1. Hoạt độ riêng
.Được tính bằng số đơn vị hoạt độ E trên một đơn vị
khối lượng protein.
.Là một chỉ tiêu quan trọng để đánh giá độ sạch của
chế phẩm E.
.Trong quá trình tinh sạch, hoạt độ riêng không tăng
G. Phân tích enzyme2. Thu nhận chế phẩm enzyme thô 2. Thu nhận chế phẩm enzyme thô
.Bước 1: Phá vỡ tế bào
.Phương pháp: Siêu âm, dùng E, máy nén, sốc nhiệt,… .Đặc điểm: Chứa nhiều protein khác,nồng độ E thấp. . Bước 2: Cô đặc dịch chiết, gây kết tủa Protein/E.
.Dùng dung môi hữu cơ như ethanol, caceton hay muối
trung tính.
G. Phân tích enzyme3. Tách từng phần và tinh sạch 3. Tách từng phần và tinh sạch
Phương pháp sắc ký trao đổi ion.
Phương pháp sắc ký lọc gel (sắc ký lọc rây phân
tử).
Phương pháp ly tâm siêu tốc. Phương pháp sắc ký ái lực.
Phương pháp điện di chế phẩm hay điện ly không biến tính.
G. Phân tích enzyme
4. Phương pháp kiểm tra độ sạch của chế phẩm enzyme.
Điện di trên gel polyacrylamide biến tính (PAGE)
Sử dụng gel và đệm có chứa sodium dodecyl sulfate
(SDS).
Phân tử Protein bị duỗi thẳng và tích điện âm => di chuyển về cực dương trong điện trường
Gel được nhuộm coomassie hay bạc nitrate => các protein
dưới dạng monome tinh sạch sẽ xuất hiện dưới dạng một băng duy nhất.
G. Phân tích enzyme
Phối hợp giữa phương pháp điện di với phương pháp
sắc ký lọc gel.
Sắc ký lọc gel: xác định được khối lượng phân tử tự
nhiên của protein.
SDS – PAGE: Khối lượng phân tử trên băng protein.
⇒ Tiểu đơn vị cấu thành của protein tự nhiên.
G. Phân tích enzyme