Hình 12: các đồ thị sắc ký thu được bằng cách cho chạy một số enzym qua cột Sepharose có gắn α -amino caproyl-D-tryptophan methyl ester (0.5x5 cm). Cột này được cân bằng và chạy với dung dịch đệm tris- Cl 0.05M, pH 8, khoảng 3mg protein (từ A tới E) được hòa tan trong 0.5 ml dung dịch đệm trên và chạy trên cột. Rửa giải
α -chymotrypsin với acid acetic 0.1M (mũi tên). Mẫu F chứa 1ml dich huyền phù (280 mµ độ hấp phụ khoảng 15) thu được bằng cách hòa tan 100mg bột pancrease của bò trong 3 ml tris-Cl, pH 8, rồi đem ly tâm 20 phút ở 4000 x g. Hoạt tính enzym thể hiện qua độ hấp phụ (256 mµ ) /phút/5 µ l mẫu, với cơ chất là benzoyl-L-tyrosin ethyl ester. Các điều kiện khác như hình 4, 5.
Điều thú vị là chymotrypsinogen A được giữ lại đáng kể (mặc dù không nhiều) bởi cột đặc hiệu cho chymotrypsin (hình 12A và 12B). Điều này cho thấy các tiền enzym này có khả năng được nhận ra yếu với các cơ chất tương tự. Enzym thủy phân protein có tính đặc hiệu rộng với cơ chất như subtilisin thì không được hấp phụ (hình 12D) một lượng nhỏ protein giống chymotrypsin cũng có thể được dễ dàng phân tách khỏi hệ enzym tiêu hóa thô (hình 12F). Loại nguyên liệu này chứa tất cả hoạt tính chymotrypsin của hệ enzym tiêu hóa thô nhưng nguyên nhân ái
lực đặc hiệu thấp cũng như bản chát chính xác của nó vẫn chưa được xác định. Có thể rửa giải với dung dịch α -phenyl propionamid 0.018M, một chất ức chế với K1 = 7mM. Nếu cột Sepharose được cân bằng trong dung dịch phenyl propionamid 0.0058M, α -chymotrypsin chỉ được giữ lại ít. Những kết quả này lại một lần nữa cho thấy quá trình phân tách rõ ràng là có liên quan đến ái lực về chức năng của vị trí liên kết enzym với cơ chất đặc hiệu.
Hình 13: sắc ký ái lực carboxypeptidase A trên cột Sepharose có gắn L-tyrosin-D- tryptophan (0.5 x 6 cm). Dung dịch đệm là tris-Cl 0.05 M, pH 8, có chứa 0.3N NaCl. Khoảng 1 mg carboxypeptidase A tinh khiết (A, B) và 1,8 mg carboxypeptidase B (C), trong 1 ml dung dịch đệm tương tự được chạy trên cột. Rửa giải với acid acetic 0.1 M (mũi tên).
Carboxypeptidase A: một chất hấp phụ đặc hiệu cho enzym này được chuẩn bị bằng cách gắn dipeptide L- tyrosin-D-tryptophan lên Sepharose. Trong quá trình gắn, khoảng 60 µ moles chất ức chế dipeptide này được thêm vào trên 1ml Sepharose.
Hình 13 cho thấy rằng enzym này được hấp phụ rất mạnh trên cột Sepharose trên. Năng suất thu được sau rửa giải được định lượng một lần nữa.