III Enzym đa chức năng ATP Có trình tự nhận biết đặc hiệu
3. Cỏc protein được mó húa bởi cADN cú thể được tổng hợp (dịch mó) trong một tế
bào chủ mà ở đú khụng cần cú bộ mỏy hồn thiện phõn tử mARN (bởi cỏc intron đó được cắt bỏ).
Khái niệm chung
ADN tái tổ hợp đ−ợc thực hiện nh− thế nào? Tách chiết và tinh sạch các axit nucleic
Tạo véctơ tái tổ hợp
Nội dung
51
Tạo véctơ tái tổ hợp
Các loại enzym sử dụng trong ADN tái tổ hợp Nhân dòng gen và xây dựng ngân hàng gen
Sàng lọc các dòng gen trong ngân hàng gen
Một nhúm contig
Các vị trí cắt của enzym giới hạn
Dũng 1 Dũng 2 Dũng 3 Dũng 4 Dũng 5 Dũng 6 Dũng 7 Dũng 7 Dũng 8 Dũng 9 Dũng 10 Dũng 11 Dũng 12 Dũng 13 Dũng 14 Tập hợp cỏc dũng gen gồm cỏc trỡnh tự nằm gối lờn nhau (contig) Cỏc dũng gen cú kớch thước
lớn từ 200 đến 500 kb (cú thể được tỏch dũng bởi cỏc
vộctơ BAC và YAC) được dựng để xõy dựng cỏc bản đồ
contig. Cỏc vị trớ cắt giới hạn của từng dũng được xỏc
Sàng lọc các dịng gen trong ngân hàng gen
Có một số ph−ơng pháp để tìm dịng gen mong muốn trong
ngân hàng hệ gen: (1) Thông qua sự biểu hiện sản phẩm của gen đ−ợc tách dịng (vd: các enzym, protein có hoạt tính, …), (2) Lai axit nucleic để tìm dịng tế bào mang trình tự mong muốn, (3) nhận biết sản phẩm gen nhờ phản ứng miễn dịch.
Ph−ơng pháp xác định dịng gen thơng qua sự biểu hiện của
gen có thể áp dụng khi sản phẩm của gen ở trạng thái biểu
53
gen có thể áp dụng khi sản phẩm của gen ở trạng thái biểu
hiện chức năng. Vd: các gen mã hóa enzym chuyển hóa hoặc tổng hợp một hợp chất dinh d−ỡng nào đó có thể xác định đ−ợc nhờ ni cấy trên các mơi tr−ờng chọn lọc.
Sàng lọc các dịng gen trong ngân hàng gen
Tuy vậy, ph−ơng pháp lai axit
nucleic là ph−ơng pháp phổ biến
nhất. Để phát hiện các trình tự ADN, ng−ời ta sử dụng các mẫu dị ADN và ph−ơng pháp thẩm tách Southern, FISH, ... Để phát hiện các trình tự mARN, ng−ời ta sử dụng mẫu dò và ph−ơng pháp thẩm tách Northern. ph−ơng pháp thẩm tách Northern.
Sàng lọc các dòng gen trong ngân hàng gen
Sàng lọc các dòng gen trong ngân hàng gen
Ph−ơng pháp nhận biết sản
phẩm của gen nhờ phản ứng miễn dịch là cơ sở của ph−ơng pháp thẩm tách Western.
Tóm tắt về ADN Tái tổ hợp
ADN tái tổ hợp là các kỹ thuật nhằm tạo ra những phân tử ADN mới đ−ợc “lắp ráp” từ các phân đoạn ADN có ngnồn gốc khác nhau. Cơ sở của công nghệ ADN tái tổ hợp là tính phổ biến của mã di truyền.
ADN tái tổ hợp là các kỹ thuật nhằm tạo ra những phân tử ADN mới đ−ợc “lắp ráp” từ các phân đoạn ADN có ngnồn gốc khác nhau. Cơ sở của cơng nghệ ADN tái tổ hợp là tính phổ biến của mã di truyền.
Công nghệ ADN tái tổ hợp phát triển nhanh chóng nhờ sự phát hiện ra và hiểu biết ngày càng rõ hơn về các loại enzym có khả năng cải biến ADN, ARN, trong đó có các enzym giới hạn.
Cơng nghệ ADN tái tổ hợp phát triển nhanh chóng nhờ sự phát hiện ra và hiểu biết ngày càng rõ hơn về các loại enzym có khả năng cải biến ADN, ARN, trong đó có các enzym giới hạn.
Việc tách dịng và xây dựng ngân hàng hệ gen của nhiều loài sinh vật khác nhau, trong đó có cả những lồi có hệ gen lớn nh− ng−ời, thực hiện đ−ợc là nhờ sự phát triển của nhiều loại véctơ khác nhau, nh− plasmid, Việc tách dòng và xây dựng ngân hàng hệ gen của nhiều loài sinh vật khác nhau, trong đó có cả những lồi có hệ gen lớn nh− ng−ời, thực hiện đ−ợc là nhờ sự phát triển của nhiều loại véctơ khác nhau, nh− plasmid,
57
đ−ợc là nhờ sự phát triển của nhiều loại véctơ khác nhau, nh− plasmid, phage, cosmid, véctơ con thoi, YAC, BAC, … cho phép tách dịng các đoạn trình tự khác nhau có kích th−ớc từ vài kb đến 500 kb.
đ−ợc là nhờ sự phát triển của nhiều loại véctơ khác nhau, nh− plasmid, phage, cosmid, véctơ con thoi, YAC, BAC, … cho phép tách dịng các đoạn trình tự khác nhau có kích th−ớc từ vài kb đến 500 kb.
Có hai loại ngân hàng gen: Ngân hàng hệ gen mang tồn bộ các trình tự có trong hệ gen của một cơ thể, và th− viện cADN mang các trình tự là sản phẩm phiên mã ng−ợc từ các phân tử mARN có mặt trong một loại tế bào nhất định (phản ánh những gen đ−ợc biểu hiện trong tế bào đó).
Có hai loại ngân hàng gen: Ngân hàng hệ gen mang tồn bộ các trình tự có trong hệ gen của một cơ thể, và th− viện cADN mang các trình tự là sản phẩm phiên mã ng−ợc từ các phân tử mARN có mặt trong một loại tế bào nhất định (phản ánh những gen đ−ợc biểu hiện trong tế bào đó).
Ngân hàng hệ gen có ý nghĩa quan trọng trong các nghiên cứu lập bản đồ di truyền, giải mã trình tự hệ gen. Th− viện cADN có ý nghĩa quan trọng trong việc tìm hiểu sự biểu hiện và chức năng của các gen trong tế bào. Ngân hàng hệ gen có ý nghĩa quan trọng trong các nghiên cứu lập bản đồ di truyền, giải mã trình tự hệ gen. Th− viện cADN có ý nghĩa quan trọng trong việc tìm hiểu sự biểu hiện và chức năng của các gen trong tế bào.