Nguồn tế bào
Thời gian (ngày) Tỷ lệ % số colony/tế bào thí nghiệm Bắt đầu quan sát thấy colony Thấy rõ đa số colony Mẫu mô 01 4 7 73 Mẫu mô 02 5 8 72 Mẫu mô 03 5 10 77 Mẫu mô 04 4 9 66 Mẫu mô 05 5 7 71
Tế bào tách từ 5 mẫu mô đƣợc thử khả năng tạo CF-E đều thấy xuất hiện các collony.
Các collony đều có thể thấy xuất hiện sớm trong vòng 05 ngày thí nghiệm, các colony lúc này có khoảng 3-4 tế bào và đã thấy rõ trong vòng 10 ngày.
Tỷ lệ colony trong tập hợp số tế bào tách ra khỏi mẫu mô đạt cao, thấp nhất là 66% và cao nhất là 77% .
Ảnh 3.4. Các colony có từ 3-5 tế bào được quan sát sớm vào ngày thí nghiệm thứ 05. Mẫu mô số 02/2010, (Soi ngược, 50X).
Ảnh 3.5. Các colony do các tế bào gốc trung mô màng dây rốn tạo nên vào ngày thí nghiệm tạo thứ 20. (Tế bào từ mẫu mô 02/2010, P2, Giemsa).
Các mẫu nghiên cứu cho thấy, tế bào gốc phát triển tốt và tạo ra số lƣợng lớn các colony (gần 30 colonies) và đƣờng kính của colony cũng đạt hơn 2mm.
Đặc điểm colony là CFU-F (fibroblast colony forming unit).
3.1.2. Biểu hiện kháng nguyên hòa hợp tổ chức và tính sinh miễn dịch của tế bào gốc trung mô dây rốn tế bào gốc trung mô dây rốn
3.1.2.1. Đặc điểm biểu hiện HLA-G, HLA-E và HLA-DR của tế bào
Kết quả phân tích bằng western blot phát hiện sự có mặt của các kháng nguyên HLA-G và HLA-E trong dịch nghiền tế bào gốc trung mô màng dây rốn cho thấy tất cả các mẫu tế bào đều biểu lộ cả kháng nguyên HLA-G và HLA-E.
Ảnh 3.6. Kháng nguyên HLA-G và HLA-E có trong dịch nghiền tế bào gốc trung mô màng dây rốn được phát hiện bằng kỹ thuật western blot. trung mô màng dây rốn được phát hiện bằng kỹ thuật western blot.
Mức độ biểu hiện HLA-DR trên bề mặt TBGTM màng dây rốn đƣợc phân tích qua flowcytometry.
Biểu đồ 3.2. Kết quả phân tích bằng flowcytometry mức độ biểu hiện HLA-DR của tế bào gốc trung mô màng dây rốn. HLA-DR của tế bào gốc trung mô màng dây rốn.
Qua 15 mẫu thí nghiệm;
Mức độ biểu hiện HLA-DR chiếm 1,9 ± 1,53%
Mức độ biểu hiện dấu ấn CD90 đặc thù của tế bào gốc trung mô đạt tới 92,65 ± 6,3%.
Nhƣ vậy, tế bào gốc trung mô dây rốn có biểu hiện cao về dấu ấn CD90 đặc thù và các kháng nguyên hòa hợp tổ chức HLA -DR, HLA-E, HLA-G.
3.1.2.2. Tính sinh miễn dịch của tế bào gốc trung mô dây rốn
Tế bào gốc trung mô đƣợc bảo quản lạnh sâu, sau đó đƣợc giải đông lạnh và nuôi lại vào đĩa Petri môi trƣờng nuôi cấy tế bào gốc trung mô. Tế bào đƣợc chia làm 2 phần. Lấy khoảng 1/2 lƣợng tế bào vào một phiến nhựa 96 giếng nuôi cấy mới. Để tủ ấm tiếp tục nuôi cấy đợi tế bào mọc lan ra toàn
bộ. Còn 1/2 lƣợng tế bào đem phá vỡ tế bào bằng siêu âm, định lƣợng protein bằng phƣơng pháp Bradford.
Biểu đồ 3.3. Phát hiện kháng thể thỏ kháng tế bào gốc với kháng nguyên siêu nghiền bằng xét nghiệm ELISA
Kết quả phát hiện kháng thể thỏ kháng tế bào gốc với kháng nguyên là tế bào siêu nghiền, ở các nồng độ pha loãng kháng thể 1/500, 1/100, 1/50, 1/10 ở các thời điểm lấy mẫu D0; D15; D30; D60.
Ở thời điểm D0 ngay sau khi ghép tế bào chƣa có đáp ứng tạo kháng thể, kháng thể đặc hiệu xuất hiện và cao nhất ở thời điểm D15.
Mật độ quang học phụ thuộc rất rõ rệt vào hiệu giá kháng thể: với hiệu giá kháng thế 1/500 thì mật độ quang học là (0,0538); với hiệu giá kháng thể 1/100 thì mật độ quang học là (0,12478); với hiệu giá kháng thể 1/50 thì mật độ quang học là (0,1963); với hiệu giá kháng thể 1/10 thì mật độ quang học (0,4223).
Kháng thể đặc hiệu tăng cao ở D15 nhƣng giảm mạnh ở thời điểm D30, D60.
Biểu đồ 3.4. Phát hiện kháng thể thỏ kháng tế bào gốc với kháng nguyên là tế bào nguyên vẹn
Kết quả tìm kháng thể thỏ kháng tế bào gốc với kháng nguyên là tế bào nguyên vẹn bằng kỹ thuật ELISA với các nồng độ pha loãng kháng thể 1/500, 1/100, 1/50, 1/10 tại thời điểm lấy mẫu D0; D15; D30; D60 cũng tƣơng tự nhƣ kết quả khi sử dụng kháng nguyên siêu nghiền để phát hiện kháng thể thỏ.
Ở thời điểm D0 ngay sau khi ghép tế bào chƣa có đáp ứng miễn dịch, kháng thể đặc hiệu xuất hiện và cao nhất ở thời điểm D15: 1/500 (0.0509); 1/100 (0.0969); 1/50 (0.128); 1/10 (0.2083). Kháng thể đặc hiệu giảm dần ở thời điểm D30, D60.
Biểu đồ 3.5. So sánh khả năng phát hiện kháng thể thỏ kháng tế bào gốc với kháng nguyên là tế bào siêu nghiền và tế bào nguyên vẹn
Biểu đồ 3.5 cho thấy mật độ quang học khi phát hiện kháng thể với độ pha loãng 1/100 bằng kháng nguyên siêu nghiền và kháng nguyên là tế bào nguyên vẹn.
Khi sử dụng kháng nguyên siêu nghiền thì mật độ quang học thu đƣợc là D0 (0.0424); D15 (0.12478); D30 (0.0568); D60 (0.0575) cao hơn khi sử dụng kháng nguyên là tế bào gốc nguyên vẹn với D0 (0.042); D15 (0.0969); D30 (0.05); D60 (0.052).
Nhƣ vậy, qua 3 biểu đồ, kết quả cho thấy tế bào gốc màng dây rốn kích thích sinh miễn dịch kháng tế bào gốc yếu và không bền.
3.1.3. Khả năng biệt hóa của tế bào gốc trung mô thành nguyên bào sợi 3.1.3.1. Thay đổi về hình thái và dấu ấn tế bào trong quá trình biệt hóa 3.1.3.1. Thay đổi về hình thái và dấu ấn tế bào trong quá trình biệt hóa