Giống cấp I
- Chuẩn bị môi trƣờng: Sử dụng môi trƣờng thạch nghiêng PGA làm môi trƣờng nuôi cấy giống cấp I.
- Cách thực hiện : Khoai tây gọt vỏ 200g, rửa sạch, cắt nhỏ, đun sôi trong vòng 20 – 30 phút. Lọc lấy nƣớc, cho 20g đƣờng, 20g agar. Đun để hòa tan hết agar. Cho nƣớc cất định mức đến 1000 ml.
- Cấy giống nấm: Chọn quả thể nấm Hồng Chi trƣởng thành tốt, không bị sâu bệnh để tiến hành phân lập.
- Cách thực hiện : Dùng dao mổ vô trùng tách lấy phần mô nấm bên trong, kích thƣớc khoảng 4 – 10mm2
, cấy vào ống thạch nghiêng. Các thao tác tiến hành trong điều kiện vô trùng. Nuôi ủ ở điều kiện nhiệt độ phòng (25 – 300
C).
Giống cấp II
- Chuẩn bị môi trƣờng: Sử dụng môi trƣờng hạt lúa có bổ sung cám gạo 5%. Cách thực hiện: Hạt thóc đƣợc ngâm qua đêm rồi đãi sạch, cho vào nồi đổ nƣớc ngập hạt và đun sôi (khoảng 20 – 30 phút) cho đến khi vừa nở. Vớt thóc ra, để nguội và ráo nƣớc, sau đó trộn với 5% cám gạo. Đóng nguyên liệu vào túi PP, đậy nút bông và hấp khử trùng bằng nồi hấp ở điều kiện 1atm, 1210
C trong thời gian 20 phút. Sau đó lấy ra để nguội.
- Cấy giống nấm: Tiến hành trong tủ cấy vô trùng. Sau khi khử trùng tủ cấy, dùng dao hoặc que cấy cắt một mảnh thạch có chứa tơ nấm cấy vào môi trƣờng hạt lúa. Ủ tối ở nhiệt độ phòng (25 – 300C) đợi tơ nấm lan hết bịch.
Giống cấp III
- Chuẩn bị môi trƣờng: Sử dụng môi trƣờng cọng mì làm môi trƣờng nuôi cấy giống cấp III.
28
- Cách thực hiện: Cọng mì sau khi loại bỏ những cọng bị gãy vụn đƣợc đem ngâm nƣớc vôi 1% trong vòng 24h, vớt ra để ráo nƣớc. Cho cọng mì vào nồi, đổ nƣớc ngập cọng mì rồi đun sôi trong vòng 20 – 30 phút. Sau đó vớt ra để nguội trộn với 5% cám gạo, đóng nguyên liệu vào túi PP, đậy nút bông, hấp khử trùng. - Cấy giống nấm: Thực hiện trong điều kiện vô trùng. Sau khi tơ nấm lan kín bịch meo lúa thì tiến hành cấy chuyền qua môi trƣờng cọng mì. Mở nút bông bịch meo lúa, dùng tay bóp nhẹ để làm các hạt lúa tách rời nhau. Mở nút bông bịch meo cọng mì, dùng que cấy móc hạt lúa có tơ nấm cấy vào bịch meo cọng. Meo cọng mì sau khi đƣợc cấy giống nấm Hồng Chi vào, ủ khoảng 15 ngày là tơ nấm đã lan kín bịch và có thể đem đi cấy giống vào bịch phôi.