nh danh ch ng vi khu n n i sinh có ho t tính
M u lá và v thân cây neem
S y và xay b tăd c li u Phân l p và làm thu n vi
khu n n i sinh
Caoăd c li u
Th nghi m ho t tính kháng khu n, kháng n m
Tìm n ngăđ c ch t i thi u c a cao chi t v i vi khu n, vi n m gây b nh
Quanăsátăđ i th , vi th Chi t xu t v i
2.2.2. Xácăđ nh tên khoa h c c a cây thu c
D a vào các tên g iăđ a ph ng,ănh ng mô t v hìnhătháiăđ thu hái m u cây thu c. M uăthuăháiăđ c mô t hình thái th c v t,ăđ căđi m c a hoa, qu , h tăvƠăđ c g i cho B môn Th c v t Tr ng i H c Khoa H c T Nhiênăđ giámăđnh tên khoa h c c a cây.
2.2.3. Quy trình thu nh n và x lý m u
2.2.3.1. Thu nh n m u
aăđi m: T nh Bình Thu n và V ngăTƠu.
Thu nh n m u: ch n nh ng m u lá và v thân cây neem không b sâu b nh, d p úng.
i v i m u phân l p vi khu n n i sinh c n đ c thu vào lúc sáng s m hay chi u mát, và đ căđánhăd u,ăb oăqu nă ă4oC và ti n hành phâp l p trong vòng 6 gi tính t khi m uăđ c thu th p (Roy và Banerjee, 2010).
2.2.3.2. X lý m u
i v i m u chi tăcaoăd c li u: ti n hành thu hái, r a s ch m uăthuăđ căd i
vòiăn c 2 l n,ăsauăđóă1ăl n v iăn c c t,ăđ khô t nhiên. Ti n hành c t thành nh ng mi ng nh (2 - 3 cm), s y khô 37oCăchoăđ n khi kh iăl ngăkhôngăđ i và nghi n nh thành b tăthôăvƠăl uătr cho l n s d ng k ti p.
i v i m u phân l p vi khu n n iăsinh:ăđ lo i tr các vi sinh v t còn bám trên b m t, m uăsauăkhiăđ c thu th păđ c ti n hành x lỦănh ăsau:ă
B c 1: r a s ch ph n v thơnăvƠăláăd iăvòiăn c m nh, ti p t c r a l i b ng
n c c t vô trùng, c t m uăthƠnhăcácăđo n nh 2 ậ4ăcmăđ d thao tác.
B că2:ăngơmăm uăv iăethanolă70oătrongă2ăphút.
B că3:ăngơmăm u trong dung d ch sodium hypochlorite 4-6% trong 1,5 phút.
B că4:ăngơmătrongăethanolă70o trong 30 giây.
B că6:ăđ tătrênăgi yăhútă m đƣăđ căh păvôătrùng.
B că7:ăki mătraăm uăđ tăyêuăc u.
ki m tra kh n ngăcácăviăsinhăv t còn sót l i trên b m t m u sau khi kh trùng, l yă200ă l n c c tăvôătrùngăđƣăr a m u b c th 5 (l n cu i)ălênăcácăđ aămôiă tr ng Tryptone ậ Yeast extract ậ glucose ậ agar và 30oC, n u sau 24 gi cácăđ aă môiătr ng này không có s xu t hi n các khu n l c thì các m uăđƣăkh trùngăđ t yêu c uă(L ngăTh H ng Hi p, 2011; Kandpal, 2012).
2.2.4. Quy trình chi t xu tă caoă d c li u và phân l p vi khu n n i sinh t cây neem sinh t cây neem
2.2.4.1. Kh o sát nh h ng c a lo i dung môi đ n hi u su t thu h i cao chi t t v thân và lá neem
- M căđích:ăxácăđnh lo i dung môi thích h p cho hi u su t cao.
- Y u t kh o sát bao g m: dung môi trích ly g m petroleum ether (60 ậ 80), n- hexan, chloroform (CHCl3), ethanol và methanol. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Y u t c đnh: t l kh iăl ng nguyên li u và th tích dung môi là 1:6; nhi t
đ chi t xu t là nhi tăđ phòng, th i gian trích ly là 72 gi . - Cách th c hi n:
B tăd c li u t v thơnăvƠăláăđ c chi t xu t b ngăph ngăphápăngơmăv i các
dungămôiăcóăđ phân c c khác nhau.
Ti n hành ngơmăphơnăđo n 10 g b tăd c li u v i 60 ml dungămôiăvƠăđemăđiăl c chân không l y dung d ch chi t. D ch chi tăđ căđemăđiăcôăquay chơnăkhôngăđ lo i hoàn toàn và thu h iădungămôi,ătaăthuăđ căcaoăsauăkhiătríchăly.ă emăcơnăs cao này b ngăcơnăphơnătích.ăCaoăd c li uăđ căhòaătanăvƠoăDMSOăđ kh oăsátătácăđ ng kháng vi sinh v t. Quy trình chi t xu t đ cătrìnhăbƠyăquaăs ăđ sau: