TÁCH CHIẾT PLASMID BẰNG PHƯƠNG PHÁP SDS

TÁCH CHIẾT PLASMID BẰNG PHƯƠNG PHÁP SDS-KIỀM - Hoạt hoá chủng E.coli DH5α mang plasmid cách cấy colony chủng - vào 5ml môi trường LB- kháng sinh tương ứng, ủ lắc 37oC qua đêm Ly tâm thu sinh khối 13000 vòng/phút phút nhiệt độ phịng Thêm 100µl S1, suspend kỹ Thêm 200µl S2, đảo nhẹ vài lần, ủ phút 4oC Thêm 150µl S3, đảo nhẹ vài lần, ủ phút 4oC Ly tâm 13000 vòng/phút 10 phút 4oC, thu dịch Bổ sung 1µl Rnase 10mg/ml Ủ hỗn hợp 37oC (hoặc cất 4oC qua đêm) Bổ sung 250µl phenol 250µl choloform, vortex phút Ly tâm 13000 - vòng/phút 10 phút 4oC thu phần dịch Tủa DNA plasmid 1ml ethanol tuyệt đối, lạnh Ly tâm 13000 vòng/phút - 10 phút 4oC, loại bỏ phần dịch nổi, thu nhận phần tủa Rửa tủa 1ml ethanol 70%, ly tâm 13000v/p phút Loại bỏ nhanh phần dịch để khô tủa nhiệt độ phịng Hồ tủa vào 30µl TE, bảo quản mẫu -20 o - C Điện di kiểm tra plasmid tách chiết gel agarose 1% đo OD Hoá chất tách plasmid từ vi khuẩn: - S1: Glucose 50mM, Tris-HCl 2,5mM pH 8,0, EDTA 10mM pH 8,0 S2 (pha trước sử dụng): 100µl SDS 10%, 40µl NaOH 5N, 860µl dH2O S3: KOAc 5M, Glacial acetic 0,2M, pH 4,8 Dung dịch TE: Tris-HCl 10mM pH 8,0, EDTA 1mM pH 8,0 Phenol bão hoà TE (pH 8,0) (giữ 4oC) Chloroform (giữ 4oC) Rnase 10mg/ml (giữ -20oC) Ethanol 100% lạnh (giữ -20oC) Ethanol 70% lạnh (giữ -20oC)