VI. CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU
Nếu muốn tiến hành nhân giống ta tiếp tục cấy những đoạn chồi có 1 đốt thân hoặc cắt những đoạn có nhiều đốt thân thành những đoạn nhỏ và tiếp tục
thân hoặc cắt những đoạn có nhiều đốt thân thành những đoạn nhỏ và tiếp tục
2.4 Cảm ứng tạo mô sẹo
Nuôi cấy mô, sau đó cắt các nguyên liệu nuôi cấy để chuẩn bị cho quá trình cảm ứng tạo sẹo. chuẩn bị cho quá trình cảm ứng tạo sẹo.
Cấy các mô cho môi trường MS có bổ sung 1mg/lBA và 0.5mg/lNAA 0.5mg/lNAA
Ban đầu giữ cho mô cấy ở trong tối từ 2-5 ngày để cảm ứng tạo sẹo. ứng tạo sẹo.
2.5 Tái sinh cây
Cấy các mô sẹo mới hình thành vào môi trường MS có chứa 1mg/lBA và 0.5mg/l IBA. Nuôi cấy cấp 2 trong môi trường MS trong vòng 20 ngày.
Mô sẹo sẽ phân hóa thành Protocorm, chồi có rễ trong khoảng 3-6 tháng.
Tách rời và nuôi cấy các chồi phát triển tốt và có tạo rễ cho đến khi cứng cáp rồi đem ra ngoài vườn hay sử dụng làm nguyên liệu cho quá trình nhân giống kế tiếp.
2.6 Sản xuất hạt nhân tạo
Treo protocorm hay chồi ngọn(0,5-1cm) trong hỗn hợp chất cơ bản MS medium chứa 4% (w/v) sodium alginate.
Sử dụng Pasteur pipet hút từng mẫu cùng chất cơ bản rồi nhỏ vào 1.306g/l 150mlCaCl2.2H2O
Ngâm các mô cấy vào dung dịch CaCl2.2H2O trong 30-40 phút. Đặt trên máy lắc với
vận tốc 100 vòng/ phút để hình thành hạt.
Các hạt được khôi phục bằng cách loại bỏ dung dịch CaCl2.2H2O. Sau đó rửa lại với
nước vô trùng.
Các hạt nhân tạo được sản xuất theo cách này có thể bảo quản trong 10 tháng trong nước vô trùng ở22±2 0 C với tỉ lệ nẩy mầm 80%
Cấy các hạt này vào môi trường nhân gống , môi trường MS có bổ sung 1mg/lBA và 0,5mg/l IBA
2.7 Bảo quản phôi