Slide 1 NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG CỦA VIÊN NÉN CAPECITABINE 500 MG TRÊN CHÓ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ LC/MS/MS TS Chử Văn Mến Trung tâm thử nghiệm lâm sàng và tương đương sinh học HỘI NGHỊ[.]
HỘI NGHỊ NỘI KHOA TOÀN QUỐC LẦN THỨ XII NGHIÊN CỨU SINH KHẢ DỤNG CỦA VIÊN NÉN CAPECITABINE 500 MG TRÊN CHÓ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ LC/MS/MS TS Chử Văn Mến Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học ĐẶT VẤN ĐỀ Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học ĐẶT VẤN ĐỀ Ưu điểm phương pháp LC/MS/MS • • • Độ nhạy cao thích hợp phân tích thuốc huyết tương Thời gian phân tích ngắn so với phương pháp khác Phân tích đồng thời nhiều chất, cho độ đặc hiệu, độ xác cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học ĐẶT VẤN ĐỀ Đề tài “Nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng viên nén bao phim chứa capecitabine” với mục tiêu: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng Capecitabine huyết tương chó sắc ký lỏng khối phổ Đánh giá tương đương sinh học viên nén chứa capecitabine chó thực nghiệm Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học HỘI NGHỊ NỘI KHOA TOÀN QUỐC LẦN THỨ XII NGUYÊN VẬT LIỆU & PHƯƠNG PHÁP Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học VẬT LIỆU & THIẾT BỊ Thiếtchuẩn: Bị •• Chất Capecitabine chuẩn VẬT LIỆU & THIẾT BỊ Động vật thí nghiệm, thuốc thử, thuốc đối chứng • Động vật thí nghiệm: chó giống đực, khỏe mạnh, cân nặng 10 - 12 kg, • Mẫu trắng: Huyết tương chó, • Thuốc thử (T): viên nén Capecitabine 500 mg; Công ty CP Dược- TTB Y tế Bình Định ( BIDIPHAR) sản xuất, • Thuốc đối chứng (R): viên nén bao phim Xeloda chứa Capecitabine 500 mg ( Roche, Thụy Sỹ) Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG • Khảo sát điều kiện sắc kí khối phổ - Xác định thông số tối ưu cho MS/MS - Xác định điều kiện sắc kí • Khảo sát quy trình xử lí mẫu - Tủa protein - Kiềm hóa huyết tương Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG • Tính tương thích hệ thống • Tính chọn lọc - đặc hiệu • Đường chuẩn khoảng tuyến tính • Giới hạn định lượng (LOQ) • Độ đúng- độ xác • Tỷ lệ thu hồi • Độ ổn định Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC Chó thực nghiệm Giai đoạn Giai đoạn Nhóm Thuốc thử T Thuốc đối chiếu R Nhóm Thuốc đối chiếu R Thuốc thử T Xác định thông số DĐH Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN SỰ PHÙ HỢP CỦA HỆ THỐNG SẮC KÝ AS STT TB CV (%) IS Tỷ Đáp ứng lệAS/IS Rt Đáp ứng Rt 0,65 0,65 0,65 0,65 0,65 0,65 0,65 2659435 2663505 2679414 2662085 2651727 2663414 2663263 0,81 0,81 0,81 0,81 0,81 0,81 0,81 2118422 2050961 2039668 2075831 2050238 2062857 2066330 1,255 1,299 1,314 1,282 1,293 1,291 1,289 0,3 1,4 1,5 Tính tương thích cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘ CHỌN LỌC- ĐẶC HIỆU Capecitabine Tỷ lệ STT Blank/ Blank LLOQ LLOQ Blank 169 28678 1566 36604 675 33302 150 31610 129 37901 100 30500 Đạt ( 352.18 2.414e+007 Felodipin 0.81 2163493 100 % 0.20 Chọn lọc đặc hiệu cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG DƯỚI (LLOQ) ZE Smooth(Mn,1x2) MRM of channels,ES+ 360.05 > 244.02 2.608e+004 Capecitabin 0.65 2051 100 % ZE Smooth(Mn,1x2) MRM of channels,ES+ 384.1 > 352.18 2.084e+007 Felodipin 0.81 1807559 100 % 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 Đạt yêu cầu nồng độ 20 ng/ml Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học 1.40 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐƯỜNG CHUẨN Độ xác (% so với nồng độ lý thuyết) Nồng độ CC1 CC2 CC3 CC4 CC5 SC1 SC2 SC3 SC4 SC5 SC6 SC7 SC8 100,4 98,0 102,2 97,1 105,5 102,4 98,4 96,0 100,3 96,4 105,5 98,1 103,9 105,4 99,2 91,2 99,2 101,9 100,4 99,1 100,7 100,9 102,2 95,5 102,2 94,1 96,6 105,2 109,6 102,1 94,3 95,9 98,3 105,4 96,3 102,4 99,9 101,3 105,4 90,9 Kết luận Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Độ xác cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘ ĐÚNG VÀ ĐỘ CHÍNH XÁC TRONG NGÀY Mẫu NC (%) Độ đúng(%) LLOQ (20 ng/mL) 19,9 ± 8,1 100,2 ±8,0 LQC(60 ng/mL) 65,3 ±13,9 108,9 ±13,9 MQC (2500 ng/mL) 2278,0 ±7,2 91,1 ±7,2 HQC (4000 ng/mL) 3728,7 ±3,0 93,2 ±3,0 Độ đúng, độ xác cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘ NHIỄM CHÉO (CARRY-OVER) SST Độ nhiễm chéo AS (%) 1,59 5,03 3,11 1,82 1,03 1,44 Đạt/ Không Độ nhiễm chéo Đạt/ Không đạt IS (%) đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt 0,03 0,02 0,03 0,03 0,02 0,03 Không bị nhiễm chéo Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Ỷ LỆ THU HỒI LQC MQC HQC STT Nền Huyết Huyết Huyết Nền mẫu Nền mẫu mẫu tương tương tương 117712 57276 5131660 2413374 7639520 3723857 116558 65040 4029828 2398583 7486843 4468645 129929 55932 6163489 2681405 7751463 4419254 123044 62706 4571135 2439185 7849912 4036143 115343 57783 5114416 2675348 7574336 4613783 TB 120517 59747 5002106 2521579 7660415 4252336 CV (%) 5,0 6,6 15,8 5,7 1,9 8,6 (%) 90,1 91,7 100,9 Trung bình 94,2 (%) Tỷ lệ thu hồi cao IS Huyết tương 2859490 1682482 2649467 1747210 3030079 1698576 2696481 1690586 2979224 1699737 2842948 1703718 5,9 1,5 109,0* Nền mẫu KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ẢNH HƯỞNG CỦA NỀN MẪU STT MFAS LQC HQC 0,571 0,769 0,567 0,782 0,628 0,799 0,541 0,916 0,564 1,085 0,433 1,209 Trung bình MFIS LQC HQC 0,993 0,868 0,928 0,882 0,904 0,904 0,846 0,966 0,860 1,123 0,844 1,156 CV (%) Ảnh hưởng thấp Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học MFAS/MFIS LQC HQC 0,575 0,819 0,611 0,849 0,694 0,878 0,639 0,893 0,656 1,011 0,513 1,134 0,615 0,931 10,5 12,8 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN ĐỘ ỔN ĐỊNH AS (30 µg/mL) IS (5 µg/mL) STT Ban đầu (0h) Sau 5(h) Ban đầu (0h) Sau 5(h) 220818 30,013 31,757 31,549 220818 30,660 31,238 31,645 220818 4,756 4,760 4,731 220818 4,916 4,918 4,920 Trung bình 31,106 31,181 4,749 4,918 CV (%) 3,1 1,6 0,327 0,040 Độ lệch (%) - 0,2 - 3,6 Kết luận - Đạt - Đạt Độ ổn định cao Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tương đương Đường cong nồng độ thuốc trung bình theo thời gian 24 cá thể chó sau uống thuốc thử T thuốc chứng R Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN CÁC THÔNG SỐ DĐH CỦA CAPECITABINE Nhóm Cmax ± SD (ng/ml) AUC0-24 ± SD (ng,h/ml) AUC0-∞ ± SD (ng,h/ml) Tmax ± SD (giờ) Thử 6209,90 ± 2553,31 12632,40 ± 3851,64 12632,55 ± 3851,64 1,69 ± 0,29 Chứng 6033,20 ± 1960,53 12066,87 ± 3992,88 12067,00± 3992,96 1,63 ± 0,30 Trung tâm thử nghiệm lâm sàng tương đương sinh học