Phương pháp ngâm lạnh, ngấm kiệt đơn giản đuợc dùng để tạo dịch chiết toàn phần. Hai phương pháp này tuy không mang lại hiệu suất cao nhưng với ưu điểm đơn giản, kinh tế, phù hợp với mục đích nghiên cứu nên đã được lựa chọn.
Sắc kí cột (SKC) và sắc kí lớp mỏng (SKLM) được sử dụng trong đề tài cũng là những phương pháp phổ biến và thường quy trong nghiên cứu về dược liệu. SKC cho hiệu quả tách cao, phân đoạn dễ tinh sạch, đặc biệt là ít gây biến tính, bảo toàn nguyên vẹn chất, tiến hành đơn giản. SKLM cũng là một phương pháp đơn giản, kinh tế và nhanh gọn có thể dùng cho phân tích định tính và định lượng cũng như là tinh chế hợp chất từ thiên nhiên. Trong nghiên cứu, SKLM đóng vai trò như một công cụ bổ trợ tối ưu hoá điều kiện của sắc kí cột, bao gồm lựa chọn dung môi, kiểm tra sự tinh khiết của phân đoạn phân lập được.
Về xác định chất, trong số loại phổ phổ biến thường được sử dụng như: phổ hồng ngoại (UV); phổ tử ngoại (IR); cộng hưởng từ hạt nhân (NHR) một
chiều (1H-NMR và 13C-NMR, DEPT) và hai chiều (HMBC, COSY, HMQC,
HSQC); khối phổ (MS). Đề tài đã lựa chọn và sử dụng loại phổ chính là cộng
hưởng từ hạt nhân một chiều (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT) kết hợp với tài liệu
tham khảo để có thể xác định tên cũng như công thức hoá học của hợp chất phân lập.
Về thử độc tính bán trường diễn: nghiên cứu được thiết kế trên mô hình chuột cống trắng; đường uống, với 2 mức liều (liều 2 gấp 3 lần liều 1) và dùng trong thời gian 28 ngày dựa trên một số hướng dẫn về thử nghiệm độc tính của thuốc [1], [9], [23]. Do ĐTĐ là một bệnh mãn tính, việc dùng thuốc có thể kéo dài suốt đời nên cần phải có thí nghiệm độc tính với thời gian dài
hơn. Trong phạm vi nghiên cứu của đề tài, việc đánh giá xác định độc tính đường uống với liều lặp lại trong 28 ngày của thí nghiệm được thực hiện sau khi có kết quả ban đầu về độc tính cấp, tạo tiền đề cho thử nghiệm độc tính trong thời gian dài hơn, góp phần vào việc chứng minh sự an toàn của dược liệu [23].