Đang tải... (xem toàn văn)
thực hành chủ động công nghệ sinh học thực vậtKHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG SUCROSE VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO Ở CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopis Javanica (Blume) Hook.F.)KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG SUCROSE VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO Ở CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopis Javanica (Blume) Hook.F.)KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG SUCROSE VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO Ở CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopis Javanica (Blume) Hook.F.)KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG SUCROSE VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO Ở CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopis Javanica (Blume) Hook.F.)KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG SUCROSE VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO Ở CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopis Javanica (Blume) Hook.F.)
BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG THỰC HÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC VẬT ĐỀ TÀI KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG SUCROSE VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO Ở CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopis Javanica (Blume) Hook.F.) GVHD: Trịnh Thị Hương Sinh viên thực hiện: Nhóm QTTT THTV QAT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, THÁNG 04 NĂM 2022 THỰC HÀNH CHỦ ĐỘNG KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ ĐƯỜNG SUCROSE VÀ NƯỚC DỪA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH CHỒI IN VITRO Ở CÂY ĐẢNG SÂM (Codonopis Javanica (Blume) Hook.F.) Mục đích - Khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường sucrose nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Đảng sâm (Codonopis Javanica (Blume) Hook.F.) Giới thiệu tổng quan Đảng sâm (Codonopsis Javanica (Blume) Hook.f et Thomson) hay gọi sâm dây thuộc họ Hoa chng (Campanulaceae), lồi thân thảo, sống nhiều năm Bộ phận dùng làm thuốc đảng sâm rễ, với thành phần saponin (loại saponin chủ yếu saponin triterpenoid), polysaccharide, phenylpropanoid, alkaloid, triterpenoid acid amin thiết yếu Các hoạt chất có đảng sâm giúp cho hoạt động trao đổi chất thể tốt hơn, đảng sâm có tác dụng hạ huyết áp, tăng cường miễn dịch thể, có tác dụng kháng viêm, giảm ho, kháng khuẩn, làm tăng số lượng hồng cầu, làm giảm số lượng bạch cầu, làm tăng nhanh máu đơng khơ mà khơng có tác dụng tán huyết Trong đơng y, đảng sâm ví “nhân sâm người nghèo” có cơng dụng nhân sâm lại rẻ tiền Từ công dụng giá thành không đắt nhân sâm làm cho việc sử dụng đảng sâm trở nên phổ biến rộng rãi Tuy nhiên, nạn tàn phá rừng, khai thác mức làm cho vùng phân bố đảng sâm tự nhiên bị thu hẹp nhanh chóng có nguy cạn kiệt, loài đưa vào danh mục nguy cấp sách đỏ Việt Nam (2007) Trong nguồn giống đảng sâm phục vụ trồng trọt chủ yếu cung cấp phương pháp gieo hạt, mà phương pháp gieo hạt cho có sức sống yếu, chất lượng khơng đồng Do đó, công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng rộng rãi nhân giống loại dược liệu để sản xuất số lượng lớn giống bệnh tương đối đồng mặt di truyền thời gian ngắn Và nuôi cấy mơ có mặt chất bổ sung đóng vai trị quan trọng Các chất bổ sung bổ sung vào môi trường nuôi cấy với hàm lượng thời gian thích hợp tạo điều kiện nuôi cấy tối ưu cho mẫu nuôi cấy sinh trưởng phát triển tốt Và thực hành đề cập ảnh hưởng số chất bổ sung tiêu biểu đường sucrose nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Đảng sâm Codonopsis javanica (Blume) Hook.f in vitro Thiết bị - Dụng cụ Bảng 1: Dụng cụ - thiết bị cho thực hành STT 10 11 12 13 14 15 16 17 Dụng cụ - Thiết bị Erlen 250ml Cốc thủy tinh Ống đong Dao mổ Kẹp Ống nghiệm Φ25 Bình tam giác Đũa thủy tinh Đèn cồn Xoong nhôm Máy đo pH Cân số Nồi hấp Tủ cấy Máy khuấy từ gia nhiệt Bếp điện Lò vi sóng Ngun liệu - Hóa chất - Mơi trường Bảng 2: Nguyên liệu - Hóa chất cho thực hành STT Tên nguyên liệu - hóa chất Cây Đảng sâm Đơn vị tính Số lượng Bình 5 10 Cồn 98o, 70o Bông thấm NaOCl 2% Nước cất vô trùng Môi trường MS Agar Đường Sucrose Nước dừa 11 Indole-3-butyric acid (IBA) Benzylaminopurine (BAP) Lít Kg Lít Lít g/l g/l g/l ml/l mg/l 0.2 0.5 mg/l thí nghiệm Theo kế hoạch bố trí Tổ chức thực hành 5.1 Chuẩn bị vật liệu, môi trường điều kiện thí nghiệm Vật liệu: Cây đảng sâm ni cấy phịng thí nghiệm Cơng nghệ tế bào thực vật, trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TP Hồ Chí Minh Mẫu: Đoạn thân chứa chồi ngủ có kích thước khoảng 1cm Mơi trường ni cấy: Mơi trường MS (Murashige Skoog, 1962) Nguyên tắc pha môi trường nuôi cấy với thành phần hàm lượng phù hợp: - Nghiên cứu ảnh hưởng chất bổ sung công thức môi trường khác để đánh giá khả nhân nhanh chồi Đảng sâm sau thời gian tuần: Mơi trường MS có bổ sung 0,6 mg/l BAP + 0,6 mg/l IBA + 9,0g/l agar + chất bổ sung (Đường sucrose, nước dừa) với nồng độ khác Lưu ý: Cần thêm 30g/l đường sucrose nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi - Cách pha môi trường: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường: Cân 4,4g/l môi trường MS cho vào cốc 500mL hòa tan nước cất → Thêm 0,6 mg/l BAP + 0,6 mg/l IBA → Khuấy dùng ống đong định mức đến 1000mL → Đổ tồn mơi trường vào xoong nhơm dùng máy đo pH (Chỉnh pH HCl NaOH cho pH môi trường nằm khoảng 5.7 - 5.8) → Bổ sung 9,0g/l agar vào môi trường → Đun bếp điện cho môi trường tan → Rót mơi trường cốc, cốc chứa 250mL môi trường → Bổ sung hàm lượng đường sucrose vào cốc tương ứng sau: 10g/l, 20g/l, 30g/l, 40g/l → Khuấy đổ dung dịch vào chai thủy tinh 100mL, chai khoảng 20 - 25mL → Hấp khử trùng môi trường áp suất 1,1 atm, nhiệt độ 121oC 20 phút Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nồng độ nước dừa: Cân 4,4g/l môi trường MS cho vào cốc 500mL hòa tan nước cất → Thêm 30g/l đường sucrose + 0,6 mg/l BAP + 0,6 mg/l IBA → Khuấy dùng ống đong định mức đến 1000mL → Đổ tồn mơi trường vào xoong nhơm dùng máy đo pH (Chỉnh pH HCl NaOH cho pH môi trường nằm khoảng 5.7 - 5.8) → Bổ sung 9,0g/l agar vào môi trường → Đun bếp điện cho môi trường tan → Rót mơi trường cốc, cốc chứa 250mL môi trường → Bổ sung hàm lượng nước dừa vào cốc tương ứng sau: 50ml/l, 100ml/l, 150ml/l, 200mL/l → Khuấy đổ dung dịch vào chai thủy tinh 100mL, chai khoảng 20 - 25mL → Hấp khử trùng môi trường áp suất 1.1 atm, nhiệt độ 121oC 20 phút Môi trường đối chứng: Ảnh hưởng hàm lượng đường sucrose: 4,4g/l môi trường MS có bổ sung 0,6 mg/l BAP + 0,6 mg/l IBA + 9,0g/l agar Ảnh hưởng hàm lượng nước dừa: 4,4g/l môi trường MS có bổ sung 30g/l đường sucrose + 0,6 mg/l BAP + 0,6 mg/l IBA + 9,0g/l agar Cách pha môi trường đối chứng tương tự cách pha mơi trường thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường sucrose, nước dừa Điều kiện thí nghiệm: Các thí nghiệm in vitro tiến hành thời gian chiếu sáng 12h/ngày, độ ẩm phịng ni cấy 50-60%, nhiệt độ 25 ± 2oC, cường độ chiếu sáng 2500 - 3000 Lux 5.2 Ảnh hưởng chất bổ sung đến khả nhân nhanh chồi Đảng sâm in vitro 5.2.1.Hàm lượng đường sucrose - Trong tủ cấy vô trùng, dùng kẹp vô trùng gắp cắt lấy đoạn thân có chứa chồi ngủ kích thước khoảng 1cm - Dùng kẹp vơ trùng chuyển đoạn thân mang mắt ngủ vào môi trường đối chứng (Môi trường MS có bổ sung 0,6 mg/l BAP + 0,6 mg/l IBA + 9,0g/l agar) mơi trường thí nghiệm chứa 10g/l, 20g/l, 30g/l, 40g/l đường sucrose - Theo dõi kết Thời gian Sucrose Số (g/l) ĐC chồi/mẫu lá/chồi 3,5 3,5 10 4,0 Số 3,5 Chiều Hình thái chồi cao chồi 0,5 Chồi phát triển 0,65 xanh tốt Chồi phát triển xanh tốt, chồi to 20 7,0 4,5 0,75 bề ngang Chồi phát triển xanh tốt, chồi ốm tuần 30 1,5 3,0 0,35 cao Chồi phát triển 40 0,5 1,5 0,05 không xanh tốt Chồi phát triển có tượng bị úa vàng Hình Hình ảnh Đảng sâm sinh trưởng phát triển sau tuần nghiệm thức môi trường khảo sát ảnh hưởng hàm lượng đường 5.2.2.Hàm lượng nước dừa Trong tủ cấy vô trùng, dùng kẹp vô trùng gắp cắt lấy đoạn thân có chứa chồi ngủ kích thước khoảng 1cm Dùng kẹp vô trùng chuyển đoạn thân mang mắt ngủ vào môi trường đối chứng (Mơi trường MS có bổ sung 30g/l đường sucrose + 0,6 mg/l BAP + 0,6 mg/l IBA + 9,0g/l agar) mơi trường thí nghiệm chứa 50ml/l, 100ml/l, 150ml/l, 200mL/l nước dừa Theo dõi kết Thời gian tuần Nước Số dừa(ml/l) ĐC chồi/mẫu lá/chồi 3,0 3,0 50 3,5 Số 3,5 Chiều cao Hình thái chồi chồi 0,4 Chồi phát triển 0,45 xanh tốt Chồi phát triển xanh tốt, chồi ốm 100 150 5,0 5,0 4,5 4,0 0,6 cao Chồi phát triển 0,3 bề ngang Chồi phát triển không xanh 200 6,0 5,5 1,25 tốt, vàng Chồi phát triển xanh tốt Hình Hình ảnh Đảng sâm sinh trưởng phát triển sau tuần nghiệm thức môi trường khảo sát ảnh hưởng hàm lượng nước dừa Chỉ tiêu đánh giá Sau tuần khảo sát tiêu sau: Tỷ lệ mẫu sống Tỷ lệ mẫu bật chồi Số chồi/mẫu Số lá/chồi Chiều cao chồi Hình thái chồi Nhận xét kết luận Nhận xét: Ảnh hưởng đường sucrose: Từ kết thực nghiệm sau tuần nuôi cấy cho thấy, nghiệm thức mơi trường có bổ sung hàm lượng đường sucrose với nồng độ thích hợp cho khả nhân chồi, chiều cao chồi phát triển vượt trội so với môi trường đối chứng (Không bổ sung đường) Tuy nhiên, hàm lượng đường sucrose bổ sung vào môi trường nuôi cấy với hàm lượng cao ảnh hưởng đến áp suất thẩm thấu môi trường dinh dưỡng với môi trường nội bào mẫu chồi, làm giảm khả hấp thụ chất dinh dưỡng từ làm suy yếu sinh trưởng chồi nuôi cấy Trong nghiệm thức mơi trường có bổ sung đường sucrose nghiệm thức mơi trường có bổ sung 20g/l đường sucrose cho kết tốt với số lượng chồi nhiều, chiều cao số lá/chồi hẳn nghiệm thức mơi trường cịn lại Cịn nghiệm thức mơi trường chứa 40g/l đường số chồi ít, chiều cao chồi thấp, số lá/chồi nghiệm thức môi trường Vậy, nghiệm thức môi trường nuôi cấy chứa 20g/l đường sucrose môi trường phù hợp cho khảo sát nhân nhanh chồi Đảng sâm in vitro Ảnh hưởng nước dừa: Dựa vào kết thực nghiệm sau tuần nuôi cấy cho thấy, hầu hết nghiệm thức mơi trường có bổ sung nước dừa với hàm lượng thích hợp cho khả nhân chồi, sinh trưởng phát triển chồi vượt trội so với môi trường đối chứng (Không bổ sung nước dừa) Trong nghiệm thức mơi trường có bổ sung nước dừa nghiệm thức mơi trường có bổ sung 200ml/l nước dừa cho kết tốt với số lượng chồi nhiều, chiều cao số lá/chồi hẳn nghiệm thức mơi trường cịn lại Kết luận: Đường nguồn carbon quan trọng nuôi cấy mơ, tùy thuộc vào mục đích ni cấy mà nồng độ bổ sung vào mơi trường thay đổi Nước dừa hợp chất hữu giàu chất khống có chứa myo-instol, số acid amin, Do đó, nước dừa có tác dụng kích thích phân hóa nhân nhanh chồi Qua thí nghiệm khảo sát thấy, ni cấy Đảng sâm in vitro, môi trường MS có bổ sung 0,6 mg/l BAP + 0,6 mg/l IBA + 30g/l sucrose + 9,0g/l agar + 200ml/l nước dừa môi trường tốt cho phát sinh, sinh trưởng phát triển chồi Đảng sâm in vitro Tài liệu tham khảo Bui Thi Ha, Nguyen Thi Tam (2021) “Effects of some supplements on the growth of Dang sam (Codonopis Javanica (Blume) Hook F.) in vitro” ... Bảng 1: Dụng cụ - thiết bị cho th? ??c hành STT 10 11 12 13 14 15 16 17 Dụng cụ - Thiết bị Erlen 250ml Cốc th? ??y tinh Ống đong Dao mổ Kẹp Ống nghiệm Φ25 Bình tam giác Đũa th? ??y tinh Đèn cồn Xoong nhôm... tương ứng sau: 10 g/l, 20g/l, 30g/l, 40g/l → Khuấy đổ dung dịch vào chai th? ??y tinh 10 0mL, chai khoảng 20 - 25mL → Hấp khử trùng môi trường áp suất 1, 1 atm, nhiệt độ 12 1oC 20 phút Th? ? nghiệm khảo... tương ứng sau: 50ml/l, 10 0ml/l, 15 0ml/l, 200mL/l → Khuấy đổ dung dịch vào chai th? ??y tinh 10 0mL, chai khoảng 20 - 25mL → Hấp khử trùng môi trường áp suất 1. 1 atm, nhiệt độ 12 1oC 20 phút Môi trường
