- Chuyển qua lần nuôi cấy tiếp theo khi môi trường nghèo chất dinh d ưỡng.
3.4. Kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào 3 K ỹ thuật xác định số lượng tế bào
Sử dụng buồng đếm hồng cầu và thuốc nhuộm trypan blue
Cấu tạo buồng đếm hồng cầu:
Buồng đếm hồng cầu là một bản kính dầy với phần trung tâm là kính dầy với phần trung tâm là buồng đếm, được dùng để định lượng tế bào.
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.4. Kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào 3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.4. Kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào 3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào
Thuốc nhuộm trypan blue
Trypan (C14H16N2) là một
Trypan (C14H16N2) là một thuốc nhuộm sống được sử
dụng để xác định sức sống của tế bào, thuộc loại thuốc nhuộm diazo dye
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.4. Kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào 3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào
Màng tế bào của những tế bào sống có khả năng thấm chọn lọc, ngăn không cho trypan blue xâm nhâp vào tế bào →
blue xâm nhâp vào tế bào →
không bắt màu.
Đối với những tế bào chết hay mô chết, màng tế bào không có khả năng thấm chọn lọc, trypan blue có thể vượt qua màng →
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.4. Kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào 3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào
Vật liệu
Ethanol 70 % (v/v) Huyền phù tế bào
Thuốc nhuộm trypan blue 0.4% (w/v) hoặc nigrosin 0.4% (w/v)
được chuẩn bị trong HBSS
được chuẩn bị trong HBSS
Buồng đếm hồng cầu có lá kính đậy
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.4. Kỹ thuật cơ bản trong nuôi cấy tế bào3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào 3.4.3. Kỹ thuật xác định số lượng tế bào
Các bước thực hiện:
Chuẩn bị buồng đếm hồng cầu
Chuẩn bị huyền phù tế bào