2. ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG SẢN PHẨM 1.Xác định hàm lượng protein
2.1.3. Định lượng nitơ acid amin bằng phương pháp nitơ foocmon
a. Nguyên tắc
Các acid amin trong dung dịch nước thì trung tính, không những do 2 nhóm chức
acid ( - COOH) và amin (- NH2) trung hoà lẫn nhau, mà do cả 2 nhóm chức đó yếu, quá
trình điện ly rất kém. Gặp formol, nhóm amin kết hợp với nhóm metylenic ( - N = CH2)
mất tính kiềm, do đó tính acid của nhóm ( -COOH) nổi bật lên và có thể định lượng bằng một chất kiềm vì phenolphatalein làm chất chỉ thị màu.
Phản ứng chỉ xảy ra hoàn toàn ở pH = 9,0 – 9,5. Vì thế khi dùng phenolphtalein làm chỉ thị phải chuẩn dung dịch tới màu đỏ sẫm.
b. Dụng cụ, vật liệu.
- Dụng cụ: dụng cụ vật liệu thông thường trong phòng thí nghiệm. - Hoá chất:
+ Formol trung tính, thông thường dung dịch formol có tính acid do formol bị oxy hoá bởi không khí thành acid fomic. Do đó khi sử dụng cần trung hoà lại formol bằng NaOH 0,2N với phenolphatalein làm chất chỉ thị màu.
+ Dung dịch phenolphtalein 1% trong cồn 900
.
+ Dung dịch dinatri phophat 0,1N.
0,0014.n.100 Nitơ toàn phần (g/100g) =
+ Dung dịch Ba(OH)2 bão hòa trong cồn metylic.
+ BaCl2 tinh thể.
c. Các bước tiến hành
Cân chính xác P (g) chất thử đã xay nhuyễn, cho vào bình định mức 100ml, với 50ml nước cất. Lắc mạnh trong 10 phút để hoà tan. Cho thêm 0,5ml dung dịch
phenolphtalein, khoảng 2g BaCl2 và từng giọt Ba(OH)2 tới màu hồng nhạt. Cho thêm
5ml Ba(OH)2 để kết tủa muối phophat và cacbonat, cho nước cất vừa đủ 100ml lắc đều
và lọc.
Lấy 25 ml dịch lọc cho vào bình nón với 20ml dung dịch formol trung tính. Chuẩn độ bằng NaOH 0,2N cho tới màu đỏ tươi.
d. Tính kết quả
Hàm lượng nitơ formol trong 100g chất thử:
Hoặc hàm lượng nitơ formol trong 1000ml chất thử:
Trong đó:
0,0028 là số g nitơ tương ứng với 1ml NaOH 0,2N. n là số ml NaOH 0,2N sử dụng.
P, V là số g hoặc ml chất thử