1. ỉ 1 Cấu trúc genom và các protein của HBV
2.1. Đối tượng nghiên cứu
2.3. Sinh phẩm chẩn đoán, dụng cụ, máy móc...24 2.4. C ác kỹ th u ậ t được sử dụng tro n g nghiên cứu... 25
2.4.1. Kỹ thuật phát hiện kháng thể H IV ... 26
2.4.2. Kỹ thuật phát hiện kháng thể H C V ...28
2.4.3. Kỹ thuật phát hiện H B s A g ... 30
2.5. X ử lý số liệ u ...32
Chưoìig 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN... 33
3.1. Tỷ lệ nhiễm phối họ p HCV, HBV ỏ bệnh nhân nhiễm H IV ...33
3.1.1. Tỷ lệ nhiễm virus viêm gan c ở bệnh nhân HIV (+ )...34
3.1.2. So sánh tỷ lệ đồng nhiễm HCV, HBV ở bệnh nhân HIV với một số nghiên c ứ u ... 35
3.1.3. Tỷ lệ nhiễm virus viêm gan B ờ bệnh nhân HIV (+)...36
3.1.4. Nguyên nhân đồng nhiễm virus viêm gan ở bệnh nhân HIV ( + ) ... 36
3.2. Tỷ lệ nhiễm virus viêm gan B và c theo tuổi và giới ở bệnh nhân HIV(+)... 37 3.3. Liên quan giữa nhiễm HCV ở bệnh nhân HIV (+) và tiền sử phơi nhiễm... 38
Kết lu ậ n ... ... 41 Tài liêu tham khảo... 42
2
TÓM TẮT CÁC CÔNG TRÌNH NCKH CỦA CÁ NHÂN
(sách, bàỉ báo, báo cáo tại Hội nghị khoa học là sản phẩm của đề tài)
1. N Giang Lien, B Khanh Hoa, T Thu Ha (2010), “ The survey of s
gene mutation of Hepatitis B virus circulating in Vietnam”. Poster presentation at 14 th International Congress of Infectious Diseases, March 2010, Myami, USA.
2. Pham Due Ngoc, Tran Thu Ha, Tràn Thị Lien, Le Xuan Thinh, Nguyen Van Tuan and Ngo Giang Lien (2010), “ Preliminary study on some
s gene mutation of HBV isolated in Vietnam”. VNU. Journal o f Science, Natural Sciences and technology 26, No. 4 S : 613-617
Tóm tắt hai công trình nghiên cứu trên: Tiếng Việt:
Gen s ờ virus viêm gan B (HBV) mã hóa kháng nguyen bề mặt, bao
gồm vùng quyết định kháng nguyên “a”. Do đó đột biến ở vùng này có thể giúp cho thể đột biến HBV có lợi thế sinh tồn bằng cách giúp cho virus đột biến tránh khỏi tác động của hệ miễn dịch. Mục đích của nghien cứu này là bước đầu tìm hiểu các đột biến ở vùng gen s của người bị nhiễm HBV và phân tích đặc điểm của những đột biến này ở các mẫu thu thập tại Việt Nam. Nghiên cứu về đột biến ở gen s của HBV có vai trò quan trọng để tìm hiểu được nguyên nhân không đạt được hiệu quả bảo vệ mong muốn của vaccine HBV hiện nay và sự khác nhau trong kết quả của các kít chẩn đoán HBsAg Qua phân tích giải trình tự đoạn ADN (300bp) of the s gene kết quả đã phát hiện 10 đột biến trong các mẫu nghiên cứu. Các đột biến này có thể chia thành 3 nhóm. Nhóm 1 bao gồm các đột biển đặc trưng cho mẫu thu thập tại VN : Đột biến tại vị trí 887 với G biến đổi thành c , ở vị trí 1116 với G biến đổi thành A và ở vị trí 1130 với c biến đổi thành G. Nhóm 2 bao gồm các đột biến cho cả mẫu thu thập tại VN và 1 sổ các nước khác: Đột biến tại vị trí 887 với A biến đổi thành G, ờ vị trí 888 với G biến đổi thành A, đột biến tại vị trí 942 với A biến đổi thành c và đột biến tại vị trí 1120 với T biến đổi thành A. Nhóm 3 bao gồm các đột biển có tất cả ở các mẫu trên thế giới: ở vị trí 891 với T biến đổi thành c , ở vị trí 897 với A biến đổi thành G và ở vị trí 898 với G biến đổi thành A. Những nghiên cứu gần đây cho thấy tầm quan trọng của các đột biến ở các vị trí này vì chúng thuộc vùng quyết định kháng nguyên “a”. Do vậy các nghiên cứu vê những đột biên thuộc gen s của HBV rất cần cho việc thiết kế các vaccine cho nhiều đột biến và kit chẩn đoán HBV
r
Tiêng Anh:
The s gene region of the hepatitis B virus (HBV) is responsible for the expression of surface antigens and includes the ‘a’ -determinant region. Thus, mutations in this region would afford HBV variants a distinct survival advantage, permitting the mutant virus to escape from the immune system. The aim of this study was to search for mutations in the s gene region in blood donor groups infected with HBV virus and to analyse the biological characters of these mutations. Mutational studies on s gene of HBV is important in understanding the failure to obtain protection with current HBV vaccines and the discrepant detection results of HBsAg between diagnostic kit.
There were ten mutations found based on sequencing results. It was into three groups. Group 1 included mutations typical only for samples from Vietnam and they were: the point mutation at nucleotide position 887 with a G to c substitution and the mutation at nucleotide 1116 with a G to an A substitution and one more point mutation at nucleotide 1130 with a c to G substitution. Group 2 included mutations occurred on samples from Vietnam and some other regions in the world such as: point mutation at nucleotide 887 with an A to G substitution, the point mutation at nucleotide 888 with a G to A substitution, the point mutation at nucleotide 942 with an A to c
substitution and the point mutation at nucleotide 1120 with a T to A substitution. Group 3 included all mutations found in all samples in the world such as the point mutation at nucleotide position 891 with a T to c
substitution, the point mutation at 897 with an A to G and the point mutation at nucleotide 898 with a G to A substitution.
SCIENTIFIC PROJECT
B R ANCH_______ : Biology
PROJECT CATEGORY : Vietnam National University level
Project title:
Study on some mutations o f Hepatitis B virus in Vietnam for finding the way for prevention and treatme
2. Code: QG-09-17
3. Managing Institution : Hanoi University of Science 4. Implementing Institution : Faculty of Biology
5. Collaborating Institutions :
Center of Hematology and blood trànussion Liverpool School of Tropical Medicine (UK) 6. Coordinator: Dr Ngo Giang Lien
7. Key implementors: Molecular biology lab
8. Duration: 2 years (from April 2009 to March 2011) 9. Budget: 100.000.000VND
10. Main results:
10.1 Results in science and technology
There were ten mutations were found. These mutations could be divided into three groups. Group 1 consisted of mutations typical only for samples from Vietnam and they included: the point mutation at nucleotide position 887 with a G to c substitution, the mutation at nucleotide 1116 with a G to an A substitution, and another point mutation at nucleotide 1130 with a c to G substitution. Group 2 was composed of mutations that occurred on samples from Vietnam and those from some other regions in the world, such as a point mutation at nucleotide 887 with an A to G substitution, the point mutation at nucleotide 888 with a G to A substitution. Group 3 refered to all mutations that found through out the world, such as a point mutation at nucleotide position 891 with a T to c substitution, the point mutation at 897 with an A to G and the point mutation at nucleotide 898 with a G to A substitution. Recent studies have revealed significant diversity in sequence of HBV isolated, accounting for the point mutations among the four major HBV serotypes and they have found that mutations occuưed at these nucleotide positions resulted in amino acid
residues changed at the certain ‘a’ epitope region. This study is necessary to design new vaccines to various HBV mutants and HBV diagnostic kit.
10.2. Scientific publication
International level: 01 scientific presentation
N. Giang Lien , B. Khanh Hoa, T. Thu Ha ( 20Ỉ0), “ The survey of mutation of the gen of hepatitis B virus circulating in Vietnam”. Poster presentation at 14 th International Congress of Infectious Diseases, March 2010, Myami, USA.
National level: 01 scientific pape
Pham Due Ngoc, Tran Thu Ha, Tran Thi Lien, Le Xuan Thinh , Nguyen Van Tuan, Ngo Giang Lien (2010), “ Preliminary study on some s gene mutation of HBV isolated in Viet Nam” . VNU. Journal o f Science, Natural Sciences and technology 26, No. 4 S : 613-617
10.3. Training:
- 01 BSc: Trần Thị Thơ (2009) - 01 Ph.D: Tran Thu Ha (2013)
10.4. Workshop: There were two workshops were organized during the project
Workshop 1:
Update on Chikungunya and Dengue in South-East-Asia Hanoi University of Science, 23 March 2010 Workshop 2:
Genome of HBV
Hanoi University of Science, 21 Sep 2010 11. Evaluation grade (if the project has been evaluated by the the evaluation committee: excellent, good, fair):
Đ Ạ I H Ọ C Q U Ố C G IA HÀ N Ộ I
T R Ư Ờ N G Đ Ạ I H Ọ C K H O A H Ọ C T ự N H IÊ N
BẲN TH Ư Y ÉT M IN H ĐỀ TÀ I ĐẶC B IỆT KHCN CÁP ĐẠI H Ọ C QUÓC GIA
TÊN ĐÈ TÀI
N G HIÊN CỬU M Ộ T SỐ Đ Ộ T BIẾN CỦA VIRUT VIÊM GAN B TẠI V IỆT NAM NHẢM T ỈM HƯỚNG PHÒNG CHÓNG VÀ ĐIÈU TRỊ
MÃ SÓ: Q G .09.I7
LĨN H V ự c N GHIÊN c ử u : KHOA HỌC s ụ SỐNG H Ư Ớ N G N G H IÊN c ử u : SINH- Y HỌC
ĐÊ CƯƠNG ĐẼ TAI ĐẶC BIỆT KHCN CẢP ĐHQGHN
1. Tên đề tài:
Tiếng Việt:
Nghiên cưu một số đột biến của virut viêm gan B tại Việt Nam nhằm tìm hướng phòng chổng và điều trị.
Tiếng Anh:
Study on some mutations o f Hepatitis B virus in Vietnam for finding the way for
prevention and treatment.
2. Thời gian thực hiệrl: 2 năm 3. Bắt đầu tư 2009 đến 2011 4. Đề tài thuộc lĩnh vực ưu tiên
5. Đề tài có trùng với một đề tài đã hoặc đang tiến hành không? Không 5. Chủ trì đề tài (Kèm theo lý lịch khoa học)
Họ và tên: Ngô Giang Liên
Năm sinh: 11 tháng 11 năm 1951 Nam/Nữ: Nữ Địa chỉ liên hệ: Bộ môn Tế bào_ Mô phôi và Lý sinh
Điện thoại: CQ (5588479) Mobile: 0984101702 Fax: 8582069 E m ail: colienngo@yahoo.com
Hoc hàm, hoc vị : PGS.TS « ' • •
Chuyên môn đào tạo : Di truyền tế bào
Tóm tắt hoạt động nghiên cứu của chủ trì đê tài
Thời
gian Tên đề tài/Công trình Tư cách tham gia
Câp quản lý/nơi công bố 1999 2000 Xác định vectơ và ký sinh trùng sốt rét bằng kỹ thuật PCR Chủ trì Tô chức Y tế thế giới WHO 2003 2005
Nghiên cứu loài đồng hình truyền sốt rét tại Việt Nam
Đồng chủ trì với GS.H.Townson (Anh) Bộ phát triển Anh Quốc (DEPD) 2001 2004
Cải tiến công nghệ, nâng cao năng lực sản xuất và chất lượng chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học Bt
trong nông nghiệp Việt Nam
Đông chủ trì với Dr. Skovmand. Ole (Pháp) và 1 số chuyên gỉa VN Đại sứ quán Đan Mạch 2003 2004 Áp dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán bệnh viêm gan c ở người
cho máu chuyên nghiệp
Chủ trì Trường
ĐHKHTN 2005
2006 2007
Nghiên cứu xác định loài đồng hình trong phức loài Anopheles.minimus bằng kỹ thuật PCR Chủ trì Bộ KH - CN 2008 2011 Sốt rét và các bệnh nhiệt đới Đồng chủ trì với GS.Townson (Anh) Bộ phát triển Vương Quốc Anh (DelPHE Tóm tắt hoạt động đảo tạo sau đại học của chủ trì đề tài trong 5 năm trở lại đây :
Thời gian Tên nghiên cứu sinh Tên học viên cao học
2003 - 2004 Đô Thị Vinh An
2004- 2005 Trân Thu Hà
2006 -2010 Nguyễn Thanh Dịu
2007-2011 Trân Thu Hà
6. Cơ quan phổi hợp và cộng tác viên chính của đê tài:
TT Cơ quan phối hợp Họ và tên cộng tác viên
Chuyên ngành của cộng tác viên CQ Bệnh viện Bạch Mai Hà ’ Nội BS. Đô Thị Vinh An BS. Bạch Khánh Hòa Huyêt học truyền máu CTV1 Đại học Khoa học Tự
nhiên (ĐHKHTN) Trần Thu Hà (NCS) Tế bào học
2 ĐHKHTN TS. Lê Thị Hòa Sinh học phân
tử
3 ĐHKHTN TS. Bùi Viêt Hà Vi sinh vât hoc
4 ĐHKHTN Th.s Phạm Đức Ngọc Vi sinh vật học
6. Thuyết minh sự cần thiết hình thành dự án : Viêm gan do virut viêm Gan B (HBV) hiện đang được xem là một căn bệnh nguy hiểm và phổ biến trên thế giới. Trên cơ sở điều tra rộng rãi về kháng nguyên bề mặt cùa virut viêm gan B (HBsAg) người ta dự tính có tới trên hai tỷ người bị nhiễm HBV trên toàn thế giới. Bệnh này thường được xem là nguyên nhân chính của các bệnh lý viêm gan, xơ gan và ung thư gan. Việt Nam là một nước thuộc khu vực có tỷ lệ nhiễm HBV rất cao, với tỷ lệ mang kháng nguyên bề mặt của virut viên gan B từ 12- 25%. Bệnh này đã trở thành mối lo ngại đối với sức khỏe cộng đồng, thách thức lớn đối với nhiều quốc gia trong đó châu Á và châu Phi là nơi có tỷ lệ nhiêm bệnh cao gây ra những tổn hại đến kinh tế và sức khỏe của người dân. Do vậy nghiên cứu viêm gan B để đưa ra những biện pháp phòng chông hữu hiệu chăng những giải quyết được vân đê bức xúc vê sức khỏe cộng đông mà còn phục vụ cho mục đích về kinh tế của quốc gia.
Tổng quan các công trình nghiên cứu: Để góp phần phòng chống viêm gan B có nhiều công trình nghiên cứu phục vụ cho việc chân đoán sớm và sản xuâl văc xin có hiệu quả là một trong những thành tựu khoa học hàng đâu cùa thê kỷ 20.
Genome của HBV và ADN kép, khép vòng nhưng không liên kết với nhau bằng liên kết cộng hóa trị, trong đó một mạch (-) ký hiệu là L có chiêu đài ôn định (3000 - 3500 nucleotit). Mạch kia ngắn có ký hiệu là s, là mạch dương (+), có đâu 5’ cô định, còn đầu 3’ thay đổi và khác nhau về chiều dài. Vùng s bao gồm gen s, pre s và pre S2. Gen s và tiền s mã hóa cho vỏ virut VGB.
Tuy nhiên do genome các virut viêm gan B rât dê bị đột biên, kê ca gen be rnạt (S) tham gia tổng hợp nên kháng nguyên bề mặt HbsAg cũng chứa các đột biên giúp cho virut
v iêm gan B có thể “trốn thoát” khỏi sự phát hiện của các kit đang
d ù n o C h ín h vi vậv việc tiêm phò ng vắc xin tron g nhũ ng trư ờ ng h ọ p này kh ô n g thể Piup n airm ta p h ò n g tránh đư ợc bệnh do các thể đột biến H B V gâỵ nén bởi vì kháng th ể đư ợ c h ìn h th àn h do vẳc xin không chống đư ợc virut đã đột biên, ơ V iệt Nam đã
có một số công trình nghiên cứu HBV phục vụ cho việc chẩn đoán nhanh, chính xác, các nghiên cứu về tách dòng và biểu hiện của các gen mã hóa cho kháng nguyên bề Ịpặl và kháng nguyên lõi của virut viêm gan B cũng là một giải pháp tôt góp phần khống chế sự lây lan của bệnh trong cộng đồng. Song rất tiếc là việc tìm kiếm các đột biến hầu như chưa được đề cập.
Lý do chọn đề tài: Các nhà thiết kế kit sàng lọc HBsAg và các nhà sản xuất vắc xin viêm gan B không ngừng cải tiến để đưa ra một kít sàng lọc có khả năng phát hiện nhiều dạng đột biến, sản xuất các loại vắc xin cho tính hiệu quả cao. Vì vậy nghiên cứu HBV ở mức độ phân tử nhằm tìm kiếm những đột biến có liên quan đến những vấn đề trên là cực kỳ cần thiết phục vụ cho y học, phòng chống bệnh.
Tính thòi sự của đề tài. Bên cạnh những hiệu quả tích cực của chương trình tiêm phòng vắc xin VGB, một vấn đề đặt ra được nhiều các nhà khoa học trên thế giới quan tâm đó là hiện tượng đột biến trong vùng quyết định kháng nguyên “a” của HBsAg. Đột biến này đầu tiên phát hiện ở Ý, cách đây 10 năm và hiện nay đã có thông báo ở nhiều quốc gia trên toàn thế giới như Tây Thi, Đài Loan, Trung Quốc, Anh, Singapore, Thái Lan, Mỹ. Quan điểm về sự liên quan của những đột biến này đến hiệu quả tiêm phòng còn gây nhiều tranh luận. Một sổ cho rằng các vắc xin VGB hiện đang sử dụng có khả năng dự phòng cho cả các chủng đột biến. Tuy nhiên trên cả lý thuyết và thực tế cho thấy tỷ lệ xuất hiện đột biến trong cộng đồng hiện đang tăng dần theo thời gian triên khai tiêm phòng vắc xin và điều đáng chú ý là lại gặp nhiều hơn ở nhóm được tiêm phòng đầy đủ so với nhóm không được tiêm phòng. Xu hưóng hiện nay được nhiêu nghiên cứu đê cập đên đó là sản xuât các văc xin có hiệu quả phòng bệnh cao đối với các chủng đột biến bằng cách cải tiến vắc xin hiện có. Vì vậy việc phát hiện các đột biến, hiểu rõ câu trúc của chúng hy vọng sẽ đáp ứng được mục đích này.
Tính cấp thiết đáp ứng nhu cầu phát triển kinh tế - xã hội: Giải quyết đirợc vấn đề sức khỏe của cộng đong là một giải pháp hữu hiệu cho sự phát triển kinh tế xã hội một cách nhanh chóng và bền vũng.
8. Địa bàn tiến hành nghiên cún:
Bệnh nhân được chỉ định theo dõi điều trị HBV và bệnh nhân có két quả sàng lọc HDBsAg âm tính hoặc dương tính tại một số địa điểm của Việt Nam.
Hiểu biết thúc tế của tác giả về địa bàn nghiên cứụ: Đã nhận được sự gợi ý của các