Faust E. C. và cs (1929) [29] đó lập nờn một phõn giống là Spirometra trong giống Diphyllobothrium. Muller (1935) [33] đó mụ tả loài Diphyllobothrium
mansonoides trờn mẫu vật tỡm được từ chú và mốo ở vựng Syracus (New York).
Đến năm 1937 Muller đề xuất giống Spirometra và thống nhất đổi
tờn loài Diphyllobothrium mansonoides thành loài Spirometra mansonoides.
Rudolphi (1918) đó phỏt hiện ấu trựng của sỏn dõy loài Spirometra
ericnaice trờn loài nhớm ở chõu Âu. Faust E. C. và cs (1929) [29] cũng đó phỏt
hiện ấu trựng loài này trờn nhớm ở Trung Quốc và dạng sỏn trưởng thành ở chú. Khi nghiờn cứu về hệ enzym của loài Spirometra erinacei ở Nhật Bản và ở Australia, Fukumoto S và cs (1992) [30] nhận xột rằng hai loài sỏn này là giống nhau.
Theo kết quả nghiờn cứu của Dalimi A. và cs (2006) [27], kiểm tra 83 chú ở cỏc tỉnh phớa tõy của Iran cho thấy: cú 38,55% chú nhiễm
Dipylidium caninum; 53,01% chú nhiễm Taenia hydatigena; 7,23% chú
nhiễm Taenia ovis; 4,82% chú nhiễm Multiceps multiceps; 13,25%chú nhiễm
Echinococcus granulosus.
Một kết quả nghiờn cứu khỏc của Dubna S. và cs (2007) [28] cho thấy, tỷ lệ nhiễm sỏn dõy Dipylidium caninum dao động từ 0,7% – 1,3%, thấy nhiều ở vựng nụng thụn.
PHẦN 3:
ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU 3.1. ĐỐI TƯỢNG, THỜI GIAN, ĐỊA ĐIỂM NGHIấN CỨU
* Đối tượng nghiờn cứu:
- Chú nuụi tại huyện Phỳ Lương, tỉnh Thỏi Nguyờn - Bệnh sỏn dõy ở chú.
* Thời gian nghiờn cứu:
Từ ngày 18 thỏng 06 năm 2014 đến ngày 18 thỏng 11 năm 2014.
* Địa điểm nghiờn cứu:
- Đề tài được thực hiện ở 4 xó của huyện Phỳ Lương, tỉnh Thỏi Nguyờn - Địa điểm xột nghiệm mẫu: phũng thớ nghiệm Khoa Chăn nuụi thỳ y - Trường Đại học Nụng Lõm - Đại học Thỏi Nguyờn.
* Vật liệu nghiờn cứu:
- Mẫu phõn của chú.
- Chú ở cỏc lứa tuổi (mổ khỏm tỡm sỏn dõy). - Kớnh hiển vi điện tử, kớnh lỳp.
- Thuốc trị sỏn dõy chú: Bột hạt cau, Niclosamide, Praziquantel.
3.2. NỘI DUNG NGHIấN CỨU
3.2.1. Nghiờn cứu đặc điểm dịch tễ bệnh sỏn dõy ở chú tại cỏc xó của huyện Phỳ Lương, tỉnh Thỏi Nguyờn Phỳ Lương, tỉnh Thỏi Nguyờn
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm sỏn dõy ở chú theo thành phần loài (qua mổ khỏm) - Tỷ lệ nhiễm sỏn dõy chú ở cỏc địa phương (qua xột nghiệm phõn) - Tỷ lệ nhiễm sỏn dõy chú theo cỏc thỏng (qua xột nghiệm phõn) - Tỷ lệ nhiễm sỏn dõy theo lứa tuổi chú (qua xột nghiệm phõn)
3.2.2. Nghiờn cứu bệnh lý và lõm sàng bệnh sỏn dõy ở chú
- Tỷ lệ và những biểu hiện lõm sàng của chú bị bệnh sỏn dõy - Bệnh tớch đại thể ở cơ quan tiờu hoỏ của chú bị bệnh sỏn dõy
3.2.3. Thử nghiệm thuốc tẩy sỏn dõy cho chú và đề xuất biện phỏp phũng bệnh
- Hiệu lực của một số thuốc tẩy sỏn dõy cho chú - Độ an toàn của thuốc tẩy sỏn dõy cho chú
- Đề xuất biện phỏp phũng trị bệnh sỏn dõy cho chú
3.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
3.3.1. Phương phỏp xỏc định tỡnh hỡnh nhiễm sỏn dõy ở chú
Bố trớ thu thập mẫu được thực hiện theo phương phỏp lấy mẫu chựm nhiều bậc. Tiến hành mổ khỏm 87 con chú ở cỏc cơ sở giết mổ chú tại 4 xó của huyện Phỳ Lương, tỉnh Thỏi Nguyờn. Đồng thời, thu thập và xột nghiệm 36 – 60 mẫu phõn chú ở mỗi xó ở cỏc giai đoạn tuổi khỏc nhau.
* Phương phỏp mổ khỏm, thu thập và định loại sỏn dõy ở chú
Để tỡm sỏn dõy ký sinh ở hệ tiờu hoỏ, tiến hành mổ khỏm chú theo phương phỏp mổ khỏm toàn diện cơ quan tiờu hoỏ, thu thập mẫu sỏn dõy ký sinh ở ruột của chú (Nguyễn Thị Kim Lan và cs, 2008 [11]).
Cỏch mổ khỏm và thu thập sỏn dõy: dựng kộo nhọn, sắc cắt dọc theo chiều dài của ruột, nạo nhẹ niờm mạc ruột và gạt toàn bộ chất chứa vào cốc thuỷ tinh dung tớch 300 ml cú chứa nước sạch. Dựng phương phỏp lắng cặn để thu thập sỏn dõy. Đếm số lượng sỏn dõy ở mỗi chú.
Sỏn dõy sau khi thu thập được làm chết tự nhiờn trong nước ló, sau đú làm sạch bằng nước cất, bảo quản trong cồn 700. Phõn loại sơ bộ cỏc loài sỏn dõy đó thu thập được bằng kớnh lỳp và kớnh hiển vi, căn cứ vào hỡnh thỏi, cấu tạo của sỏn dõy trưởng thành theo khoỏ định loại của Phan Thế Việt và cs (1977) [26], Nguyễn Thị Kỳ (1994) [8]. Việc xỏc định chớnh xỏc thành phần loài sỏn dõy ở đường tiờu hoỏ chú được thực hiện ở Viện sinh thỏi và Tài nguyờn sinh vật.
* Phương phỏp thu thập mẫu phõn, xột nghiệm và đỏnh giỏ tỷ lệ nhiễm sỏn dõy
- Phương phỏp thu thập mẫu phõn.
Việc thu thập mẫu được tiến hành ngẫu nhiờn tại hộ nuụi chú. Số mẫu phõn được lấy ở cỏc xó thuộc huyện Phỳ Lương, tỉnh Thỏi Nguyờn.
- Mẫu phõn chú mới thải ra được thu thập ngẫu nhiờn vào cỏc buổi sỏng, để trong lọ nhựa cú nắp. Những mẫu xỏc định được đỳng cỏc thụng tin sau thỡ ghi vào nhón: loại chú, tuổi, tớnh biệt, trạng thỏi phõn và cỏc biểu hiện lõm sàng của chú, thời gian, địa chỉ. Những mẫu khụng xỏc định được đỳng cỏc thụng tin thỡ chỉ ghi nhón: địa điểm, thời gian lấy mẫu.
Cỏc loại mẫu được xột nghiệm ngay trong ngày hoặc xột nghiệm sau khi bảo quản theo quy trỡnh bảo quản mẫu trong nghiờn cứu ký sinh trựng học.
- Phương phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm sỏn dõy:
Xột nghiệm tỡm đốt sỏn do chú thải ra trong phõn: cho từng mẫu phõn vào cốc thuỷ tinh, thờm 5 - 10 lần nước ló sạch, khuấy tan rồi để yờn 15 - 20 phỳt cho lắng xuống, gạn nước trờn đi, lại cho nước vào, rửa đi rửa lại nhiều lần cho đến khi nước trong suốt, cho cặn vào đĩa petri, đặt trờn tờ giấy màu đen để quan sỏt bằng mắt thường và kớnh lỳp tỡm cỏc đoạn và cỏc đốt sỏn dõy. Nếu cú đốt sỏn thỡ dựng bỳt lụng hoặc lụng gà khời ra. Những mẫu phõn tỡm thấy đốt sỏn dõy được xỏc định là cú nhiễm (+), ngược lại là khụng nhiễm (-).
* Phương phỏp xỏc định cường độ nhiễm sỏn dõy:
Cường độ nhiễm sỏn dõy được xỏc định bằng số lượng sỏn dõy ký sinh/chú bằng phương phỏp mổ khỏm, thu thập và đếm số lượng sỏn ký sinh ở mỗi chú, đồng thời đếm số lượng đốt sỏn dõy/lần thải phõn bằng phương phỏp soi kớnh lỳp, đếm tất cả những đốt sỏn phỏt hiện trong mẫu.
3.3.2. Phương phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm sỏn dõy chú theo cỏc thỏng
Thu thập mẫu phõn chú và xột nghiệm tỡm đốt sỏn thải ra trong phõn của cỏc loại chú khỏc nhau tại cỏc xó trong cỏc thỏng: 6, 7, 8, 9, 10.
3.3.3. Phương phỏp xỏc định tỷ lệ nhiễm sỏn dõy theo lứa tuổi chú
Thu thập mẫu phõn chú và xột nghiệm tỡm đốt sỏn thải ra trong phõn của cựng loại chú ở 4 lứa tuổi khỏc nhau tại cỏc xó của huyện Phỳ Lương, tỉnh Thỏi Nguyờn: ≤ 2 thỏng tuổi, > 2 – 6 thỏng tuổi, > 6 – 12 thỏng tuổi, > 12 thỏng tuổi.
3.3.4. Phương phỏp theo dừi triệu chứng lõm sàng của chú bị bệnh sỏn dõy
Quan sỏt, theo dừi tất cả những chú cú kết quả kiểm tra phõn đó nhiễm sỏn dõy.
Sử dụng phương phỏp chẩn đoỏn cơ bản.
Trực tiếp quan sỏt trạng thỏi cơ thể và cỏc biểu hiện của những chú nhiễm sỏn dõy, kết hợp hỏi chủ nuụi chú về một số thụng tin cần thiết, từ đú xỏc định được cỏc triệu chứng của chú bị bệnh sỏn dõy.
3.3.5. Phương phỏp bố trớ xỏc định bệnh tớch đại thểở cơ quan tiờu húa do sỏn dõy gõy ra
- Thực hiện trờn những chú mổ khỏm thấy nhiễm sỏn dõy ở cường độ nặng. - Mổ khỏm những chú bị nhiễm sỏn dõy đường tiờu hoỏ, quan sỏt bằng mắt thường và kớnh lỳp để xỏc định bệnh tớch ở dạ dày, ruột non, ruột già, chụp ảnh vựng cú bệnh tớch điển hỡnh.
3.3.6. Phương phỏp đỏnh giỏ hiệu lực tẩy sỏn dõy, độ an toàn của thuốc thử nghiệm thử nghiệm
* Phương phỏp đỏnh giỏ hiệu lực tẩy sỏn dõy trờn diện hẹp
Thử nghiệm thuốc tẩy sỏn dõy cho chú trờn diện hẹp được thực hiện ở 15 chú nhiễm sỏn dõy nặng (qua xột nghiệm phõn).
Bố trớ 3 lụ thớ nghiệm,1 lụ đối chứng (mỗi lụ gồm 5 chú): + Lụ 1: dựng Niclosamide với liều lượng 100mg/kg TT + Lụ 2: dựng Praziquantel với liều lượng 10mg/kg TT + Lụ 3: nước sắc hạt cau với liều lượng 2000mg/kg TT
Trước khi dựng thuốc, nhốt riờng mỗi chú ở một cũi, theo dừi, xỏc định cường độ nhiễm bằng cỏch đếm số lượng đốt sỏn/lần thải phõn. Sau khi dựng thuốc, xột nghiệm phõn chú bằng phương phỏp gạn rửa sa lắng tỡm đốt sỏn ở cỏc ngày thứ 12, 13, 14. Từ đú đỏnh giỏ được hiệu lực tẩy của thuốc:
- Nếu thấy số lượng đốt sỏn dõy/lần thải phõn khụng giảm so với trước dựng thuốc thỡ đỏnh giỏ thuốc khụng cú hiệu lực đối với sỏn dõy.
- Nếu vẫn thấy đốt sỏn dõy nhưng số lượng bỡnh quõn/lần thải phõn cũn rất ớt thỡ đỏnh giỏ thuốc cú hiệu lực nhưng chưa triệt để.
- Nếu khụng thấy đốt sỏn dõy trong phõn thỡ đỏnh giỏ là thuốc cú hiệu lực triệt để.
* Phương phỏp xỏc định độ an toàn của thuốc
Độ an toàn của thuốc được đỏnh giỏ bằng kết quả theo dừi trạng thỏi cơ thể, sự vận động, ăn uống và một số phản ứng khỏc của cơ thể chú trước và sau khi dựng thuốc một giờ.
* Phương phỏp đỏnh giỏ hiệu lực tẩy sỏn dõy trờn diện rộng
Sau khi đỏnh giỏ hiệu lực, độ an toàn của thuốc trờn diện hẹp, tiến hành dựng thuốc tẩy sỏn dõy cho chú với số lượng gồm 40 con chú. Trước khi dựng thuốc, xỏc định tỷ lệ nhiễm sỏn dõy. Sau khi dựng thuốc 15 ngày xột nghiệm lại phõn, đỏnh giỏ hiệu lực tẩy của thuốc:
- Nếu số mẫu phõn xột nghiệm cú tỷ lệ nhiễm sỏn dõy cao thỡ đỏnh giỏ thuốc khụng cú hiệu lực đối với sỏn dõy.
- Nếu số mẫu phõn xột nghiệm cú tỷ lệ nhiễm sỏn dõy thấp thỡ đỏnh giỏ thuốc cú hiệu lực nhưng chưa triệt để.
- Nếu khụng cũn mẫu nào nhiễm sỏn dõy thỡ đỏnh giỏ thuốc cú hiệu lực triệt để.
* Sử dụng thuốc cú hiệu lực để tẩy sỏn dõy đại trà cho chú
Sau khi thử nghiệm thuốc trờn diện hẹp, đỏnh giỏ hiệu lực và độ an toàn của thuốc tẩy trờn diện rộng, đưa ra kết luận về loại thuốc tẩy sỏn dõy cho chú cú hiệu quả và an toàn, tiến hành sử dụng thuốc cú hiệu lực tẩy sỏn dõy đại trà cho chú ở huyện Phỳ Lương.
Kết quả sau khi tẩy được xỏc định bằng việc kết luận số chú khụng nhiễm sỏn dõy (-) thụng qua việc xột nghiệm phõn như đó trỡnh bày ở trờn.
3.4. PHƯƠNG PHÁP SỬ Lí SỐ LIỆU
Số liệu thu được được xử lý bằng phương phỏp thống kờ sinh học, trờn phần mềm Excel 2003, minitab.
* Đối với cỏc tớnh trạng định tớnh như: tỷ lệ nhiễm, cường độ nhiễm sỏn, hiệu lực của thuốc, độ an toàn của thuốc tẩy... được tớnh theo cụng thức
- Số trung bỡnh cộng: p = n m Trong đú: m là số chú nhiễm sỏn dõy n là tổng số mẫu xột nghiệm - Sai số của số trung bỡnh:
p q p.q p(1 p) m m n n − = =± =± Trong đú: mp và mq : sai số của p và q.
p và q : tỷ lệ % chú nhiễm và khụng nhiễm sỏn dõy. n : dung lượng mẫu
* Đối với cỏc tớnh trạng định lượng như: số lượng sỏn dõy và số lượng
đốt sỏn dõy… được tớnh theo cụng thức
- Số trung bỡnh cộng: X = n xn x x1+ 2+...+ = n x ∑
Trong đó: ∑ x : là tổng các giá trị của x
- Độ lệch tiờu chuẩn: 2 2 X ( X) X n n 1 s = ± − − ∑ ∑
- Sai số của số trung bỡnh: + Với n ≤ 30 : x x S m n - 1 = ± + Với n > 30 : x x S m n = ±
Trong đú: m : sai số của số trung bỡnh x
x
s : độ lệch tiờu chuẩn n: dung lượng mẫu
* So sỏnh mức độ sai khỏc giữa hai số trung bỡnh
2 2 2 1 2 1 P P TN m m P P t + − =
Trong đú: P1 và P2: tỷ lệ nhiễm sỏn dõy của nhúm 1 và nhúm 2.
mP1và mP2: sai số của P1 và P2 1 1 1. 1 n q p mP = 2 2 2. 2 n q p mP = 1
PHẦN 4:
KẾT QUẢ NGHIấN CỨU VÀ HỆ THỐNG BẢNG BIỂU
4.1. NGHIấN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH SÁN DÂY Ở CHể TẠI HUYỆN PHÚ LƯƠNG – TỈNH THÁI NGUYấN
4.1.1. Tỡnh hỡnh nhiễm sỏn dõy ở chú tại cỏc xó của huyện Phỳ Lương- tỉnh Thỏi Nguyờn
4.1.1.1. Tỷ lệ và cường độ nhiễm sỏn dõy ở chú qua mổ khỏm
Bằng phương phỏp mổ khỏm khụng toàn diện cơ quan tiờu húa của 87 chú tại huyện Phỳ Lương tỉnh Thỏi Nguyờn, chỳng tụi đó xỏc định được tỷ lệ, cường độ nhiễm sỏn dõy của chú và xỏc định thành phần loài sỏn dõy thu thập được thực hiện ở Viện sinh thỏi và Tài nguyờn sinh vật kết quả được trỡnh bày ở bảng 4.1.
Bảng 4.1. Tỷ lệ nhiễm sỏn dõy ở chú tại cỏc xó của huyện Phỳ Lương, tỉnh Thỏi Nguyờn (qua mổ khỏm)
Loài sỏn dõy Số chú mổ khỏm (con) Số chú nhiễm (con) Tỷ lệ nhiễm (%) Dipylidium caninum 87 27 31,03 Taenia hydatigena 15 17,24
Kết quả bảng 4.1 cho thấy, qua mổ khỏm 87 chú tại cỏc cơ sở giết mổ chú tại huyện Phỳ Lương – tỉnh Thỏi Nguyờn cú 27 chú nhiễm loài
Dipylidium caninum (31,03%) và 15 chú nhiễm loài Taenia hydatigena
(chiếm 17,24%).
4.1.1.2. Tỷ lệ nhiễm sỏn dõy ở chú tại cỏc xó của huyện Phỳ Lương (qua xột
nghiệm phõn)
Thu thập 201 mẫu phõn chú tại 4 xó thuộc huyện Phỳ Lương - tỉnh Thỏi Nguyờn. Bằng phương phỏp lắng cặn chỳng tụi đó xỏc định được tỷ lệ nhiễm sỏn dõy ở chú. Kết quả được trỡnh bày ở bảng 4.2 và hỡnh 4.1
Bảng 4.2. Tỷ lệ nhiễm sỏn dõy ở chú (qua xột nghiệm phõn) Địa phương
(xó)
Số mẫu kiểm tra
(mẫu) Số mẫu nhiễm (mẫu) Tỷ lệ nhiễm (%) Sơn Cẩm 60 24 40,00 Vụ Tranh 53 22 41,51 Cổ Lũng 36 15 41,67 Phấn Mễ 52 18 36,53 Tớnh chung 201 79 39,30
Hỡnh: 4.1 Biểu đồ tỷ lệ nhiễm sỏn dõy chú qua xột nghiệm phõn
Kết quả ở bảng 4.2 cho và hỡnh 4.1 cho thấy:
Qua kiểm tra 201 mẫu phõn chú nuụi tại 4 xó của huyện Phỳ Lương, cú 79 mẫu nhiễm, tỷ lệ nhiễm chung là 39,30% biến động từ 36,53% - 41,67%. Kết quả này phản ỏnh tỡnh hỡnh nhiễm sỏn dõy ở chú tại 4 xó thuộc huyện Phỳ Lương là rất phổ biến. 40 41.51 41.67 36.53 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 Sơn cẩm Cổ lũng Vụ tranh Phấn mễ Tỷ lệ (%) Tỷ lệ (%) Địa phương (xó)
So sỏnh giữa 4 xó được điều tra chỳng tụi thấy: tỷ lệ nhiễm sỏn dõy cú sự khỏc nhau giữa cỏc xó Cổ Lũng cú tỷ lệ nhiễm cao nhất (41,67%), tiếp đú là xó Vụ Tranh (41,51%), Sơn Cẩm (40,00%), và thấp nhất là xó Phấn Mễ (36,53%).
Qua điều tra thực tế chú nuụi ở cỏc xó này chủ yếu là nuụi theo hỡnh thức thả rụng, vệ sinh kộm, chế độ kiểm soỏt giết mổ lỏng lẻo dẫn đến tỷ lệ nhiễm sỏn dõy tăng lờn.
4.1.2 Tỷ lệ nhiễm sỏn dõy theo cỏc thỏng (qua xột nghiệm phõn)
Qua thu thập và kiểm tra 201 mẫu phõn chú ở cỏc thỏng 6, 7, 8, 9, 10 chỳng tụi thu được kết quả như sau:
Bảng 4.3. Tỷ lệ nhiễm sỏn dõy theo cỏc thỏng (qua xột nghiệm phõn) Thỏng Số mẫu kiểm tra
(mẫu) Số mẫu nhiễm (mẫu) Tỷ lệ nhiễm (%) 6 53 19 35,84 7 37 14 37,84 8 39 16 41,02 9 41 17 41,46 10 31 13 41,94 Tớnh chung 201 79 39,30
Kết quả ở bảng 4.3 như sau: qua kiểm tra 201 mẫu phõn chú trong thỏng 6, 7, 8, 9, 10. Chỳng tụi phỏt hiện 79 mẫu nhiễm sỏn dõy, tỷ lệ nhiễm chung là 39,30%; biến động từ 35,84%-41,94%.