Phương pháp thu sinh khối
Nuôi cấy VSV trong các bình nón chứa môi trường MRS ở điều kiện 37o
C trong 24h trong tủ ấm 5% CO2 (như phương pháp nêu trong mục 2.3.2). Gạn bớt phần dịch trong phía trên, phần hỗn dịch sinh khối phía dưới đong vào các ống li tâm. Li tâm các ống này với tốc độ 4000 vòng/phút trong 15 phút. Lấy các ống li tâm khỏi máy, loại bỏ phần dịch trong, giữ lại phần cắn sinh khối phía dưới, thu được sinh khối từ các bình nuôi cấy.
Sinh khối thu được phân tán đều trong dung dịch tá dược độn đã được hấp tiệt khuẩn bằng máy lắc (Vortex) và máy khuấy từ. Đổ hỗn dịch các mẫu này ra đĩa petri đã được làm sạch và hấp tiệt khuẩn từ trước, đậy kín bằng giấy nhôm, để các đĩa này vào tủ lạnh sâu ở -80oC cho đông rắn hoàn toàn, sau đó tiến hành giai đoạn làm khô trong máy đông khô. Tạo các mẫu đông khô từ sinh khối của vi sinh vật và các tá dược bảo vệ khác nhau.
Phương pháp tạo nguyên liệu dạng hạt
Sinh khối thu được đem phân tán đều trong 100ml dung dịch sữa gầy 20% bằng máy lắc (Vortex) và khuấy từ. Hỗn dịch sinh khối trong sữa gầy đem phối hợp với 100ml dung dịch alginat 4% bằng khuấy từ trong 15 phút thu được 200ml hỗn dịch sinh khối trong dung dịch alginat 2% và sữa gầy 10%. Tạo hạt bằng cách dùng pipet nhỏ hỗn dịch tế bào-alginat vào dung dịch CaCl2 2% đã được hấp tiệt khuẩn ở 115oC/20 phút. Ngâm hạt trong 30 phút để hạt ổn định, sau đó rửa hạt bằng dung dịch nước muối sinh lý đã được hấp tiệt khuẩn. Hạt tạo thành được chia vào các đĩa petri đã được hấp tiệt khuẩn, đậy kín bằng giấy nhôm rồi đem tiền đông trong tủ lạnh sâu ở -80oC trong 24h cho đông rắn hoàn toàn.
Phương pháp đông khô
- Tiền đông: Các mẫu được làm đông lạnh trong tủ lạnh sâu ở -80o
C trong 24h cho đông rắn hoàn toàn.
- Làm khô: Các mẫu được làm khô trong không gian lạnh của máy đông khô ở nhiệt độ khoảng -50oC; áp suất 0,055mbar trong 24h.
Kết thúc quá trình đông khô, lấy mẫu ra khỏi thiết bị, xác định số lượng vi sinh vật sống sót và hàm ẩm của các mẫu nguyên liệu hoặc chuyển các mẫu nguyên liệu vào bao polyme có khóa, để trong hộp nhựa, đậy kín rồi bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ khoảng 4o
C.