... để cuối cùng là một protein
tinh sạch. Ở mỗi bước phân tách, thử
nghiệm xác định hoạt tính và xác định
nồng độ protein đều được thực hiện.
Lượng đáng kể protein tinh sạch,
khoảng vài miligram, ... pha di động.
Trong tinh sạch protein, có bốn
phương pháp được ứng dụng nhiều
Concanavalin A thay thế những phân
tử glucose nối với cột.
Hình 3: minh họa cho cơ chế tinh...
...
Tinh sạch protein
(tt)
V. Phân tách protein bằng điện
di trên gel
Để đánh giá quá trình tinh sạch
protein có hiệu quả hay không, ngoài
cách xác định hoạt tính đặc trưng của
protein ... bước tinh
sạch, mức độ tinh sạch tăng lên trong
khi yield lại giảm. Thật vậy, với kỹ
thuật SDS-PAGE, nếu ta nạp một
lượng mẫu nhất định vào mỗi giếng
trên bản gel ứng...
... hợp có sự hện diện của
2 protein, tính tan của protein này sẽ
giảm vì sự hiện diện của protein kia.
Tinh sạch protein
bằng phương pháp tủa (tt)
3. Tủa protein bằng phương pháp ... của protein cũng thay đổi. Ở
pH thấp, protein tích điện dương vì
nhóm amide bị proton hóa (thu nhận
proton). Ở giá trị pH cao, protein tích
điện âm vì các nhóm carbocyl tro...
...
những protein tinh sạch và từ
những tinh thể đó chúng ta sẽ biết
được cấu trúc bậc 4 cũng như các
đơn vị chức năng của protein thông
qua dữ liệu chiếu xạ tia X.
Vì vậy, quá trình tinh sạch protein ... độ tinh sạch cao nhất nhưng
nhìn chung một quá trình tinh sạch
protein cũng cần đi qua các bước
căn bản sau:
1. Nhận biết protein mục tiêu
2. Ly trích prot...
... năng
hòa tan của protein giảm, vì thế tạo sự
kết tủa. Tuy nhiên, các dung môi hữu
cơ lại có ái lực với các bề mặt kỵ
nước của phân tử protein. Kết quả là
Tinh sạch protein
bằng phương ... để tủa protein.
Khả năng hòa tan của protein tùy
thuộc vào nhiều yếu tố: đặc tính lý
hóa tự nhiên của protein, pH, nhiệt độ,
nồng độ của muối…
Ở nồng độ muối thấp, tính tan của
pr...
...
(Lúc này, protein có thể còn trên phần
dịch nổi). Loại đi phần nước ở lớp
trên.
5. Thêm 4 thể tích Methanol. Vortex.
Tinh sạch protein
bằng phương pháp tủa (tt)
3. Tủa protein ... của protein cũng thay đổi. Ở
pH thấp, protein tích điện dương vì
nhóm amide bị proton hóa (thu nhận
proton). Ở giá trị pH cao, protein tích
điện âm vì các nhóm carbocyl tron...
...
Tinh sạch protein
(tt)
V. Phân tách protein bằng điện
di trên gel
Để đánh giá quá trình tinh sạch
protein có hiệu quả hay không, ngoài
cách xác định hoạt tính đặc trưng của
protein ... trình tinh
sạch tốt sẽ có mức độ tinh sạch cao và
chỉ số yield thấp. Nếu chỉ số yield cao
còn mức độ tinh sạch thấp có nghĩa là
còn nhiều tạp nhiễm trong mẫu (nhiều...
...
Tinh sạch protein
I. Giới thiệu chung
Sự tinh sạch của protein rất quan
trọng vì từ protein tinh sạch chúng
ta có thể xác định được trình ...
những protein tinh sạch và từ
những tinh thể đó chúng ta sẽ biết
được cấu trúc bậc 4 cũng như các
đơn vị chức năng của protein thông
qua dữ liệu chiếu xạ tia X.
Vì vậy, quá trình tinh sạch protein ......
...
nồng độ cao.
Tinh sạch protein
bằng phương pháp tủa
Phương pháp tủa được sử dụng tương
đối rộng rãi để thu nhận các phân tử
sinh học mà nhất là protein. Để tủa,
người ta ... chứa protein.
1. Tủa bằng muối
Đây là cách phổ biến để tủa protein.
Khả năng hòa tan của protein tùy
hằng số điện môi:
ln (S/Sw) = (A/RT) (1/Dw - 1/D)
Trong đó
S: độ hòa tan của...
...
Tinh sạch protein
bằng phương pháp tủa (tt)
3. Tủa protein bằng phương pháp
điểm đẳng điện
Khi thay đổi pH của môi trường, mức
độ tủa của protein cũng thay đổi. Ở
pH thấp, protein ... diện của
2 protein, tính tan của protein này sẽ
giảm vì sự hiện diện của protein kia.
Phương pháp này thường dùng cho
các protein đậu nành (có điểm đặng
điện khoảng 4....