ho«it dò tàng Ièn va cao gép 3 làn (tinh trèn con) so vói
nhòng ngày thù 5.
B^ng ky thuàt khuéch tàn dia th^ch Ò 4 pH khàc nhau
(pH5; 7; 9 va 10,5) chùng tòi nhàn théy hôt dò enzim m^mh
nh^t Ò pH 7 va 9. 5^ a o 0) •t-t o a ^ • o X N5 N7 Giai doan (ngày)
HÌnh 5. TIA, KIA va PA trong qua trinh bién thài tù nhòng
dén con trUÒng thành Ò H. armigerạ — • — , TIA;
- «<• , KIA; — * — , PẠ N I , N 3 , N5 , N7 , N9: nhòng
cac ngay 1, 3, 5, 7, 9; TT: con trUÒng thành.
caze
Bièn di trèn gel poliacrilamit eó SDS va eó ed chét
in 0, 2% dé xàc dinh thành phàn proteinaza, dà phàn bièt
dU0e it nhét 3 bang proteinaza trong giai dôn nhòng (hình 6 ) .
Tuy nhièn, b^tng ky thuàt này dà khòng phàt hi^n dU0c bang
proteinaza Ò con trUÒng thành, trong khi vói ky thuàt Anson
nhùng bSng chùng phàn ành su khàc bi^t vé tinh chét cùa enzim eó màt trong giai dôn nhòng va con trUÒng thành. Két qua trèn chùng tò trong diéu ki^n eó SDS, proteinaza cùa con trUÒng thành bi màt ho§it tinh trong qua trinh dién dị Biéu này co thè do enzim eó càu trùe bàc 4 ma hôt tinh cùa nó bi màt sau khi bi phàn ly thành càc tièu phàn duói đn vị
HÌnh 6. SU biè'n dòi vé thành phàn proteinaza trong qua trình bién thài tù nhòng dèn con trUÒng thành Ò
H. armigerạ Bièn di trèn gel poliacrilamit eó SDS, ed ch^t cazein 0,2%, gel 10%. TÙ trai qua phài: nhòng ngày 1, 3, 5, 7, 9, va con trUÒng thành (TT).
Theo Levenbook [122], sU biè'n dèi cùa ho§it dò proteolitic trong giai dpan nhòng, phàn ành yèu càu cùa qua trình biè'n thài dé thu5^ phàn càc protein dU trù nhàm cung c^p
càc axit amin càn thièt de hình thành eà'u trùc cùa con trUÒng thành. Trong diéu kièn thi nghièm cùa chùng tòi, giai dôn nhòng kéo dai khoang 9-11 ngàỵ TÙ ngày thù 7 trò di dà bit dàu thà'y nhùng eà'u trùc mòi dupe hinh thành, lièn quan dén yèu càu giàm xuòng cùa hôt dò enzim sau ngày thù 5. Trong qua trinh bién dèi eòa nhòng tù ngày thù 1 dén ngày thù 5, hôt dò proteolitic tàng dàn; ngU0e l^i hôt dò antiproteolitic giàm dàn. càc su kién trèn cho phép hUÒng tòi già thiét vè vai trò cùa protein ùc che proteinaza nhU là mot lỏii protein dU trù trong qua trình bién thàị Vé vai trò cùa chat ùc che proteinaza nhU là protein dU trù dà dU0c nèu ro trong càc nghièn eùu Ò thUe vàt [145] va Ò Artemia, mot loài dòng vàt khòng xUdng sèng [65]. Trong còng trinh nghièn eùu cùa minh
dòi vói h^it bi (Cucurbia pepo var. pat issonia) , Ph^im Thi Tran
Chàu [138] cùng dà nèu Ièn già thiét vé vai trò sinh ly cùa càc chat ùc che tripxin (TI) dèi vói cày bi, trong dò eó vai trò cùa TI nhU là protein dU trù trong qua trình này màm cùa h$it. Bi theo huòng nghièn eùu này, gàn day Phan Tu^n Nghia va Bành BÙC PhUdng [8] cùng cho biét eó sU bién dèi cùa càc TI cùa h§it mUÒp dang (Momordica charantia L.) trong qua trình này màm.
Nhu vày, kèt qua nghièn eùu vé sU bièn dòi cùa hôt dò proteolitic va hôt dò antiproteolitic cùa sàu xanh (He 1iothis armigera) trong qua trình bién thài tù nhòng dén con trUÒng thành, ké't h0p vói ké't qua nghièn eùu vé sU biè'n dòi này Ò giai dôn tù éu trùng dén tièn nhòng [9,171] dà phàe hô mot
bue tranh day dù vé hôt dò proteolitic va hôt dò antiproteolitic trong qua trình phàt triè'n, bién thài cùa
Heliothis armigera tù àu trùng qua tién nhòng, nhòng dén con trUÒng thành. Bue tranh này dà cho théy trong vòng dòi cùa con trùng H. armigera co sU bién dòi theo chièu hUóng trai ngU0c nhau giùa hôit dò proteolitic va hôit dò antiproteolitic. Hôit dò proteolitic Ò giai dôn àu trùng cao hdn so vói càc giai do$in con l^i, thàp nhàt là giai dô-n cuòi tién nhòng chuàn bi chuyèn sang giai dôn nhòng. Cung chinh t^ti thòi ky này, hôt dò antiproteolitic dgit mùc cao nhàt. SU bièn dòi này phàn ành vai trò cùa proteinaza va chat ùc che proteinaza trong qua trình phàt trièn va bièn thài cùa con trùng. Trong giai dôn àu trùng, ho§it dò proteolitic lièn quan chù yéu dén hôt dòng tièu hoà cùa àu trùng. Au trùng sàu xanh tuoi 4 va 5 rat phàm àn, day cùng là tuoi co sue phà hôi cày trÒng m^nh nhàt . Hôt dò proteolitic tinh trèn gam trpng lU0ng sàu va hô^t dò rièng cao nhét Ò tuoi 5 (bang 1). Ò cuòi tuoi 6, sàu giàm àn va ngùng àn khi di vào tién nhòng, Trong qua trinh này hôt dò proteolitic cùng giàm dàn. SU bién dèi nhu vày vè hôit dò proteolitic èng tièu hoà trong qua trinh phàt trièn cùng dà dU0e nghièn eùu Ò àu trùng Spodoptera litura [16]. SU bién dòi vè ho§it dò proteolitic cùa iu trùng co lièn quan trUc tiép dén mùc àn cùa chùng, dàc bièt là protein thùc àn. Hình mSu vé sU bién dèi cùa nÒng dò protein trong èng tièu hoà tUdng ùng vói ho§it dò proteolitic [16]. Khi nghièn eùu vè ành hUÒng cùa protein thùc àn Ièn sU tàng trUÒng va sinh lý tièu hoà cùa éu
trùng Heliothis zea va Spodoptera exigua, Broadway va Duffey [37] dà di tòi két luàn ràng mùc dò tièu hoà protein in vivo va hôt dò cùa enzim tripxin tàng tUdng ùng vói nÒng dò protein thùc àn, khòng phài sè lU0ng thùc àn trong èng tièu hoà. Biéu này dà cho phép hp di dén già thiét cho ràng su tèng h0p va /hoàc su tièt cùa proteinaza dU0c kièm soàt bòi mot 'ed che tiét tue thòí. SU thè' hièn cùa ed che này dà dU0c nghièn eùu Ò nhiéu loài con trùng khàc nhau [23,69,74,118,126]. Nghièn eùu sU bién dòi cùa hôt dò proteolitic Ò éu trùng H.
armigera, chùng tòi cùng cho ràng sU san xuàt va tiét cùa proteinaza co thè chiù kièm soàt cùa ed che tièt tue thòị Tuy nhièn, viéc phàt hién ra chat ùc che proteinaza Ò tièn nhòng va d^t mùc cao nhàt Ò cuòi tién nhòng, dàu giai dôn nhòng, dòng thòi vói hôt dò proteolitic giàm xuèng thép nhàt Ò giai dôn này dà già thiét vè vai trò cùa càc chat ùe che proteinaza ma mot trong nhùng vai trò cùa ehùng nhU là chat kim hàm nói sinh dèi vói proteinaza tièu hoà. Kèt qua dièn di dà cho thày eó it nhàt 3 thành phàn TI va 3 thành phàn KI trong giai do$in này, chùng tò sU da d^ng cùa càc protein ùc che proteinaza cùa con trùng. Màt khàc, két qua nghièn eùu vé proteinaza va ch^t ùe che proteinaza trong qua trình bièn thài tù nhòng dè'n con trUÒng thành cùa H. armigera dà cho théy hôit dò proteolitic tàng dàn trong qua trinh bién dòi cùa nhòng tù ngày thù nhà't dè'n ngày thù 5, dÒng thòi vói sU giàm dàn cùa hôit dò antiproteolitic dà huòng tòi già thiè't vé vai trò cùa chat ùc ché proteinaza nhU là mot lôi protein dU trù trong
qua trinh biè'n thàị Két qua nghièn eùu cùng dà già thiét vé vai trò cùa proteinaza thUc hièn chùc nàng thujr phàn càc protein dU trù trong vièc cung cép càc axit amin càn thiét cho sU xày dUng céu trùc cùa con trUÒng thành. Nhu vày, trong qua trình bièn thài, chat ùc che proteinaza dà dóng nhùng vai trò nhàt dinh tuy theo yéu càu cùa tùng giai dôin hoàc là diéu hoà hôit dò proteolitic trong qua trình phàt triè'n, hoàc là eó vai trò bào vè Cd thè bang càch ùc che càc enzim cùa càc vi sinh vàt gay bénh, va eó thè là protein dU trù.
2. Tinh sach va nghièn eùu mot sè tinh ch^t cùa proteinaza ò sàu xanh
2.1. Anh huòng c&a mot sè yéu tò dén hoat dò proteolitic cùa dich chiét sàu tuèi 5
Trong phàn trUÒc, két qua nghièn eùu ho§it dò proteolitic trong giai dôn àu trùng dà cho thày hôt dò này cao nhét Ò tuoi 5 (tinh trèn gam trpng lupng). Vl vàỵ chùng tòi dà t ié'n hành di sàu nghièn cÙu mot sè t inh eh^t cùa proteinaza Ò sàu tuoi 5.
2.1.1. Ành huòng cùa pH va nhi^t dò dè'n hôt dò proteoli t ie
HÌnh 7 cho théy hôt dò proteolitic cùa dich chié't sàu m^nh nhat Ò vùng pH tù 9 dén 12. Ò pH 7 hôt dò chi bang khoang 35 % bôt dò Ò pH 11. Biéu dò ehùng tò proteinaza cùa sàu xanh thuòc lôi proteinaza kièm. Tinh ch^t này tUdng tu nhu càc proteinaza kièm dà dU0c tim thiiy Ò nhiéu loài con
trùng [57,62,]. Càc proteinaza kiém dU0e biét dén nhiéu là subtilizin, vi du nhU proteinaza Ò Bacillus pumilus [139], Khàc vói tinh chat cùa càc proteinaza dà dU0e xàe dinh Ò mot sè loài dòng vàt khòng xUdng sèng khàc, pH tèi Uu cùa proteinaza dàu tòm biè'n thuòc vé kiém yéu (pB7,5 va pH8,5)
[3]; hoàc pH trung tinh (pH6,5) dèi vói proteinaza trong dich
sam Tachypleus tridentatus [13] .
HÌnh 7. Ành hUÒng cùa pH dén hôt dò proteolitic cùa dich chièt sàu xanh
Nhi^t dò là mot trong nhùng yèu tè quan trpng ành huòng dén hôt dò cùa enzim. Nghièn eùu ành hUÒng cùa nhièt dò dén hôt dò proteolitic cùa dich chièt dà cho th^y hôt dò d^t cUc d^i Ò 50°C, sau dò giàm dàn va bi m^t hoàn toàn Ò 70°C
40 A5 50 55
NWjt do f C )
70
HÌnh 8. Anh hUÒng cùa nhièt dò dén hôt dò proteolitic cùa dich chiét sàu xanh.
2.1.2. Bò ben vói nhiét
Ba tién hành giù djch chiét Ò 5°C , nhi^t dò phòng (22 C) va 60 C, sau càc thòi dièm nhàt dinh lày mSu xàc dinh hôit dò Ò dièu kièn chu^n. Kèt qua cho théy sau 24 giò Ò 5°C va nhi^t dò phòng hôit dò DC thay dòi khòng dàng kè, sau 72 giò Ò nhi$t dò phòng hôt dò con khoang 80 % hôit dò ban dàu (hình 9 ) . Khi xù ly Ò 60 C hôt dò tuy giàm m^nh nhUng sau 70 phùt vSn con 50 % hôt dò ban dàu (hinh 10).
TÙ nhùng két qua Ò trèn, chùng tòi két luàn r^ng proteinaza trong dich chiét cùa sàu xanh tuoi 5 khà ben vói nhi^t. Tinh chét này chùng tò Ò d^ng dich chiét, proteinaza cùa sàu xanh tuèi 5 ben vói nhièt hdn so vói proteinaza cùa dàu tòm biè'n [3], hoàc proteinaza trong dich sam [13].