4. Mở Rộn g:
4.1 môi trường sử dụng:
Môi t rư ờ ng Chap m an aga r (m an i t ol s alt aga r ):
Là môi trường chọn lọc dùng để phát hiện, phân lập và định lượng tụ cầu khuẩn gây bệnh tronh thực phẩm như sữa, thịt , hải sản…cũng như các sinh phẩm khác.
Các thí nghiệm của koch cho thấy tụ cầu khuẩn có thể chịu được nồng độ muối cao 7.5%. Sau đó Chapman xác minh hiện tượng trên, đồng thời ghi nhận tụ cầu khuẩn nào gây đông tụ huyết tương thỏ sẽ hình thành khuẩn lạc vàng trên môi trường chapman agar, môi trường có khả năng ức chế hầu hết vi khuẩn khác. Nồng độ muối cao ức chế sinh trưởng hầu hết các loài vi khuẩn trừ Staphylococcus.
Vi khuẩn lên men đường manitol sinh axit làm đổi màu chỉ thị (fenol red)của môi trường từ đỏ sang vàng.
Xác định tất cả các loại khuẩn lạc có màu vàng hoặc màu trắng vói môi trường xung quanh có màu vàng. Tuy nhiên, có thề lẫn các khuẩn lạc trong giống Bacillus nên cần xác định các khuẩn lạc này bằng cách quan sát dưới
kính hiển vi.
Tụ cầu khuẩn gây bệnh sẽ tạo khuẩn lạc có sắc tố vàng, đồng thời môi trường xung quanh đổi từ đỏ sang vàng.
tụ cầu khuẩn gây bệnh thường tạo khuẩn lạc nhỏ có màu đỏ và không làm thay đổi màu môi trường.
Sau 48h nuôi cấy, vài chuẩn cầu khuẩn đường ruột Baciilus, Micrococcus và Serratia cũng có thể mọc trên môi trường này.
Môi t rư ờ ng B aird parker agar
Là môi trường dùng để phân lập và định lượng vi khuẩn .Staphylococcus trong thực phẩm, dược phẩm.
Công thức môi trường này do baird parker khai triển năm 1962 nhằm định lượng Staphylocoagulase. Năm 1964, Smith và Baird Parker chứng
minh rằng khi bổ sung sulfamerthzine vào môi trường sẽ ức chế sinh trưởng của vi khuẩn proteus. Năm 1971, Tardio và Baer quan sát trong 18 môi trường phân lập chọn lọc thử nghiệm thì môi trường B.P ít gây ức chế hơn các môi trường khác.
Thành phần môi trường có lithium chloride và tellurite có tác dụng ức chế các quần thể vi khuẩn thường hiện diện cùng Staphylococci trong khi đó pyruvate và glycine kích thích sự phát triển của Staphylococci .
Khuẩn lạc Staphylococci có hai đặc điểm:Khuẩn lạc có màu đen do khử telurite thành telurium, dạng lồi và tạo vòng trong xung quanh khuẩn lạc,đường kính từ 2 – 5 mm do sự thủy phân protein. Sau đó có thể xuất hiện 1 vòng đục ở trong vòng trong (có tác động của lecithinase, một loại lipase). Đây là một đặc tính thường thấy và có tính chuyên biệt ở các tụ cầu khuẩn gây bệnh.
Đặc tính của Staphylococcus aureus sẽ được kiểm chứng qua phản ứng coagulase và tốt nhất bằng các thử nghiệm desoxyribonuclease và phosphatase.
Các loại vsv ngoại lệ khác có thể mọc trên môi trường này như:
rất nhỏ, màu nâu tới đen.
màu nâu sậm đục, mọc sau 48h. trắng.
Micrococci Bacillus sp nấm men
Pastorex:
Là một thử nghiệm dùng để định danh S.aureus được thực hiện trực tiếp với vi khuẩn trên môi trường nuôi cấy đầu tiên.
Bằng phản ứng ngưng kết latex trên kính (latex đã được mẫn cảm với huyết tương người), thử nghiệm cho phép phát hiện đồng thời 2 yếu tố: yếu tố cụm “clumping factor” (một chất có ở bề mặt tế bào vi khuẩn và có ái lực cao với fibrinogen) và protein A
Kết quả nghiên cứu với pastorex với 228 chủng Staphylococci cho thấy:độ nhạy cảm 97.5%, độ đặc hiệu 92.5%.