2.2.5.1. Tiến hành sắc kí cột phân tách licopen và β-caroten của dịch cà chua chín.
- Chất hấp phụ: Al2O3
- Dung môi chạy sắc kí cột: do chất cần tách là licopen và β-caroten nên chúng tôi dùng ete dầu hỏa ñể chạy cột
- Cách nhồi cột: nhồi khô
Cột có kích thước 50cm ñược rửa sạch bằng hỗn hợp nước rửa sunfocromic, tráng và làm khô nước, sấy thật khô cột, khóa cột, thoa vazơlin vào khóa cột cho ñều, cho một ít bông vào ñáy cột, cột ñược ñổ ñầy ete dầu hỏa, vừa cho ete dầu hỏa chảy ra chầm chậm bên dưới vừa cho từng ít một của 20 g bột Al2O3 ở dạng khô vào ñầu cột, vừa cho vừa gõ nhẹ vào thành cột, cho ñến hết 20 g bột Al2O3 và dừng lại.Tiếp tục cho ete dầu hỏa vào cột, dung môi ete dầu hỏa ñược lấy ra ở phía dưới cột với tốc ñộ 10 giọt/phút chứa vào cốc và dung môi này tiếp tục ñược dùng ñể rót trở lại lên ñầu cột vài ba lần ñể giúp cho việc nạp cột ñược chặt chẽ và ñảm bảo không có bọt khí trong cột. Không ñược ñể cho ñầu cột bị khô, cho lớp bông gòn lên trên bề mặt lớp bột Al2O3 ñể khi cho ete dầu hỏa chạy qua cột bề mặt cột không bị xáo trộn. Cho ete dầu hỏa chảy qua cột ñến khi cột mịn. ðểổn ñịnh trước 10 giờ.
- Cách cho dịch cà chua chín vào ñầu cột:
Dịch chất màu của cà chua chín ñược hòa tan vào 1 ml ete dầu hỏa. Mở khóa cột ñể hạ mực ete dầu hỏa bằng với mực chất hấp phụñang có trong cột, khóa cột lại, dùng ống nhỏ giọt hút dung dịch mẫu cà chua chín cho vào ñầu cột. Từ từ mở khóa cột ñể cho dung dịch mẫu cà chua chín thấm xuống bề mặt lớp Al2O3 trên ñầu cột, lúc thấy
dung dịch ñã xuống gần lớp Al2O3 thì khóa cột lại, dung dịch không chảy ra nữa, tiếp tục nạp cho hết lượng chất màu dịch cà chua vào ñầu cột.
Mở khóa ñể hạ mực dung dịch màu cà chua chín xuống sát mặt thoáng chất hấp phụ Al2O3, dùng ống nhỏ giọt cho một lượng nhỏ 5-10 ml ete dầu hỏa vào ñầu cột lại mở khóa ñể dịch màu cà chua chảy ra sao cho mặt thoáng chất hấp phụ Al2O3 vừa vặn khô.Tiếp tục khóa lại cho thêm 2 ml ete dầu hỏa nữa, làm như thế ñến khi thấy dịch chất màu cà chua chín ñã gắn chặt vào chất hấp phụ Al2O3 ở phần ñầu cột. Cho thêm ete dầu hỏa ñầy cột và theo dõi quá trình tách các phân ñoạn
- Theo dõi quá trình tách các phân ñoạn:
Chất màu cà chua nạp vào cột quan sát chúng tôi thấy trong cột có hai màu: màu vàng da cam bên dưới cột và màu ñỏ bên trên. Cho ete dầu hỏa chảy qua cột, 15 phân ñoạn ñược tách ra với tốc ñộ 7-10 giọt/phút. Mỗi phân ñoạn lấy từ 15-20 giọt ñựng vào các lọ penicilin ñược ñánh số thứ tự từ 1 ñến 15. Các phân ñoạn có màu không khác nhau nhiều có 2 màu chủ yếu là màu da cam và màu ñỏ. Khi dịch chất màu trên cột ñã chảy xuống hết ñóng khóa lại.
Kiểm tra các phân ñoạn bằng sắc kí bản mỏng ñể xác ñịnh các phân ñoạn này ñã sạch chưa.