Phương pháp tách chiết và tinh sạch enzyme

1. Hoạt độ riêng

._{Được tính bằng số đơn vị hoạt độ E trên một đơn vị}

khối lượng protein.

._{Là một chỉ tiêu quan trọng để đánh giá độ sạch của}

chế phẩm E.

._{Trong quá trình tinh sạch, hoạt độ riêng không tăng}

G. Phân tích enzyme

._{Bước 1: Phá vỡ tế bào}

._{Phương pháp: Siêu âm, dùng E, máy nén, sốc nhiệt,…} ._{Đặc điểm: Chứa nhiều protein khác,nồng độ E thấp.} . _{Bước 2: Cô đặc dịch chiết, gây kết tủa Protein/E.}

._{Dùng dung môi hữu cơ như ethanol, caceton hay muối}

trung tính.

G. Phân tích enzyme

 Phương pháp sắc ký trao đổi ion.

 _{Phương pháp sắc ký lọc gel (sắc ký lọc rây phân}

tử).

 _{Phương pháp ly tâm siêu tốc.}  _{Phương pháp sắc ký ái lực.}

 Phương pháp điện di chế phẩm hay điện ly không biến tính.

G. Phân tích enzyme

4. Phương pháp kiểm tra độ sạch của chế phẩm enzyme.

 _{Điện di trên gel polyacrylamide biến tính (PAGE)}

 _{Sử dụng gel và đệm có chứa sodium dodecyl sulfate}

(SDS).

 Phân tử Protein bị duỗi thẳng và tích điện âm => di chuyển về cực dương trong điện trường

 _{Gel được nhuộm coomassie hay bạc nitrate => các protein}

dưới dạng monome tinh sạch sẽ xuất hiện dưới dạng một băng duy nhất.

G. Phân tích enzyme

 _{Phối hợp giữa phương pháp điện di với phương pháp}

sắc ký lọc gel.

 _{Sắc ký lọc gel: xác định được khối lượng phân tử tự}

nhiên của protein.

 _{SDS – PAGE: Khối lượng phân tử trên băng protein.}

⇒ Tiểu đơn vị cấu thành của protein tự nhiên.

G. Phân tích enzyme