/1996 đến 7/1997,” Y học thành phố Hồ Chí Minh, vol Số đặc b, pp 41 – 45, 1997 [19] Nguyễn Thị Sâm, Nguyễn Đức Tân, Lê Đức Quyết, Lê Hướng Ngọc Lức, Nguyên Văn Thoại, and Yutaka Nakai, “Tình hình nhiễm Cryptosporidium spp.trên đàn bị số tỉnh Nam Trung Bộ Tây Nguyên, bước đầu sử dụng kỷ thuật sinh học phân tử để xác định thành phần loại,” Tạp chí Nơng Nghiệp phát triển Nông thôn, pp 36 – 40, 2007 [20] Y N Nguyễn Thị Sâm, Nguyễn Đức Tân, Lê Đức Quyết, Lê Hướng Ngọc Lức, 25 Nguyên Văn Thoại, “Tình hình nhiễm Cryptosporidium spp.trên đàn bị số tỉnh Nam Trung Bộ Tây Nguyên, bước đầu sử dụng kỷ thuật sinh học phân tử để xác định thành phần loại,” Tạp chí Nơng Nghiệp phát triển Nơng thôn, vol Số Đặc B, pp 36 – 40, 2007 26 ... nhiều tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp xã Quảng Phú, Quảng Lơi, Quảng Ngạn Từ kết thấy tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp xã Phong Sơn tương đối cao (32.22%), tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp xác. .. với Cryptosporidiidae spp %: Tỷ lệ mẫu dương tính %: Tỷ lệ mẫu dương tính Qua bảng 4.3 ta thấy, tỷ lệ nhiễm Cryptosporidiidae spp bò bò đực tương ứng 29.16% 33.33% Tuy nhiên, phân tích tỷ lệ nhiễm. .. cứu - Xác định tỷ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp đàn bị, bê ni xã Quảng Lợi , huyện Quảng Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế - So sánh tỉ lệ nhiễm cường độ nhiễm Cryptosporidiidae spp theo