(LUẬN văn THẠC sĩ) đánh giá tình trạng người mang ký sinh trùng sốt rét không biểu hiện triệu chứng bằng kỹ thuật RT – qPCR tại huyện tuy đức, tỉnh đắk nông

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN ĐINH THỊ NGỌC DUYÊN ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NGƢỜI MANG KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT KHÔNG BIỂU HIỆN TRIỆU CHỨNG BẰNG KỸ THUẬT RT-qPCR TẠI HUYỆN TUY ĐỨC, TỈNH ĐĂK NÔNG Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8.42.01.14 Hƣớng dẫn khoa học: TS.BS Huỳnh Hồng Quang TS Trần Thanh Sơn download by : skknchat@gmail.com LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng với cán y tế, nghiên cứu viên Viện Sốt rét-Ký sinh trùng-Côn trùng Quy Nhơn giảng viên Đại học Quy Nhơn đồng thực Các số liệu kết nêu luận văn hoàn toàn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Đinh Thị Ngọc Duyên download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết ,tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tồn Q thầy trƣờng Đại học Quy Nhơn, Quý thầy cô Khoa Khoa học Tự nhiên Đồng thời, cho tơi gửi lời cảm ơn sâu sắc, lịng kính trọng biết ơn đến hai giáo viên trực tiếp hƣớng dẫn : TS BS Huỳnh Hồng Quang TS Trần Thanh Sơn - hai thầy giáo dành nhiều thời gian, tâm huyết , tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức, giúp đỡ chỉnh sửa toàn đề cƣơng ,luận văn nhƣ động viên tơi q trình học tập làm luận văn Xin trân trọng cảm ơn đến Ban Lãnh đạo, Quý thầy cô, đồng nghiệp công tác Khoa Nghiên cứu Điều trị, Khoa Xét nghiệm - Sinh học phân tử thuộcViện Sốt rét - Ký sinh trùng - Côn trùng Quy Nhơn tạo điều kiện cho tham gia thực hành tốt thực địa nhƣ la bơ, đóng góp ý kiến sâu sắc thảo luận văn hoàn chỉnh Xin trân trọng cảm ơn đến Ban Giám hiệu nhà trƣờng, Phòng Đào tạo Sau đại học Trƣờng Đại học Quy Nhơn, Khoa Khoa học Tự nhiên giúp cho tơi hồn thiện hồ sơ dự tuyển cao học, đồng thời tạo điều kiện thuận lợi để học tập nghiên cứu Trân trọng cảm ơn BGH nhà trƣờng, Quý thầy cô đồng nghiệp Trƣờng THPT số Tuy Phƣớc, Tỉnh Bình Định – nơi công tác chia sẻ phần trách nhiệm, công việc lịch giảng dạy linh hoạt suốt thời gian theo học lớp Đào tạo Thạc sĩ , Ngành Sinh học thực nghiệm, Trƣờng Đại học Quy Nhơn Kính gửi lời cảm ơn đến Cha mẹ - ngƣời mong muốn tiến bộ, thành đạt Cảm ơn ông xã trai động lực mạnh mẽ, gánh vác việc gia đình cho tơi n tâm học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Cuối cùng, xin cảm ơn đến tất ngƣời dân , trạm y tế thôn, buôn chia sẻ thông tin mẫu bệnh phẩm để số liệu xét nghiệm nghiên cứu cách đầy đủ Tác giả luận văn Đinh Thị Ngọc Duyên download by : skknchat@gmail.com ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NGƢỜI MANG KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT KHÔNG BIỂU HIỆN TRIỆU CHỨNG BẰNG KỸ THUẬT RT-qPCR TẠI HUYỆN TUY ĐỨC, TỈNH ĐĂK NÔNG Học viên: Đinh Thị Ngọc Duyên | Chuyên ngành: Sinh học Thực nghiệm Mã số: 8.42.01.14 | Khóa: 21, Trƣờng Đại học Quy Nhơn Giới thiệu: Sốt rét vấn đề y tế công cộng quan trọng tỷ lệ mắc chúng có xu hƣớng giảm vùng sốt rét lƣu hành Việt Nam, song ổ chứa tiềm ẩn ngƣời mang trùng không triệu chứng (NMTKTC) thách thức lộ trình loại trừ sốt rét Nghiên cứu tiến hành nhằm xác định tỷ lệ NMTKTC kỹ thuật RT-qPCR với đích mRNA tỉnh Đăk Nơng Phƣơng pháp nghiên cứu: Nghiên cứu cắt ngang dựa vào cộng đồng giai đoạn (20192020) Xét nghiệm lam máu nhuộm giêm sa, test nhanh RT-qPCR để chẩn đốn sốt rét Phân tích liệu Excel v.2010 Kết quả: Trong số 2809 ngƣời điều tra, tỷ lệ NMTKTC chung 4,6% theo vùng SRLH từ cao đến thấp xã Quảng Trực, Đăk Ngo Đăk Buk So thời điểm mùa mƣa mùa khô cho tỷ lệ lần lƣợt 12,8% so với 12,6%; 3,6% so với 3,6%, 1,5% so với 1,8%, thay đổi tỷ lệ hai mùa khơng có ý nghĩa, nhƣng khác biệt có ý nghĩa vùng lƣu hành Kết luận: Cùng sốt rét có triệu chứng, NMTKTC làm tăng thêm gánh nặng bệnh tật vùng nghiên cứu Do đó, lộ trình LTSR theo định hƣớng đến năm 2030, NMTKTC khía cạnh cần quan tâm Từ khóa: Ký sinh trùng sốt rét máu khơng triệu chứng, tỷ lệ mắc EVALUATION OF ASYMPTOMATIC MALARIA PARASITEMIA BY RT-qPCR TECHNIQUE IN DISTRICTS OF TUY DUC, DAK NONG PROVINCE Backgrounds: Malaria is still an important public health and its prevalence has been declining in malaria endemic zones in Vietnam, but hidden reservoir of asymptomatic parasitemia as challenge in malaria elimination roadmap This study aimed to determine the prevalence of asymptomatic subjects by one-step reverse transcription-quantitative PCR take mRNA targets (RT-qPCR) technique in Dak Nong province Methods: A community based cross-sectional study was conducted in 2019-2020 The multistage sampling technique was employed to select 2940 participants in total of three communes per district A standard microscopy and rapid diagnostic test were used to diagnosis, and RT-qPCR to diagnosis Analyzed data using microsoft excel version 2010 Results: Analyzed data from 2809 subjects, 4.6% were confirmed to be asymptomatic malaria parasite carriers According to high, moderate, and low endemic communes of Quang Truc, Dak Ngo, and Dak Buk So in the mid-wet and mid-dry season surveyed point have 12.8% vs 12.6%; 3.6% vs 3.6%, and 1.5% vs.1.8%, respectively, non-significanntly changed in two seasons, but significantly changed between different malaria endemic zone Conclusions: Along with symptomatic malaria, asymptomatic carriers will be plus more burden of disease in the study sites Therefore, on the way for malaria elimination back on the agenda by 2030, asymptomatic malaria need to concern Key words: Asymptomatic malaria parasitemia, prevalence download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài luận văn Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn Bố cục luận văn Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình sốt rét giới Việt Nam qua báo cáo năm 2017-2018 1.1.1 Trên toàn cầu 1.1.2 Tình hình sốt rét Việt Nam năm 2017-2018 1.2 Một số phƣơng pháp phát hiện, chẩn đoán sốt rét 11 1.2.1 Xét nghiệm lam máu nhuộm giêm sa 12 1.2.3 Xét nghiệm sinh học phân tử chẩn đoán ký sinh trùng sốt rét 15 1.3 Một số nghiên cứu đánh giá ngƣời mang KSTSR không triệu chứng 16 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ HƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 38 2.1.1 Tiêu chuẩn tuyển chọn 38 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 38 2.2 Địa điểm thời gian 38 2.3 Thiết kế nghiên cứu 40 2.4 Cỡ mẫu 40 2.5 Thu thập mẫu nghiên cứu 42 download by : skknchat@gmail.com 2.6 Quy trình nghiên cứu 42 2.7 Biến số số đánh giá nghiên cứu 42 2.8 Kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 44 2.8.1 Xét nghiệm lam máu soi KHV 44 2.8.2 Kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán nhanh SD-Bioline HRP2/pLDH Pf/Pv 44 2.8.3 Kỹ thuật phân tử RT-qPCR phát loài thể Plasmodium spp 45 2.9 Phân tích số liệu 46 2.9.1 Phân tích liệu 46 2.9.2 Dự kiến kết đầu 46 2.10 Khía cạnh đạo đức nghiên cứu 46 2.10.1 Sự chấp thuận Hội đồng Đạo đức 47 2.10.2 Cam kết tham gia nghiên cứu thông qua 47 2.10.3 Quyền lợi đối tƣợng tham gia 47 2.10.4 Bảo mật thông tin số liệu 47 2.10.5 Dịch vụ chăm sóc y tế 48 2.10.6 Sự khích lệ động viên đối tƣợng tham gia hồn tất 48 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 49 3.1 Đặc điểm chung nhóm đối tƣợng tham gia nghiên cứu 49 3.2 Tỷ lệ nhiễm ký sinh trùng ngƣời không triệu chứng RTqPCR 52 3.2.1 Tỷ lệ bệnh nhân có KST Plasmodium spp dƣơng tính khơng triệu chứng 52 3.2.2 Kết định loài Plasmodium spp ca dƣơng tính xã 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 81 KẾT LUẬN 81 download by : skknchat@gmail.com 1.1 Tỷ lệ nhiễm KSTSR thể vơ tính ngƣời không biểu triệu chứng 81 1.2 Xác định loài Plasmodium spp giao bào phƣơng pháp RT-qPCR 81 KIẾN NGHỊ 82 TÍNH MỚI, TÍNH KHOA HỌC VÀ ĐIỂM HẠN CHẾ ĐỀ TÀI 82 3.1 Tính 82 3.2 Tính khoa học 82 3.3 Điểm hạn chế 83 CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ CỦA TÁC GIẢ 84 DANH MỤC CÁC TÀI LIỆU THAM KHẢO 85 QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ (bản sao) download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ACTs Artemisinin-based Combination Thuốc phối hợp có thành phần Therapies artemisinins BNSR Bệnh nhân sốt rét CRFs Case Report Forms Mẫu Báo cáo ca bệnh DNA Deoxyribonucleic acid Acid deoxyribonucleic GCPs Good Clinical Practices Thực hành lâm sàng tốt KHV Kính hiển vi KST Ký sinh trùng KSTSR Ký sinh trùng sốt rét LHSR Lƣu hành sót rét LTSR Loại trừ sốt rét MDA Mass Drug Administration PCSR Phòng chống sốt rét PCR Polymerase Chain Reaction Nested PCR Nested Polymerase Chain Reaction PCR lồng P falciparum Plasmodium falciparum P vivax Plasmodium vivax P malariae Plasmodium malariae P ovale Plasmodium ovale P knowlesi Plasmodium knowlesi qPCR Quantitative PCR Phản ứng chuỗi trùng định lƣợng RDTs Rapid Diagnostic Tests Xét nghiệm chẩn đoán nhanh RNA Ribonucleic acid RT-qPCR Reverse Transcriptase qPCR PCR đ lƣợng chép ngƣợc us-qPCR Ultra-qPCR PCR định lƣợng siêu nhạy SOPs Standard Operational Procedures Quy trình thực hành chuẩn TCYTTG Tổ chức Y tế giới WHO World Health Organization Điều trị thuốc hàng loạt Phản ứng chuỗi trùng hợp download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các tỉnh/ thành có số KSTSR cao năm 2018 vàso với 2017 Bảng 2.1 Cỡ mẫu ngƣời không biểu triệu chứng 41 Bảng 2.2 Các biến số số thu thập nghiên cứu 43 Bảng 3.1 Đặc điểm dân số nhóm nghiên cứu xã thuộc huyện Tuy Đức 49 Bảng 3.2 Đặc điểm lâm sàng nhóm nghiên cứu xã thuộc huyện Tuy Đức 51 Bảng 3.3 Xét nghiệm lam máu test chẩn đoán nhanh xã, huyện Tuy Đức 52 Bảng 3.4 Tỷ lệ KSTSR (+) kỹ thuật RT-qPCR xã có lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức thời điểm mùa khô .53 Bảng 3.5 Tỷ lệ KSTSR (+) kỹ thuật RT-qPCR xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức thời điểm mùa mƣa 54 Bảng 3.7 Định loài Plasmodium spp xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức 62 Bảng 3.6 So sánh tỷ lệ nhiễm KSTSR kỹ thuật RT-qPCR xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức hai thời điểm mùa mƣa mùa khô 55 Bảng 3.8 Xác định giao bào Plasmodium spp thời điểm mùa mƣa xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức 63 Bảng 3.9 Xác định giao bào Plasmodium spp thời điểm mùa khô xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức 64 download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Bản đồ phân bố ký sinh trùng sốt rét toàn quốc năm 2018 Hình 1.2 Cơ cấu ký sinh trùng sốt rét toàn quốc năm 2018 10 Hình 1.3 Quy trình làm lam máu nhuộm giêm sa chẩn đốn sốt rét 13 Hình 1.4 Phiên giải kết test nhanh sốt rét phát P faciparum/ P.vivax 14 Hình 1.5 Nguyên lý phiên giải kết PCR chẩn đoán sốt rét 15 Hình 2.1 Bản đồ xã nghiên cứu thuộc huyện Tuy Đức, tỉnh Đắk Nơng 39 Hình 3.1 Xác định giống Plasmodium spp nhóm nghiên cứu kỹ thuật RT-qPCR hệ thống máy ABI 7500 fast 53 Hình 3.2 Định lồi Plasmodium spp nhóm có kết KSTSR dƣơng tính kỹ thuật RT-qPCR hệ thống máy ABI 7500 fast 62 download by : skknchat@gmail.com Pl-10 phịng thí nghiệm Chúng tơi giữ mẫu máu ẩn danh bạn khoảng 10 năm kể từ lúc lấy máu có thiết bị phƣơng pháp phát sốt rét đƣợc phát triển, chúng tơi xét nghiệm lại mẫu thiết bị /hoặc phƣơng pháp đề chẩn đoán sốt rét Những rủi ro khó chịu Việc lấy máu đầu ngón tay trẻ gây đau buốt nhẹ thống qua Nhóm nghiên cứu IMPE giàu kinh nghiệm lấy máu từ đầu ngón tay bạn Có nguy nhiễm trùng chích kim vào ngón tay bạn Nếu bạn cảm thấy chóng mặt đau nhìn thấy máu, xin vui lịng nói cho cán IMPE để họ giúp bạn nằm xuống Chữ ký cha, mẹ/ ngƣời giám hộ trẻ tham gia: _ Bảng câu hỏi Trả lời câu hỏi có liên quan đến nghiên cứu nhƣ di chuyển bạn vòng hai tuần qua bạn có sử dụng biện pháp phịng ngừa sốt rét khơng? Lợi ích: Nếu chúng tơi phát có ký sinh trùng sốt rét máu bạn qua soi dƣới kinh hiển vi bạn đƣợc điều trị bệnh viện huyện/ trạm y tế xã gần theo Hƣớng dẫn điều trị sốt rét Bộ Y tế Mặc dù, phải đến vài tháng kể từ lấy máu kết phân tích phịng xét nghiệm để xác định bạn có mật độ ký sinh trùng thấp máu mà không gây triệu chứng sốt rét nhƣ sốt, nhức đầu, mệt mỏi, đau dày, lợi ích trực tiếp bạn nghiên cứu đƣợc bác sĩ IMPE kiểm tra sức khỏe chung Nếu bác sỹ IMPE tìm thấy vấn đề sức khỏe chuyển trực tiếp bạn đến bệnh viện huyện trạm y tế xã gần để hỗ trợ khám, chữa bệnh Các kết xét nghiệm máu bạn từ nghiên cứu giúp Bộ Y tế thiết kế quy trình loại trừ sốt rét tƣơng lai khỏi cộng đồng nơi bạn Bảo vệ thông tin cá nhân: Tất cán nghiên cứu đảm bảo thơng tin cá nhân an tồn bạn đƣợc bảo mật suốt sau nghiên cứu Tên bạn không xuất lam máu ống chứa mẫu máu Chỉ nhóm nghiên cứu IMPE biết tham gia nghiên cứu Mẫu đơn cho phép tham gia cha mẹ/ ngƣời giám hộ mẫu đơn đồng ý tham gia thông tin bạn đƣợc lƣu giữ IMPE Quy Nhơn tủ hồ sơ có khóa Chúng tơi báo cáo kết nghiên cứu này, nhƣng tên bạn download by : skknchat@gmail.com Pl-11 không xuất bấn kỳ báo cáo thuyết trình Bồi dƣỡng: Con bạn khơng nhận đƣợc tiền quà từ việc tham gia nghiên cứu Các câu hỏi: Nếu bạn có câu hỏi, phần nàn lo lắng việc bạn tham gia vào nghiên cứu, bạn gọi điện tới gặp nhóm nghiên cứu IMPE để thảo luận mối lo ngại bạn với họ Ngoài bạn liên lạc với TS.BS Huỳnh Hồng Quang (số di động 0905103496) IMPE Quy Nhơn để đƣợc giải đáp câu hỏi thắc mắc bạn Nếu bạn có câu hỏi nghiên cứu quyền lợi bạn với vai trò ngƣời tham gia nghiên cứu, bạn liên lạc tới Hội đồng Đạo đức Y Sinh học IMPE Quy Nhơn (ĐT: 0256.3514408) bạn sử dụng điện thoại, cán IMPE giúp bạn liên lạc với Hội đồng Đạo đức Y Sinh học Sau bạn hoàn toàn hiểu rõ điều xảy với bạn tham gia vào nghiên cứu, bạn cần phải ký tên cung cấp điểm ngón tay vào mẫu đơn cho phép tham gia cha mẹ/ngƣời giám hộ, với tên của bạn Khi ký tên vào có nghĩa bạn nhận đƣợc mẫu đơn cho phép tham gia cha mẹ/ngƣời giám hộ hiểu việc ký tên vào mẫu đơn chứng tỏ bạn sẵn lịng cho tham gia vào nghiên cứu Chữ ký cha, mẹ/ ngƣời giám hộ trẻ tham gia: _ download by : skknchat@gmail.com Pl-12 ĐƠN CHO PHÉP THAM GIA CỦA CHA MẸ/NGƢỜI GIÁM HỘ ĐỐI VỚI TRẺ EM (≤ 17 TUỔI) Tên đề tài: Đánh giá tình trạng ngƣời mang ký sinh trùng sốt rét không biểu triệu chứng kỹ thuật RT-pPCR huyện Tuy Đức, tỉnh Đăk Nông (2019-2020) Chủ nhiệm đề tài: TS.BS Huỳnh Hồng Quang, IMPE Quy Nhơn, Việt Nam Tham gia thực hiện: CN Đinh Thị Ngọc Duyên, Đại học Quy Nhơn Chữ ký bạn mẫu đơn cho phép tham gia cho thấy bạn đƣợc giải thích nghiên cứu bạn có thời gian đặt câu hỏi Bạn đồng ý cho phép tham gia vào nghiên cứu Thông tin thu thập từ bạn đƣợc giữ riêng tƣ sử dụng mục đích nghiên cứu Các kết nghiên cứu của bạn đƣợc cung cấp cho bạn bạn yêu cầu báo cáo đƣợc công bố nghiên cứu bảo vệ thông tin cá nhân bạn Bạn cần hiểu bạn không bắt buộc phải tham gia vào nghiên cứu bạn hồn tồn cho rút lui khỏi nghiên cứu vào lúc bạn muốn mà không bị quyền lợi đƣợc chăm sóc y tế tƣơng lai của Bạn đƣợc cung cấp mẫu đơn cho phép tham gia ký để lƣu trữ Nếu bạn có lo lắng việc nghiên cứu đƣợc tiền hành nhƣ nào, xin vui lòng đến gặp trực tiếp chủ nhiệm đề tài Tên trẻ (Chữ in) Tên cha mẹ/Ngƣời giám hộ trẻ _ _ / _ _ / _ (chữ in) NN Chữ ký cha mẹ/Ngƣời giám hộ trẻ (Điểm ngón tay cái) TT NNNN Thời gian: _ _ : _ _ (giờ:phút) download by : skknchat@gmail.com Pl-13 Chữ ký ngƣời làm chứng: (Chỉ yêu cầu chữ ký ngƣời làm chứng cha mẹ/ ngƣời giám hộ trẻ chữ Trong trƣờng hợp này, ngƣời làm chứng biết chữ phải ký Ngƣời làm chứng ngƣời bạn, họ hàng ngƣời đại diện/ngƣời đứng đầu xã Nếu có thể, ngƣời nên đƣợc cha mẹ/ngƣời giám hộ trẻ lựa chọn khơng có mối liên hệ với nhóm nghiên cứu IMPE) Tơi làm chứng việc đọc xác mẫu đơn cho phép tham gia cha mẹ/ngƣời giam hộ cho che mẹ/ ngƣời giám hộ, ngƣời có hội đặt câu hỏi thắc mắc Tôi xác nhận cha mẹ/ ngƣời giám hộ trẻ tự nguyện cho phép tham gia nghiên cứu Chữ ký cha, mẹ/ ngƣời giám hộ trẻ tham gia: _ Tên ngƣời làm chứng chữ in: Chữ ký ngƣời làm chứng: Ngày: _ _ / _ _ / _ NN TT NNNN Chữ ký bác sĩ IMPE tự nguyện ngƣời tham gia Tơi đọc xác làm chứng việc đọc xác nội dung mẫu đơn cho phép tham gia cha mẹ/ngƣời giám hộ cho cha mẹ/ngƣời giám hộ, ngƣời có hội đặt câu hỏi thắc mắc Tôi xác nhận cha mẹ/ngƣời giám hộ tự nguyện cho phép tham gia nghiên cứu Tên bác sĩ IMPE chấp nhận cho phép tham gia cha mẹ/ngƣời giám hộ _ _ / _ _ / _ NN TT NNNN Chữ ký bác sĩ IMPE chấp nhận cho phép tham gia cha mẹ/ngƣời giám hộ Chữ ký cha, mẹ/ ngƣời giám hộ trẻ tham gia: _ download by : skknchat@gmail.com Pl-14 Phụ lục THÔNG TIN NGƢỜI THAM GIA VÀ ĐƠN ĐỒNG Ý THAM GIA ĐỐI VỚI TRẺ EM (TỪ 10 ĐẾN 17 TUỔI) Tên đề tài: Đánh giá tình trạng ngƣời mang ký sinh trùng sốt rét không biểu triệu chứng kỹ thuật RT-pPCR huyện Tuy Đức, tỉnh Đăk Nông (2019-2020) Chủ nhiệm đề tài: TS.BS Huỳnh Hồng Quang, IMPE Quy Nhơn, Việt Nam Tham gia thực hiện: CN Đinh Thị Ngọc Duyên, Đại học Quy Nhơn Mẫu đơn đồng ý tham gia dành cho trẻ em từ 10-17 tuổi đƣợc mời tham gia vào dự án sốt rét huyện Tuy Đức, tỉnh Đăk Nông Mẫu đơn đồng ý tham gia có hai phần: I Bảng thơng tin (chia sẻ thông tin nghiên cứu với bạn) II Chứng nhận việc đồng ý (ký tên điểm bạn đồng ý tham gia) Bạn đƣợc cung cấp đầy đủ mẫu đơn đồng ý tham gia Phần I Bảng thông tin Bạn đƣợc mời tham gia vào nghiên cứu sốt rét huyện Tuy Đức, tỉnh Đăk Nông Sốt rét bệnh gây chết ngƣời gây ký sinh trùng sốt rét truyền từ muỗi sang ngƣời gây triệu chứng nhƣ sốt, đau cơ, đau đầu, buồn nôn, nôn mửa, mệt mỏi tử vong không đƣợc chữa trị hiệu Bộ Y tế Việt Nam hƣớng tới việc loại trừ sốt rét vào năm 2030 Để đạt đƣợc mục tiêu này, cần phải có thơng tin tỷ lệ nhiễm sốt rét ngƣời không biểu triệu chứng Những ngƣời có mật độ ký sinh trùng máu thấp điều khiến sốt rét tiếp tục lan truyền Chúng mời ngƣời dân từ xã bạn tham gia vào nghiên cứu để xác định có ngƣời mang ngƣời số lƣợng nhỏ ký sinh trùng máu, từ Bộ Y tế thiết kế quy trình loại trừ sốt rét Nghiên cứu đƣợc tiến hành Viện Sốt rét-Ký sinh trùngCôn trùng (IMPE) trực thuộc Bộ Y tế Với tƣ cách bác sĩ IMPE, cung cấp thông tin mời bạn tham gia nghiên cứu Bạn có quyền lựa chọn việc muốn tham gia hay không Chúng thảo luận nghiên cứu với cha mẹ ngƣời giám hộ bạn họ biết hỏi bạn việc chấp thuận tham gia nghiên cứu Nếu bạn định tham gia, cha mẹ ngƣời giám hộ bạn đồng ý Nếu bạn không muốn tham gia, bạn không bị bắt buộc, dù cha mẹ bạn đồng ý Đây lựa chọn bạn Nếu bạn không muốn tham gia không bạn bị sốt rét bạn đƣợc điều trị sốt rét từ trạm y tế Dù đồng ý tham gia bây giờ, bạn thay đổi ý kiến sau Bạn thảo luận bất download by : skknchat@gmail.com Pl-15 đơn với cha mẹ bạn ngƣời bạn muốn Có thể có số từ bạn không hiểu điều bạn muốn giải thích rõ bạn thấy thú vị quan tâm Vui lịng tìm tơi lúc tơi dành thời gian giải thích cho bạn Bác sĩ IMPE: Tôi kiểm tra đứa trẻ, cô bé/cậu bé hiểu việc tham gia vào nghiên cứu tự nguyện _ (ký nháy) Bạn đƣợc hỏi nghiên cứu Bạn đƣợc mời trả lời câu hỏi bạn phơi nhiễm, bảo vệ cá nhân phòng bệnh sốt rét, tiến hành khám để xác định tình trạng sức khỏe chung bạn lấy mẫu máu đầu ngón tay (vài giọt) để xét nghiệm xem bạn có bị sốt rét hay khơng Chữ ký ngƣời tham gia: _ Bác sĩ IMPE: Tôi kiểm tra đứa trẻ cô bé/cậu bé hiểu rõ việc điều xảy với tham gia vào nghiên cứu _ (ký nháy) Bảng câu hỏi Trả lời câu hỏi có liên quan đến nghiên cứu nhƣ di chuyển bạn vòng hai tuần qua bạn có sử dụng biện pháp phịng ngừa sốt rét khơng? Bác sĩ IMPE: Tôi kiểm tra đứa trẻ cô bé/cậu bé hiểu rõ câu hỏi _ (ký nháy) Máu bạn đƣợc dùng làm nghiên cứu Bạn đƣợc lấy mẫu máu từ đầu ngón tay (vài giọt) điều gây đau buốt thống qua Tuy nhiên, nhóm nghiên cứu IMPE có kinh nghiệm lấy máu đầu ngón tay hạn chế tối thiểu đau cho bạn Mẫu máu đầu ngón tay đƣợc dùng để làm lam máu xác định tồn số lƣợng ký sinh trùng máu bạn chủng loài sốt rét đƣợc xác định kính hiển vi Nếu có ký sinh trùng máu bạn bạn đƣợc điều trị cán trạm y tế theo hƣớng dẫn Bộ Y tế Máu thu đƣợc từ đầu ngón tay bạn đƣợc đƣa vào ống nhỏ để xác định số lƣợng nhỏ ký sinh trùng máu dựa xét nghiệm phịng thí nghiệm Chúng giữ mẫu máu ẩn danh bạn khoảng 10 năm kể từ lấy máu có thiết bị phƣơng pháp phát sốt rét đƣợc phát triển, chúng tơi xét nghiệm lại mẫu bạn thiết bị phƣơng pháp đề chẩn đốn sốt rét Bác sĩ IMPE: Tơi kiểm tra đứa trẻ cô bé/cậu bé hiểu rõ máu đƣợc sử dụng làm nghiên cứu _ (ký nháy) Rủi ro khó chịu Lấy máu đầu ngón tay gây đau buốt thống qua Nhóm nghiên cứu có kinh nghiệm download by : skknchat@gmail.com Pl-16 IMPE lấy máu đầu ngón tay Chỉ có nguy nhiễm trùng thấp và/ thâm tím vị trí kim chích máu ngón tay Nếu bạn cảm thấy chóng mặt đau nhìn thấy máu, vui lịng nói cho cán IMPE biết bạn nằm xuống chăm sóc bạn Bác sỹ IMPE: Tơi khám cho cháu bé cô bé/ cậu bé hiểu đƣợc rủi ro khó chịu mà điều gặp tham gia vào nghiên cứu _ (ký nháy) Lợi ích Nếu chúng tơi phát ký sinh trùng máu bạn soi dƣới kính hiển vi, bạn đƣợc điều trị bệnh viện huyện/ trạm y tế xã gần theo Hƣớng dẫn điều trị Bộ Y tế Mặc dù vài tháng để xét nghiệm phòng xét nghiệm để xác định xem liệu bạn có ký sinh trùng sốt rét với mật độ thấp không đủ gây triệu chứng bệnh sốt rét nhƣ sốt, đau đầu, mệt mỏi, khó chịu dày nhƣng lợi điểm bạn tham gia vào nghiên cứu bác sỹ IMPE kiểm tra sức khỏe chung bạn Nếu qua đó, bác sỹ phát có vấn đề sức khỏe họ chuyển trực tiếp bạn đến bệnh viện huyện/ trạm y tế xã để trợ giúp y tế Các kết xét nghiệm máu bạn giúp cho Bộ Y tế thiết kế quy trình phù hợp cho việc loại trừ sốt rét tƣơng lai cộng đồng bạn Bác sỹ IMPE: Tôi kiểm tra với trẻ cô bé/ cậu bé hiểu lợi điểm tham gia vào nghiên cứu _ (ký nháy) Chữ ký ngƣời tham gia: _ Bảo vệ thông tin cá nhân Chúng không kể với việc bạn tham gia vào nghiên cứu không chia sẻ thông tin bạn với khơng làm việc với nhóm nghiên cứu IMPE Thông tin bạn đƣợc thu thập trình nghiên cứu đƣợc giấu đi, khơng ngoại trừ nhóm nghiên cứu IMPE thấy đƣợc Bất kỳ thơng tin bạn có số thay cho tên bạn Chỉ có nhóm nghiên cứu IMPE biết số bạn chúng tơi khóa kỹ thơng tin tủ Bạn hỏi tơi câu hỏi sau Tơi có số điện thoại địa ghi giấy để bạn liên lạc với nhóm nghiên cứu IMPE bạn gần đây, bạn tới gặp chúng tơi Nếu bạn muốn nói chuyện với khác mà bạn biết, nhƣ giáo viên mình, dì bác sĩ trạm y tế, điều khơng Bác sĩ IMPE: Tôi kiểm tra đứa trẻ cô bé/cậu bé hiểu rõ thông tin cá nhân trẻ đƣợc bảo vệ nhƣ _ (ký nháy) download by : skknchat@gmail.com Pl-17 Khoản bồi dƣỡng Bạn không nhận đƣợc tiền quà từ việc tham gia vào nghiên cứu Bác sĩ IMPE: Tôi kiểm tra trẻ cô bé/cậu bé hiểu rõ lợi ích _ (ký nháy) Phần II: Chứng nhận đồng ý trẻ em (từ 10 đến 17 tuổi) Tôi đƣợc mời tham gia nghiên cứu sốt rét xã Tôi hiểu phải cung cấp mẫu máu cán nghiên cứu IMPE yêu cầu Tôi đƣợc thơng báo có rủi ro bao gồm đau nới chích máu đầu ngón tay Tôi hiểu không nhận đƣợc lợi ích cá nhân không nhận đƣợc q (ví dự nhƣ tiền) Tơi đƣợc cung cấp tên ngƣời chủ nhiệm đề tài để liên lạc dễ dàng số điện thoại ngƣời  Tơi biết tơi lựa chọn tham gia không tham gia nghiên cứu Tôi biết tơi ngừng tham gia lúc muốn;  Tôi đọc tờ thông tin (hoặc đƣợc nghe đọc tờ thông tin này);  Tôi đƣợc giải đáp câu hỏi tơi biết tơi đặt câu hỏi khác sau có;  Tơi hiểu thay đổi nghiên cứu đƣợc thảo luận với tôi;  Tôi đồng ý tham gia vào nghiên cứu Chữ ký ngƣời tham gia: _ Tên trẻ (Chữ in) _ _ / _ _ / NN TT NNNN Ngày sinh trẻ Chữ ký trẻ (Điểm ngón tay cái) Thời gian: _ _ : _ _ (Giờ: phút) Chữ ký ngƣời làm chứng: (Chỉ yêu cầu chữ ký ngƣời làm chứng dấu lăn tay trẻ trẻ chữ Trong trƣờng hợp này, ngƣời làm chứng biết chữ phải ký download by : skknchat@gmail.com Pl-18 Ngƣời làm chứng ngƣời bạn, họ hàng ngƣời đại diện/ngƣời đứng đầu xã Nếu có thể, ngƣời nên đƣợc cha mẹ/ngƣời giám hộ trẻ lựa chọn khơng có mối liên hệ với nhóm nghiên cứu IMPE) Tơi làm chứng việc đọc xác mẫu đơn đồng ý tham gia cho đứa trẻ, ngƣời có hội đặt câu hỏi thắc mắc Tôi xác nhận đứa trẻ tự nguyện tham gia nghiên cứu Tên ngƣời làm chứng chữ in: Chữ ký ngƣời làm chứng: Ngày: _ _ / _ _ / _ Chữ ký bác sĩ IMPE đồng ý tham gia: Tôi đọc xác làm chứng việc đọc xác nội dung mẫu đơn đồng ý tham gia cho đứa trẻ này, ngƣời có hội đặt câu hỏi thắc mắc Tôi xác nhận đứa trẻ tự nguyện tham gia nghiên cứu Tên bác sĩ IMPE chấp nhận đồng ý tham gia (Chữ in) _ _ / _ _ / _ NN TT NNNN Chữ ký bác sĩ IMPE chấp nhận đồng ý tham gia (Chữ in) Chữ ký ngƣời tham gia: _ download by : skknchat@gmail.com Pl-19 Phụ lục MỘT SỐ HÌNH ẢNH LIÊN QUAN ĐẾN NGHIÊN CỨU Hình Triển khai thực địa xã Hình Triển khai thực địa xã Hình Triển khai thực địa xã Hình Triển khai thực địa xã Hình Triển khai thực địa xã Hình Triển khai thực địa xã download by : skknchat@gmail.com Pl-20 SOP1: CÁCH GHI NHÃN TẤT CẢ MẪU MÁU LÀM XÉT NGHIỆM MỤC ĐÍCH Quy trình thực hành chuẩn mơ tả quy trình hƣớng dẫn ghi nhãn test chẩn đốn nhanh (RDTs) lam máu sốt rét dùng cho việc soi kính hiển vi mẫu máu dùng cho phân tích DNA/RNA QUY TRÌNH 2.1 Các mẫu máu chích đầu ngón tay (130-150 µL) đƣợc lấy vào ống BDmicrotainer EDTA 500µL từ ngƣời khơng biểu triện chứng sống gần xã (Đăk Buk So, Đăk Ngo Quảng Trực) thuộc huyện Tuy Đức, tỉnh Đắk Nông Tất mẫu vật thu thập đƣợc từ ngƣời tham gia đƣợc ghi nhãn mã số nhận dạng nghiên cứu độc Con số bắt đầu với chữ xã sau số gán cho ngƣời tham gia: Đăk Buk So-DBS; Đăk NgoDG; Quảng Trực-QT 2.2 Các dụng cụ nghiên cứu (các ống EDTA, RDTs, lam kính hiển vi ống eppendorf) đƣợc ghi nhãn trƣớc với nhãn cho thấy số ID nghiên cứu ngày thu thập, thông tin đƣợc viết bút mực khơng trơi có màu đen/ xanh da trời/ đỏ Để dễ dàng theo dõi xã ngƣời tham gia có mức độ lƣu hành sốt rét khác (thấp, trung bình cao) bút màu đen đƣợc sử dụng cho ngƣời tham gia DBS, bút màu xanh da trời đƣợc dùng cho ngƣời tham gia DG bút màu đỏ dùng cho ngƣời tham gia QT 2.3 Các dụng cụ nghiên cứu sau đƣợc ghi nhãn trƣớc: Các ống BD-microtainer EDTA 500 µL, ống Eppendorf® LoBind microcentrifuge 1.5 mL, test nhanh (SD-Bioline Malaria Ag Pf/Pan CAT No 05FK60), Lam máu giọt dày mỏng-Số lƣợng download by : skknchat@gmail.com Pl-21 LẦN ẢNH CỦA DỤNG CỤ NGHIÊN CỨU MỤC ĐÍCH THU CỦA DỤNG THẬP CỤ QT001 12-11-19 Các ống BDmicrotainer EDTA 500 µL có chứa khoảng 150 µL mẫu máu chích từ đầu ngón tay ngƣời tham gia download by : skknchat@gmail.com Pl-22 Eppendorf® LoBind microcentrifu ge 1.5 Ml QT001 12-11-19 chứa 250 µL chất phản ứng RNA-Protect mà 50 µL máu đầu ngón tay đƣợc thu thập vào lần số đƣợc cho ẢNH CỦA DỤNG CỤ NGHIÊN CỨU vào để dùng cho việc tách chiết DNA/RNA LẦN MỤC ĐÍCH THU DỤNG CỤ THẬP NGHIÊN CỨU µL máu chích đầu ngón tay ngƣời tham gia đƣợc thu QT001 thập lần số 12-11-19 đƣợc đƣa vào giếng que chẩn đoán nhanh để chẩn đoán sốt rét download by : skknchat@gmail.com Pl-23 Khoảng µL máu chích đầu ngón tay ngƣời tham gia thu thập lần đƣợc đƣa vào lam máu để làm giọt mỏng giọt QT001 12-11-19 download by : skknchat@gmail.com dày dùng cho việc phân tích dƣới KHV download by : skknchat@gmail.com ... skknchat@gmail.com ĐÁNH GIÁ TÌNH TRẠNG NGƢỜI MANG KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT KHÔNG BIỂU HIỆN TRIỆU CHỨNG BẰNG KỸ THUẬT RT- qPCR TẠI HUYỆN TUY ĐỨC, TỈNH ĐĂK NÔNG Học viên: Đinh Thị Ngọc Duyên | Chuyên ngành: Sinh. .. biện pháp can thiệp phù hợp, đề tài ? ?Đánh giá tình trạng ngƣời mang ký sinh trùng sốt rét không biểu triệu chứng kỹ thuật RT- qPCR huyện Tuy Đức, tỉnh Đăk Nông? ?? đƣợc tiến hành Mục tiêu nghiên cứu... Bảng 3.4 Tỷ lệ KSTSR (+) kỹ thuật RT- qPCR xã có lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức thời điểm mùa khô .53 Bảng 3.5 Tỷ lệ KSTSR (+) kỹ thuật RT- qPCR xã lƣu hành sốt rét huyện Tuy Đức thời điểm mùa