liên tục
Chuẩn bị
Cân, đong chính xác các thành phần theo công thức môi trường MRS đặc (nêu trong mục 2.1.2). Hòa tan các thành phần tan trong nước, phân tán thạch vào dung dịch đựng trong bình nón thích hợp. Đậy kín bằng nút bông. Hấp tiệt khuẩn ở 115oC/20 phút trong nồi hấp tiệt khuẩn. Lấy bình đựng môi trường ra khỏi nồi hấp, phân phối môi trường lên các đĩa petri đã được rửa sạch, hấp tiệt khuẩn và sấy khô (bề dày lớp thạch trên các đĩa khoảng 2mm) sao cho mặt thạch nhẵn, phẳng. Chờ cho thạch nguội và đông rắn lại, đậy kín.
Chuẩn bị các ống nghiệm sạch mỗi ống chứa 9ml nước muối sinh lí, đậy kín, hấp tiệt khuẩn ở 115o
C /20 phút, để nguội xuống nhiệt độ khoảng 37 ÷ 40oC.
Xác định số lượng VSV trong 1ml dịch nuôi cấy.
Hút chính xác 1ml hỗn dịch sinh khối pha vào ống nghiệm thứ nhất, lắc đều. Hút chính xác 1ml dịch đã được đồng nhất trong ống nghiệm thứ nhất pha loãng sang ống nghiệm thứ 2 (chứa 9ml nước muối sinh lí), lắc đều. Cứ tiếp tục pha loãng như vậy cho tới nồng độ pha loãng cuối cùng (trong thí nghiệm này là 10-7
, 10-8, 10-9). Cấy trải lên mỗi đĩa petri 0,5ml dịch trong các ống pha loãng ở trên (làm trên 3 nồng độ cuối, mỗi nồng độ cấy trên 2 đĩa).
Đối với mẫu nguyên liệu dạng bột
Làm nhỏ nguyên liệu, cân chính xác khoảng 1g mẫu, sau đó pha vào bình nón chứa 100ml nước cất đã được hấp tiệt khuẩn ở 115oC/20 phút. Phân tán đều mẫu trong nước bằng khuấy từ, sau đó hút chính xác 1ml dịch từ bình nón pha vào ống nghiệm chứa 9ml nước muối sinh lí, rồi tiếp tục pha loãng, cấy như đối với mẫu là chất lỏng ở trên.
Tiến hành phá hạt: Cân chính xác 1g hạt nguyên liệu, cho vào bình nón chứa 100ml dung dịch natri citrat 2% đã được hấp tiệt trùng ở 115o
C; 0,6 atm trong 20 phút. Hòa tan bằng máy khuấy từ liên tục cho đến khi các hạt tan hoàn toàn thành dung dịch đồng nhất. Hút chính xác 1,0ml dung dịch từ bình nón pha loãng vào ống nghiệm chứa 9ml nước muối sinh lí, rồi tiếp tục pha loãng và cấy như các mẫu trên.
Các đĩa petri được ủ trong tủ ấm 5% CO2, nhiệt độ 37oC trong 48h. Xác định số lượng khuẩn lạc mọc trên các đĩa thạch.
Tiến hành xác định số lượng VSV trên các mẫu: - 1ml dịch nuôi cấy sau 24h.
- Mẫu nguyên liệu dạng bột sau đông khô.
- Mẫu nguyên liệu dạng hạt sau đông khô và trong thời gian bảo quản.
Số lượng VSV có trong 1g nguyên liệu hoặc 1ml dịch nuôi cấy ban đầu được tính theo công thức:
Trong đó:
m: Khối lượng mẫu đem tiến hành xác định số lượng VSV. X: Số VSV có trong 1g hoặc 1ml mẫu.
Chƣơng 3. THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN