3. Máy xét nghiệm sinh hoá
3.2. Các phơng pháp đo trong xét nghiệm sinh hoá
3.2.1. Phơng pháp điểm cuối (Endpoint)
Phơng pháp này chỉ đo độ hấp thụ của hỗn hợp phản ứng một lần, đó là lúc phản ứng tạo màu đã sảy ra hoàn toàn, và nồng độ các chất trong dung dịch sau phản ứng đã ổn định. Có thể đo độ hấp thụ ở một bớc sóng (monochromatic) hoặc hai bớc sóng (bichromatic). Sử dụng dung dịch chuẩn (Standard) để dựng đờng chuẩn hay hệ số cài đặt trớc.
Chia theo số dung dịch chuẩn sử dụng khi đo ta có 3 loại:
tính theo công thức: blank dard s dard s Blank Sample Sample A A C A A C − − = tan tan ) (
- Phép đo sử dụng nhiều dung dịch chuẩn (multistandard): nồng độ của
mẫu đợc xác định từ đờng cong chuẩn. Đờng cong này dựng đợc từ các dung dịch chuẩn đã biết trớc nồng độ và độ hấp thụ đo đợc:
(Astandard- Ablank).TR
TR là chiều của phản ứng : +1 nếu chiều phản ứng tăng -1 nếu chiều phản ứng giảm Nồng độ của mẫu đợc nội suy từ đờng cong chuẩn: (Asample- Ablank).TR
- Phép đo sử dụng hệ số:
Khi đo không sử dụng các dung dịch chuẩn mà sử dụng một hệ số cho trớc để tính ra nồng độ của dung dịch. Nồng độ mẫu đợc tính theo công thức:
Csample = (Asample- Ablank).F Với F là hệ số cho trớc
Chia theo số bớc sóng sử dụng khi đo ta có 2 loại:
- Phép đo một bớc sóng: đo độ hấp thụ của dung dịch Trắng, Chuẩn và
Mẫu tại một bớc sóng.
- Phép đo hai bớc sóng: đo độ hấp thụ của Trắng (Blank), Chuẩn và
mẫu (Sample) tại hai bớc sóng, một bớc sóng chính và một bớc sóng phụ, độ hấp thụ của các dung dịch đợc tính theo công thức sau:
Asample, Astandard, Ablank=Aλmain- Aλref A: độ hấp thụ
λmain: Bớc sóng chính
λref: Bớc sóng phụ
3.2.2. Phơng pháp động học (Kinetic)
Phơng pháp động học đợc sử dụng để đo độ hoạt động của enzym. Đặc điểm của phơng pháp này là đo ngay khi bắt đầu phản ứng, sau một khoảng thời gian trễ (Delay time) nào đó, không có thời gian đợi phản ứng ổn định.
- Phơng pháp đo động học (K):
Độ hấp thụ của hỗn hợp phản ứng đợc đo n lần trong thời gian phản ứng t (Reaction time), khoảng cách giữa n lần đo là t/n giây và tính giá trị chênh lệch của các độ hấp thụ giữa phép đo sau với phép đo trớc, kết quả cuối cùng là tính đợc giá trị chênh lệch trung bình/phút (DA/min)
Độ hoạt động của enzym đợc tính theo công thức:
Độ hoạt động của Enzym =DA/min.K.
Trong đó, K là hệ số thờng đợc cho trớc với từng loại hoá chất.
Đơn vị đo độ hoạt động enzym là U/L, ngoài ra còn sử dụng đơn vị mới là kat (katal) là lợng men xúc tác sự biến đổi 1 mol cơ chất trong 1 giây.
- Phơng pháp đo thời gian cố định (Fixed Time):
Cũng tơng tự nh phép đo động học, nhng chỉ khác là thời gian giữa các lần đo độ hấp thụ là cố định.
Lợng giá kiến thức phần 1
Lựa chọn câu đúng/sai trong các câu sau:
1. ánh sáng đơn sắc có một bớc sóng λ xác định trong chân không và có một
màu sắc riêng biệt. đúng-sai
2. ánh sáng trắng là tổng hợp nhiều ánh sáng đơn sắc có màu biến thiên liên
tục từ màu đỏ tới màu tím. đúng-sai
3. Quang phổ vạch phát xạ là quang phổ gồm nhiều dải sáng, màu sắc khác nhau, nối tiếp nhau một cách liên tục. đúng-sai 4. Lăng kính và cách tử nhiễu xạ hoạt động trên nguyên tắc cho ánh sáng trắng đi vào, nối ra sẽ cho một ánh sáng đơn sắc. đúng-sai 5. Các lớp kính trong kính lọc giao thoa đặt cách nhau một khoảng cách λ/2 để lọc ra đợc các tia sáng có bớc sóng λ. đúng-sai
Chọn câu trả lời đúng nhất trong các câu sau:
6. Máy xét nghiệm sinh hoá thờng sử dụng các bớc sóng: A. Từ bớc sóng màu đỏ đến bớc sóng màu tím; B. Từ bớc sóng 405nm đến 760 nm;
C. Từ 340nm trở lên trên vùng cận hồng ngoại; D. Các bớc sóng 340nm, 405nm và 505nm. 7. Khi ánh sáng đi qua dung dịch sẽ bị:
A. Hấp thụ hoàn toàn; B. Hấp thụ một phần; C. Không bị hấp thụ;
D. Hấp thụ một phần, một phần bị phản xạ và một phần đi xuyên qua dung dịch.
A. Bề dày lớp chất lỏng;
B. Nồng độ dung dịch mà ánh sáng đi qua; C. Bản chất của dung dịch mà ánh sáng đi qua; D. Cả ba ý trên;
9. Trong máy sinh hoá, giá trị máy đo đợc trực tiếp là: A. Hệ số phụ thuộc bản chất dung dịch;
B. Cờng độ ánh sáng sau khi đi qua dung dịch; C. Nồng độ của dung dịch mà ánh sáng đi qua; D. Độ hấp thụ A của dung dịch mà ánh sáng đi qua. 10. Tác dụng của các linh kiện quang - điện là:
A. Khuếch đại tín hiệu quang; B. Khuếch đại tính hiệu điện;
C. Chuyển đổi tín hiệu quang thành tín hiệu điện; D. Chuyển đổi tính hiệu điện thành tín hiệu quang. 11. Phôtô điốt là linh kiện có tác dụng:
A. Chuyển đổi quang điện; B. Chỉnh lu dòng điện; C. ổn định điện áp;
D. Dới tác dụng của năng lợng ánh sáng, hai đầu bán dẫn khi nối ra mạch ngoài sẽ có dòng chạy qua gọi là dòng quang điện;
E. Tất cả các tác dụng trên.
12. Các bệnh phẩm dùng trong máy sinh hoá là:
A. Máu toàn phần, nớc tiểu, dịch não tuỷ, dịch vị, phân; B. Huyết thanh, huyết tơng, nớc tiểu, một số loại dịch; C. Chỉ dùng huyết thanh;
D. Chỉ dùng huyết tơng. 13. Máy sinh hoá dùng để đo:
A. Các loại tế bào trong máu;
B. Các chất hữu cơ trong mẫu bệnh phẩm;
C. Các chất khí nh oxy, cacbonic, pH, các chất vô cơ nh Na+, K+; D. Tất cả các loại chất chứa trong dung dịch bệnh phẩm.
14. Việc đo các chất trong bệnh phẩm dựa vào nguyên tắc: A. Đo trực tiếp dung dịch bệnh phẩm;
B. Tạo các phản ứng có sản phẩm với màu đặc trng;
C. Tạo các phản ứng có sản phẩm hấp thụ một dải bớc sóng nào đó mạnh nhất;
D. So sánh màu sắc của dung dịch sau các phản ứng hoá học. 15. Đặc điểm của phép đo điểm cuối trong máy sinh hoá là:
A. Chỉ đo độ hấp thụ của dung dịch một lần vào lúc bắt đầu phản ứng; B. Độ hấp thụ của dung dịch nhiều lần để tính ra nồng độ của dung dịch;
C. Đo độ hấp thụ một lần khi phản ứng tạo màu sảy ra hoàn toàn, nồng độ các chất sau phản ứng đã ổn định;
D. Đo sự sai lệch độ hấp thụ giữa các lần đo.
16. Có thể tính ra nồng độ của chất trong dung dịch mẫu khi dùng phơng pháp điểm cuối bằng cách đo:
A. Độ hấp thụ của dung dịch trắng, dung dịch chuẩn và dung dịch mẫu; B. Độ hấp thụ của dung dịch mẫu;
C. Độ hấp thụ của dung dịch trắng, dung dịch mẫu và hệ số cho trớc; D. Cả A và C;
E. Cả A, B và C.
17. Phơng pháp động học tính ra độ hoạt động của Enzym bằng cách:
A. Đo độ hấp thụ một lần sau khi phản ứng sảy ra hoàn toàn, lấy kết quả đó nhân với hệ số K cho trớc;
B. Đo độ hấp thụ một lần trớc khi phản ứng sảy ra hoàn toàn, lấy kết quả đó nhân với hệ số K cho trớc;
C. Đo độ hấp thụ nhiều lần sau khi phản ứng sảy ra hoàn toàn, lấy kết quả đó nhân với hệ số K cho trớc;
D. Đo độ hấp thụ nhiều lần trong khi phản ứng đang sảy ra, lấy trung bình hiệu các kết quả liên tiếp, sau đó nhân với hệ số K cho trớc.
Câu hỏi tự lợng giá
18. Trình bày khái niệm về ánh trắng, ánh sáng đơn sắc.
19. Trình bày cấu tạo và tác dụng của một số dụng cụ quang học thờng gặp trong máy sinh hoá.
20. Trình bày hai định luật quang điện, phân tích ý nghĩa của hai định luật này trong máy xét nghiệm sinh hoá?
21. Trình bày định luật Bouger- Lambert- Beer? ý nghĩa của hai định luật trong máy sinh hoá?
22. Trình bày một số chất thờng đo trong máy sinh hoá? Phân tích cách thức để đo đợc các chất này?
Phần 2
Giới thiệu máy Quang kế 722