Xây dựng phương pháp định lượng

140 KS 08112012 #46 [modified by Nam Hung] UV_VIS_1 mAU

3.2.2 Xây dựng phương pháp định lượng

3.2.2.1Chuẩn bị mẫu thử, mẫu đối chiếu và pha động

 Dung dịch thử

Cân chính xác một lượng bột Captopril nguyên liệu tương ứng với 50,0mg captopril cho vào bình định mức 50ml, thêm 40ml hỗn hợp MeOH:Đệm phosphat 0,01M pH = 2,40 (tỉ lệ 65:35). Lắc kỹ rồi siêu âm 2 phút. Thêm hỗn hợp dung môi

đến vạch, lắc đều. Hút chính xác 1,00 ml dung dịch vừa pha cho vào bình định mức 10ml, thêm hỗn hợp dung môi đến vạch, lắc đều siêu âm trong 3 phút. Lọc qua màng lọc 0,45µm, bỏ khoảng 2ml dịch lọc đầu, sau đó dịch lọc được đem tiêm sắc ký (nồng độCaptopril trong dung dịch khoảng 100µg/ml).

 Dung dịch chuẩn

Cân chính xác khoảng 50,0mg Captopril chuẩn đối chiếu (nồng độ 95,3%) cho vào bình định mức 50ml, thêm 40ml hỗn hợp MeOH:Đệm phosphat 0,01M pH = 2,40 (65:35). Lắc kỹ rồi siêu âm 2 phút. Thêm hỗn hợp dung môi đến vạch, lắc

đều. Hút chính xác 1,00 ml dung dịch vừa pha cho vào bình định mức 10ml, thêm hỗn hợp dung môi đến vạch, lắc đều siêu âm trong 3 phút. Lọc qua màng lọc 0,45µm, sau đó dịch lọc được đem tiêm sắc ký (nồng độCaptopril trong dung dịch khoảng 100µg/ml).

 Pha động

+ Dung dịch đệm phosphat 0,01M pH = 2,40

Hòa tan 1,36g KH₂PO₄ trong 1 lít nước cất 2 lần, điều chỉnh về pH 2,40 bằng dung dịch H3PO4 (8,5%). Lọc qua màng lọc 0,45µm, sau đó siêu âm đuổi khí 30 phút.

+Methanol : siêu âm đuổi khí 20 phút

3.2.2.2Chương trình sắc ký

 Cột Luna C8 (250 mm x 4,6 µm, 5µm)

 Pha động là MEOH/Đệm phosphat 0,01M pH = 2,40(tỷ lệ 65/35)  Thể tích tiêm 20µl

 Detertor UV 220 nm

 Nhiệt độ phân tích là nhiệt độ phòng

3.2.2.3Tiến hành sắc ký định lượng.

Chuẩn bị và cho hệ thống HPLC chạy ổn định với pha động trong 30 phút. Tiêm lần lượt 20µl mỗi dung dịch đã chuẩn bị vào hệ thống sắc ký. Tiến hành sắc ký trong điều kiện đã chọn. Ghi các giá trị diện tích pic thu được trên sắc ký đồ của mẫu thử và mẫu chuẩn tương ứng.

3.2.2.4Tính kết quả

Hàm lượng phần trăm so với nhãn của captopril trong nguyên liệu được tính theo công thức:

C(%) = x C_ch x (100 - a) (3.1) Trong đó :

a(%) : Hàm ẩm của Captopril trong mẫu chuẩn.

C(%) : Hàm lượng phần trăm của captopril trong mẫu thử. Cch(%) : Hàm lượng phần trăm của captopril trong mẫu chuẩn.

mth(gam) :Khối lượng của bột nguyên liệu đã cân để pha dung dịch thử. m_ch(gam) : Khối lượng của captopril chuẩn đã cân để pha dung dịch chuẩn. S_th và S_ch : Diện tích pic của dung dịch thử và dung dịch chuẩn.